1、動物細胞工程,其中，動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎。,燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植。 但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學們想一想如何來治療該病人？,思考？,取該患者的皮膚進行細胞培養,獲得人造皮膚后再移植。,（一）、概念,是指從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖。,（二）、原理,細胞分裂增殖,一、動物細胞培養,(三)、動物細胞培養過程,取動物組織塊,剪碎組織,胰蛋白酶處理,細胞培養,單個細胞,動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎,剪碎組織,及胰蛋白酶處理的目的？,剪碎組織及胰蛋白

2、酶處理的目的：將組織分散成單個細胞，有利于細胞與培養液充分接觸，便于培養。,制成細胞懸液,動物胚胎或幼齡動物器官,因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養。,（四）動物細胞生長特性,1.細胞貼壁：細胞懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。 要求：培養瓶或培養 皿的內表面光滑 無毒、易于貼附。,2.接觸抑制,接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。,接觸抑制,（細胞為單層）,50代以后細胞失去接觸抑制,原代培養： 人們通常將動物組織消化后的初次培養稱為原代培養。 傳代培養： 貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續

3、培養，讓細胞繼續增殖。這樣的培養過程通常被稱為傳代培養。,培養過程：,動物胚胎或幼齡動物的細胞、組織或器官,細胞懸浮液,單個細胞,剪碎,細胞貼壁,剝離 分瓶,部分細胞的細胞核型發生變化,動物細胞培養最終不能培養成動物體,接觸抑制,培養器皿,超凈工作臺,實驗設備,細胞培養箱,倒置顯微鏡,（五）、動物細胞培養條件,1、無菌、無毒的環境 （添加一定量的抗生素；定期更換培養液） 2、營養 （葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等） 3、溫度和PH 溫度36.5+0.5度，pH7.27.4 4、氣體環境 O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,（使用合成培養基時，需加入血清、血漿等）,補充合

4、成培養基中缺乏的物質，如血清激素、氨基酸等。,CO2有調節PH的作用。,思考與討論,1、進行動物細胞傳代培養時用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？ 2、胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？,主要是蛋白質。 不行，因為動物細胞培養適宜PH為7.27.4，而胃蛋白酶適宜PH為2.0，胃蛋白酶會失去活性。,長時間會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用。所以應控制好胰蛋白酶的消化時間。,P44,3、動物細胞培養液與植物組織培養基相比，有何獨特之處？,4、動物細胞培養能否像綠色植物組織培養那樣最終培養成新個體？,動物細胞培養液的獨特之處有： 1、液體培養基 2、成分中有動

5、物血清等,不能，動物細胞培養只能使細胞數目增多，不能發育成新的動物個體,植物組織培養和動物細胞培養的比較,動物細胞培養技術的應用,生產蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等 健康細胞培養：如獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。 用于檢測有毒物質 用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據,P50,動物細胞培養要經過脫分化過程嗎？為什么？ 不經過。因為高度分化的動物細胞發育潛能變窄，失去了發育成完整個體的能力。,二、動物體細胞核移植技術和克隆動物,1. 概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育成

6、動物個體。,核移植,受體細胞：,細胞分化程度低，恢復全能性容易,用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。 2.原理：動物體細胞核的全能性。,（難度高）,M期的卵母細胞,選用去核卵母細胞的原因：卵母細胞比較大，容易操作；細胞質多，營養豐富，含有促進細胞核全能性表達的物質。,胚胎移植,動物細胞核移植,原理：動物細胞核具有全能性和細胞膜的流動性,討論：,1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？,為使遺傳物質全部來自有重要利用價值的動物。,P49,2.用于核移植 的供體細胞一般都選用傳代10代以內的細胞，想一想，這是為什么？ 培養的動物細胞一般當傳代至1050代左右時，部分細胞核型可能會發生變化，其細胞遺傳物質可能會發生突變，而 10代以內的細胞一般能保持正常的二倍體核型。,3.你認為用上 述體細胞核移植方法生產的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？ 不是。 克隆動物絕大部分DNA來自于供體細胞核， 少部分DNA