食品微生物食品微生物微生物的分離純化

一、目的要求

學(xué)習(xí)從混雜的微生物群體中分離與純化微生物菌種的方法。綜合練習(xí)微生物學(xué)實驗的各種無菌操作技術(shù)二、基本原理

自然界中各種微生物混雜生活在一起，即使取很少量的樣品也是許多微生物共存的群體。人們要研究某種微生物的特性，首先須使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。微生物的分離、純化技術(shù)是指從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程。微生物的平板分離純化技術(shù)自1880年被發(fā)明以來以有100多年的歷史，該技術(shù)的建立和發(fā)展為人類獲得豐富的微生物資源以及在工、農(nóng)、醫(yī)、環(huán)境、動物細胞培養(yǎng)等方面的應(yīng)用作出了巨大的貢獻。平板稀釋涂布、平板稀釋混合、平板劃線法是分離和純化微生物的常規(guī)方法。分離純化技術(shù)其實是進行平板接種，即用接種環(huán)將菌種接至平板培養(yǎng)基上，或用移液管、滴管將一定體積的菌液移至平板培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)。平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)，分離純化菌種，活菌計數(shù)及在平板上進行各種實驗時采用的一種接種方法。本實驗是利用分離純化技術(shù)來獲得三大類微生物的平板純培養(yǎng)物，為下次實驗微生物的形態(tài)觀察提供菌落形態(tài)的部分（形態(tài)觀察主要包括群體形態(tài)（菌落形態(tài)）和個體形態(tài)觀察兩個方面。三、實驗材料1、各組所需物品：無菌培養(yǎng)皿：兩包，12套無菌三角玻扒：1支無菌吸管：3支接種器具：酒精燈，鑷子，消毒棉球，打火機，標簽貼紙，圓珠筆，一次性口罩，紙巾。制平板的培養(yǎng)基：肉湯瓊脂培養(yǎng)基（1瓶）,麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基（1

瓶）(于殺菌鍋里保溫)

2、平板的制備：

將融化的瓊脂培養(yǎng)基,冷卻至50℃左右(以手背能忍受的溫度為準)溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于45℃時，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在酒精燈火焰旁進行，右手掌心握住三角瓶的底部，左手打開三角瓶棉塞，以右手的無名指和末指夾持瓶塞，灼燒瓶口。左手拿培養(yǎng)皿，用左手的大拇子將皿蓋掀開一縫，至瓶口剛好伸入，向皿內(nèi)注入培養(yǎng)基（約15mL,厚度約0.5mL左右），迅速蓋好皿蓋。左手持培養(yǎng)皿稍加旋轉(zhuǎn)搖動，使培養(yǎng)基均勻分布于整個培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即為平板。四、實驗內(nèi)容1.土壤稀釋液的制備四、實驗內(nèi)容2.平板混合分離法：

將土壤懸液分離樣品搖勻，用無菌移液管取1ml的菌液移至無菌培養(yǎng)皿中，然后將融化，涼至50℃左右的培養(yǎng)基，在每個培養(yǎng)皿內(nèi)各倒入約15ml，搖勻，凝固，制成平板。

混合倒平板操作法示意圖四、實驗內(nèi)容3.平板劃線分離法：

將土壤稀釋樣品搖勻，以無菌操作用接種環(huán)直接取試管中待分離純化的菌液，將菌液點種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約30℃）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線，劃線時平板面與接種環(huán)面成30-40℃，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線,接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基,線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。

四、實驗內(nèi)容

平板劃線分離操作法示意圖

平板劃線菌落分離效果圖4.平板涂布分離法(3皿)：將0.1ml土壤稀釋液小心地滴在平板培養(yǎng)基表面中央位置。右手拿無菌三角玻扒在平板培養(yǎng)基表面上,將菌懸液先沿一條直線輕輕地來回推動,使之分布均勻，然后改變方向沿另一垂直來回推動,平板內(nèi)邊緣處可改變方向用三角玻扒再涂布幾次。

涂布平板操作法示意圖四、實驗內(nèi)容5.生物的培養(yǎng)技術(shù)：培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)法

細菌于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-2d，平板倒置培養(yǎng)。霉菌和酵母菌于32℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3d，平板倒置培養(yǎng)。五、實驗報告1、觀察記錄實驗結(jié)果：微生物的菌落特征

注:菌落特征描寫方法參考如下：大小：大，中,小,針尖狀形態(tài)：圓形，不規(guī)則等干濕情況：干燥，濕潤，粘稠高度：扁平，隆起，凹下透明度：透明度，半透明，不透明顏色：黃色，金黃色，灰色，乳白色，紅色，粉紅色，黑色等邊緣：整齊，不整齊2、思考題: