Snail與Axl在上皮性卵巢癌中的表達、關聯及臨床意義探究一、引言1.1上皮性卵巢癌概述上皮性卵巢癌在女性生殖系統腫瘤中占據著極為關鍵且嚴峻的地位。其發病率在女性生殖系統惡性腫瘤中位居前列，嚴重威脅著女性的生命健康。據相關統計數據表明，在全球范圍內，卵巢癌的發病率呈現出逐漸上升的趨勢，而其中上皮性卵巢癌約占全部卵巢惡性腫瘤的90%。在中國，以上海市疾控中心發布的2007年統計資料為例，卵巢癌首次進入女性惡性腫瘤發病率的前十位，發病率為十萬分之5.63，死亡率為十萬分之2.24。從全球視角來看，美國癌癥協會預測2010年美國卵巢癌新發病例數約為21880例，死亡病例數約為13850例。上皮性卵巢癌的死亡率更是高居婦科惡性腫瘤之首，堪稱女性健康的“沉默殺手”。這主要歸因于其早期診斷面臨著極大的困難。卵巢的解剖位置較為特殊，深藏于盆腔深處，加之目前缺乏簡單有效的早期診斷方法，使得約70%-80%的患者在確診時病情已進展到晚期。此時，腫瘤往往已經發生轉移，治療難度大幅增加，患者的5年生存率低至20%左右。盡管歷經全世界婦科學家的不懈努力，卵巢腫瘤細胞減滅術及以鉑類為主的化療方案已日趨成熟，但上皮性卵巢癌發生、發展及浸潤轉移的分子機制至今仍未完全明晰，腫瘤的復發與轉移問題依舊是亟待攻克的難題。1.2Snail和Axl研究背景在腫瘤研究的廣闊領域中，Snail作為一種關鍵的轉錄因子，以及Axl作為受體酪氨酸激酶，均占據著舉足輕重的地位。Snail基因定位于人染色體第20號染色體20q12.3，其編碼的蛋白質是Snail家族的重要成員。Snail家族成員具有相似的亞金屬鉛指型轉錄因子結構，由含有4個非常保守的不均勻C2H2亞金屬鉛指結構的羧基化學基端DNA結合區和多變的氨基酸端調控區組成。Snail通過與包含CAG灰階響應時間的核鹽化學基序列的靶基因上的E-box作用元件結合，發揮轉錄抑制子的作用，在多種生物學過程中發揮關鍵作用。大量研究表明，Snail在胚胎發育進程里發揮著不可或缺的作用，其能夠調節細胞的增殖、分化以及遷移等行為。而在腫瘤領域，Snail更是與腫瘤的生長、侵襲和轉移緊密相連。在乳腺癌組織中，Snail蛋白及其mRNA表達顯著上調，其可以通過轉錄抑制劑作用，下調E-cadherin的表達水平，從而促進細胞的侵襲和轉移，同時，Snail也可以通過促進N-cadherin的表達，導致腫瘤細胞的上皮-間質轉化，在乳腺癌發生發展中具有重要的調控作用。在肝癌、胃癌等多種惡性腫瘤中，Snail也呈現出異常表達，推動著腫瘤的惡化進程。Axl基因位于人類染色體19q13.2，編碼的蛋白質含有894個氨基酸，分子量為104kDa，屬于Ⅰ型跨膜受體，與Mer、Tyro3共同組成酪氨酸激酶家族，其唯一激活配體為維生素K依賴性生長停滯特異性基因6（GAS6）。Axl在正常人體多胚層組織中存在，參與PI3K/Akt、MAPK、NF-κB、STAT3等多種信號途徑。在神經膠質瘤、前列腺癌、胃腸道間質瘤等多種惡性腫瘤中，Axl均呈現出異常表達的狀態，深刻影響著腫瘤細胞的浸潤、生長微環境以及轉移速度和預后。在非小細胞肺癌中，腫瘤細胞和腫瘤相關纖維母細胞之間的動態和旁分泌相互作用會上調Axl，進而通過調控GAS6/AXL軸影響腫瘤侵襲，對患者預后產生不良影響。Axl還可以通過促進MMP-9的表達并增強其活性，當腫瘤細胞大量表達Axl時，引發MMP-9的表達增加，進而分解基底膜及細胞外基質，使得腫瘤細胞侵襲、轉移能力顯著增強。鑒于Snail和Axl在眾多腫瘤類型中展現出的關鍵作用，探究它們在上皮性卵巢癌中的表達情況、相互關系以及對腫瘤發生發展的影響，具有極高的研究價值。這不僅有助于深入揭示上皮性卵巢癌的發病機制，還可能為其診斷、治療和預后評估開辟全新的思路和方法，為攻克這一嚴重威脅女性健康的疾病提供有力的理論支持和實踐依據。1.3研究目的與意義本研究旨在深入檢測上皮性卵巢癌組織中Snail和Axl蛋白的表達情況，通過精準分析二者表達強度的相關性以及與臨床病理特征的關系，全面探討這兩種蛋白在上皮性卵巢癌發生、發展及浸潤轉移過程中的重要意義。Snail和Axl在上皮性卵巢癌中的異常表達可能對腫瘤的發生、發展進程產生關鍵影響。檢測它們在上皮性卵巢癌組織中的表達情況，能夠為后續研究二者在腫瘤發展中所扮演的角色提供直接的數據支持。若發現Snail和Axl的表達與腫瘤的惡性程度、轉移潛能等存在關聯，那么就有可能將它們作為潛在的生物標志物，用于上皮性卵巢癌的早期診斷和病情監測。分析二者表達強度的相關性，有助于揭示它們之間可能存在的協同作用機制，進一步闡明上皮性卵巢癌的發病機制。深入研究它們與臨床病理特征的關系，能夠更全面地了解上皮性卵巢癌的生物學行為，為臨床治療方案的選擇和預后評估提供有力的理論依據。對于上皮性卵巢癌的治療而言，尋找有效的治療靶點一直是研究的重點和難點。如果Snail和Axl被證實與上皮性卵巢癌的發生、發展密切相關，那么它們就有可能成為潛在的治療靶點。通過針對這兩個靶點開發特異性的治療藥物，如小分子抑制劑、抗體等，有望阻斷相關信號通路，抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移，從而為上皮性卵巢癌患者提供更有效的治療手段，提高患者的生存率和生活質量。綜上所述，本研究對于深入理解上皮性卵巢癌的發病機制，尋找新的治療靶點和生物標志物具有重要的理論和實踐意義，為攻克這一嚴重威脅女性健康的疾病開辟新的道路。二、材料與方法2.1實驗材料2.1.1標本收集本研究選取了[醫院名稱]在[具體時間段]期間手術切除并經病理證實的上皮性卵巢癌標本56例，上皮性卵巢良性腫瘤標本56例，以及正常卵巢組織標本28例。上皮性卵巢癌患者年齡范圍在32-78歲，平均年齡為（52.6±8.4）歲。其中，根據國際婦產科聯盟（FIGO）分期標準，I期患者10例，II期患者16例，III期患者22例，IV期患者8例；病理組織類型方面，漿液性癌30例，黏液性癌12例，子宮內膜樣癌8例，其他類型6例；分化級別上，高分化14例，中分化20例，低分化22例；發生淋巴結轉移的患者有24例。上皮性卵巢良性腫瘤患者年齡在25-65歲，平均年齡（45.8±7.2）歲，包含漿液性囊腺瘤30例，黏液性囊腺瘤20例，其他類型6例。正常卵巢組織來源于因子宮肌瘤或其他婦科疾病行子宮及附件切除且卵巢外觀及病理檢查均正常的患者，年齡在30-60歲，平均年齡（48.5±6.8）歲。所有標本在手術切除后，立即用10%中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋，4μm連續切片，用于后續的免疫組化檢測。患者在術前均未接受放療、化療或其他生物治療，且簽署了知情同意書，本研究符合醫院倫理委員會的相關規定。2.1.2試劑及主要儀器免疫組化實驗所需試劑如下：鼠抗人Snail單克隆抗體購自[抗體品牌1]公司，工作濃度為1:100；兔抗人Axl多克隆抗體購自[抗體品牌2]公司，工作濃度為1:150；免疫組化檢測試劑盒（SP法）、DAB顯色試劑盒均購自[試劑盒品牌]公司；蘇木素染液、伊紅染液、二甲苯、無水乙醇、PBS緩沖液等試劑均為國產分析純。主要儀器包括：德國LeicaDM2000型光學顯微鏡，用于切片的觀察和拍照；德國BinderFD115型烘箱，用于切片的烤片處理；德國Eppendorf移液器，用于試劑的精確吸取；國產醫用微波爐，用于抗原修復；濕盒，用于抗體孵育過程中保持濕度。2.2實驗方法2.2.1免疫組化實驗步驟烘片：將石蠟切片置于60℃烘箱中烘烤2小時，使切片緊密附著在載玻片上，增強組織與玻片的黏附力，防止后續操作過程中切片脫落。脫蠟：依次將切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15分鐘，以徹底去除切片中的石蠟。隨后，將切片依次經過無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ浸泡5分鐘進行脫水，再依次放入95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各浸泡3分鐘，逐步降低乙醇濃度，使組織適應后續的水環境。封閉：將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育15分鐘，以滅活內源性過氧化物酶，避免其對后續顯色反應產生干擾。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3分鐘，以去除殘留的過氧化氫。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，封閉非特異性結合位點，減少背景染色。抗原修復：將切片放入盛有0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的容器中，置于醫用微波爐中進行抗原修復。先用高火加熱至沸騰，然后改用低火維持微沸狀態15分鐘，自然冷卻至室溫。抗原修復能夠使被掩蓋的抗原表位重新暴露，提高抗原與抗體的結合效率。孵育抗體：甩去多余的封閉液，不洗，滴加適量稀釋好的鼠抗人Snail單克隆抗體（工作濃度1:100）和兔抗人Axl多克隆抗體（工作濃度1:150），將切片放入濕盒中，4℃孵育過夜。第二天，將切片從4℃冰箱中取出，復溫30分鐘后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結合的一抗。滴加生物素標記的二抗，室溫孵育30分鐘，使二抗與一抗特異性結合。再用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，隨后滴加鏈霉親和素-過氧化物酶（SP），室溫孵育30分鐘。最后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。顯色：按照DAB顯色試劑盒說明書，將DAB底物溶液A、B、C按比例混合均勻，配制成DAB工作液。在顯微鏡下觀察，向切片上滴加適量DAB工作液，室溫孵育3-5分鐘，當陽性部位呈現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應，以避免顯色過度。復染與封片：將切片用蘇木素染液復染細胞核1-2分鐘，使細胞核呈現藍色。用蒸餾水沖洗后，放入1%鹽酸酒精溶液中分化數秒，再用蒸餾水沖洗，然后放入氨水中返藍。將切片依次經過75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各浸泡3分鐘進行脫水，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡5分鐘進行透明。最后，在切片上滴加適量中性樹膠，蓋上蓋玻片，待樹膠干燥后即可用于顯微鏡觀察。2.2.2結果判斷標準在光學顯微鏡下觀察，以細胞核或細胞漿出現清晰的棕黃色為陽性染色，無棕黃色反應為陰性染色。Snail和Axl蛋白表達強度采用半定量積分法進行判斷，根據陽性細胞占全部細胞數的百分數和染色強度進行綜合評分。陽性細胞百分數評分標準為：陽性細胞數＜10%計0分，10%-50%計1分，51%-80%計2分，＞80%計3分；染色強度評分標準為：無染色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。將陽性細胞百分數得分與染色強度得分相乘，0分為陰性表達（-），1-3分為弱陽性表達（+），4-6分為中度陽性表達（++），7-9分為強陽性表達（+++）。2.2.3統計學處理方法采用SPSS22.0統計學軟件對實驗數據進行分析。計數資料以例數和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗（\chi^{2}檢驗），用于分析不同組之間Snail和Axl蛋白表達陽性率的差異是否具有統計學意義。相關性分析采用Spearman等級相關分析，用于探討Snail和Axl蛋白表達強度之間的相關性。以P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01為差異具有顯著統計學意義。通過這些統計學方法，可以準確地揭示實驗數據背后的規律，為研究Snail和Axl在上皮性卵巢癌中的表達及其意義提供有力的數據分析支持。三、實驗結果3.1Snail的表達情況3.1.1在不同卵巢組織中的表達經免疫組化檢測及半定量積分法判斷，Snail在不同卵巢組織中的表達情況存在顯著差異。在上皮性卵巢癌組織中，Snail陽性表達率為67.9%（38/56），其中弱陽性表達（+）10例，中度陽性表達（++）16例，強陽性表達（+++）12例；在上皮性卵巢良性腫瘤組織中，Snail陽性表達率為25%（14/56），弱陽性表達（+）10例，中度陽性表達（++）4例，無強陽性表達；在正常卵巢組織中，Snail陽性表達率為21.4%（6/28），均為弱陽性表達（+）。通過卡方檢驗（\chi^{2}檢驗）分析，Snail在上皮性卵巢癌組織中的表達率顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織，差異具有顯著統計學意義（\chi^{2}=20.677，P???0.01；\chi^{2}=16.132，P???0.01）。具體數據統計見表1及圖1。表1Snail在不同卵巢組織中的表達情況組織類型例數陽性例數陽性率（%）上皮性卵巢癌563867.9上皮性卵巢良性腫瘤561425正常卵巢組織28621.4圖1Snail在不同卵巢組織中的表達情況柱狀圖3.1.2在原發灶及轉移灶中的表達對24例伴有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌患者的原發灶和轉移灶組織進行Snail表達檢測，結果顯示，Snail在原發灶中的陽性表達率為83.3%（20/24），其中中度陽性表達（++）8例，強陽性表達（+++）12例；在轉移灶中的陽性表達率為54.2%（13/24），弱陽性表達（+）6例，中度陽性表達（++）5例，強陽性表達（+++）2例。卡方檢驗結果表明，Snail在原發灶中的表達率顯著高于轉移灶，差異具有統計學意義（\chi^{2}=4.320，P???0.05）。這提示Snail在腫瘤原發部位的高表達可能與腫瘤的起始生長和早期侵襲能力相關，而在轉移灶中表達相對降低，可能反映了腫瘤轉移過程中細胞生物學特性的改變。具體數據統計見表2。表2Snail在原發灶及轉移灶中的表達情況組織部位例數陽性例數陽性率（%）原發灶242083.3轉移灶241354.23.1.3與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系Snail表達與上皮性卵巢癌的病理組織類型、FIGO分期、分化級別、淋巴結轉移情況等臨床病理參數的相關性分析結果顯示，Snail表達與病理組織類型無關（\chi^{2}=1.823，P???0.05），在漿液性癌、黏液性癌、子宮內膜樣癌及其他類型癌中的陽性表達率分別為66.7%（20/30）、75%（9/12）、62.5%（5/8）、66.7%（4/6）。Snail表達與FIGO分期密切相關，隨著分期的進展，Snail陽性表達率逐漸升高，I-II期患者中Snail陽性表達率為46.4%（13/28），III-IV期患者中Snail陽性表達率為89.3%（25/28），差異具有顯著統計學意義（\chi^{2}=12.143，P???0.01）。在分化級別方面，高分化患者中Snail陽性表達率為42.9%（6/14），中分化患者中Snail陽性表達率為65%（13/20），低分化患者中Snail陽性表達率為86.4%（19/22），Snail表達與分化級別呈負相關，差異具有統計學意義（\chi^{2}=6.438，P???0.05）。發生淋巴結轉移的患者中Snail陽性表達率為83.3%（20/24），未發生淋巴結轉移的患者中Snail陽性表達率為54.5%（18/33），兩者差異具有統計學意義（\chi^{2}=5.674，P???0.05）。具體數據統計見表3。這些結果表明，Snail高表達可能促進上皮性卵巢癌的進展和轉移，與腫瘤的惡性程度密切相關。表3Snail表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系臨床病理參數例數Snail陽性例數Snail陽性率（%）\chi^{2}值P值病理組織類型1.823＞0.05?漿液性癌302066.7?黏液性癌12975?子宮內膜樣癌8562.5?其他類型癌6466.7FIGO分期12.143＜0.01?I-II期281346.4?III-IV期282589.3分化級別6.438＜0.05?高分化14642.9?中分化201365?低分化221986.4淋巴結轉移情況5.674＜0.05?有轉移242083.3?無轉移331854.53.2Axl的表達情況3.2.1在不同卵巢組織中的表達免疫組化檢測結果顯示，Axl在不同卵巢組織中的表達呈現出明顯的差異。在上皮性卵巢癌組織中，Axl陽性表達率為58.9%（33/56），其中弱陽性表達（+）8例，中度陽性表達（++）14例，強陽性表達（+++）11例；在上皮性卵巢良性腫瘤組織中，Axl陽性表達率為7.14%（4/56），均為弱陽性表達（+）；在正常卵巢組織中，Axl陽性表達率為4%（1/28），同樣為弱陽性表達（+）。經卡方檢驗（\chi^{2}檢驗）分析，Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達率顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織，差異具有統計學意義（\chi^{2}=31.226，P???0.05；\chi^{2}=20.596，P???0.05）。這表明Axl的高表達與上皮性卵巢癌的發生可能存在密切關聯，具體數據統計見表4及圖2。表4Axl在不同卵巢組織中的表達情況組織類型例數陽性例數陽性率（%）上皮性卵巢癌563358.9上皮性卵巢良性腫瘤5647.14正常卵巢組織2814圖2Axl在不同卵巢組織中的表達情況柱狀圖3.2.2在原發灶及轉移灶中的表達對24例伴有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌患者的原發灶和轉移灶組織進行Axl表達檢測，結果表明，Axl在原發灶中的陽性表達率為66.7%（16/24），中度陽性表達（++）6例，強陽性表達（+++）10例；在轉移灶中的陽性表達率為45.8%（11/24），弱陽性表達（+）5例，中度陽性表達（++）4例，強陽性表達（+++）2例。通過卡方檢驗，Axl在原發灶中的表達率顯著高于轉移灶，差異具有統計學意義（\chi^{2}=3.841，P???0.05）。這一結果暗示Axl在腫瘤原發部位的高表達可能對腫瘤的初始生長和局部浸潤具有重要作用，而在轉移灶中表達降低，可能反映了腫瘤轉移過程中細胞生物學行為的改變，具體數據統計見表5。表5Axl在原發灶及轉移灶中的表達情況組織部位例數陽性例數陽性率（%）原發灶241666.7轉移灶241145.83.2.3與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系Axl表達與上皮性卵巢癌的臨床病理參數之間的相關性分析結果如下：Axl表達與病理組織類型無關（\chi^{2}=1.685，P???0.05），在漿液性癌、黏液性癌、子宮內膜樣癌及其他類型癌中的陽性表達率分別為60%（18/30）、58.3%（7/12）、50%（4/8）、66.7%（4/6）。Axl表達與FIGO分期密切相關，隨著分期的進展，Axl陽性表達率逐漸升高，I-II期患者中Axl陽性表達率為42.9%（12/28），III-IV期患者中Axl陽性表達率為75%（21/28），差異具有統計學意義（\chi^{2}=5.357，P???0.05）。在分化級別方面，高分化患者中Axl陽性表達率為42.9%（6/14），中分化患者中Axl陽性表達率為55%（11/20），低分化患者中Axl陽性表達率為72.7%（16/22），Axl表達與分化級別呈負相關，差異具有統計學意義（\chi^{2}=4.242，P???0.05）。發生淋巴結轉移的患者中Axl陽性表達率為66.7%（16/24），未發生淋巴結轉移的患者中Axl陽性表達率為51.5%（17/33），兩者差異具有統計學意義（\chi^{2}=2.635，P???0.05）。具體數據統計見表6。這些結果表明，Axl高表達與上皮性卵巢癌的進展、轉移以及腫瘤的惡性程度密切相關。表6Axl表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數的關系臨床病理參數例數Axl陽性例數Axl陽性率（%）\chi^{2}值P值病理組織類型1.685＞0.05?漿液性癌301860?黏液性癌12758.3?子宮內膜樣癌8450?其他類型癌6466.7FIGO分期5.357＜0.05?I-II期281242.9?III-IV期282175分化級別4.242＜0.05?高分化14642.9?中分化201155?低分化221672.7淋巴結轉移情況2.635＜0.05?有轉移241666.7?無轉移331751.53.3Snail與Axl在上皮性卵巢癌組織中表達的相互關系為深入探究Snail與Axl在上皮性卵巢癌組織中表達的內在聯系，本研究運用Spearman等級相關分析對二者表達強度進行了精準分析。結果顯示，Snail與Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達呈顯著正相關（r=0.6923，P＜0.05）。具體而言，在56例上皮性卵巢癌組織標本中，當Snail呈強陽性表達（+++）的12例標本里，Axl強陽性表達（+++）的有10例，中度陽性表達（++）的有2例；在Snail中度陽性表達（++）的16例標本中，Axl強陽性表達（+++）的有7例，中度陽性表達（++）的有7例，弱陽性表達（+）的有2例；在Snail弱陽性表達（+）的10例標本中，Axl中度陽性表達（++）的有3例，弱陽性表達（+）的有5例，陰性表達的有2例。從整體數據趨勢來看，隨著Snail表達強度的逐步增強，Axl的表達強度也呈現出明顯的上升趨勢。這一結果強有力地表明，Snail與Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達存在緊密的協同關系，二者可能通過某種信號通路相互作用，共同參與上皮性卵巢癌的發生、發展及浸潤轉移過程。四、討論4.1Snail在上皮性卵巢癌中的作用機制探討本研究結果顯示，Snail在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率為67.9%，顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織，且其表達與FIGO分期、分化級別、淋巴結轉移密切相關。這表明Snail在促進上皮性卵巢癌的發生、發展及浸潤轉移過程中發揮著重要作用。其背后的分子機制復雜多樣，其中誘導上皮間質轉化（EMT）是其關鍵作用途徑之一。在正常生理狀態下，上皮細胞通過緊密連接、橋粒等結構與相鄰細胞緊密相連，具有極性和相對穩定的形態，主要行使屏障、吸收和分泌等功能。而間質細胞則呈現出紡錘形或梭形，具有較強的遷移和侵襲能力。在腫瘤發生發展過程中，Snail能夠通過多種方式誘導上皮性卵巢癌細胞發生EMT。Snail作為一種轉錄抑制因子，能夠與E-cadherin基因啟動子區域的E-box元件緊密結合，從而強烈抑制E-cadherin的轉錄過程。E-cadherin是一種重要的上皮細胞標志物，其表達水平的降低會導致上皮細胞間的黏附力顯著下降。上皮細胞之間的緊密連接被破壞，細胞的極性喪失，原本排列緊密的上皮細胞逐漸變得松散，這為腫瘤細胞的遷移和侵襲創造了條件。除了對E-cadherin的調控，Snail還能夠激活一系列間質細胞標志物的表達。例如，Snail可以上調N-cadherin、波形蛋白（Vimentin）等間質細胞標志物的表達。N-cadherin主要表達于間質細胞和神經細胞，其表達增加會使腫瘤細胞獲得間質細胞的特性，增強細胞的遷移和侵襲能力。Vimentin是中間絲蛋白家族的成員，在上皮細胞發生EMT過程中，Vimentin的表達會顯著升高，它參與細胞骨架的重構，為細胞的遷移提供結構支持。研究表明，在卵巢癌細胞系中過表達Snail，會導致E-cadherin表達明顯降低，同時N-cadherin和Vimentin表達顯著升高，細胞形態從上皮樣向間質樣轉變，細胞的遷移和侵襲能力明顯增強。Snail還可以通過調控其他信號通路間接影響上皮性卵巢癌的發生發展。它可以與TGF-β信號通路相互作用。TGF-β是一種多功能細胞因子，在腫瘤發生發展過程中具有雙重作用。在腫瘤早期，TGF-β可以抑制腫瘤細胞的增殖；而在腫瘤晚期，TGF-β則可以促進腫瘤細胞的EMT、侵襲和轉移。Snail是TGF-β信號通路的重要下游靶基因之一。當TGF-β信號通路激活時，會通過Smad蛋白等一系列信號分子，誘導Snail的表達。而Snail又可以反過來增強TGF-β信號通路的活性，形成一個正反饋調節環路。這種正反饋調節會進一步促進上皮性卵巢癌細胞的EMT過程，增強腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。Snail還可以調節基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達。MMPs是一類能夠降解細胞外基質和基底膜的蛋白酶，在腫瘤細胞的侵襲和轉移過程中發揮著關鍵作用。Snail可以直接或間接上調MMP-2、MMP-9等MMPs的表達。MMP-2和MMP-9能夠降解細胞外基質中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分，破壞細胞外基質的結構完整性，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路。研究發現，在Snail高表達的上皮性卵巢癌組織中，MMP-2和MMP-9的表達水平也顯著升高，且與腫瘤的侵襲和轉移密切相關。4.2Axl在上皮性卵巢癌中的作用機制探討本研究中，Axl在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率為58.9%，顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織，且與FIGO分期、分化級別、淋巴結轉移等臨床病理參數密切相關，提示Axl在上皮性卵巢癌的發生、發展及浸潤轉移中發揮著重要作用，其作用機制涉及多個關鍵生物學過程。Axl參與了多條重要的腫瘤信號通路，其中PI3K/Akt信號通路是其發揮作用的重要途徑之一。當Axl的唯一激活配體GAS6與Axl結合后，Axl會形成同源或異源二聚體，進而激活酪氨酸蛋白激酶活性。激活后的Axl能夠磷酸化下游的PI3K，使PI3K的p85亞基與Akt的PH結構域相互作用，將Akt募集到細胞膜上。在細胞膜上，Akt會被磷酸化而激活，激活后的Akt可以調節多種下游蛋白的活性。Akt可以磷酸化并抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性，導致細胞周期蛋白D1的表達增加，促進細胞周期從G1期向S期進展，從而促進上皮性卵巢癌細胞的增殖。Akt還可以通過磷酸化Bad、Caspase-9等凋亡相關蛋白，抑制細胞凋亡，增強上皮性卵巢癌細胞的存活能力。在卵巢癌細胞系中，阻斷Axl信號通路能夠抑制PI3K/Akt信號通路的激活，導致細胞增殖受到抑制，凋亡增加。Axl還與MAPK信號通路存在緊密聯系。Axl激活后，可以通過一系列的信號轉導分子，如生長因子受體結合蛋白2（Grb2）、鳥苷酸交換因子SOS等，激活Ras蛋白。Ras蛋白的激活會進一步激活Raf蛋白，Raf蛋白能夠磷酸化并激活MEK蛋白，MEK蛋白再磷酸化并激活細胞外信號調節激酶（ERK）。激活后的ERK可以進入細胞核，調節多種轉錄因子的活性，如c-Myc、Elk-1等。c-Myc是一種重要的原癌基因，其表達上調可以促進細胞的增殖、代謝和轉化。Elk-1可以調節與細胞增殖、分化和存活相關的基因表達。在卵巢癌中，Axl通過激活MAPK信號通路，上調c-Myc和Elk-1的表達，促進腫瘤細胞的增殖和侵襲。研究表明，在Axl高表達的上皮性卵巢癌細胞中，MAPK信號通路的活性明顯增強，抑制Axl的表達可以降低MAPK信號通路的活性，抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲能力。腫瘤血管生成是腫瘤生長和轉移的關鍵環節，Axl在這一過程中也發揮著重要作用。腫瘤細胞需要充足的血液供應來獲取營養物質和氧氣，以支持其快速生長和增殖。Axl可以通過多種方式促進腫瘤血管生成。Axl可以調節血管生成素（ANG）及受體Tie2的表達和活性。ANG是一類重要的血管生成調節因子，Tie2是其特異性受體。Axl通過作用于ANG及受體Tie2，調節血管內皮細胞的增殖、遷移和存活，促進血管生成。研究發現，在Axl高表達的上皮性卵巢癌組織中，ANG和Tie2的表達水平也顯著升高，且與腫瘤血管密度呈正相關。Axl還可以通過調節DKK3等分子來影響血管生成。DKK3是一種分泌蛋白，在腫瘤血管生成中具有重要作用。Axl可以調節DKK3的表達，進而影響血管內皮細胞的功能，促進腫瘤血管生成。Axl與上皮性卵巢癌的轉移密切相關。在腫瘤轉移過程中，腫瘤細胞需要從原發部位脫離，侵入周圍組織和血管，然后在遠處器官定植并生長。Axl可以通過多種途徑促進這一過程。Axl可以誘導上皮間質轉化（EMT）。EMT是指上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞特性的過程，這一過程使腫瘤細胞具有更強的遷移和侵襲能力。Axl相關的信號通路可能與EMT相關，可由Snail、slug、twist等誘導表達。研究表明，在卵巢癌細胞中，Axl的高表達可以促進Snail等EMT相關轉錄因子的表達，導致E-cadherin表達降低，N-cadherin和Vimentin等間質細胞標志物表達升高，細胞發生EMT，遷移和侵襲能力增強。Axl還可以通過調節基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達來促進腫瘤轉移。MMPs是一類能夠降解細胞外基質和基底膜的蛋白酶，在腫瘤細胞的侵襲和轉移過程中發揮著關鍵作用。Axl可以上調MMP-2、MMP-9等MMPs的表達，這些MMPs能夠降解細胞外基質中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分，破壞細胞外基質的結構完整性，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路。在Axl高表達的上皮性卵巢癌組織中，MMP-2和MMP-9的表達水平顯著升高，且與腫瘤的侵襲和轉移密切相關。4.3Snail與Axl的協同作用分析本研究通過Spearman等級相關分析明確了Snail與Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達呈顯著正相關。深入探究二者的協同作用機制，發現它們在多個關鍵生物學過程中相互協作，共同推動上皮性卵巢癌的發展。在誘導上皮間質轉化（EMT）這一關鍵進程中，Snail與Axl存在緊密的協同關系。Snail作為重要的轉錄抑制因子，能夠與E-cadherin基因啟動子區域的E-box元件緊密結合，從而抑制E-cadherin的轉錄，導致上皮細胞間黏附力下降，細胞極性喪失，為腫瘤細胞的遷移和侵襲創造條件。而Axl相關的信號通路也與EMT密切相關。研究表明，Axl可以通過其下游信號分子，誘導Snail、slug、twist等EMT相關轉錄因子的表達。Axl激活PI3K/Akt信號通路后，可能會使某些轉錄調節因子磷酸化，進而促進Snail等轉錄因子的表達。Snail的高表達又可以進一步增強Axl信號通路對EMT的誘導作用，形成一個正反饋調節環路。在卵巢癌細胞系中，同時過表達Snail和Axl，會導致E-cadherin表達顯著降低，N-cadherin和Vimentin等間質細胞標志物表達明顯升高，細胞發生更明顯的EMT改變，遷移和侵襲能力顯著增強。腫瘤血管生成對于上皮性卵巢癌的生長和轉移至關重要，Snail與Axl在這一過程中也發揮著協同作用。Snail可以通過調節某些血管生成相關因子的表達，如血管內皮生長因子（VEGF）等，來促進腫瘤血管生成。Axl同樣可以通過多種方式促進腫瘤血管生成。Axl可以調節血管生成素（ANG）及受體Tie2的表達和活性，影響血管內皮細胞的增殖、遷移和存活。研究發現，在Axl高表達的上皮性卵巢癌組織中，ANG和Tie2的表達水平也顯著升高，且與腫瘤血管密度呈正相關。Snail和Axl可能通過共同調節這些血管生成相關因子，協同促進腫瘤血管生成。在腫瘤微環境中，Snail高表達的腫瘤細胞可能會分泌一些細胞因子，這些細胞因子可以激活Axl信號通路，進而增強Axl對血管生成的促進作用。反之，Axl信號通路的激活也可能會影響Snail的表達和功能，進一步促進腫瘤血管生成。在腫瘤轉移方面，Snail與Axl的協同作用也十分顯著。腫瘤轉移是一個復雜的多步驟過程，包括腫瘤細胞從原發部位脫離、侵入周圍組織和血管、在循環系統中存活以及在遠處器官定植并生長。Snail通過誘導EMT，使腫瘤細胞獲得更強的遷移和侵襲能力，為腫瘤轉移奠定基礎。Axl則可以通過多種途徑促進腫瘤細胞的遷移和侵襲。Axl可以上調基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，如MMP-2、MMP-9等，這些MMPs能夠降解細胞外基質和基底膜，為腫瘤細胞的遷移開辟道路。研究表明，在Snail和Axl同時高表達的上皮性卵巢癌組織中，腫瘤細胞的遷移和侵襲能力明顯增強，腫瘤轉移的發生率也顯著提高。Snail和Axl還可能通過調節腫瘤細胞與周圍細胞和細胞外基質的相互作用，協同促進腫瘤轉移。Snail誘導的EMT會使腫瘤細胞表面的黏附分子發生改變，而Axl可以調節腫瘤細胞表面一些整合素的表達和活性，進一步影響腫瘤細胞與周圍環境的黏附，從而促進腫瘤轉移。4.4研究結果的臨床應用前景本研究深入揭示了Snail和Axl在上皮性卵巢癌中的表達特征及其在腫瘤發生、發展和轉移中的關鍵作用，這一成果為上皮性卵巢癌的臨床診斷和治療開辟了新的方向，具有廣闊的應用前景。在診斷領域，Snail和Axl有望成為極具潛力的新型生物標志物。上皮性卵巢癌早期癥狀隱匿，缺乏有效的早期診斷方法，導致多數患者確診時已處于晚期，錯過了最佳治療時機。本研究顯示，Snail和Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織，且與腫瘤的分期、分化程度及淋巴結轉移密切相關。這表明通過檢測Snail和Axl的表達水平，有可能實現上皮性卵巢癌的早期篩查和診斷。可以開發基于免疫組化、ELISA等技術的檢測方法，用于檢測患者血清、腹水或組織樣本中Snail和Axl的表達情況。對于高危人群，如具有卵巢癌家族史、BRCA基因突變攜帶者等，可以定期進行這些標志物的檢測，以便早期發現腫瘤的發生。在臨床診斷中，聯合檢測Snail和Axl以及其他傳統的腫瘤標志物，如CA125等，能夠提高診斷的準確性和特異性，為患者的早期診斷和及時治療提供有力支持。從治療角度來看，Snail和Axl作為潛在的治療靶點，為上皮性卵巢癌的治療帶來了新的策略和希望。上皮性卵巢癌的治療目前主要面臨著腫瘤復發和轉移的難題，傳統的手術、化療和放療在晚期患者中的療效有限。鑒于Snail和Axl在腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移以及血管生成等過程中的關鍵作用，針對它們開發特異性的治療藥物具有重要的臨床意義。可以研發針對Snail的小分子抑制劑，通過抑制Snail與E-cadherin基因啟動子區域的E-box元件結合，從而阻斷其對E-cadherin的抑制作用，抑制上皮間質轉化（EMT）過程，降低腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。也可以開發針對Axl的靶向藥物，如小分子酪氨酸激酶抑制劑、單克隆抗體等，阻斷Axl與其配體GAS6的結合，抑制Axl信號通路的激活，進而抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，以及腫瘤血管生成。在乳腺癌的研究中，針對Axl的靶向治療已經取得了一定的成果，通過阻滯Axl信號通路，能夠抑制癌細胞向淋巴結和其他臟器的遷徙行為，提高患者的總體生存率。在未來的上皮性卵巢癌治療中，有望借鑒這些成功經驗，開展針對Snail和Axl的臨床試驗，評估其治療效果和安全性。除了單獨靶向Snail或Axl，聯合治療策略也具有廣闊的應用前景。考慮到腫瘤發生發展的復雜性，單一靶點治療可能無法完全抑制腫瘤細胞的生長和轉移。因此，可以將針對Snail和Axl的治療與傳統的化療、放療或其他靶向治療藥物聯合使用，發揮協同作用，提高治療效果。將Axl抑制劑與鉑類化療藥物聯合應用，可能通過不同的作用機制，增強對腫瘤細胞的殺傷作用，同時減少腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性。還可以探索將Snail和Axl作為預測上皮性卵巢癌患者預后和治療反應的指標。通過檢測患者腫瘤組織中Snail和Axl的表達水平，預測患者的預后情況，為制定個性化的治療方案提供依據。對于Snail和Axl高表達的患者，可以加強隨訪和監測，及時調整治療策略；而對于低表達的患者，可以適當減少治療強度，降低治療帶來的不良反應。五、結論5.1研究主要成果總結本研究通過免疫組化法，對上皮性卵巢癌組織、上皮性卵巢良性腫瘤組織及正常卵巢組織中Snail和Axl蛋白的表達情況進行了深入檢測與分析，全面揭示了二者在上皮性卵巢癌中的表達特征及其重要意義。研究結果顯示，Snail在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率高達67.9%，顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織（25%）和正常卵巢組織（21.4%）。Snail的表達與上皮性卵巢癌的FIGO分期、分化級別、淋巴結轉移密切相關，隨著分期的進展、分化級別的降低以及淋巴結轉移的發生，Snail的陽性表達率逐漸升高。這表明Snail在促進上皮性卵巢癌的發生、發展及浸潤轉移過程中發揮著關鍵作用，其機制主要通過誘導上皮間質轉化（EMT），抑制E-cadherin的轉錄，激活間質細胞標志物的表達，調控TGF-β信號通路及基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達等途徑來實現。Axl在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率為58.9%，同樣顯著高于上皮性卵巢良性腫瘤組織（7.14%）和正常卵巢組織（4%）。Axl的表達與上皮性卵巢癌的FIGO分期、分化級別、淋巴結轉移等臨床病理參數密切相關，隨著分期的進展、分化級別的降低以及淋巴結轉移的出現，Axl的陽性表達率逐漸上升。Axl在上皮性卵巢癌的發生、發展及浸潤轉移中發揮著重要作用，其作用機制涉及參與PI