兒童呼吸道合胞病毒疫苗的研究進展2025呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)是一種單股負鏈非節段性RNA病毒，主要通過飛沫、接觸等途徑傳播，能夠引發呼吸道感治療甚至導致死亡的嚴重下呼吸道感染。RSV感染是全世界5歲以下兒一生中會反復感染，對人體的危害較大。2019年開展的一項針對兒童的流行病學研究發現，全球范圍內因RSV引發的急性下呼吸道感染的病例數估計達到了3300萬例，因RSV相關的急性下呼吸道感染死亡的5歲以下兒童數量為6.6萬~19.0萬[1]。除此之外，在嬰幼兒階段感染RSV因此，開發可用的RSV疫苗非常重要。但由于對RSV融合蛋白(fusionproteins,F)構象變化的認識不明晰、生物技術不夠成熟，及福爾馬林滅活疫苗(Formalin-inactivatedRSVvaccine,FI-RSV)研發失敗等原因，造成此前RSV疫苗研發并不順利。近年來，隨著對RSV生物結構及發病機制的理解，以及在新型冠狀病毒肺炎(CoronaVirusDisease2019,COVID-19)期間成分疫苗的快目前已有亞單位疫苗及核酸疫苗被批準用于老年人預防RSV感染。但由(vaccine-enhanceddiseases,VED),低齡兒童疫苗的研發尤為艱難。母體疫苗的研發改善了兒童疫苗的現狀。2023年，美國食品藥品監督管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)首次批準了用于預防嬰個月對嚴重RSV疾病提供短暫保護，不足以持久保護大齡嬰兒和幼兒免受感染，而80%的RSV相關下呼吸道感染和超過一半的RSV死亡發生現對RSV生物結構及預防兒童RSV感染疫苗的最新研究進展進行綜述。RSV有10個基因，共編碼11種蛋白質，包括核蛋白(nuclearproteins,N)、基質蛋白(matrixproteins,M)、F蛋白、黏附蛋白(glycoproteins,G)、小疏水蛋白(smallhydro磷蛋白(phosphoproteins,P)、大聚合酶亞單位蛋白(largepolymeraseproteins,L)、調節M2蛋白(regulatoryM2proteins,M2)及非結構蛋白[3]。膜表面的F、G蛋白含有抗原表位，在RSV感染或接種疫苗后附因子相互作用將病毒黏附在宿主細胞上。亞組中的大多數G蛋白，根據其抗原性，將RSV分為RSV-A和RSV-B兩種亞型。病毒F蛋白通過強烈的構象變化驅動病毒和宿主細胞膜的融合[4],促進病毒的進入。融合前亞穩定狀態的F蛋白(PreF)目前被解析的抗原位點有6個：I、Ⅱ、Ⅲ、IV、V和φ,融合后F蛋白(PostF)的抗原位點有4及相對保守性，目前已成為疫苗最廣泛的靶向抗原蛋白。SH參與延遲感自RSV首次被發現到2023年批準第一批疫苗，疫苗研發已歷經60多年。答：血清陰性的疫苗接種患兒較對照組高熱、氣喘及肺炎的發生率更高，且2名注射嬰兒死亡，引起VED,最終以失敗告終[7]。后續研究表明VED產生的原因可能是FI-RSV在處理過程中，導致部分抗原表位變化；也可能是剛出生嬰兒的免疫系統發育不成熟及體內被FI-RSV誘導產生以輔助性T細胞2(Thelper2cell,Th2)偏向物，激活補體，引起炎癥和組織損傷；FI-RSV引起Th2偏向的CD4+T細胞反應，促進無效抗體應答IgE產生及相關細胞因子白細胞介素4和白細胞介素13分泌，引起類似過敏樣表現，再次感染時致使嗜酸性粒細胞增多及產生氣道高反應性[8]。2013年，RSVF蛋白結構得到解析，逐漸明晰F蛋白融合前與融合后的構象差異，疫苗研究隨之進入新階段。目前正在研發中的兒童RSV疫苗包括減毒活疫苗(live-attenuatedmRNA疫苗及載體疫苗等類型。下列為部分正在研發的兒童RSV疫苗。耗時較長，且難以預測回復突變的概率及產來，隨著反向遺傳技術的成熟，通過突變病抗體與感染野生型RSV的初次應答相當，疫苗誘導的空斑減少中和實驗 (plaquereductionneutral呼吸道感染的保護[9]。MV-012-968:是美國MeissaVaccines公司2017年通過密碼子優化下調RSV的毒力基因減弱毒性，及增加RSVF蛋白的表達，增加免疫原性研發的一種LAV。2023年8月公布的針對6~36個月血清陰性兒童的臨床數據顯示：100%的RSV血清陰性的嬰幼兒對間隔28d予2劑10?PFU/L的MV-012-968可產生免疫反應，且是美國國家過敏和傳染病研究所通過缺失M2-2基因制備的一種LAV,與從而增加保護性抗原的表達量。2015年的I期臨床試驗顯示：RSV血清陰性兒童中接種MEDI△M2-2,體內疫苗復制受到高度限制，但是，抗RSV的中和抗體滴度提高了4倍[11]。為優化該疫苗候選物的免疫保護效能，針對低溫適應型RSVA2株進行基因工程改造，通過缺失M2-2基因調控蛋白表達，構建新型減毒活疫苗株LID△M2-2。基于6~24月齡嬰幼兒群體的臨床試驗數據顯示，該疫苗免疫后受試群體血清中和抗體效價較基線水平提升超過4倍，達到90%的血清轉化率，但疫苗接種組呼吸道癥狀及發熱反應發生率較高[率可能會使其在大量人群中耐受不良，在2019年，通過刪除M2-2和5個冷傳突變制備了LIDcp△M2-2疫苗，I期臨床試驗顯示：90%的疫苗接種者RSV中和抗體滴度及85%的RSVIgG滴度增加4倍以上，但較多疫苗接種者和安慰劑組接種者也出現了呼吸道癥狀[13]。2020年，RSV候選疫苗D46/NS2/N/△M2-2-HindⅢ在6~24月齡的兒童中進行的I期臨床試驗結果顯示：21例疫苗接種者中，95%的疫苗接種者肺泡灌洗液中監測到疫苗脫落，95%的接種者血清RSV中和抗體和100%抗RSVIgG滴度升高超過4倍，76%的接種者在接種期間出現輕度上呼癥狀的免疫應答。該疫苗具有良好的感染性和InstituteofHealth,NIH)和Med-Immune公司前期通過化學誘變和低溫條件下連續傳代篩選得到冷適應溫度敏感株cpts248/404,但因其臨床試驗顯示會引起鼻塞，影響新生兒的睡眠和哺乳。隨后，通過剔除SH基因，并在L基因1030位引入點突變制備重組疫苗2013年針對5~24個月的血清陰性的嬰幼兒進行I期臨床試驗，結果顯示59%的MEDI-599疫苗接種者可以觀察到功能性免疫反應，有良好因組248及1030位點表現出較高的回復突變頻率。為優化疫苗株的基因在6~24月齡嬰幼兒中開展的I期臨床試驗結果顯示：60%的接種者血RSV/△NS2/△1313/I1314L:該LAV是NIH聯合賽諾菲公司研發的，通過將MEDI-599的NS2基因片段和1313位點氨基酸殘基靶向缺失，一項針對12~59個月RSV血清陽性和陰性兒童的I期臨床試驗，結果顯示：在RSV血清陰性的兒童中，10?PFU/劑耐△1313/I1314L和RSV/2762種候選疫苗，結果顯示：2種疫苗均具有良好的安全性和免疫原性，RSV/276疫苗組的咳嗽癥狀略多[17]。因清陰性的患兒接種后有產生VED的風險[18]。因此，該疫苗目標人群為的亞單位疫苗，包含RSVA、B2種具有穩定性和免疫原性的構建體847,引入3種突變，即二硫橋(T103C-I148C),利用非極性氨基酸填充空腔(S190I)和電荷中和突變，減少離子排斥或增強預融合構象中三聚體的離子吸引制備[19]。Abrysvo是一種母體疫苗，可通過胎盤傳給胎兒，剛出生的嬰兒通過母乳從母體獲得抗RSV特異性抗體。Ⅲ期臨床試驗的結果顯示，Abrysvo在降低出生90d內與RSV相關的嚴重下呼吸道感染風險方面的有效性為81.8%,在降低180d后的有效性為69.4%[20]。但是，Ⅱb和Ⅲ期臨床試驗中，妊娠24~36周的孕婦注射RSVPreF疫苗，與安慰劑組相比，疫苗組早產發生率稍高，疫苗組5.7%的嬰兒為早產兒，安慰劑組只有4.7%,差異無統計學意義，但沒有充足證據排除對早產的影響[21]。因此，在2023年8月，FDA首個批準該疫苗用于妊娠32~36周的孕婦來預防6個月內嬰兒因RSV引起的下呼吸道感染[22]。RSVPreF3疫苗(Arexvy):英國GSK公司以RSVF蛋白的預融合構象為主要抗原，通過引入二硫橋(S155C和S290C)和疏水空間(S190F和V207L)突變制成[23]。針對60歲及以上個體的臨床試驗顯示出良好的安全性和免疫原性，將發生RSV相關下呼吸道疾病的風險降低了71.7%[24]。2023年5月，FDA批準Arexvy用于60歲及以上的老年人[17]。在妊娠中晚期的孕婦中使用無佐劑RSVPreF3疫苗的I/Ⅱ期臨床試驗結果顯示，在母親和嬰兒中具有良好的安全性(無妊娠相關或新生兒不B2種亞型，在出生后181d下降[25]。但針對妊娠24~34周孕婦的Ⅲ示：疫苗組的早產率為6.8%,新生兒死亡率為0.4%,而安慰劑組早產率為4.9%,新生兒死亡率為0.2%,這種現象主要發生在中低收入國家[26]。2.3mRNA疫苗宿主細胞內，在體內可自然降解，促進不穩具有較高的安全性，同時還能激活體液和細胞免疫。但在COVID-19流重視mRNA疫苗的安全性問題。RNA-1345:是美國Moderna公司為了提高免疫原性，通過序列設計和密碼子優化改進mRNA-1777疫苗，得到編碼穩定的預融合F蛋白的疫苗，主要結構是利用脂質納米顆粒(lipidnano-particle,LNP)包裹編碼預融合F蛋白全長的mRNA。2024年5月，FDA批準該疫苗用于保護60歲及以上成年人免受RSV引起的下呼吸道疾病[27],這是基于美國Moderna公司公布的初步臨床數據：針對≥60歲的成人的Ⅲ期臨床試驗結果顯示，該疫苗對至少有2種RSV相關下呼吸道感染癥狀或體征的保護效力為83.7%,且具有良好的安全性[28],但近期公布的臨床數據也顯示該疫苗的功效較Arexvy減弱得更快[29]。目前正在針對2~18歲的兒童和有生育能力的女性進行對兒童的核酸疫苗有效性及耐受性的數據公布，重組載體疫苗通過基因工程改造的復制缺陷型病毒載體系統，將RSV抗制。近年來，隨著腺病毒疫苗的開發，新的在2種COVID-19腺病毒載體疫苗中觀察到疫苗誘導的免疫性血栓性血小板減少[30]。因此，載體疫苗在開發過程中應更加關注其安全性問題。目前常用的載體有腺病毒、副流感病毒等。ChAd155-RSV:英國GSK公司利用黑猩猩腺病毒-155(ChimpanzeeAdenovirus,ChAd155)載至病毒載體基因組，構建出重組載體疫苗。在針對12~23月齡RSV血清陽性兒童的免疫原性研究中，該疫苗誘導的RSV特異性抗體滴度呈現劑量依賴性增長，且受試者耐受性良好[31]。2024年進行的一項I/Ⅱ期隨機對照試驗評估了ChAd155RSV在嬰兒中的安全性和免疫原性，結果顯示在接種后第31天、第61天和第1個RSV季節(平均隨訪7個月)結期積極數據，目前該疫苗已進入針對RSV血清陰性嬰幼兒的Ⅲ期臨床試驗階段。BLB-201: