H5N1、H9N2亞型禽流感病毒NS1基因在T4噬菌體表面的展示作者：陳麗指導老師：謝青梅禽流感簡介禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽類（家禽和野禽）的一種感染和/或疾病綜合征。主要發生在雞、鴨、鵝、鴿子等禽類和鳥類身上，但主要侵害火雞和雞，哺乳動物如豬、馬、海豹、人等也可感染。我國《家畜家禽防疫條例》和國際獸醫局動物流行病組織（OIE）規定禽流感為Ａ類烈性傳染病。

發生禽流感時沒有特有的癥狀表現，其癥狀的明顯和嚴重程度受感染毒株的毒力、感染禽的品種、日齡、有無并發和繼發病、應激、禽群的飼養管理水平、營養狀況及環境等因素的影響。防治禽流感現狀禽流感在世界范圍內的流行，給很多國家帶來了嚴重的經濟損失。目前，我國主要采用免疫+撲殺的政策來控制禽流感，但疫苗的大量使用干擾了禽流感疫情的監測，因此現有檢測方法難以區分免疫禽群和感染群。因此建立迅速檢測區分免疫禽群和感染群方法有很大的現實意義，能夠使我們及時了解疫情，做出相應處理，在很大程度上減少經濟損失。NS1基因簡介NS1基因為禽流感病毒的第8個基因片段,在禽流感病毒的8個片段中最短,編碼非結構蛋白。作為病毒的非結構成分,NS1蛋白出現僅僅只局限在病毒感染期，它可刺激機體產生非結構蛋白抗體。因此，針對NS1蛋白的抗體只可能出現于病毒感染群中，而在使用滅活疫苗免疫時不會產生。從而可以將其及其抗體作為病毒感染機體的一個標記用以區分免疫群和感染群的鑒別診斷。NS1的作用近來研究報道非結構蛋白（NS1）可以抵抗干擾素對蛋白質合成的抑制作用。而且能夠抑制宿主細胞Pre2mRNA的運輸和剪接，在病毒復制過程及與細胞蛋白質的相互作用中發揮重要作用,從而關閉宿主細胞的基因表達,并且可以增強病毒mRNA翻譯的效率。反向遺傳系統實驗已證實,在病毒感染期間，NS1蛋白的Ｎ端區域有增強病毒蛋白合成的功能。更為重要的是NS1蛋白能使流感病毒逃逸宿主的免疫防御，在抑制干擾素(IFNα/β)及腫瘤壞死因子(TNFβ)介導的抗病毒反應中起重要作用。T4噬菌體表達載體的優點容量大、拷貝數多可以展示的肽或蛋白質范圍廣有兩個展示位點，可以同時展示性質完全不同的兩種蛋白質適于大規模培養,展示在衣殼表面的外源蛋白容易純化同時外源蛋白保持了相對完整的生物學活性具有很好的免疫原性研究目的及意義本研究旨在利用T4噬菌體表達NS1蛋白，為下一步研究NS1單克隆抗體或特異性抗體鑒別診斷禽類感染禽流感病毒是由疫苗引起還是病毒感染所致，同時可建立一套鑒別診斷禽流感感染禽群的免疫群和感染群的診斷方法，這對于禽流感的診斷和防制研究具有重要的現實意義和實用價值，對生產實踐具有很好的理論指導作用。實驗結果

用所設計的引物特異地擴增到H5N1、H9N2NS1基因并獲得了其核苷酸序列。2個毒株的NS1基因長分別為678bp、693bp，分別編碼226、231個氨基酸；核苷酸序列與GenBank中收錄的其他分離株NS1基因比較，其核苷酸同源性很高（96-98%），氨基酸的同源性為87%-97%。將AIVNS1基因克隆至pSOC質粒，NS1基因與SOC基因融合表達得到融合蛋白pSOC-