中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 6食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實(shí)施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會國 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B5 0 0 9.1 4 92 0 0 3 食品中梔子黃的測定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B5 0 0 9.1 4 92 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中梔子黃的測定” ; 原標(biāo)準(zhǔn)第一法高效液相色譜法測定梔子苷修改為高效液相色譜法測定藏花素和藏花酸; 改進(jìn)了樣品前處理分析方法; 擴(kuò)大了方法適用范圍; 刪除了第二法 薄層色譜法。G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 61 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中梔子黃的代表性成分: 藏花素、 藏花酸的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于冰淇淋、 蜜餞、 腌菜、 干杏仁、 巧克力、 糕點(diǎn)、 熟肉、 醬油、 果汁、 配制酒、 果凍、 薯片中藏花素和藏花酸的測定。2 原理試樣用甲醇超聲提取后, 通過C1 8反相色譜柱分離, 用高效液相色譜/可見光檢測器于4 4 0n m下檢測梔子黃的主要顯色成分藏花素和藏花酸, 以保留時間定性, 外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 甲醇(CH3OH) : 色譜純。3.1.2 乙腈(CH3C N) : 色譜純。3.1.3 冰乙酸(CH3C OOH) 。3.1.4 乙酸銨(CH3C OONH4) 。3.2 試劑配制3.2.1 乙酸-乙酸銨溶液(p H=4) : 準(zhǔn)確稱取0.7 7g乙酸銨置于1L容量瓶內(nèi), 加9 0 0m L水溶解, 用冰乙酸調(diào)節(jié)p H=4.0, 加水定容至1L, 混勻, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾后使用。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 藏花素標(biāo)準(zhǔn)品(C4 4H6 4O2 4,C A S號:4 2 5 5 3 - 6 5 - 1) , 純度9 0.0%。3.3.2 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)品(C2 0H2 4O4,C A S號:2 7 8 7 6 - 9 4 - 4) , 純度9 0.0%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 藏花素標(biāo)準(zhǔn)儲備液: 準(zhǔn)確稱取5 .0 0m g( 精確至0 .0 1m g) 藏花素標(biāo)準(zhǔn)品, 用甲醇溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花素濃度為0 .5m g/m L, 于4保存。3.4.2 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液: 準(zhǔn)確稱取1 .0 0m g( 精確至0 .0 1m g) 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)品, 用甲醇溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花酸濃度為0 .1m g/m L, 于4保存。3.4.3 藏花素、 藏花酸混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液: 分別均吸取藏花素標(biāo)準(zhǔn)儲備液、 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液0 .0 5m L、0.1m L、0.2m L、0.5m L、1.0m L于1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 62 別均為2.5g/m L、5g/m L、1 0g/m L、2 5g/m L、5 0g/m L, 藏花酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分別均為0.5g/m L、1g/m L、2g/m L、5g/m L、1 0g/m L, 于4保存。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀, 配置可見檢測器。4.2 分析天平: 感量為0.0 1m g和0.0 1g。4.3 離心機(jī): 轉(zhuǎn)速50 0 0r/m i n。4.4 酸度計(jì)。4.5 超聲波清洗儀。4.6 食品粉碎機(jī)。4.7 有機(jī)相型微孔濾膜: 孔徑0.4 5m。5 分析步驟5.1 試樣制備及保存5.1.1 液體樣品將飲料、 酒類、 醬油等樣品搖勻分裝, 密閉常溫或冷藏保存。5.1.2 半固態(tài)樣品對果凍等樣品取可食部分勻漿后, 攪拌均勻, 分裝, 密閉冷藏或冷凍保存。5.1.3 固體樣品餅干、 糕點(diǎn)、 熟肉制品、 可可制品等低含水量樣品, 經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎、 分裝, 于室溫下避光密閉保存。5.2 試樣處理5.2.1 液體樣品稱取2g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣( 若試樣中含二氧化碳應(yīng)先超聲除去) 置于燒杯中, 用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 5m L容量瓶中, 加甲醇定容, 搖勻。吸取1m L溶液過0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測。5.2.2 半固體試樣及固體試樣稱取2g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣于5 0m L離心管中, 準(zhǔn)確量取2 5m L甲醇溶液加入其中, 超聲2 0m i n后渦旋2m i n,40 0 0r/m i n離心1 0m i n, 吸取1m L上清液過0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測。5.2.3 醬油稱取1g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣置于燒杯中, 用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 0m L容量瓶中, 加甲醇定容, 搖勻。吸取1m L溶液過0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測。注:5.2過程應(yīng)在避免強(qiáng)光照射的環(huán)境下進(jìn)行。5.3 儀器參考條件儀器參考條件列出如下:G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 63 a) 色譜柱:C1 8色譜柱, 柱長2 5 0mm, 內(nèi)徑4.6mm, 粒徑5m, 或同等性能的色譜柱;b) 流動相:A: 乙酸-乙酸銨緩沖溶液,B: 乙腈, 梯度洗脫見表1;c) 進(jìn)樣量:1 0L;d) 流速:1.0m L/m i n;e) 檢測波長:4 4 0n m。表1 流動相及梯度洗脫條件時間m i n流速m L/m i n流動相A%流動相B%01.08 02 011.08 02 081.04 06 08.11.03 07 01 31.029 81 51.08 02 02 01.08 02 05.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入高效液相色譜儀中, 測定藏花素和藏花酸相應(yīng)的峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo), 以色譜峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線( 標(biāo)準(zhǔn)圖譜見圖A.1) 。5.5 試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到藏花素和藏花酸的峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中藏花素和藏花酸的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中藏花素和藏花酸的含量按式(1) 計(jì)算:X=V10 0 0m10 0 010 0 0F(1) 式中:X 試樣中藏花素或藏花酸的含量, 單位為克每千克(g/k g) ; 由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中藏花素或藏花酸的濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣品溶液定容體積, 單位為(m L) ;10 0 0 換算系數(shù);m 最終樣液代表的試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;F 標(biāo)準(zhǔn)品的純度折算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的1 5%。G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 64 8 其他方法檢出限(L O D) : 醬油樣品當(dāng)稱樣量為1.0g時, 藏花素為5 0m g/k g, 藏花酸為1 0.0m g/k g, 其他樣品取樣量為2.0g時, 藏花素為1 2.5m g/k g, 藏花酸為2.5m g/k g。方法定量限(L OQ) : 醬油樣品當(dāng)稱樣量為1.0g時, 藏花素為2 5 0m g/k g, 藏花酸為5 0.0m g/k g, 其