實驗二 細菌基本形態和特殊結構觀察,一 目的要求,1 了解普通光學顯微鏡原理及構造。 2 學習并掌握普通光學顯微鏡油鏡的正確使用方法。 3 用油鏡觀察細菌基本形態。 4 了解負染色原理、細菌芽孢染色基本原理，油鏡觀察細 菌的莢膜、芽孢形態。 5 細菌運動性觀察。,二 基本原理, 普通光學顯微鏡的結構 普通光學顯微鏡的光學成象原理 3 莢膜染色 4 芽孢染色, 普通光學顯微鏡的結構,（1 ) 機械系統 包括鏡座、鏡臂、載物臺、物鏡轉換器、鏡筒及調節器等 （2 ) 光學系統 包括反光鏡、聚光器、物鏡、目鏡等。, 普通光學顯微鏡的光學成象原理,（1）顯微鏡的放大倍數 放大倍數：目鏡的放大倍數與物鏡的放大倍數之乘積 。,目鏡 ： 物鏡,低倍鏡：10X 高被鏡：40X 油鏡：100X,10 X 100X,目鏡,物鏡, 顯微鏡的分辨率,油鏡比低倍鏡、高倍鏡觀察物體更清晰。,原因： 油鏡分辨率高于低倍鏡、高倍鏡 油鏡匯聚光線的能力大于低倍鏡、高倍鏡, 分辨率是指顯微鏡能夠分辨的最小距離即鑒別限度（R） R=（2NA） (為入射光波波長； NA為顯微鏡數值孔徑),NA= .sin,為標本、物鏡之間介質的折射率。 為光軸上物點發出的光線與物鏡有效直徑兩端最大夾角角度的 一半。,低倍鏡= 高倍鏡=空氣=1.0 ， 油鏡香柏油=1.52 低倍鏡 高倍鏡 油鏡 ， sin低倍鏡 sin高倍鏡 sin油鏡 NA低倍鏡 NA高倍鏡 NA油鏡 所以，油鏡的分辨力比高倍鏡、低倍鏡高。,匯聚光線的能力油鏡高于低倍鏡、高倍鏡。,3 莢膜染色,主要成分多為糖類，無色透明且不易著色常用負染色觀察。負染色是將細菌細胞和背景著色，從而把無色透明、不著色的莢膜結構襯托顯現出來。,菌體,莢膜,菌膠團： 多個菌體的莢膜融合為一個團狀物，內有多個菌體。,4 芽孢染色,細菌芽孢壁厚而致密，透性低，難于染色，但一旦被染色又難于脫色。因此先用強著色力的染料（孔雀綠）處理，并同時加熱，使菌體以及芽孢均著色，后使菌體脫色，而芽孢保留原色，經復染（蕃紅），菌體與芽孢分別以不同顏色顯現。,芽孢,菌體,對有芽孢的菌體進行簡單染色（只用一種染料染色）。 菌體和芽孢著色情況如何？,三 實驗材料,細菌基本形態標本片：大腸桿菌片 枯草桿菌片 八疊球菌片 細菌特殊形態標本片：枯草芽孢桿菌芽孢片 示范片觀察：莢膜片觀察 懸滴法觀察活細菌的運動,四 實驗內容及步驟,1 細菌基本形態觀察 2 細菌特殊結構觀察 3 懸滴法觀察活細菌運動,1 細菌基本形態觀察,學習油鏡的正確使用方法。 用油鏡觀察 大腸桿菌 枯草桿菌 八疊球菌,2 細菌特殊結構觀察,學習油鏡的正確使用方法。 用油鏡觀察細菌特殊結構 枯草芽孢桿菌芽孢（油鏡） 鉀細菌莢膜（高倍鏡）（示范）,3 懸滴法觀察活細菌運動,懸滴片制好后，用低倍鏡調焦，換高倍鏡觀察。 注意：視野中暗光觀察。運動的菌體發亮。,觀察前準備 ：顯微鏡的準備和調試視野明亮 低倍鏡觀察 高倍鏡觀察（此步可以省略） 油鏡觀察：加香柏油，油鏡頭浸入香柏油中后調焦 顯微鏡油鏡頭的清洗和歸位（二甲苯清洗）,油鏡使用主要步驟,注意 ！ 顯微鏡調焦方法,五 實驗報告,繪 大腸桿菌 枯草桿菌 八疊球菌形態示意圖 繪枯草芽孢桿菌芽孢形態示意圖,菌 名：大腸桿菌 放大倍數：16100 X,細菌形態示意圖繪圖要求：, 選擇形態典型的部分細菌細胞繪圖。 僅繪出細菌細胞輪廓，但不同細菌的細胞大小比例應 適宜，且形態上應有所區分。 細菌與視野相對大小應符合實際，應將細菌細胞排布 在視野中離開中心的部位（即繪空心圖）。 必須注明菌名、