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文檔簡介
實驗4葉綠體色素的提取 分離 理化性質和葉綠素含量的測定實驗目的 掌握植物中葉綠體色素的成分分離和定性 定量分析的原理和方法 一 實驗原理 1 溶解性 葉綠素和類胡蘿卜素均不溶于水而溶于有機溶劑 常用95 的乙醇或80 的丙酮提取 2 吸附性 濾紙對Chlb Chla 葉黃素的胡蘿卜素的吸附能力不同 當用石油醚作推動劑時 其在濾紙上的移動速度不同 可相互分離 2KOH 2KOH CH3OH C20H39OH 3 皂化反應 葉綠素是二羧酸酯 與強堿反應 形成綠色的可溶性葉綠素鹽 就可與有機溶劑中的類胡蘿卜素分開 4 取代反應 在酸性或加溫條件下 葉綠素卟啉環中的Mg 可依次被H 和Cu 取代形成褐色的去鎂葉綠素和綠色的銅代葉綠素 H 取代Mg2 Cu2 Zn2 取代H 褐色 綠色 5 葉綠素受光激發 可發出紅色熒光 反射光下可見紅色熒光 透射光下呈綠色 反射光下呈紅色 6 定量分析 葉綠素吸收紅光和藍紫光 紅光區可用于定量分析 其中645和663用于定量葉綠素a b及總量 而652可直接用于總量分析 a b Relativeabsorbtance Waverlength nm 材料 菠菜 三 方法和結果 1 定性分析 鮮葉5g 95 30ml 逐步加入 磨成勻漿 過濾入三角瓶中 觀察熒光現象透射光色 反射光光 色素分離在濾紙中心緩慢滴入30滴提取液略干后滴入石油醚直到接近濾紙邊緣用筆注出成分和顏色結果附于實驗報告中 皂化反應加KOH數片劇烈搖均 加石油醚5ml和H2O1ml分層后觀察上層呈色 為 吸收光 下層呈色 為 吸收光 取代反應 1 加醋酸約2ml 變褐 葉綠素 取1 2加醋酸銅粉加熱變色 為葉綠素 取代反應 2 鮮葉2 3cm2 加Ac AcCu20ml加熱 觀察 min變為色的葉綠素 min后 變為色的葉綠素 2 葉綠素定量分析 鮮葉0 1g 加1 9mlH2O 磨成勻漿 各取0 2ml加80 丙酮4 8ml 搖勻 4000轉離心3min 上清液在645 652 663測定OD 計算Chla Chlb和Chl總量的值 四 結果計算Ca mg L 12 7OD663 2 69OD645Cb mg L 22 9OD645 4 68OD663CT mg L Ca Cb OD652 1000 34 5 Chla含量 mg g FW Ca mg L 1000 2 0 1 5 0 2Chlb含量 mg g FW Cb mg L 1000 2
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