PAGEPAGE19第30講微生物的利用[考綱要求]1.大腸桿菌的培育和分別。2.分別以尿素為氮源的微生物。考點(diǎn)一微生物的培育和分別1.培育基與無(wú)菌技術(shù)(1)培育基含義微生物生存的環(huán)境和養(yǎng)分物質(zhì)成分①水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，還需滿意不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特別養(yǎng)分物質(zhì)以及氧氣的要求②LB培育基：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水、瓊脂(固體培育基)各成分的作用蛋白胨、酵母提取物：為細(xì)菌生長(zhǎng)供應(yīng)碳源和氮源氯化鈉：維持肯定的滲透壓瓊脂：凝固劑，不易分解，一般不作為養(yǎng)分物質(zhì)。其在96℃時(shí)溶化成液體，冷卻到45℃以下即重新凝固種類①按物理狀態(tài)分：固體培育基、半固體培育基、液體培育基②按特別用途分：基礎(chǔ)培育基、加富培育基、選擇培育基和鑒別培育基③按培育的微生物分：細(xì)菌培育基(pH呈中性偏堿，添加有機(jī)物如蛋白胨、酵母提取物，還要添加氯化鈉以維持滲透壓)、霉菌培育基(pH呈中性偏酸，添加無(wú)機(jī)物或添加蔗糖的豆芽汁)(2)滅菌操作項(xiàng)目灼燒滅菌高壓蒸汽滅菌過(guò)濾滅菌適用材料或用具接種環(huán)、接種針或其他金屬用具培育基、培育皿、試管等玻璃器具等尿素等加熱會(huì)分解的物質(zhì)滅菌條件剛好間在酒精燈火焰上充分灼燒，直至燒紅，冷卻后備用①LB培育基：121℃(1kg/cm2壓力)、15min②含葡萄糖的培育基：90℃以上(500g/cm2壓力)、30min③玻璃器皿：高壓蒸汽滅菌后放入60～80℃烘箱中烘干G6玻璃砂漏斗過(guò)濾2.大腸桿菌的培育和分別(1)大腸桿菌①特性：大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧(代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對(duì)人無(wú)害，但若進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng)，就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。②用途：是基因工程技術(shù)中被廣泛采納的工具。(2)細(xì)菌的培育和分別①細(xì)菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，約20min分裂一次。②培育的方法：須要將已有細(xì)菌的培育物轉(zhuǎn)移到新的培育基中，一般用接種環(huán)(工具)轉(zhuǎn)移帶菌的培育物。③細(xì)菌分別的方法與特點(diǎn)分別方法特點(diǎn)劃線分別法操作簡(jiǎn)潔涂布分別法操作困難，單菌落更易分開(kāi)(3)大腸桿菌的培育和分別試驗(yàn)①試驗(yàn)內(nèi)容：將大腸桿菌擴(kuò)大培育和劃線分別，即用LB液體培育基擴(kuò)大培育大腸桿菌，培育后再在LB固體平面培育基上劃線進(jìn)行分別，隨后培育基上便會(huì)形成一個(gè)個(gè)單獨(dú)的菌落。②試驗(yàn)步驟培育基滅菌↓倒平板↓接種↓劃線分別↓培育視察50mLLB液體培育基和50mLLB固體培育基及培育皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌將培育基分別倒至4個(gè)滅菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培育基的三角瓶中接種大腸桿菌，培育12h用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培育基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培育皿培育皿倒置(蓋在下面)，放在37℃恒溫培育箱中培育12～24h后，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落③大腸桿菌分別的用途：?jiǎn)尉涞姆謩e是消退污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。3.微生物兩種常用的接種方法比較比較劃線分別法涂布分別法工具接種環(huán)玻璃刮刀原理通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基表面。在數(shù)次劃線后培育，可以分別到由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞群體，即菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面，進(jìn)行培育。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落特點(diǎn)方法簡(jiǎn)潔，但不相宜計(jì)數(shù)單菌落更易分開(kāi)，但操作困難些目的使培育基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體——菌落(1)玻璃砂漏斗用后需用1mol/L的HCl浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至洗出液呈中性，干燥后保存(√)(2)科研人員在超凈臺(tái)上進(jìn)行接種操作時(shí)，為了保證無(wú)菌環(huán)境，打開(kāi)紫外燈和過(guò)濾風(fēng)(×)(3)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的培育皿蓋放到一邊，以免培育基濺到培育皿蓋上(×)(√)(5)劃線分別法簡(jiǎn)潔并且可以用來(lái)計(jì)數(shù)，涂布分別法使單菌落更易分開(kāi)，但操作困難些(×)(6)微生物的分別和培育試驗(yàn)結(jié)束后，將培育基倒入廢料桶并用清水將器皿清洗干凈(×)(7)下圖中甲為劃線分別法中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果：①每一次劃線后都要灼燒接種環(huán)(√)②除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是第一次劃線的末端(×)視察甲、乙、丙、丁四幅圖和兩種接種方法接種后培育的效果圖，請(qǐng)思索：(1)請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。(2)甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。(3)丁中的操作須要等待平板冷卻凝固才能進(jìn)行。(4)下圖是采納純化微生物培育的兩種接種方法接種后培育的效果圖，請(qǐng)思索：①獲得圖A效果和B效果的接種方法分別是什么？提示獲得圖A效果的接種方法為涂布分別法，獲得圖B效果的接種方法為劃線分別法。②某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)覺(jué)培育基上的菌落連成了一片，最可能的緣由是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避開(kāi)此種現(xiàn)象？提示最可能的緣由是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌。應(yīng)實(shí)行的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。1.(2024·杭州一模)據(jù)報(bào)道，一些企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出金黃色葡萄球菌超標(biāo)，加上熟鹵制品的大腸桿菌超標(biāo)，“細(xì)菌門”事務(wù)引起公眾普遍關(guān)注。金黃色葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培育基上形成的菌落四周會(huì)出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)某生物愛(ài)好小組欲檢測(cè)某果汁類食品中是否含有金黃色葡萄球菌以及該菌的含量。①配制培育基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后____________，分裝到錐形瓶后利用________________進(jìn)行滅菌，在無(wú)菌狀態(tài)下加入卵黃液(100mL10%滅菌NaCl溶液中加一個(gè)雞蛋黃，振蕩勻稱)搖勻后馬上倒平板。②接種：該小組采納涂布分別法檢測(cè)果汁樣品中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時(shí)間，這樣做的目的是________________________；然后，將1mL果汁樣品稀釋10倍，在3個(gè)平板上用涂布分別法分別接入0.1mL稀釋液。③培育及結(jié)果：將培育皿____________放入恒溫培育箱中經(jīng)適當(dāng)培育，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為19、18和17。據(jù)此可得出每升果汁樣品中的活菌數(shù)為_(kāi)_________個(gè)。(2)示意圖A和B中____________表示的是用涂布分別法接種培育后得到的結(jié)果。(3)下列有關(guān)常用涂布分別法的操作正確的是________。A.在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行接種時(shí)應(yīng)關(guān)閉紫外燈B.接種前需先稀釋，然后過(guò)濾除去雜菌C.在每個(gè)固體培育基表面都可形成單菌落D.玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中滅菌，不用灼燒(4)菌種保存：在無(wú)菌條件下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在_______上，在37℃下培育24h后，置于4℃冰箱中保存。答案(1)①②③(2)B(3)A(4)斜面解析(1)①培育基配制好后應(yīng)調(diào)整酸堿度(pH)，分裝到錐形瓶后利用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。②涂布接種前，將制好的空白平板先培育一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培育基平板滅菌是否合格；③接種后，培育皿須要倒置培育，防止皿蓋上凝集的水滴滴落造成污染；0.1mL稀釋液(稀釋10倍)含細(xì)菌數(shù)約為18個(gè)，得出每升果汁含有活菌數(shù)1.8×106個(gè)。(2)圖中A為劃線分別得到的結(jié)果，B為涂布分別得到的結(jié)果。(3)在超凈工作臺(tái)進(jìn)行接種操作時(shí)應(yīng)關(guān)閉紫外燈，A正確；涂布分別前需稀釋，但不能過(guò)濾除菌，B錯(cuò)誤；稀釋度較大的溶液涂布分別不肯定出現(xiàn)單菌落，C錯(cuò)誤；玻璃刮刀浸泡后須要灼燒，D錯(cuò)誤。(4)純化的菌種保存在斜面上。2.(2024·寧波3月聯(lián)考)探討小組從土壤中篩選以多環(huán)芳烴(PAHs)為碳源和能源的細(xì)菌，用以降解工業(yè)廢水和生活污水中的PAHs。請(qǐng)回答：(1)為了從土壤中篩選PAHs降解菌，需配制以______________為唯一碳源的培育基，培育基經(jīng)____________[A.121℃(500g/cm2壓力)，15minB.90℃(500g/cm2壓力)，15minC.121℃(1kg/cm2壓力)，15minD.90℃(500g/cm2壓力)，30min]高壓蒸汽滅菌，待冷卻至60℃后倒平板。(2)倒平板時(shí)應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰，目的是______________________。在倒平板的過(guò)程中，假如培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，則這個(gè)平板不能用來(lái)培育PAHs降解菌，緣由是________________________________________________________________________。(3)制備土壤稀釋液時(shí)，用________法接種于固體培育基表面；培育時(shí)，需將培育皿________并放在37℃恒溫培育箱中培育24h。(4)用劃線分別法純化PAHs降解菌的過(guò)程中，在其次次及其后的劃線操作時(shí)，應(yīng)從上一次劃線的末端起先劃線，緣由是__________________________________________________。答案(1)PAHsC(2)防止雜菌污染空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生(3)涂布分別倒置(4)使細(xì)菌數(shù)量隨著劃線次數(shù)的增加而漸漸削減，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的菌落解析(1)為了篩選以PAHs為碳源的細(xì)菌，應(yīng)保證培育基中PAHs為唯一碳源；配制好的培育基經(jīng)高壓蒸汽滅菌法滅菌，溫度為121℃(1kg/cm2壓力)，滅菌15min。(2)倒平板時(shí)使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰，目的是防止雜菌污染。若培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，則空氣中的微生物可能在此部位的培育基上滋生，故該平板不能運(yùn)用。(3)土壤稀釋液用涂布分別法接種，培育皿需倒置培育。(4)劃線分別法中其次次及其后的劃線操作要從上一次劃線的末端起先，緣由是上一次劃線末端菌數(shù)削減，有利于進(jìn)一步分別。3.(2024·舟山質(zhì)檢)下列是有關(guān)大腸桿菌的培育試驗(yàn)，請(qǐng)回答問(wèn)題：(1)配制培育大腸桿菌的培育基時(shí)，依據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培育基中加入蛋白胨和_______作為養(yǎng)分物質(zhì)，為維持肯定的滲透壓，常需加入肯定量的_______。(2)大腸桿菌的培育和分別試驗(yàn)中，在______________中進(jìn)行擴(kuò)大培育，培育液經(jīng)________后，在LB固體培育基上進(jìn)行________，并將培育皿__________放在恒溫培育箱中培育，可以獲得如圖所示效果。為了檢測(cè)接種、培育過(guò)程是否受到雜菌污染以及______________，應(yīng)同時(shí)將未接種的培育基放入相同條件的恒溫培育箱中培育。(3)依據(jù)________的形態(tài)、大小等特征對(duì)獲得的純菌種進(jìn)行初步的鑒定。(4)下列關(guān)于“大腸桿菌的培育和分別”的操作中，敘述正確的是________。A.高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培育皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液體培育基稀釋分別倒置無(wú)菌操作是否規(guī)范(3)菌落(4)D解析(1)配制培育大腸桿菌的培育基時(shí)，依據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培育基中加入蛋白胨和酵母提取物作為養(yǎng)分物質(zhì)，為維持肯定的滲透壓，常需加入肯定量的NaCl。(2)大腸桿菌的培育和分別試驗(yàn)中，在LB液體培育基中進(jìn)行擴(kuò)大培育，培育液經(jīng)稀釋后，在LB固體培育基上進(jìn)行分別，并將培育皿倒置放在恒溫培育箱中培育；為了檢測(cè)接種、培育過(guò)程是否受雜菌污染以及無(wú)菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培育基放入恒溫培育箱中培育。(3)依據(jù)菌落的形態(tài)、大小等特征對(duì)獲得的純菌種進(jìn)行初步的鑒定。(4)高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能打開(kāi)放氣閥，開(kāi)啟鍋蓋，不能干脆打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零，A錯(cuò)誤；倒平板過(guò)程中不能打開(kāi)培育皿的皿蓋，以防止雜菌污染，B錯(cuò)誤；接種環(huán)在火焰上灼燒后，待冷卻后才可以快速挑取菌落，C錯(cuò)誤；用記號(hào)筆標(biāo)記培育皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D正確。1.對(duì)無(wú)菌操作的理解(1)滅菌的緣由：為了獲得純凈的培育物，防止外來(lái)雜菌的污染。(2)無(wú)菌操作的條件：各種器皿必需無(wú)菌；培育基必需無(wú)菌；細(xì)菌接種、轉(zhuǎn)移等操作過(guò)程必需無(wú)菌。(3)避開(kāi)培育物被雜菌污染的方法①留意滅菌操作原則，滅菌徹底，降低環(huán)境污染概率，手和試驗(yàn)服要清潔，削減操作時(shí)間，膽大心細(xì)。②留意微生物的生長(zhǎng)條件，如pH、滲透壓、溫度等?！凹?xì)菌喜葷，霉菌喜素”，細(xì)菌喜愛(ài)在中性偏堿的環(huán)境中生長(zhǎng)，霉菌喜愛(ài)在中性偏酸的環(huán)境中生長(zhǎng)。因此，可依據(jù)不同微生物的“喜好”來(lái)削減污染。2.劃線分別操作中的有關(guān)問(wèn)題(1)在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束后，仍舊須要灼燒接種環(huán)。第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束灼燒目的避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境或感染操作者(2)在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。(3)在進(jìn)行其次次以及其后的劃線操作時(shí)，要從上一次劃線的末端起先劃線。每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端起先劃線，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。3.進(jìn)行恒溫培育時(shí)，要將培育皿倒置的緣由假如正放培育皿，則皿蓋上形成的水滴會(huì)落到培育基表面并且擴(kuò)散開(kāi)，會(huì)沖散菌體，污染菌落，達(dá)不到分別的目的，因此恒溫培育時(shí)，培育皿必需倒置。考點(diǎn)二分別以尿素為氮源的微生物1.菌種特點(diǎn)含有脲酶，可以通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。2.培育基用以尿素為唯一氮源的培育基培育，以LB全養(yǎng)分培育基為比照。3.試驗(yàn)原理(1)篩選以尿素為氮源的微生物，可運(yùn)用以尿素為唯一氮源的選擇培育基進(jìn)行培育選擇。(2)細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH上升，使酚紅指示劑變紅。4.試驗(yàn)步驟5.反應(yīng)的鑒定在配制培育基時(shí)，加入指示劑酚紅，培育時(shí)細(xì)菌將尿素分解并產(chǎn)生堿性的氨，使培育基上菌落四周出現(xiàn)紅色的環(huán)帶。(1)分別以尿素為氮源的微生物時(shí)，配制的培育基中加入酚紅作為酸堿指示劑，加入瓊脂作為凝固劑(×)(2)選擇培育基可以鑒定某種微生物的種類(×)(3)從物理性狀的角度看，選擇培育基多屬于固體培育基(√)(4)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采納涂布分別法，而不能用劃線分別法(×)(5)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培育基中，尿素是唯一的氮源(√)(6)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培育基的酸堿度降低(×)如圖為分別以尿素為氮源的微生物的試驗(yàn)，思索回答下列問(wèn)題：(1)試驗(yàn)?zāi)康氖沁\(yùn)用含有尿素的培育基分別能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，運(yùn)用酚紅作為指示劑。(2)有脲酶的細(xì)菌菌落四周出現(xiàn)有色環(huán)帶的緣由是什么？提示細(xì)菌向胞外分泌脲酶，使培育基中尿素水解產(chǎn)生呈堿性的氨，遇培育基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色改變，形成紅色環(huán)帶。(3)制備尿素固體培育基的過(guò)程中采納的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法、G6玻璃砂漏斗過(guò)濾法。(4)從上圖所示試驗(yàn)過(guò)程中可推斷出細(xì)菌懸液C的稀釋度為10－4。1.幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分別培育。試驗(yàn)基本步驟如下：eq\x(配制培育基)→eq\x(滅菌、倒平板)→eq\x(X)→eq\x(培育)→eq\x(視察)請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在配制培育基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落四周會(huì)出現(xiàn)______色環(huán)帶。(2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是__________滅菌。A.高壓蒸汽B.紫外燈照耀C.70%酒精浸泡D.過(guò)濾(3)步驟X表示________。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液_______到培育基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得________菌落。(4)在培育時(shí)，需將培育皿倒置并放在________中，若不倒置培育，將導(dǎo)致__________。(5)臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的_________________________________________________________分解為NH3和14CO2。答案(1)脲酶紅(2)D(3)接種涂布單(4)恒溫培育箱無(wú)法形成單菌落(5)尿素解析(1)幽門螺桿菌(Hp)含有脲酶，能以尿素為氮源，在加入尿素和酚紅指示劑的培育基中培育Hp，由于尿素經(jīng)脲酶的降解可產(chǎn)生堿性的NH3，NH3能使培育基中的酚紅由紅黃色變成紅色，故菌落四周會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)由于尿素加熱會(huì)分解，對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌最好用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾。(3)微生物的分別和培育步驟：配制培育基→滅菌、倒平板→接種→培育。為獲得單菌落，接種操作前應(yīng)先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培育基平面上即可。(4)微生物培育時(shí)需將培育皿倒置并放在恒溫培育箱中，若不倒置培育，則無(wú)法形成單菌落。(5)幽門螺桿菌能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，故臨床上常用14C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體內(nèi)幽門螺桿菌的存在。2.(2024·紹興市魯迅高級(jí)中學(xué)期中質(zhì)檢)回答下列問(wèn)題：尿素是一種高濃度氮肥，且長(zhǎng)期施用沒(méi)有不良影響，但尿素只有通過(guò)土壤中某些細(xì)菌的分解作用，才能被植物汲取利用。某同學(xué)要分別出土壤中能分解尿素的細(xì)菌，并嘗試進(jìn)行計(jì)數(shù)，培育基配方如下：K2HPO4NaClH2O葡萄糖尿素酚紅瓊脂0.12g0.12g15mL0.025g2.0g0.25mg0.5g(1)上述培育基配制完成后，應(yīng)選擇____________________法滅菌，依據(jù)培育基的成分推斷，該同學(xué)能否分別出土壤中只分解尿素的細(xì)菌？__________(填“能”或“否”)，推斷理由是__________________________________________________________________________。(2)分別得到分解尿素的細(xì)菌后，則應(yīng)選擇____________培育基進(jìn)行擴(kuò)大培育。培育一段時(shí)間后，要借助顯微鏡對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)過(guò)程中，下列哪種行為會(huì)影響計(jì)數(shù)的精確性____________。A.計(jì)數(shù)時(shí)干脆從靜置培育的試管底部取培育液進(jìn)行計(jì)數(shù)B.假如方格內(nèi)微生物細(xì)胞數(shù)量多于300個(gè)，應(yīng)將培育液先稀釋后再計(jì)數(shù)C.假如微生物細(xì)胞有粘連，要數(shù)出團(tuán)塊中的每一個(gè)細(xì)胞D.壓在方格線上的細(xì)胞只計(jì)左線和上線上的細(xì)胞數(shù)(3)為了提高尿素肥效，可以將分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采納________________技術(shù)。答案(1)高壓蒸汽滅菌否瓊脂是未純化的混合物，內(nèi)含肯定量的含氮化合物，導(dǎo)致尿素不是唯一的氮源(2)液體A(3)固定化酶解析(1)高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫的物品，如培育基、金屬器械、玻璃等，題中培育基配制完成后，應(yīng)選擇高壓蒸汽滅菌；該同學(xué)不能分別出土壤中只分解尿素的細(xì)菌，因?yàn)榄傊俏醇兓幕旌衔?，?nèi)含肯定量的含氮化合物，導(dǎo)致尿素不是唯一的氮源。(2)應(yīng)選擇液體培育基進(jìn)行擴(kuò)大培育；由于重力作用，試管底部培育液中細(xì)菌種群密度較大，應(yīng)將培育液搖勻后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采納固定化酶技術(shù)，使酶與尿素分開(kāi)，可重復(fù)利用。3.(2024·浙江名校新高考聯(lián)盟聯(lián)考)請(qǐng)分析回答以下關(guān)于分別以尿素為氮源的微生物試驗(yàn)的問(wèn)題：(1)脲酶可以催化尿素分解為_(kāi)______________________，其中堿性物質(zhì)能使酚紅指示劑變?yōu)開(kāi)_________________________。(2)分別以尿素為氮源的微生物，配制培育基時(shí)必需加凝固劑______，培育基在______g/cm2壓力下滅菌30分鐘，冷卻至60℃，加入通過(guò)__________的尿素溶液，混合勻稱待用。(3)為了從土壤中分別得到以尿素為氮源的微生物，分別效果比較好的操作方法是釆用________________，釆用該方法分別，土壤溶液必需經(jīng)過(guò)________處理。答案(1)NH3和CO2紅色(2)瓊脂糖500G6玻璃砂漏斗過(guò)濾(3)涂布分別法稀釋解析(1)脲酶可以催化尿素分解為NH3和CO2，其中堿性物質(zhì)能使酚紅指示劑變?yōu)榧t色。(2)分別以尿素為氮源的微生物，配制培育基時(shí)必需加凝固劑瓊脂糖。培育基在500g/cm2壓力下滅菌30分鐘，冷卻至60℃，加入通過(guò)G6玻璃砂漏斗過(guò)濾的尿素溶液，混合勻稱待用。(3)涂布分別法是從土壤中分別得到以尿素為氮源的微生物的最簡(jiǎn)便的方法，采納該方法分別，土壤溶液必需經(jīng)過(guò)稀釋處理。培育基的選擇作用(1)選擇培育基的概念選擇培育基是指依據(jù)某種微生物的特別養(yǎng)分需求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培育基。在培育基中往往加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不須要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)須要的微生物的生長(zhǎng)，從而提高對(duì)該菌的篩選效率。(2)選擇培育基的常用設(shè)計(jì)方案加入青霉素的培育基：分別酵母菌、霉菌等真菌。加入青霉素、卡那霉素等抗生素的培育基：分別導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞。加入高濃度食鹽的培育基：分別金黃色葡萄球菌。不加氮源的無(wú)氮培育基：分別固氮菌。不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培育基：分別自養(yǎng)型微生物。加入氨基蝶呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培育基：分別雜交瘤細(xì)胞。提示：運(yùn)用選擇培育基對(duì)微生物進(jìn)行篩選時(shí)，需設(shè)置比照試驗(yàn)，一般選擇LB全養(yǎng)分培育基作為比照。(3)選擇培育基與鑒別培育基的區(qū)分一般來(lái)說(shuō)，選擇培育基能夠篩選出所須要培育的微生物，促進(jìn)其生長(zhǎng)，抑制其余種類的微生物的生長(zhǎng)。而鑒別培育基往往通過(guò)顯色反應(yīng)，只需用肉眼辨別顏色就能從近似菌落中找到目的菌菌落，但不能抑制其余種類的微生物生長(zhǎng)。例如，利用伊紅—美藍(lán)培育基可鑒別分解乳糖的大腸桿菌，菌落呈紫黑色且?guī)в薪饘俟鉂伞Ｌ骄空骖}預(yù)料考向1.(2024·浙江10月選考)請(qǐng)回答從土壤中分別產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化試驗(yàn)的有關(guān)問(wèn)題：(1)LB固體培育基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入肯定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。(2)尿素固體培育基：先將相宜濃度的尿素溶液用____________滅菌過(guò)的G6玻璃砂漏斗過(guò)濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗____________________，故用于過(guò)濾細(xì)菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培育基中，備用。(3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培育基和尿素固體培育基上，培育48h，推想固體培育基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)最少的是____(A.10－5稀釋液＋尿素固體培育基B.10－5稀釋液＋LB固體培育基C.10－4稀釋液＋尿素固體培育基D.10－4稀釋液＋LB固體培育基)。在尿素固體培育基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落四周出現(xiàn)______，其緣由是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生__________所致。(4)制備固定化脲酶時(shí)，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。答案(1)瓊脂糖(2)高壓蒸汽孔徑小，細(xì)菌不能濾過(guò)(3)A紅色環(huán)氨(或NH3)(4)除去游離的脲酶解析(1)LB固體培育基的成分組成是蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、蒸餾水、瓊脂(糖)。(2)尿素固體培育基的制備：先將含有酚酞的固體培育基高壓蒸汽滅菌，待冷卻至60℃時(shí)加入滅菌的尿素溶液，但要留意尿素溶液的加入需用到高壓蒸汽滅菌后的G6玻璃砂漏斗過(guò)濾，緣由是G6玻璃砂漏斗的孔徑小，細(xì)菌不能通過(guò)，便于除菌。(3)LB固體培育基含有的養(yǎng)分元素全面，培育基上會(huì)有較多菌落，而尿素培育基只有尿素為唯一氮源，培育基上有較少菌落。尿素培育基上細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶將尿素分解為NH3，使菌落四周的含酚酞的培育基變成紅色環(huán)。(4)制備固定化脲酶可用吸附法將脲酶固定在石英砂上，用10倍體積的蒸餾水沖洗固定化酶柱，目的是除去未吸附的游離的脲酶。2.(2015·浙江自選)某工廠為了生產(chǎn)耐高溫植酸酶飼料添加劑，開(kāi)展了產(chǎn)該酶菌株的篩選、酶的固定化及其特性分析探討，其流程如下圖所示。eq\x(土樣中的菌株篩選)→eq\x(菌株鑒定)→eq\x(優(yōu)良菌株擴(kuò)大培育)→eq\x(植酸酶提純)→eq\x(植酸酶固定化)→eq\x(植酸酶特性分析)請(qǐng)回答：(1)土壤懸液首先經(jīng)80℃處理15分鐘，其目的是篩選出________________。(2)在無(wú)菌條件下，將經(jīng)過(guò)處理的土壤懸液進(jìn)行________，然后涂布于含有植酸鹽的固體培育基上。培育后視察到________，其四周出現(xiàn)透亮水解圈，圈的直徑大小與________________強(qiáng)弱相關(guān)。(3)篩選獲得的菌株經(jīng)鑒定后，將優(yōu)良菌株進(jìn)行液體擴(kuò)大培育。培育時(shí)須要振蕩，其主要目的是________________________________________________________________________。液體培育基與固體培育基相比，不含有的成分是________________________________。(4)在合適條件下，將提純的植酸酶與海藻酸鈉混合后，滴加到肯定濃度的鈣離子溶液中，使液滴形成凝膠固體小球。該過(guò)程是對(duì)酶進(jìn)行________。A.吸附B.包埋C.裝柱D.洗滌(5)溫度與植酸酶相對(duì)酶活性的關(guān)系如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是________。A.測(cè)試溫度中，固定化與非固定化植酸酶的最適溫度分別為60℃和45℃B.測(cè)試溫度范圍內(nèi)，固定化植酸酶的相對(duì)酶活性波動(dòng)低于非固定化植酸酶C.固定化與非固定化植酸酶相比，相對(duì)酶活性在80%以上時(shí)的溫度范圍較寬D.65℃時(shí)固定化與非固定化植酸酶的相對(duì)酶活性因蛋白質(zhì)變性而位于最低點(diǎn)答案(1)耐高溫菌株(2)稀釋單菌落植酸酶的活性(3)供氧瓊脂(4)B(5)D解析(1)欲獲得“耐高溫”植酸酶合成菌株，需在“高溫”條件下篩選目的菌株。(2)若對(duì)產(chǎn)植酸酶的菌株進(jìn)行選擇培育，宜在無(wú)菌條件下，將經(jīng)過(guò)處理的土壤懸液進(jìn)行稀釋，然后用涂布分別法將菌液涂布于含有植酸鹽的固體選擇培育基上，培育基上可呈現(xiàn)以植酸酶合成菌菌落為中心的透亮圈，圈的直徑大小與植酸酶活性呈正相關(guān)。(3)對(duì)篩選獲得的優(yōu)良菌株進(jìn)行液體擴(kuò)大培育時(shí)，為滿意菌株需氧呼吸對(duì)O2的需求，宜進(jìn)行振蕩處理，與固體培育基相比，液體培育基中不需添加瓊脂等凝固劑。(4)將海藻酸鈉與提純的植酸酶混合，滴加到肯定濃度的鈣離子溶液中，使液滴形成凝膠固體小球，此操作應(yīng)屬于包埋法固定化酶技術(shù)。(5)圖示曲線變動(dòng)趨勢(shì)表明，相對(duì)于非固定化植酸酶，固定化植酸酶其活性波動(dòng)明顯降低，且酶活性溫度范圍更加寬泛；非固定化酶的最適溫度為45℃，而固定化酶的最適溫度為60℃；圖中65℃并非固定化植酸酶活性的最低點(diǎn)，由以上分析知，A～D中A、B、C均正確，D錯(cuò)誤。3.(2024·浙江11月選考，32(一))回答與微生物培育及應(yīng)用有關(guān)的問(wèn)題：(1)對(duì)培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，滅菌時(shí)間應(yīng)從________時(shí)起先計(jì)時(shí)。對(duì)于不耐熱的液體培育基，一般可將其轉(zhuǎn)入G6玻璃砂漏斗中，采納_______方式可較快地進(jìn)行過(guò)濾滅菌。(2)與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加_____的過(guò)程。某醋化醋桿菌培育基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇組成，其中甘露醇的主要作用是______。(3)為篩選胞外α-淀粉酶分泌型菌種，一般從____________(A.果園樹(shù)下B.肉類加工廠四周C.米酒廠四周D.枯樹(shù)四周)獲得土樣，用無(wú)菌水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培育基上培育，一段時(shí)間后在培育基表面滴加碘液，可在菌落四周視察到透亮的水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種，需選擇若干個(gè)______________________比值大的菌落，分別利用液體培育基振蕩培育進(jìn)行擴(kuò)增。然后將培育液離心，取__________用于檢測(cè)酶活性。答案(1)達(dá)到設(shè)定的溫度或壓力值抽濾(2)將淀粉分解成糖作為碳源(3)C水解圈直徑與菌落直徑上清液解析(1)高壓蒸汽滅菌的計(jì)時(shí)時(shí)間從達(dá)到設(shè)定的溫度或壓力值起先，采納抽濾方式用G6玻璃砂漏斗進(jìn)行過(guò)濾滅菌。(2)將淀粉分解成糖，便于微生物的利用，醋化醋桿菌培育基中的甘露醇的主要作用是作為碳源。(3)篩選富含α-淀粉酶的菌種要在富含淀粉的環(huán)境中篩選，故選C。水解圈直徑與菌落直徑比值越大說(shuō)明菌種分泌的酶活性越高。課時(shí)作業(yè)一、選擇題1.下圖為試驗(yàn)室培育和純化大腸桿菌過(guò)程中的部分操作步驟，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A.①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B.步驟①中，待倒入的培育基冷卻后蓋上培育皿的皿蓋C.步驟③中，每次劃線前后都需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理D.劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培育箱中培育答案B解析由圖可知，步驟①是倒平板，步驟②是用接種環(huán)蘸取菌液，步驟③是進(jìn)行平板劃線，步驟④是培育。①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止被雜菌污染，A項(xiàng)正確；倒完平板后應(yīng)馬上蓋上培育皿的皿蓋，冷卻后將平板倒過(guò)來(lái)放置，B項(xiàng)錯(cuò)誤；每次劃線前后灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到單菌落，C項(xiàng)正確；劃線接種結(jié)束后，將平板倒置放入培育箱中培育，有利于培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，D項(xiàng)正確。2.下列關(guān)于大腸桿菌的培育的敘述，不正確的是()A.在大腸桿菌培育過(guò)程中，除考慮養(yǎng)分條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件B.若對(duì)大腸桿菌活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品的稀釋度合適C.在微生物培育操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培育基和培育皿進(jìn)行消毒D.運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄答案C解析微生物培育條件有養(yǎng)分條件、pH、溫度、滲透壓等，A正確；為計(jì)數(shù)活菌數(shù)，要多次試驗(yàn)求平均值、操作要嚴(yán)格，還要保證樣品的稀釋度合適，便于檢測(cè)，B正確；為防止雜菌污染，對(duì)培育基和培育皿要進(jìn)行滅菌，C錯(cuò)誤；為防止對(duì)環(huán)境的污染，用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄，D正確。3.下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的依次為1、2、3、4、5。下列操作方法正確的是()A.操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌B.劃線操作應(yīng)在火焰上進(jìn)行C.在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌答案D解析操作前要將接種環(huán)放在火焰上灼燒滅菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤；劃線操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行，B項(xiàng)錯(cuò)誤；在5區(qū)域中最有可能得到所需菌落，C項(xiàng)錯(cuò)誤；在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，D項(xiàng)正確。4.細(xì)菌培育過(guò)程中分別采納了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A.接種環(huán)、手、培育基 B.高壓鍋、手、接種環(huán)C.培育基、手、接種環(huán) D.接種環(huán)、手、高壓鍋答案C解析一般來(lái)說(shuō)，滅菌是指徹底殺滅微生物，使其恒久丟失生長(zhǎng)繁殖的實(shí)力，對(duì)于培育基、操作器皿和接種環(huán)等都須要滅菌。消毒僅指殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物，而對(duì)被消毒的物體基本無(wú)害，操作者的手須要消毒。高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌設(shè)備，通常用于培育基的滅菌；用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法；火焰灼燒可以快速?gòu)氐诇缇?，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。二、非選擇題5.(2024·嘉興模擬)自生固氮菌是一種能獨(dú)立固定氮?dú)獾募?xì)菌，其中有些好氧種類能產(chǎn)生PHB(一種生物可降解的熱塑性塑料)。現(xiàn)欲從活性污泥中分別、純化、篩選出高產(chǎn)PHB的固氮菌，操作流程如下：采集土樣→富集培育→分別、純化培育→初步篩選PHB固氮菌→篩選高產(chǎn)PHB固氮菌→保存?zhèn)溆?。?qǐng)回答：(1)富集培育時(shí)，為達(dá)到篩選自生固氮菌的目的，在配制培育液時(shí)不應(yīng)添加______。培育時(shí)要將裝有培育液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培育，其目的是為細(xì)菌的生長(zhǎng)供應(yīng)_______。(2)篩選高表達(dá)量菌株的方法之一是經(jīng)涂布分別獲得________。進(jìn)行分別、純化培育時(shí)，要先將培育基倒入________中，制成平板，此時(shí)所運(yùn)用的培育基與富集培育時(shí)有所不同，添加了肯定量的________。(3)在純化過(guò)程中，在固體培育基上劃線時(shí)，下列操作正確的是________。A.接種環(huán)采納70%酒精滅菌B.接種時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行C.劃線時(shí)要將最終一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連D.劃線分別時(shí)，須要把接種環(huán)深化培育基中進(jìn)行接種答案(1)含氮物質(zhì)(或氮源)足夠的氧氣(2)單菌落培育皿瓊脂糖(3)B6.(2024·浙江五校9月聯(lián)考)某村莊有一條小溪，近幾年由于上游幾家乳膠廠不斷向其中排放廢水，小溪變得不再澄澈。某同學(xué)想測(cè)定該溪水中的細(xì)菌含量狀況?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)先依據(jù)所學(xué)學(xué)問(wèn)制備LB培育基。制備該培育基的步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，下列關(guān)于制備LB培育基的敘述，錯(cuò)誤的是________。A.培育基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌B.培育基應(yīng)先滅菌再分裝到培育皿C.溶化瓊脂時(shí)不能使培育基溢出或燒焦D.滅菌時(shí)一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃，500g/cm2壓力下滅菌15分鐘(2)該同學(xué)利用上述制備的培育基來(lái)檢測(cè)水樣中的細(xì)菌數(shù)量，他所選擇的分別方法應(yīng)是________________；該同學(xué)在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時(shí)間，這樣做的目的是__________________。接種在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，工作臺(tái)上試驗(yàn)前一段時(shí)間需打開(kāi)，試驗(yàn)中需關(guān)閉的是________(A.酒精燈B.照明燈C.紫外線D.過(guò)濾風(fēng))。(3)值得留意的是，他所選擇的這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌的數(shù)目要低，這是因?yàn)?不考慮試驗(yàn)操作緣由引起的細(xì)菌數(shù)目的改變)：①________________________________________________________________________________________________________________________________________________。②________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)該同學(xué)欲將所分別出的某種細(xì)菌臨時(shí)保藏，應(yīng)接種到試管的________培育基上，等菌落長(zhǎng)成后，放入冰箱低溫保藏。答案(1)D(2)涂布分別法檢查平板滅菌是否徹底C(3)①該方法只能統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，死菌無(wú)法統(tǒng)計(jì)②當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落(4)斜面解析(1)要想測(cè)定該溪水中的細(xì)菌含量狀況，需先依據(jù)所學(xué)學(xué)問(wèn)制備LB培育基，制備該培育基的步驟：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。制備LB培育基時(shí)，培育基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌，A正確；培育基應(yīng)先滅菌再分裝到培育皿，B正確；溶化瓊脂時(shí)不能使培育基溢出或燒焦，C正確；滅菌時(shí)一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃，1000g/cm2壓力下維持15分鐘，D錯(cuò)誤。(2)用上述制備的培育基來(lái)檢測(cè)水樣中的細(xì)菌數(shù)量時(shí)，選擇的分別方法應(yīng)是涂布分別法；在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時(shí)間，這樣做的目的是檢查平板滅菌是否徹底；接種在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，工作臺(tái)上試驗(yàn)前一段時(shí)間需打開(kāi)，試驗(yàn)中需關(guān)閉的是紫外線，以防止紫外線對(duì)人體造成損害。(3)用涂布分別法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌數(shù)量時(shí)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌數(shù)目低的緣由：①該方法只能統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，死菌無(wú)法統(tǒng)計(jì)；②當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落。(4)臨時(shí)保藏菌種時(shí)，應(yīng)將菌種接種到試管的斜面培育基上，等菌落長(zhǎng)成后，放入冰箱低溫保藏。7.(2024·浙江金麗衢十二校聯(lián)考)鎘是工業(yè)廢水中常見(jiàn)的污染物，對(duì)人體的損害極大，被我國(guó)環(huán)保法列為一類污染物。一些微生物可以分泌多聚糖、糖蛋白、脂多糖、可溶性氨基酸等胞外聚合物，這些聚合物具有絡(luò)合或沉淀金屬離子的特點(diǎn)，從而起到凈化工業(yè)廢水中重金屬鹽的功能。某同學(xué)打算依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分別篩選鎘降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)______是消退污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。(2)鎘降解菌富集培育基中含有蛋白胨、鎘、葡萄糖、水等物質(zhì)，則其在進(jìn)行滅菌時(shí)應(yīng)限制壓力在______________。分別時(shí)應(yīng)取不同濃度的稀釋液______mL涂布到平板上。(3)下圖為劃線分別法分別純化細(xì)菌，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程須要將接種環(huán)灼燒滅菌________次。A.2B.3C.4D.5(4)采納光電比色測(cè)定法檢測(cè)降解后的廢水中鎘留量。在制備標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)分別以______________為橫、縱坐標(biāo)繪制曲線。答案(1)單菌落的分別(2)500g/cm20.1(3)C(4)鎘濃度、光密度值解析(1)單菌落的分別是消退污染雜菌的通用方法。(2)鎘降解菌富集培育基中含有蛋白胨、鎘、葡萄糖、水等物質(zhì)，則其在進(jìn)行滅菌時(shí)應(yīng)限制壓力在500g/cm2。分別時(shí)應(yīng)取不同濃度的稀釋液0.1mL涂布到平板上。(3)依據(jù)圖中劃線分別法中劃線的方向和起始端可知，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中劃了3次線，而每一次劃線前后都須要將接種環(huán)灼燒滅菌，所以一共須要滅菌4次，故選C。(4)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)以鎘濃度為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)，其中各組的鎘濃度應(yīng)當(dāng)設(shè)置等濃度梯度。8.下圖是“分別以尿素為氮源的微生物”試驗(yàn)的基本流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)該試驗(yàn)培育基不能含有____________。A.尿素B.氯化鈉C.葡萄糖D.瓊脂(2)尿素溶液可用__________________使之無(wú)菌。若要檢查B過(guò)程滅菌是否徹底，可以采納的方法是____________________________________________________________________。(3)圖中步驟C為_(kāi)_____。相對(duì)于劃線分別法，過(guò)程D涂布分別法的優(yōu)點(diǎn)是_________。(4)假如菌落四周出現(xiàn)____________色環(huán)帶，說(shuō)明該菌落能分泌脲酶。答案(1)D(2)G6玻璃砂漏斗過(guò)濾將空白培育基放在相宜溫度下培育一段時(shí)間，視察有無(wú)菌落出現(xiàn)(3)倒平板單菌落更易分開(kāi)(4)紅解析(1)分別以尿素為氮源的微生物，應(yīng)當(dāng)以尿素為唯一氮源，所以不應(yīng)有瓊脂。(2)尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除去其中的細(xì)菌等微生物。(4)若菌落能分泌脲酶，則菌落四周會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。9.(2024·