四、苯乙胺類含量測定,測定方法： 非水滴定法 溴量法,比色法 提取酸堿滴定法 熒光分光光度法 高效液相色譜法 衍生化氣相色譜法,（二）溴量法 適用于：鹽酸去氧腎上腺素及其注射液、 重酒石酸間羥胺,重酒石酸間羥胺,（比較司可巴比妥鈉P107）,原理：苯酚結構，酸性溶液中酚羥基鄰對位活潑氫與溴定量地發生溴代反應，用碘量法滴定剩余的溴。根據消耗硫代硫酸鈉的量來計算。,反應式：,（定量過量）,（以去氧腎上腺素為例）,Br2+2KI 2KBr+I2 I2+2Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6,(剩余的）,測定方法： 取本品0.1g，至碘量瓶 加水20 ml 精密加溴液50 ml 加鹽酸5ml（產生溴） 立即密塞（以防溴氣損失），放置，振搖 加碘化鉀10ml 用硫代硫酸鈉滴定 近終點加淀粉指示液（以防過多的碘與淀粉絡合，靈敏度不高） 滴定至藍色消失。 結果用空白作對照，1ml溴滴定液（0.1mol/l）相當于C9H12NO2 HCl 3.395mg 。,溴滴定液（0.1 mol/L）的配制：取溴酸鉀3.0 g與溴化鉀15 g，加水適量使溶解成1000 ml，搖勻。,KBrO3+5KBr+HCl 3Br2,計算：剩余滴定法（回滴定法）,T：滴定度 Vo：空白試驗消耗滴定液的體積 V：樣品測定消耗滴定液的體積 F：滴定液濃度矯正因子,滴定度T如何計算？,CBr=CNa2S2O3=0.1 mol/l 1mlBr=1mlNa2S2O3,C9H12NO2 HCl：Br=a:b=1mol:6mol,T=a/b CBr M =1/6*0.1*203.67=3.395(mg/ml),（三）比色法,原理： 酚羥基與亞鐵離子絡合 芳伯氨基重氮化-偶合反應,適用 鹽酸異丙腎上腺素注射液、鹽酸多巴胺注射液 鹽酸克侖特羅栓,鹽酸多巴胺,（鹽酸克侖特羅）,（以鹽酸克侖特羅栓為例）,反應式：,+ NaCl + H2O,與亞硝酸鈉的重氮化反應：,與N-(1-萘基）-乙二胺的偶合反應：,（有色）,測定方法：,對照法定量,0.5%氨基磺酸銨,？,對照：A0= CoL 樣品：A= CL C=ACo/Ao,結果用空白作對照,偶合劑N-（1-萘基）-乙二胺遇亞硝酸也能顯色，干擾比色測定，所以在重氮化后，應加氨基磺酸銨將剩余的亞硝酸分解除去，再加偶合試劑N-（1-萘基）-乙二胺。,2HNO2+2H2NSO3NH4 2N2+（NH4）2SO4+H2SO4+H2O,重氮-偶合反應,與普魯卡因重氮-偶合方法（P142）有何區別？：,顯色劑,酸性 N-（1-萘基）-乙二胺,堿性 萘酚,中性 ？,顯色劑,N-（1-萘基）-乙二胺, 萘酚,酸堿性,酸性,堿性,應用,比色定量,定性鑒別,練習,在酸性條件下進行重氮化-偶合比色測定時最常用的偶合試劑是：,A. 萘酚 B.變色酸 C. N-（1-萘基）-乙二胺 D.對二甲氨基苯甲醛 E.香草醛,（四）提取酸堿滴定法 適用于：硫酸苯丙胺及其制劑,鹽類可溶解于水，不溶于有機溶劑,游離堿不溶于水，易溶于有機溶劑,依據性質：,（堿性）,（五）熒光分光光度法 （ 自學 ）,HPLC固定相,固定相,固定液,載體,十八烷基氯硅烷,硅膠,鍵合方式,屬于非極性鍵合相,離子對法,將反離子加入到流動相中，與呈解離狀態的藥物作用，生成脂溶性的離子對化合物（注意不是成鹽），從而增加了被測物在非極性固定相中的溶解度，使分配系數增加，改善分離效果。,分析堿性或帶正電荷物質，用帶負電荷的磺酸鹽作離子對試劑,去甲腎上腺素（+）,分析酸性或帶負電荷物質，用帶正電荷的季銨鹽作離子對試劑,磺酸染料（-）,庚烷基磺酸鈉（-）,四甲基銨（+）,控制PH很重要： 使得被測物能很好解離，與反離子形成離子對,電化學檢測器（EChD),應用最廣的是安培檢測器 檢測原理：利用組分的氧化還原反應產生的變 化進行檢測,被測物要有氧化還原性,GC固定相,根據“相似性”原理 PEG-20M適用于極性藥物分析（柱溫25 280 ）,衍生化法,目的：增加被測組的熱穩定性和揮發性，增加 被測物對檢測器的靈敏度和選擇性。,方法：,硅烷化,烷基化,酰化,有-NH2和-OH的藥物,如：酚氟拉明、利多卡因、心得平等,檢測器FID,優點： 靈敏度高 響應快 應用最廣,缺點： 對內源性雜質有響應，需經萃取純化后再分析,第三節 芳氧丙醇胺類藥物,有雙鍵,無雙鍵,高錳酸鉀液 顏色消失，產生棕色沉淀,215nm 252nm,硫氰酸鉻5滴 淡紅色沉淀,275nm,三 鹽酸卡替洛爾中有關物質的檢查,薄層高低濃度對比法： 檢查方法 取本品0.2g，加甲醇10ml溶解，作為供試溶液，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，量取1ml，置10ml量瓶中，作為對照液。（二者差500倍）吸取兩液，顯斑點。供試品雜質斑點不得更深。限量為0.2%。,（供試品自身對照法P54）,薄層展開圖,藥品斑點,雜質斑點,（限量為0.2%，供試品雜質斑點不得更深）,四 含量測定,原料藥,非水滴定法,制劑,分光光度法,下面以鹽酸卡替洛爾為例：,（片劑、滴眼液等）,（一）鹽酸卡替洛爾原料藥含量非水滴定法,方法： 取本品0.5g，加冰醋酸30ml溶解，加熱溶解，放冷。加醋酐70 ml，照電位滴定法用高氯酸滴定。1ml高氯酸(0.1)相當于32.88mg。,利用氨基的堿性，在酸液