CD133、B7-H1表達與胃癌術后生存率關聯探究一、引言1.1研究背景與意義胃癌是全球范圍內常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。據統計，中國每年的新發胃癌病例數占全球新發病例數的近一半，且大多數患者在確診時已處于中晚期，治療難度和死亡率顯著增加。早期胃癌患者手術治療后的5年生存率超過90％，而晚期胃癌患者的生存期往往不超過1年，提高胃癌的早期診斷率和治療效果迫在眉睫。在腫瘤研究領域，腫瘤干細胞理論為腫瘤的發生、發展和復發轉移提供了新的視角。CD133作為一種重要的腫瘤干細胞標志物，在多種腫瘤中被發現與腫瘤的惡性程度、轉移潛能及預后密切相關。研究表明，CD133陽性的腫瘤細胞具有更強的自我更新、增殖和分化能力，能夠抵抗化療和放療，導致腫瘤的復發和轉移。在胃癌中，CD133的表達也被證實與腫瘤的侵襲深度、淋巴結轉移和TNM分期相關，提示其在胃癌的進展中發揮著重要作用。同時，腫瘤的發生發展與宿主免疫功能狀態密切相關。免疫監視機制失調是腫瘤發生的重要機理之一，其中T細胞介導的細胞免疫在抗腫瘤免疫中發揮著關鍵作用。T細胞的活化需要雙信號的刺激，而B7-H1作為近年來發現的具有負向調節作用的共刺激分子，屬于B7家族成員，可向T細胞傳遞抑制性信號，使T細胞失活，從而逃避免疫監視。已有研究發現，B7-H1在乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、肺癌等多種癌細胞及浸潤的巨噬細胞的胞膜及胞質中高表達，并與疾病的預后負相關。然而，B7-H1在胃癌中的表達及作用機制尚未完全明確。因此，深入研究CD133、B7-H1在胃癌中的表達情況，探討它們與胃癌臨床病理特征的關系以及對術后生存率的影響，對于揭示胃癌的發病機制、尋找新的診斷標志物和治療靶點具有重要的理論和臨床意義。通過檢測CD133、B7-H1的表達水平，有望為胃癌的早期診斷、預后評估和個體化治療提供科學依據，從而提高胃癌患者的生存率和生活質量。1.2國內外研究現狀在胃癌研究領域，CD133和B7-H1已成為備受關注的研究熱點，國內外學者從多個角度對它們在胃癌中的表達及對術后生存率的影響展開了深入研究。國外學者在較早階段便開始關注CD133在腫瘤干細胞中的作用，為后續研究奠定了理論基礎。通過大量的細胞實驗和動物模型研究發現，CD133陽性的胃癌細胞表現出更強的增殖、遷移和侵襲能力。在對臨床樣本的研究中，有研究分析了數百例胃癌患者的組織標本，發現CD133的表達與腫瘤的大小、浸潤深度以及淋巴結轉移密切相關，CD133陽性表達的患者術后復發率更高，5年生存率顯著低于陰性表達者，這表明CD133可作為評估胃癌患者預后的重要指標。對于B7-H1，國外研究揭示了其在腫瘤免疫逃逸中的關鍵作用機制。在胃癌的研究中，利用免疫組化和流式細胞術等技術檢測發現，B7-H1在胃癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織，且其表達水平與腫瘤的分期、轉移及患者的預后密切相關。部分研究還探討了B7-H1與其他免疫分子之間的相互作用，為開發新的免疫治療策略提供了理論依據。國內研究也取得了豐碩的成果。在CD133方面，眾多研究團隊對不同地區、不同病理類型的胃癌患者進行了研究，進一步證實了CD133表達與胃癌臨床病理特征的相關性。一些研究還將CD133與其他腫瘤標志物聯合檢測，發現聯合檢測能更準確地預測胃癌的預后，為臨床診斷和治療提供了更全面的信息。關于B7-H1在胃癌中的研究，國內學者不僅驗證了其在胃癌組織中的高表達現象，還深入研究了其表達與患者免疫狀態的關系。通過對胃癌患者外周血和腫瘤組織中免疫細胞的分析，發現B7-H1的高表達會抑制T細胞的活化和增殖，導致機體抗腫瘤免疫功能下降，從而影響患者的預后。部分研究還嘗試通過阻斷B7-H1信號通路來增強機體的抗腫瘤免疫反應，為胃癌的免疫治療提供了新的思路和方法。盡管國內外在CD133、B7-H1與胃癌的研究上取得了一定進展，但仍存在一些不足與空白。目前的研究多集中在它們與單一臨床病理參數的關系上，對于CD133、B7-H1之間的相互作用及其與多個臨床病理參數的綜合關聯研究較少。在作用機制方面，雖然已知它們在腫瘤的發生發展和免疫逃逸中發揮作用，但具體的分子信號通路及調控機制尚未完全明確。此外，目前的研究結果在不同地區、不同種族的人群中存在一定差異，缺乏大規模、多中心的臨床研究來進一步驗證和統一結論。在臨床應用方面，如何將CD133、B7-H1的檢測有效地應用于胃癌的早期診斷、治療方案選擇及預后評估，仍需要更多的研究和探索。1.3研究目的與方法本研究旨在通過對胃癌組織的檢測與分析，明確CD133、B7-H1在胃癌中的表達情況，探討其與胃癌患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、組織分化程度、淋巴結轉移、腹腔種植或遠處轉移等臨床病理特征之間的相關關系，并評估它們對患者術后生存率的影響，為胃癌的臨床診斷、治療及預后評估提供理論依據和新的思路。為實現上述研究目的，本研究采用了以下研究方法：收集來自溫州醫學院附屬第一醫院普外科2005年4月至2006年7月期間行手術治療的65例胃癌石蠟包塊標本，確保標本涵蓋不同分期，且所有患者術前未接受放療或化療，并具備完整的臨床病理參數及隨訪資料（已剔除失訪病例）。運用免疫組化染色方法（SP-步法），通過脫蠟、水化、抗原修復、抗體孵育、著色、核染、鏡檢等一系列嚴謹的實驗步驟，分別檢測CD133和B7-H1蛋白在胃癌組織中的表達。在數據分析階段，使用SPSS15.0統計軟件包對數據進行統計分析，其中CD133和B7-H1蛋白在胃癌組織中的表達率與胃癌臨床病理參數之間的關系采用卡方或Fisher確切概率法來檢驗；對于胃癌患者術后生存時間，單因素分析采用Log-rank檢驗，并使用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，而影響胃癌預后可能因素的多因素分析則采用Cox比例風險回歸模型分析，以P<0.05作為有統計學意義的標準，確保研究結果的科學性和可靠性。二、相關理論基礎2.1胃癌概述胃癌是一種原發于胃部，起源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，在全球范圍內，其發病率和死亡率均處于較高水平。在我國，胃癌的發病率位居消化道腫瘤之首，在所有腫瘤中位列第二，死亡率則排在第三位，嚴重威脅著人們的生命健康。從分類角度來看，胃癌的病理類型豐富多樣，其中腺癌最為常見，約占胃癌病例的90%以上。腺癌又可進一步細分為乳頭狀腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌、印戒細胞癌等多種亞型，不同亞型在組織形態、生物學行為和預后等方面存在顯著差異。除腺癌外，還包括未分化癌、鱗癌、腺鱗癌等相對少見的類型，這些類型的胃癌在臨床特征和治療策略上也各有特點。胃癌的發病機制是一個多因素、多步驟、多階段的復雜過程。幽門螺桿菌（Hp）感染是目前已知的最重要的危險因素之一。我國胃癌高發區成人Hp感染率在60%以上，Hp能促使硝酸鹽轉變成亞硝酸鹽及亞硝胺等致癌物，其毒性產物CagA、VacA可能具有促癌作用。地域環境與飲食生活因素也在胃癌的發生中扮演重要角色，長期食用熏烤、鹽腌食品，這些食物中亞硝酸鹽、真菌毒素、多環芳烴化合物等致癌物或前致癌物含量高，會增加胃遠端癌的發病風險，吸煙者的胃癌發病危險較不吸煙者高50%。此外，癌前病變如胃息肉、慢性萎縮性胃炎及胃部分切除后的殘胃，伴有不同程度的慢性炎癥過程、胃黏膜腸上皮化生或非典型增生，有可能轉變為癌。遺傳因素同樣不可忽視，胃癌患者有血緣關系的親屬其胃癌發病率較對照組高4倍，胃癌的癌變涉及癌基因、抑癌基因、凋亡相關基因與轉移相關基因等的改變。在流行病學方面，胃癌的發病呈現出明顯的地域性差異，我國的西北與東部沿海地區胃癌發病率比南方地區明顯為高。好發年齡在50歲以上，男女發病率之比為2：1，但近年來，由于飲食結構改變、工作壓力增大等原因，胃癌呈現年輕化傾向。全球每年新發胃癌病例約120萬，中國胃癌患者約占40%，且大多數患者確診時已處于進展期，早期胃癌患者僅占20%左右，這給治療帶來了極大的挑戰。目前，胃癌的治療手段主要包括手術治療、化療、靶向治療、免疫治療及支持治療等。手術治療是胃癌的主要治療方法，包括根治性手術和姑息性手術。根治性手術原則為整塊切除包括癌灶和可能受浸潤胃壁在內的胃的部分或全部，按臨床分期標準整塊清除胃周圍的淋巴結，重建消化道；姑息性手術則適用于原發灶無法切除，為減輕梗阻、穿孔、出血等并發癥癥狀而進行的手術，如胃空腸吻合術、空腸造口、穿孔修補術等?；熡糜诟涡允中g的術前、術中和術后，可延長生存期，晚期胃癌患者采用適量化療，能減緩腫瘤的發展速度，改善癥狀。常用的化療給藥途徑有口服給藥、靜脈、腹膜腔給藥、動脈插管區域灌注給藥等，常用化療藥物包括氟尿嘧啶、絲裂霉素、順鉑等。靶向治療針對性地損傷癌細胞，減輕正常細胞損害，目前胃癌靶向治療藥物種類及作用均有限，主要有表皮生長因子受體抑制劑、血管生成抑制劑等。免疫治療是近年來新興的治療方法，通過激活機體自身的免疫系統來對抗腫瘤，如抗PD-1/PD-L1治療，在部分胃癌患者中取得了較好的療效。支持治療旨在減輕患者痛苦，改善生活質量，延長生存期，包括鎮痛、糾正貧血、改善食欲、改善營養狀態、緩解梗阻、控制腹水、心理治療等。多種治療手段的綜合應用，旨在提高胃癌患者的治愈率和生存率，改善患者的生活質量，但對于晚期胃癌患者，治療效果仍不盡人意，因此，尋找新的診斷標志物和治療靶點具有重要的臨床意義。2.2CD133相關理論CD133，又稱為AC133或prominin-1，是一種具有獨特結構的跨膜糖蛋白，定位于人類第5號染色體上。其結構包含5個跨膜結構域以及2個大的N-糖基化細胞外環，這種特殊的結構賦予了CD133獨特的生物學功能。在細胞分化過程中，CD133的表達呈現出迅速下調的顯著特點，使其成為分離和鑒定干細胞與祖細胞的獨特分子標志。在腫瘤干細胞領域，CD133發揮著關鍵作用，是重要的標志物之一。腫瘤干細胞是腫瘤組織中一小部分具有干細胞特性的細胞亞群，具備自我更新能力、多向分化潛能以及對傳統放化療手段的耐藥性。大量研究表明，在多種實體腫瘤中，如神經膠質瘤、結腸癌、乳腺癌、肝癌等，均發現了CD133陽性細胞的存在，且這些CD133陽性細胞展現出典型的腫瘤干細胞特性。在神經膠質瘤中，CD133陽性細胞表現出更強的增殖能力，能夠在體外培養中形成腫瘤球，并且具有更高的成瘤能力，將少量CD133陽性細胞接種到免疫缺陷小鼠體內，即可成功誘導腫瘤的發生。在結腸癌中，CD133陽性細胞也表現出更強的遷移和侵襲能力，能夠促進腫瘤的轉移。CD133與腫瘤的發生、發展、轉移和復發密切相關。在腫瘤發生階段，CD133陽性細胞可能通過自我更新和分化，不斷產生腫瘤細胞，為腫瘤的形成提供細胞來源。研究發現，在肝癌的發生過程中，CD133陽性的肝癌干細胞能夠通過激活Wnt/β-catenin信號通路，促進細胞的增殖和腫瘤的形成。在腫瘤發展過程中，CD133陽性細胞的存在往往與腫瘤的惡性程度增加相關，這些細胞能夠抵抗放化療的作用，導致腫瘤難以被徹底清除，進而促進腫瘤的進展。在乳腺癌中，CD133陽性細胞對化療藥物紫杉醇和阿霉素具有更強的耐藥性，使得乳腺癌患者在接受化療后容易出現復發和轉移。在腫瘤轉移方面，CD133陽性細胞具有更強的遷移和侵襲能力，能夠突破基底膜，進入血液循環或淋巴循環，從而導致腫瘤的遠處轉移。在肺癌中，CD133陽性細胞高表達基質金屬蛋白酶（MMPs）等分子，能夠降解細胞外基質，促進腫瘤細胞的遷移和侵襲。腫瘤復發也與CD133陽性細胞密切相關，由于這些細胞具有自我更新能力，在腫瘤治療后，殘留的CD133陽性細胞能夠重新增殖，導致腫瘤復發。2.3B7-H1相關理論B7-H1，又稱為程序性死亡配體1（PD-L1），是B7家族的重要成員之一。1999年，陳列平博士率先發現了B7-H1，其基因位于人類染色體9p24.1上，編碼的蛋白是一種相對分子質量為40×103的I型跨膜蛋白。B7-H1的結構包含一個免疫球蛋白V樣結構域、一個跨膜結構域和一個短的胞內結構域，這種結構使其能夠與其他免疫分子相互作用，在免疫調節中發揮關鍵作用。B7-H1主要表達于抗原提呈細胞，如樹突狀細胞、巨噬細胞和B細胞等，在受到干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子刺激時，其表達水平會顯著上調。除免疫細胞外，B7-H1在多種腫瘤細胞表面也有高表達，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等。在腫瘤微環境中，腫瘤細胞表面的B7-H1表達可被腫瘤浸潤淋巴細胞分泌的細胞因子所誘導，形成一個免疫抑制的微環境。在免疫調節過程中，B7-H1通過與T細胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結合，發揮重要的負性調節作用。正常情況下，T細胞的活化需要雙信號刺激，第一信號來自T細胞受體（TCR）與抗原提呈細胞表面的主要組織相容性復合體（MHC）-抗原肽復合物的結合，提供抗原特異性識別信號；第二信號則來自共刺激分子，如B7-1（CD80）、B7-2（CD86）與T細胞表面的CD28結合，提供共刺激信號，促進T細胞的活化、增殖和分化。然而，當B7-H1與PD-1結合時，會向T細胞傳遞抑制性信號，抑制T細胞的活化、增殖和細胞因子分泌，導致T細胞失活、凋亡或進入免疫耐受狀態。具體而言，B7-H1/PD-1信號通路可抑制T細胞內的磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號通路的激活，減少白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）等細胞因子的產生，從而抑制T細胞的免疫應答。B7-H1與腫瘤免疫逃逸密切相關，是腫瘤細胞逃避機體免疫系統監視和殺傷的重要機制之一。腫瘤細胞通過高表達B7-H1，與腫瘤浸潤T細胞表面的PD-1結合，抑制T細胞的功能，使其無法有效地識別和殺傷腫瘤細胞。研究表明，在多種腫瘤中，B7-H1的高表達與腫瘤的進展、轉移及不良預后相關。在肺癌中，B7-H1陽性的腫瘤患者無進展生存期和總生存期明顯短于B7-H1陰性患者，且B7-H1的表達水平與腫瘤的分期、淋巴結轉移呈正相關。在乳腺癌中，B7-H1的高表達也與腫瘤的復發和遠處轉移風險增加相關。B7-H1還可以通過調節腫瘤微環境中的其他免疫細胞，如調節性T細胞（Treg）、髓源性抑制細胞（MDSC）等，進一步促進腫瘤免疫逃逸。Treg細胞可通過分泌抑制性細胞因子如IL-10、轉化生長因子-β（TGF-β）等，抑制效應T細胞的功能，而B7-H1的表達可促進Treg細胞的增殖和活化。MDSC則可以通過多種機制抑制T細胞的活化和功能，B7-H1與MDSC表面的PD-1結合，可增強MDSC的免疫抑制作用。三、CD133、B7-H1在胃癌中的表達研究設計3.1實驗材料本研究選取了來自溫州醫學院附屬第一醫院普外科2005年4月至2006年7月期間行手術治療的65例胃癌石蠟包塊標本，這些標本涵蓋了不同分期的胃癌，全面反映了胃癌的疾病特征。所有患者術前均未接受放療或化療，這確保了實驗結果不會受到放化療因素的干擾，能夠真實地反映CD133、B7-H1在胃癌自然病程中的表達情況?；颊叩呐R床資料完整，包括年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、組織分化程度、淋巴結轉移、腹腔種植或遠處轉移等關鍵信息，為后續分析CD133、B7-H1表達與臨床病理特征的相關性提供了豐富的數據支持。在主要試劑方面，CD133鼠抗人單克隆抗體購自美國Chemicon公司，該公司在抗體研發和生產領域具有卓越的聲譽，其生產的CD133抗體具有高特異性和高親和力，能夠準確地識別并結合CD133抗原，為實驗的準確性提供了有力保障。B7-H1兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，該公司專注于生物工程領域，其產品質量可靠，B7-H1抗體能夠特異性地與B7-H1蛋白結合，滿足實驗對抗體特異性的要求。SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑購自福州邁新生物技術開發有限公司，這些試劑在免疫組化實驗中發揮著關鍵作用，SP免疫組化試劑盒提供了進行免疫組化染色所需的各種試劑和緩沖液，保證了實驗操作的順利進行，DAB顯色劑則能夠與辣根過氧化物酶標記的抗體結合，產生棕色沉淀，從而使抗原抗體反應部位得以可視化，便于觀察和分析。實驗所需的主要儀器包括：石蠟切片機，用于將石蠟包埋的胃癌組織切成薄片，為后續的免疫組化染色提供合適的切片厚度，確保組織形態結構的完整性和清晰性；光學顯微鏡，德國徠卡公司生產，具有高分辨率和良好的成像質量，能夠清晰地觀察組織切片中細胞的形態和結構，以及免疫組化染色后的陽性信號分布情況；恒溫箱，用于維持孵育過程中的溫度穩定，確?？乖贵w反應在適宜的溫度條件下進行，保證實驗結果的重復性和可靠性；烤箱，在切片處理過程中用于烤片，使切片牢固地附著在載玻片上，防止在后續實驗操作中發生脫片現象；離心機，用于分離和沉淀細胞、蛋白質等生物樣品，在試劑配制和樣品處理過程中發揮重要作用。這些儀器均經過嚴格的校準和調試，確保其性能穩定，能夠滿足實驗的高精度要求。3.2實驗方法本研究運用免疫組化染色方法（SP-步法）對CD133、B7-H1的表達進行檢測，具體步驟如下：首先，將石蠟切片置于60℃烤箱中烘烤1小時，使切片與載玻片緊密結合。隨后，進行脫蠟處理，將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15分鐘，以徹底去除石蠟。接著進行水化操作，將脫蠟后的切片依次放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中各浸泡10分鐘，再放入95%乙醇中浸泡5分鐘，85%乙醇中浸泡5分鐘，70%乙醇中浸泡5分鐘，使組織逐漸恢復到含水狀態。為了暴露抗原決定簇，采用高溫高壓抗原修復法。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復盒中，置于高壓鍋中，加熱至噴氣后計時2-3分鐘，然后自然冷卻。修復完成后，將切片用蒸餾水沖洗，再放入PBS緩沖液中浸泡5分鐘，以去除殘留的緩沖液。為消除內源性過氧化物酶的活性，將切片放入3%過氧化氫溶液中室溫孵育10分鐘，之后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。在進行抗體孵育前，用5-10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉切片，室溫孵育10分鐘，以減少非特異性染色。傾去血清后，勿洗，滴加適當比例稀釋的CD133鼠抗人單克隆抗體或B7-H1兔抗人多克隆抗體，將切片放入濕盒中，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。孵育結束后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。然后滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30分鐘，再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。接著滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃孵育30分鐘，之后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。顯色步驟使用DAB顯色劑，在顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現棕色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。隨后進行蘇木精復染，將切片放入蘇木精染液中染色3-5分鐘，用自來水沖洗返藍。最后，將切片依次放入梯度乙醇（70%、85%、95%、100%）中脫水，每次3-5分鐘，再放入二甲苯中透明5-10分鐘，用中性樹膠封片。對于免疫組化染色結果的判斷，主要依據陽性細胞的染色強度和陽性細胞所占比例。陽性細胞染色強度分為陰性（-），無棕色反應；弱陽性（+），淺黃色；中度陽性（++），棕黃色；強陽性（+++），棕褐色。陽性細胞所占比例分為：陽性細胞數<10%為陰性（-）；10%-25%為弱陽性（+）；26%-50%為中度陽性（++）；>50%為強陽性（+++）。綜合染色強度和陽性細胞比例進行判斷，以確保結果的準確性。在數據分析階段，使用SPSS15.0統計軟件包對數據進行統計分析。CD133和B7-H1蛋白在胃癌組織中的表達率與胃癌臨床病理參數之間的關系采用卡方檢驗或Fisher確切概率法來檢驗，以確定兩者之間是否存在顯著相關性。對于胃癌患者術后生存時間，單因素分析采用Log-rank檢驗，通過比較不同組別的生存曲線，判斷各因素對生存時間的影響。并使用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，直觀地展示患者的生存情況。影響胃癌預后可能因素的多因素分析采用Cox比例風險回歸模型分析，篩選出影響預后的獨立危險因素。以P<0.05作為有統計學意義的標準，確保研究結果的可靠性和科學性。四、CD133、B7-H1在胃癌中的表達結果4.1CD133在胃癌中的表達情況在本研究收集的65例胃癌組織標本中，通過免疫組化染色檢測發現，CD133在癌細胞的細胞膜、部分細胞漿及少量間質細胞中呈現出不同程度的表達。其中，CD133蛋白表達的陽性率為30.8%。這一結果表明，CD133在胃癌組織中具有一定比例的陽性表達，提示其在胃癌的發生發展過程中可能發揮著重要作用。進一步分析CD133在不同臨床病理特征患者中的表達差異，結果顯示其陽性表達率與患者年齡、腫瘤浸潤深度、組織學分化程度、脈管內癌栓及TNM分期密切相關。在年齡方面，年齡≥60歲的患者中，CD133陽性表達率顯著高于年齡＜60歲的患者，這可能與老年人機體免疫力下降，腫瘤干細胞更易存活和增殖有關。隨著腫瘤浸潤深度的增加，CD133陽性表達率逐漸升高，在腫瘤浸潤至漿膜層及以外的患者中，CD133陽性表達率明顯高于局限于黏膜層和黏膜下層的患者，表明CD133的表達與腫瘤的侵襲能力密切相關，CD133陽性的腫瘤細胞可能具有更強的浸潤能力，能夠突破胃壁組織的屏障，向周圍組織浸潤。在組織學分化程度上，低分化胃癌組織中CD133陽性表達率顯著高于高分化和中分化組織。低分化腫瘤細胞往往具有更高的惡性程度和增殖活性，CD133的高表達可能促進了腫瘤細胞的增殖和分化異常，導致腫瘤的惡性程度增加。脈管內癌栓的存在也與CD133陽性表達率密切相關，有脈管內癌栓的患者中CD133陽性表達率明顯高于無癌栓者，這意味著CD133陽性的腫瘤細胞可能更容易進入脈管系統，增加了腫瘤遠處轉移的風險。此外，TNM分期越晚，CD133陽性表達率越高，在Ⅲ期和Ⅳ期患者中，CD133陽性表達率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者，表明CD133的表達與腫瘤的進展程度密切相關，可作為評估腫瘤分期和預后的重要指標。4.2B7-H1在胃癌中的表達情況在本次研究的65例胃癌組織標本中，通過免疫組化染色檢測發現，B7-H1在癌細胞的細胞膜、部分細胞漿以及少量間質細胞中呈現出不同程度的表達，且在部分腫瘤組織浸潤的淋巴管及淋巴細胞上也檢測到B7-H1的陽性表達。其中，B7-H1蛋白表達的陽性率為36.9%，這表明B7-H1在胃癌組織中具有一定比例的陽性表達，提示其在胃癌的發生發展及免疫逃逸過程中可能扮演著重要角色。進一步分析B7-H1在不同臨床病理特征患者中的表達差異，結果顯示其陽性表達率與患者淋巴結轉移及脈管內癌栓密切相關。在有淋巴結轉移的患者中，B7-H1陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者。淋巴結作為腫瘤轉移的重要途徑，B7-H1在有淋巴結轉移患者中的高表達，可能與腫瘤細胞通過淋巴管轉移過程中，利用B7-H1介導的免疫逃逸機制，逃避機體免疫系統的監視和殺傷有關。脈管內癌栓的形成是腫瘤細胞進入血液循環或淋巴循環的重要標志，有脈管內癌栓的患者中B7-H1陽性表達率明顯高于無癌栓者，說明B7-H1的表達可能促進了腫瘤細胞在脈管內的存活和轉移，增強了腫瘤的侵襲性。而B7-H1蛋白表達陽性率與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、組織分化程度及遠處轉移等因素無明顯相關性，這可能與本研究的樣本量、患者個體差異或其他尚未明確的因素有關，需要進一步擴大樣本量和深入研究來探討這些因素與B7-H1表達之間的潛在關系。4.3CD133與B7-H1表達的相關性分析為了進一步探究CD133與B7-H1在胃癌發生發展過程中的相互作用關系，本研究對兩者在胃癌組織中的表達進行了相關性分析。通過對65例胃癌組織標本的檢測數據進行統計分析，結果顯示CD133和B7-H1在胃癌組織中的表達呈正相關，相關系數r=0.319，P=0.01。這表明，在胃癌組織中，CD133表達水平較高時，B7-H1的表達水平也往往較高；反之，CD133表達較低時，B7-H1的表達也相對較低。這種正相關關系可能暗示著CD133和B7-H1在胃癌的發生、發展及免疫逃逸過程中存在協同作用。CD133作為腫瘤干細胞標志物，其陽性細胞具有更強的自我更新、增殖和分化能力，能夠促進腫瘤的生長和侵襲。而B7-H1作為免疫負調節分子，高表達的B7-H1可與T細胞表面的PD-1結合，抑制T細胞的活化和增殖，使腫瘤細胞逃避免疫監視。當CD133陽性的腫瘤干細胞數量增加時，可能會誘導腫瘤微環境中B7-H1的表達上調，從而共同促進腫瘤的發展和免疫逃逸。另一方面，B7-H1介導的免疫抑制微環境可能也為CD133陽性的腫瘤干細胞提供了更有利的生存和增殖條件，進一步增強了腫瘤的惡性程度。五、CD133、B7-H1表達對胃癌術后生存率的影響5.1患者術后生存情況隨訪本研究對65例接受手術治療的胃癌患者展開術后生存情況隨訪，隨訪起始時間為患者手術完成之日，截止時間設定為2011年7月31日，隨訪時長跨度達5年。在隨訪方式上，主要通過電話隨訪與門診隨訪相結合的模式，確保隨訪信息的全面與準確。電話隨訪時，詳細詢問患者的身體狀況、是否出現復發轉移癥狀、后續治療情況等，并做好記錄；門診隨訪則借助患者定期復查的契機，獲取更為直觀的臨床檢查數據，包括血液檢查、影像學檢查結果等，以此判斷患者的生存狀態。在隨訪進程中，患者的生存與死亡情況呈現出顯著差異。其中，生存患者共計30例，死亡患者達35例。這一結果直觀地反映出胃癌疾病的嚴重性以及對患者生存的巨大威脅。進一步對生存患者的生存時間進行分析，發現生存時間最短為1年，最長可達5年以上。而死亡患者的生存時間分布更為分散，最短僅為3個月，最長為4年。這種生存時間的巨大差異，提示了胃癌患者個體間的病情進展和預后存在明顯的異質性，也凸顯了探究影響胃癌術后生存率因素的重要性。5.2CD133表達與術后生存率的關系通過對65例胃癌患者術后生存情況的分析，發現CD133表達與術后生存率之間存在顯著關聯。在這65例患者中，CD133陽性表達患者術后5年生存率僅為20.0%，而陰性表達者的5年生存率則達到了55.6%，兩者之間的差異具有統計學意義（P<0.05）。這一數據直觀地表明，CD133陽性表達的胃癌患者術后生存情況明顯較差，5年生存率顯著低于陰性表達患者。為了更直觀地展示CD133表達與術后生存率的關系，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線（見圖1）。從生存曲線中可以清晰地看出，CD133陽性表達患者的生存曲線始終位于陰性表達患者生存曲線的下方，且隨著時間的推移，兩條曲線之間的差距逐漸增大。這意味著在術后的各個時間點，CD133陽性表達患者的生存率均低于陰性表達者，且生存時間越久，這種差異越明顯，進一步證實了CD133陽性表達與較差的術后生存率密切相關。對胃癌患者術后生存時間進行單因素分析，采用Log-rank檢驗，結果顯示CD133的表達是影響胃癌患者術后生存時間的危險因素（P<0.05）。這表明，在不考慮其他因素的情況下，CD133陽性表達這一因素會顯著增加患者術后死亡的風險，對患者的生存時間產生負面影響。為了進一步確定CD133表達是否為影響胃癌預后的獨立危險因素，進行多因素分析，采用Cox比例風險回歸模型。在納入患者年齡、腫瘤大小、浸潤深度、遠處轉移等可能影響預后的因素后，分析結果顯示，患者年齡≥60歲、腫瘤直徑>5cm、浸潤深度、遠處轉移以及CD133蛋白表達陽性是影響患者預后的獨立危險因素。這意味著，CD133蛋白表達陽性在胃癌患者預后中具有獨立的影響作用，即使在考慮了其他多種因素后，CD133陽性表達仍然是導致患者預后不良的重要因素之一。這可能是因為CD133陽性的腫瘤細胞具有更強的自我更新、增殖和轉移能力，使得腫瘤更容易復發和轉移，從而降低了患者的生存率。5.3B7-H1表達與術后生存率的關系在對65例胃癌患者術后生存情況進行分析后，發現B7-H1表達與術后生存率之間存在緊密聯系。B7-H1陽性表達患者術后5年生存率僅為25.0%，而陰性表達者的5年生存率則達到了56.1%，二者之間的差異具備統計學意義（P<0.05）。這清晰地表明，B7-H1陽性表達的胃癌患者術后生存情況欠佳，5年生存率顯著低于陰性表達患者，意味著B7-H1的高表達對患者的長期生存產生了不利影響。通過Kaplan-Meier法繪制生存曲線（見圖2），能更直觀地呈現B7-H1表達與術后生存率的關系。從生存曲線中可以明顯看出，B7-H1陽性表達患者的生存曲線始終處于陰性表達患者生存曲線的下方，且隨著時間的推移，兩條曲線之間的差距逐漸加大。這表明在術后的各個時間點，B7-H1陽性表達患者的生存率均低于陰性表達者，并且生存時間越長，這種差異越顯著，進一步證實了B7-H1陽性表達與較低的術后生存率緊密相關。運用Log-rank檢驗對胃癌患者術后生存時間進行單因素分析，結果顯示B7-H1的表達是影響胃癌患者術后生存時間的危險因素（P<0.05）。這說明，在不考慮其他因素的情況下，B7-H1陽性表達這一因素會顯著增加患者術后死亡的風險，對患者的生存時間造成負面影響。盡管B7-H1在單因素分析中顯示為影響胃癌患者術后生存的危險因素，但在多因素分析中，納入患者年齡、腫瘤大小、浸潤深度、遠處轉移等多種可能影響預后的因素后，B7-H1表達并未成為影響患者預后的獨立危險因素。這可能是由于在復雜的腫瘤微環境中，存在多種因素相互作用，共同影響著患者的預后，B7-H1的作用被其他更具主導性的因素所掩蓋。也可能與本研究的樣本量相對較小有關，較小的樣本量可能無法準確捕捉到B7-H1在多因素模型中的獨立作用，需要進一步擴大樣本量進行深入研究。5.4CD133、B7-H1聯合表達對術后生存率的影響進一步分析CD133、B7-H1聯合表達與術后生存率的關系，結果顯示，CD133和B7-H1兩者均陽性患者的累積死亡率高達91.7%，顯著高于兩者單一陽性死亡率（60.0%）或兩者均陰性死亡率（39.4%），差異具有統計學意義（P<0.05）。這表明，當CD133和B7-H1同時陽性表達時，對患者術后生存率的負面影響更為顯著，患者的死亡風險大幅增加。從腫瘤干細胞和免疫逃逸的角度來看，CD133陽性的腫瘤干細胞具有更強的自我更新、增殖和轉移能力，而B7-H1的高表達則可抑制機體的免疫應答，使腫瘤細胞逃避免疫監視。當兩者均陽性表達時，腫瘤干細胞的惡性生物學行為與免疫逃逸機制相互協同，共同促進腫瘤的進展和復發，從而導致患者的生存率顯著降低。這一結果提示，聯合檢測CD133和B7-H1的表達，對于評估胃癌患者的術后預后具有重要價值，能夠更準確地預測患者的生存情況，為臨床制定個性化的治療方案提供有力依據。六、討論6.1CD133、B7-H1表達與胃癌臨床病理特征的關系探討在本研究中，對65例胃癌組織標本的檢測分析揭示了CD133、B7-H1表達與胃癌臨床病理特征之間的緊密聯系，這為深入理解胃癌的發病機制和臨床進展提供了關鍵線索。CD133作為腫瘤干細胞標志物，在胃癌組織中的陽性表達率為30.8%，其表達與多種臨床病理特征密切相關。隨著腫瘤浸潤深度的增加，CD133陽性表達率顯著升高。這是因為CD133陽性的腫瘤干細胞具有更強的遷移和侵襲能力，它們能夠分泌多種蛋白酶，如基質金屬蛋白酶（MMPs），降解細胞外基質和基底膜，從而促進腫瘤細胞向周圍組織浸潤。研究表明，CD133陽性的胃癌細胞高表達MMP-2和MMP-9，這些蛋白酶能夠降解Ⅳ型膠原等基底膜成分，使腫瘤細胞突破胃壁的各層組織，導致腫瘤浸潤深度增加。組織學分化程度也與CD133表達緊密相關，低分化胃癌組織中CD133陽性表達率明顯高于高分化和中分化組織。腫瘤干細胞具有自我更新和多向分化的潛能，CD133陽性的腫瘤干細胞可能在腫瘤分化過程中起到關鍵作用。在低分化胃癌中，CD133陽性細胞的高表達可能導致腫瘤細胞分化異常，無法形成正常的組織結構和功能，從而使腫瘤惡性程度增加。脈管內癌栓的形成與CD133陽性表達密切相關，有脈管內癌栓的患者中CD133陽性表達率明顯高于無癌栓者。CD133陽性的腫瘤干細胞具有更強的抗凋亡能力和生存能力，能夠在脈管系統中存活并形成癌栓。這些癌栓中的腫瘤細胞可以隨著血液循環或淋巴循環轉移到遠處器官，增加了腫瘤轉移的風險。TNM分期越晚，CD133陽性表達率越高。這是因為CD133陽性的腫瘤干細胞通過不斷增殖和分化，促進腫瘤的生長和侵襲，導致腫瘤分期進展。CD133陽性細胞還能夠調節腫瘤微環境，招募免疫細胞和間質細胞，促進腫瘤血管生成和淋巴管生成，進一步促進腫瘤的發展和轉移。B7-H1作為免疫負調節分子，在胃癌組織中的陽性表達率為36.9%，其表達與淋巴結轉移及脈管內癌栓密切相關。在有淋巴結轉移的患者中，B7-H1陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者。腫瘤細胞通過淋巴管轉移到淋巴結的過程中，B7-H1的高表達可以抑制T細胞的活化和增殖，使腫瘤細胞逃避免疫監視，從而在淋巴結中存活和增殖，導致淋巴結轉移。脈管內癌栓的形成也與B7-H1陽性表達相關，有脈管內癌栓的患者中B7-H1陽性表達率明顯高于無癌栓者。B7-H1的表達可以抑制NK細胞和細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的活性，使腫瘤細胞在脈管內逃避機體的免疫攻擊，進而形成癌栓并促進腫瘤的遠處轉移。本研究還發現CD133和B7-H1在胃癌組織中的表達呈正相關。CD133陽性的腫瘤干細胞可能通過分泌細胞因子，如干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，誘導腫瘤微環境中B7-H1的表達上調。而B7-H1介導的免疫抑制微環境又為CD133陽性的腫瘤干細胞提供了更有利的生存和增殖條件，兩者相互協同，共同促進腫瘤的發展和免疫逃逸。6.2CD133、B7-H1表達對胃癌術后生存率影響的機制分析CD133和B7-H1的表達對胃癌術后生存率產生顯著影響，其背后的作用機制涉及多個方面，與腫瘤的生物學行為和免疫逃逸密切相關。從腫瘤生物學行為角度來看，CD133作為腫瘤干細胞標志物，其陽性表達的腫瘤細胞具有獨特的生物學特性，對胃癌的發展和預后產生重要影響。CD133陽性的腫瘤干細胞具備極強的自我更新能力，能夠不斷增殖并產生大量腫瘤細胞，為腫瘤的持續生長提供充足的細胞來源。研究發現，在胃癌細胞系中，CD133陽性細胞能夠在體外長期培養并形成腫瘤球，且腫瘤球中的細胞仍保持CD133陽性表達，具有干細胞特性。這種自我更新能力使得腫瘤難以被徹底清除，即使在手術切除大部分腫瘤組織后，殘留的CD133陽性腫瘤干細胞仍可重新增殖，導致腫瘤復發，從而降低患者的術后生存率。CD133陽性細胞還具有多向分化潛能，能夠分化為不同類型的腫瘤細胞，這不僅增加了腫瘤細胞的異質性，也使得腫瘤的治療更加困難。不同分化狀態的腫瘤細胞對化療藥物和放療的敏感性存在差異，部分分化的腫瘤細胞可能對治療產生抵抗，導致治療效果不佳。在胃癌中，CD133陽性細胞可分化為具有不同侵襲和轉移能力的腫瘤細胞亞群，這些細胞亞群在腫瘤的進展過程中發揮不同作用，進一步促進腫瘤的惡化，影響患者的生存。CD133陽性腫瘤細胞還具有更強的遷移和侵襲能力，這是其影響胃癌術后生存率的重要機制之一。CD133陽性細胞通過調節多種細胞信號通路，如PI3K/Akt、MAPK等信號通路，促進細胞骨架的重組和細胞運動相關蛋白的表達，從而增強細胞的遷移和侵襲能力。這些細胞能夠突破胃壁組織的屏障，向周圍組織浸潤，并通過血液循環或淋巴循環轉移到遠處器官，形成轉移灶。一旦腫瘤發生轉移，患者的治療難度顯著增加，預后明顯變差，術后生存率也隨之降低。B7-H1主要通過免疫逃逸機制影響胃癌術后生存率。在正常免疫應答過程中，T細胞介導的細胞免疫是機體抵抗腫瘤的重要防線。T細胞的活化需要雙信號刺激，第一信號來自TCR與MHC-抗原肽復合物的結合，第二信號來自共刺激分子。然而，在胃癌患者中，腫瘤細胞表面高表達的B7-H1可與T細胞表面的PD-1結合，向T細胞傳遞抑制性信號。這一信號抑制了T細胞內的PI3K/Akt和MAPK等信號通路的激活，導致T細胞無法正?；罨⒃鲋澈头置诩毎蜃?。研究表明，B7-H1陽性的胃癌組織中，腫瘤浸潤T細胞的活性明顯受到抑制，其增殖能力和細胞因子分泌水平顯著降低。T細胞功能的抑制使得機體無法有效地識別和殺傷腫瘤細胞，腫瘤細胞得以逃避免疫監視，在體內不斷增殖和擴散，從而降低患者的術后生存率。B7-H1還可以通過調節腫瘤微環境中的其他免疫細胞，進一步促進腫瘤免疫逃逸，影響患者預后。B7-H1的表達可促進Treg細胞的增殖和活化，Treg細胞通過分泌抑制性細胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制效應T細胞的功能，從而削弱機體的抗腫瘤免疫反應。B7-H1與MDSC表面的PD-1結合，可增強MDSC的免疫抑制作用，MDSC通過多種機制抑制T細胞的活化和功能，如消耗T細胞增殖所需的氨基酸、產生活性氧等，共同營造一個有利于腫瘤生長和免疫逃逸的微環境。在這種免疫抑制微環境中，腫瘤細胞能夠逃脫免疫系統的攻擊，持續生長和轉移，最終導致患者術后生存率下降。CD133和B7-H1之間存在協同作用，共同影響胃癌術后生存率。CD133陽性的腫瘤干細胞可能通過分泌細胞因子，如IFN-γ、TNF-α等，誘導腫瘤微環境中B7-H1的表達上調。而B7-H1介導的免疫抑制微環境又為CD133陽性的腫瘤干細胞提供了更有利的生存和增殖條件。當兩者同時陽性表達時，腫瘤干細胞的惡性生物學行為與免疫逃逸機制相互促進，腫瘤的生長、侵襲和轉移能力增強，患者的術后生存率顯著降低。6.3研究結果的臨床應用價值與展望本研究關于CD133、B7-H1在胃癌中的表達及對術后生存率影響的結果，具有重要的臨床應用價值，為胃癌的臨床診斷、治療和預后評估提供了新的思路和方法。在臨床診斷方面，CD133和B7-H1可作為潛在的診斷標志物。由于CD133在胃癌組織中的陽性表達率與腫瘤浸潤深度、組織學分化程度、脈管內癌栓及TNM分期密切相關，B7-H1與淋巴結轉移及脈管內癌栓有關，通過檢測它們的表達情況，有助于醫生更準確地判斷胃癌的病情進展和惡性程度，從而實現早期診斷和病情評估。聯合檢測CD133和B7-H1可能具有更高的診斷價值，提高胃癌診斷的準確性和特異性，為患者的早期治療爭取時間。在治療方案選擇上，本研究結果也提供了重要的參考依據。對于CD133陽性表達的患者，由于其腫瘤細胞具有更強的自我更新、增殖和轉移能力，傳統的手術、化療和放療可能效果不佳，需要考慮更具針對性的治療策略。可以研發針對CD133陽性腫瘤干細胞的靶向治療藥物，特異性地殺傷腫瘤干細胞，從而提高治療效果，減少腫瘤復發和轉移的風險。對于B7-H1陽性表達的患者，可考慮采用免疫治療，如使用B7-H1拮抗劑阻斷B7-H1/PD-1通路，解除免疫抑制，增強機體的抗腫瘤免疫反應。當CD133和B7-H1同時陽性表達時，可采用聯合治療策略，結合靶向治療和免疫治療，以提高治療效果，改善患者的預后。在預后評估方面，CD133和B7-H1的表達情況對判斷患者的預后具有重要意義。CD133和B7-H1陽性表達的患者術后5年生存率明顯低于陰性表達者，且兩者均陽性患者的累積死亡率更高。因此，通過檢測CD133和B7-H1的表達，醫生可以更準確地預測患者的預后，為患者制定個性化的隨訪和治療計劃。對于預后較差的患者，可加強隨訪監測，及時發現腫瘤復發和轉移的跡象，并采取積極的治療措施。未來研究方向可以從以下幾個方面展開：進一步擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，以驗證本研究結果的可靠性和普遍性。深入研究CD133和B7-H1的作用機制，明確它們在胃癌發生發展過程中的具體信號通路和調控網絡，為開發新的治療靶點和藥物提供理論基礎。探索CD133和B7-H1與其他腫瘤標志物或免疫指標的聯合應用，提高胃癌診斷、治療和預后評估的準確性和有效性。開展針對CD133和B7-H1的臨床試驗，評估新的治療策略和藥物的療效和安全性，為臨床實踐提供更多的證據支持。七、結論與展望7.1研究主要結論總結本研究通過對65例胃癌組織標本的檢測與分析，系統地探討了CD133、B7-H1在胃癌中的表達情況，及其與臨床病理特征的關系和對術后生存率的影響，得出以下主要結論：在表達情況方面，CD133和B7-H1在胃癌組織中均有一定比例的陽性表達。CD133蛋白表達的陽性率為30.8%，其在癌細胞的細胞膜、部分細胞漿及少量間質細胞中呈現出不同程度的表達；B7-H1蛋白陽性率為36.9%，在癌細胞的細