小麥抗禾谷孢囊線蟲鑒定技術規程2018-04-13實施2018-04-13實施河北省質量技術監督局發布IDB13/T2656—2018本標準按照GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準有河北省農林科學院提出。本標準起草單位：河北省農林科學院植物保護研究所。本標準主要起草人：李秀花、馬娟、高波、王容燕、陳書龍。DB13/T2656—2018小麥抗禾谷孢囊線蟲鑒定技術規程本標準規定了小麥抗禾谷孢囊線蟲鑒定技術相關術語和定義、接種體制備、鑒定技術和抗性評價標準。本標準適用于小麥對禾谷孢囊線蟲的抗性鑒定及評價。2術語和定義下列術語和定義適用于本文件。是指危害禾谷類作物孢囊線蟲種類的統稱，本文特指燕麥孢囊線蟲(Heteroderaavenae)。是禾谷孢囊線蟲在發育過程中雌蟲的發育前期，呈白色。孢囊是孢囊類線蟲發育過程中的特殊階段，是雌蟲死亡后形成的褐色蟲體，褐色外殼包裹諸多卵粒。3禾谷孢囊線蟲接種體制備3.1禾谷孢囊線蟲的孢囊分離方法于小麥收獲后至種植前，在禾谷孢囊線蟲發生嚴重小麥田，取5cm～20cm深的根際土樣，帶回實驗室進行孢囊分離。將土樣加適量水混合，攪拌均勻后，靜止10s,把上清液傾倒在20目和80目上下鑲嵌的網篩上，重復3次，然后用水沖洗20目網篩上的雜質至80目，把80目網篩上的殘留物沖洗到濾紙上，在體式顯微鏡下挑取禾谷孢囊線蟲孢囊。將新鮮的純凈孢囊置于5℃條件下存放8周，然后在15℃條件下繼續培養，每隔1天～2天直接吸取二齡幼蟲或用淺盤法收集二齡幼蟲。將孵化不超過一周的二齡幼蟲用于接種試驗。4室內抗性鑒定人工接種鑒定室應具備人工調節溫度15℃~25℃、光照3000Lux的條件，使人工接種后具備良好的發病環境。工2DB13/T2656—2018鑒定時選用矮抗58、石家莊8號為感病對照品種。4.3鑒定材料準備4.3.1播種基質的準備挖取田園土壤與細沙混合(3:1),調整土壤含水量為10%～15%,分裝1kg塑料袋，高壓滅菌(121℃,2h),在室溫條件下放置2d～3d后使用。4.3.2小麥種子的催芽用3%次氯酸鈉溶液浸泡小麥種子5min,用無菌水沖洗3次～5次直到去除次氯酸鈉，然后將小麥種子在鋪有濾紙的培養皿中培養(25℃),在芽長0.5cm～1cm時即可進行播種。取PVC塑料管(5cm×20cm)裝入已消毒濕潤土壤，用牛皮紙包住底部，土壤表面距PVC塑料管上部邊緣3cm,每管點播一粒已發芽的種子，同時在根尖滴加幼蟲懸浮液1ml(約含200條幼蟲),覆土約1cm~1.5cm厚，以后每隔3天接種一次，共接種3次，累計接種量約600條二齡幼蟲/管。在第二和第三次接種時，均在離麥苗旁約1cm處扎一個小孔，孔深4.0cm左右，把配好的線蟲懸液1ml加入該孔內，再把孔埋上。每品種重復3次，每重復10株苗，隨機排列。4.4接種后管理接種后將植株置于16±2℃鑒定室內培養10天，然后將溫度調到18℃~20℃,補光(3000Lux),每天光照14h,定期澆水、施肥，保證小麥正常生長。在生長期間，控制病蟲發生。5.1調查時間小心清洗小麥根系，檢查并記錄根上的白雌蟲數，同時用漂浮法分離土壤中的孢囊，統計每株上的白雌蟲與孢囊總和。白雌蟲與孢囊數量為三次重復的算術平均值。6.2鑒定有效性判別當感病對照品種白雌蟲與孢囊數量大于20時，該批次抗禾谷孢囊線蟲鑒定視為有效。6.3抗性評價標準3DB13/T2656—2018依據不同品種根部形成的白雌蟲與孢囊數量確定其對禾谷孢囊線蟲的抗性水平，劃分標準見表1。