18.3.4含量測定一、非水溶液滴定法重點(diǎn)原料藥

多數(shù)生物堿類藥物均以成鹽的形式作為原料，簡寫為BH+A-，游離生物堿在水溶液中堿性較弱，而所用酸為無機(jī)酸，酸性強(qiáng)，不能順利滴定。而在非水酸性介質(zhì)如冰醋酸中，只要生物堿鹽的弱堿性pKb大于10，都能被均化為溶劑的溶劑Ac-的堿性，使堿性強(qiáng)度增強(qiáng)，滴定能順利進(jìn)行。可以用非水HClO4直接滴定。2（一）原理水溶液中滴定突躍不明顯，在非水介質(zhì)中，堿性增強(qiáng)，使滴定順利進(jìn)行。BH+·A-+HClO4=BH+·ClO4-+HA

由于被置換出的HA酸性強(qiáng)弱不同，對滴定反應(yīng)的影響也不同。根據(jù)化學(xué)平衡的原理，必須除去或降低反應(yīng)產(chǎn)生的HA，使反應(yīng)順利完成。31.溶劑酸性溶劑：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐惰性溶劑：苯、氯仿、四氯化碳能影響溶質(zhì)的解離情況和能影響酸堿強(qiáng)度很大的溶劑：硝基甲烷、丙酮、二氧六環(huán)2.滴定劑：高氯酸的冰醋酸溶液或高氯酸的二氧六環(huán)溶液4無機(jī)酸在冰醋酸中的酸性次序?yàn)椋焊呗人幔練滗逅幔玖蛩幔钧}酸＞＞硝酸＞其它弱酸（磷酸、有機(jī)酸）酸HClO4H2SO4HClHNO3

Ka1.6×10-56.3×10-91.6×10-94.2×10-103.指示終點(diǎn)的方法電位法：玻璃—甘汞電極系統(tǒng)指示劑法：結(jié)晶紫、喹哪啶紅等5（二）適用范圍

有機(jī)堿及其鹽類及有機(jī)酸堿金屬鹽類（溶劑的選擇）8＜pKb＜10冰醋酸作溶劑10＜pKb＜12冰醋酸+醋酐pKb＞12醋酐

醋酐離解生成的醋酐合乙酰陽離子是比醋酸合質(zhì)子更強(qiáng)的酸。6（三）酸根的影響（1）硝酸在冰醋酸中為弱酸，能使反應(yīng)完全，不影響滴定，但硝酸要氧化指示劑，干擾滴定，且突躍不明顯，用電位指示終點(diǎn)；（2）氫溴酸和鹽酸為強(qiáng)酸，存在使反應(yīng)無法定量進(jìn)行，可加入醋酸汞冰醋酸溶液，形成難以解離的HgX2，而使反應(yīng)完全，排除干擾。7（3）硫酸一級電離是強(qiáng)酸，二級電離是弱酸，在冰醋酸中顯示為一元酸，滴定至硫氫酸鹽，因此，要注意滴定度的計(jì)算，一元生物堿的硫酸鹽用高氯酸滴定時是1：1mol反應(yīng)；若是二元生物堿時是1：3mol反應(yīng)，計(jì)算滴定度時要除以3；也有人用氯化鋇除去硫酸根，在滴定時以1：2mol反應(yīng)。8（四）一般測定方法

一般采用半微量法。ChP（2020）的測定方法為：取經(jīng)適當(dāng)方法干燥的供試品適量〔約消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8ml〕，加冰醋酸10～30ml使溶解。若供試品為氫鹵酸鹽，應(yīng)再加5％醋酸汞的冰醋酸溶液3～5m1，加各藥品項(xiàng)下規(guī)定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。9咖啡因ChP(2020)

取本品約0.15g，精密稱定，加醋酐—冰醋酸（5∶1）的混合液25ml，微熱使溶解，放冷，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯黃色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.42mg的C8H10N4O2。含量=[（V0-V）×T×F]/W*100%10鹽酸麻黃堿ChP(2020)

取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于20.17mg的C10H15NO·HCl。11硝酸士的寧ChP(2020)

取本品約0.3g，精密稱定，加冰醋酸20ml，振搖使溶解，照電位滴定法（附錄ⅦA），用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于39.74mg的C21H22N2O2·HNO3。12制劑含量1.注射劑（1）一般是取一定量樣品在水浴上蒸干，在一定溫度下干燥后按原料藥物項(xiàng)下的方法進(jìn)行。——主藥對熱穩(wěn)定鹽酸罌粟堿注射液ChP（2020）

精密量取本品10ml，置水浴上蒸干，在105℃干燥1h，放冷，加冰醋酸10ml，與醋酸汞試液6ml使溶解，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于37.58mg的C20H21NO4·HCl。13（2）堿化，經(jīng)有機(jī)溶劑反復(fù)提取完全，蒸去溶劑后，再按原料藥方法進(jìn)行。——主藥對熱不穩(wěn)定二鹽酸奎寧注射液

ChP（2020）

精密量取本品適量（約相當(dāng)于二鹽酸奎寧0.15g），置分液漏斗中，加水使成20ml，加氨試液使成堿性，用氯仿分次振搖提取，第一次25ml，以后每次各10ml，至奎寧提盡為止，每次得到的氯仿液均用同一份水洗滌2次，每次5ml，洗液用氯仿10ml振搖提取，合并氯仿液，置水浴上蒸去氯仿，加無水乙醇2ml再蒸干，在105℃干燥1h，放冷，加醋酐5ml與冰醋酸10ml，溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，14用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.87mg的C20H24N2O2·2HCl。2.片劑

片中許多賦形劑如硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、羧甲基纖維素鈉等都消耗高氯酸，因此片劑的測定一般需提取分離并經(jīng)干燥后才可進(jìn)行。如硫酸奎寧片、硫酸奎尼丁片堿化、有機(jī)溶劑提取后，HClO4滴定時，反應(yīng)摩爾比為1∶4。15硫酸奎寧片ChP（2020）取本品10片，除去糖衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g），置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加氯仿50ml，振搖10min，靜置，分取氯仿液，用干燥濾紙濾過。精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于19.57mg的（C20H24N2O2）2·H2SO4·2H2O。16二、提取中和法

提取酸堿滴定法、提取容量法（一）原理與方法171.堿化2.有機(jī)溶劑提取（1）直接滴定法用于堿性較強(qiáng)的生物堿3.中和法測定18（2）剩余滴定法用于堿性較弱的生物堿（3）酸滴定液返提后剩余滴定法用于對熱不穩(wěn)定的生物堿19（二）測定條件的選擇1.堿化試劑最常用氨水2.提取溶劑（1）提取溶劑選擇的原則（2）常用的提取溶劑最常用氯仿（3）提取溶劑的用量及提取次數(shù)通常應(yīng)提取4次，第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半，以后幾次應(yīng)各為第一次的一半。203.提取終點(diǎn)的確定用合適的沉淀反應(yīng)確定4.指示劑的選擇

5.乳化的預(yù)防和消除21（三）特點(diǎn)

儀器簡單、試劑常用，但操作繁瑣、費(fèi)時、精密度差、準(zhǔn)確度差，主要用于制劑分析。（四）應(yīng)用阿片粉中嗎啡的含量測定ChP（2020）

22（五）提取重量法23三、酸性染料比色法制劑（一）基本原理在一定pH值條件下，生物堿鹽的陽離子和酸性染料的陰離子定量結(jié)合生成配位化合物，即離子對，此離子對易溶于有機(jī)溶劑，經(jīng)有機(jī)溶劑（氯仿等）提取后，在一定波長處測定該溶液有色離子對的吸收度，計(jì)算出生物堿的含量。1.水相中反應(yīng)2.有機(jī)溶劑提取24

離子對BH+·In-被有機(jī)溶劑提取，使有機(jī)相呈色。剩余的酸性染料留于水相。3.比色法測定（1）定量分離出有機(jī)提取液，脫水后，測定A，求出有機(jī)堿含量。（2）定量分離出有機(jī)提取液，脫水后，堿化，則水相呈色，測定水相中In-的吸收度，間接求出有機(jī)堿的含量。

BH+In-+OH-→B+H2O+In-（3）定量分離出有機(jī)提取液，脫水后，酸化，則水相呈色，測定水相中HIn的吸收度，間接求出有機(jī)堿的含量。25（二）影響定量分析的因素1.水相的最適pH值如果水相pH值過小，酸性染料幾乎仍以分子狀態(tài)存在；如果水相pH值過大，則生物堿幾乎全部以游離堿的形式存在。2.有機(jī)溶劑的選擇CHCl3、CH2Cl23.酸性染料的選擇常用溴甲酚綠、溴麝香草酚藍(lán)（BTB）等4.水分的影響嚴(yán)防水分的混入有機(jī)層可加入無水硫酸鈉等脫水劑或經(jīng)干燥濾紙濾過

265.有色雜質(zhì)的排除6.共存物的影響（三）特點(diǎn)1.選擇性高（選用適當(dāng)pH緩沖液可消除干擾）2.靈敏度高、供試品用量少3.準(zhǔn)確度差，不能用于原料藥的測定，只能用于制劑分析27（四）應(yīng)用硫酸阿托品注射液ChP（2020）注射液對照法片劑對照法28

四、紫外—可見分光光度法五、色譜法（一）高效液相色譜法

1．反相HPLC分析生物堿類和有機(jī)含氮藥物的特點(diǎn)色譜峰拖尾，保留時間過長，甚至長期地保留在色譜柱上。

反相離子對色譜法是將待測組分的反離子加入到流動相中，同呈離解狀態(tài)的藥物作用生成可逆的離子對化合物。29

采用化學(xué)鍵合相作為固定相，即在硅膠表面，利用硅醇基R-Si-OH（R表示硅膠載體）的活性與有機(jī)硅烷反應(yīng)，使硅烷基鍵合在硅膠表面，如鍵合為十八烷基是形成常用的十八烷基鍵合固定相（ODS）。在硅膠表面引入硅烷基形成的固定相極性很弱，而流動相系統(tǒng)，多采用水-甲醇或水-乙腈系統(tǒng)，極性較強(qiáng)，流動相的極性大雨固定相極性的色譜方法稱為反相高效液相色譜法。302．解決方法（1）加掃尾劑法分離依據(jù)物質(zhì)的極性及溶解性。在流動相中加入掃尾劑，最常用的掃尾劑是三乙胺（2）用硅膠作固定相法離子交換機(jī)理：根據(jù)pKa大小進(jìn)行分離

流動相要選擇適宜的pH值、競爭離子的種類和濃度，同時要加入有機(jī)改性劑，適合于藥物與體內(nèi)代謝物的分析。（3）用金剛烷基硅烷化硅膠作固定相法分離依據(jù)物質(zhì)溶解性31（二）氣相色譜法

不論是游離堿還是其鹽類，均是以游離堿出峰32例1：咖啡因和茶堿的特征鑒別反應(yīng)是：A.雙縮脲反應(yīng)B.Vitali反應(yīng)C.Marquis反應(yīng)D.紫脲酸銨反應(yīng)E.綠奎寧反應(yīng)答案：D33例2：鹽酸嗎啡中應(yīng)檢查的特殊雜質(zhì)為：A.嗎啡B.阿樸嗎啡C.罌粟堿D.莨菪堿E.其它生物堿答案：BCD34例3：用非水溶液滴定法測定鹽酸嗎啡含量時，應(yīng)使用的試劑是：A.5％醋酸汞冰醋酸液B.鹽酸C.冰醋酸D.二甲基甲酰胺E.高氯酸答案：ACE35例4：非水溶液滴定法測定硫酸奎寧含量的反應(yīng)條件為:A．冰醋酸一醋酐為溶劑B.高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定C．1mol的高氯酸與?mol的硫酸奎寧反應(yīng)D.僅用電位法指示終點(diǎn)E．溴酚藍(lán)為指示劑答案：ABC36例5：非水溶液滴定法測定硫酸奎寧原料的含量時，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介質(zhì)中的供試品，1摩爾硫酸奎寧需要消耗高氯酸的摩爾數(shù)為：A.1B.2C.3D.4E.5答案：C37例6：A.雙縮脲反應(yīng)B.Marquis反應(yīng)C.兩者皆是D.兩者皆不是1.鹽酸麻黃堿2.某些生物堿類藥物3.鹽酸嗎啡4.咖啡因5.硫酸奎尼丁（A）（C）（B）（D）（D）38例7：生物堿類藥物的一般鑒別試驗(yàn)包括：