pcr考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術的發明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.PCR反應中，DNA變性所需的溫度一般是（）A.55-60℃B.72℃C.90-95℃D.37℃答案：C3.以下哪種酶是PCR反應所必需的（）A.限制酶B.DNA連接酶C.Taq酶D.逆轉錄酶答案：C4.PCR反應體系中，引物的作用是（）A.提供模板B.提供能量C.引導DNA合成的起始D.促進DNA聚合答案：C5.在PCR反應中，延伸步驟的溫度一般為（）A.55-60℃B.72℃C.90-95℃D.37℃答案：B6.PCR反應的循環次數一般為（）A.1-5次B.10-20次C.20-30次D.50-60次答案：C7.下列哪項不是影響PCR反應的因素（）A.模板質量B.引物濃度C.光照強度D.酶的活性答案：C8.以下關于PCR產物的說法正確的是（）A.都是雙鏈DNAB.都是單鏈DNAC.可以是雙鏈或單鏈DNAD.是RNA答案：C9.PCR反應中，鎂離子的作用是（）A.激活酶活性B.穩定DNA結構C.作為底物D.抑制反應答案：A10.對于一個特定的PCR反應，引物長度一般為（）A.5-10個堿基B.15-30個堿基C.50-100個堿基D.100-200個堿基答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.DNA聚合酶D.dNTPs答案：ABCD2.以下哪些情況可能導致PCR擴增失敗（）A.引物設計不當B.模板DNA降解C.酶失活D.反應體系中存在抑制劑答案：ABCD3.PCR技術在以下哪些領域有應用（）A.基因診斷B.法醫學鑒定C.基因克隆D.遺傳疾病研究答案：ABCD4.引物設計時需要考慮的因素有（）A.長度B.特異性C.GC含量D.退火溫度答案：ABCD5.在PCR反應中，以下哪些物質可以作為模板（）A.基因組DNAB.cDNAC.質粒DNAD.線粒體DNA答案：ABCD6.PCR反應的特點包括（）A.特異性強B.靈敏度高C.操作簡便D.快速高效答案：ABCD7.下列關于Taq酶的描述正確的是（）A.熱穩定B.來源于嗜熱微生物C.催化DNA合成D.對鎂離子有依賴性答案：ABCD8.以下屬于PCR衍生技術的有（）A.巢式PCRB.反向PCRC.熒光定量PCRD.多重PCR答案：ABCD9.PCR反應中，dNTPs的作用有（）A.提供合成原料B.參與能量代謝C.維持反應體系的離子平衡D.穩定DNA結構答案：A10.影響PCR反應特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.酶的質量答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應只能擴增雙鏈DNA。（）答案：錯誤2.Taq酶在PCR反應中可以反復使用。（）答案：正確3.引物的退火溫度越高越好。（）答案：錯誤4.PCR反應不需要模板也能進行。（）答案：錯誤5.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤6.PCR產物的長度是固定不變的。（）答案：錯誤7.增加PCR反應的循環次數一定會提高產物量。（）答案：錯誤8.引物與模板的結合是完全互補的。（）答案：錯誤9.在PCR反應中，鎂離子濃度過高會抑制反應。（）答案：正確10.熒光定量PCR可以實時監測PCR反應進程。（）答案：正確四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本步驟。答案：PCR反應基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱到90-95℃，使雙鏈DNA解開為單鏈；退火是將溫度降低到引物的退火溫度（一般55-60℃），使引物與模板鏈互補結合；延伸是在72℃下，Taq酶以dNTPs為原料在引物的引導下合成新的DNA鏈。2.引物設計的原則有哪些？答案：引物設計原則包括：長度一般為15-30個堿基；具有特異性，避免與非靶序列結合；GC含量適中，一般40-60%；引物之間不能互補形成二聚體；退火溫度合適等。3.簡述Taq酶在PCR反應中的作用。答案：Taq酶是一種熱穩定的DNA聚合酶，在PCR反應中以dNTPs為原料，依據引物與模板的結合位點，催化合成與模板互補的新的DNA鏈，從而實現DNA的擴增。4.說出至少三種PCR衍生技術及其用途。答案：巢式PCR用于提高特異性和靈敏度，檢測低拷貝數的模板；熒光定量PCR用于定量分析基因表達量；多重PCR可同時擴增多個目標片段，用于檢測多種病原體或基因位點。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術在疾病診斷中的優勢與局限性。答案：優勢：特異性強能準確檢測病原體基因，靈敏度高可檢測低濃度病原體，操作相對簡便快速。局限性：容易受污染導致假陽性，對一些復雜基因變異檢測可能存在不足，無法直接檢測病原體的活性等。2.如何提高PCR反應的特異性？答案：可通過優化引物設計確保特異性，提高退火溫度，使用高質量的模板、酶和試劑，采用巢式PCR等衍生技術提高特異性。3.闡述PCR反應中模板質量對結果的影響。答案：高質量模板可使PCR反應正常進行，產量和特異性較好。若模板降解會導致擴增失敗或產物量