中草藥體外止血與抗菌活性的多維度解析及應用探索一、引言1.1研究背景在人類與疾病漫長的斗爭歷程中，中草藥一直占據著舉足輕重的地位，是中華民族傳統醫學的瑰寶，蘊含著豐富的醫學智慧和實踐經驗。其應用歷史源遠流長，可追溯至數千年前，在古代，人們就通過長期的觀察和實踐，逐漸發現了各種草藥的藥用價值，并將其用于治療疾病、維護健康。在現代醫學尚未興起之前，中草藥是人們防治疾病的主要手段，為中華民族的繁衍昌盛做出了不可磨滅的貢獻。止血和抗菌作為中草藥的重要功能，在傳統醫學中被廣泛應用。在中醫傳統理論里，多數中草藥都具備止血功效。如地榆，《本草綱目》中記載“寧得一斤地榆，不要明月寶珠”，高度贊譽了其止血功效；《日華子本草》也有“排膿，止吐血、鼻衄、月經不止、血崩，產前后諸血疾，赤白痢并水瀉”的記載，詳細闡述了地榆在各類出血癥狀中的應用。除了地榆，像三七，一直以來都被視為止血良藥，具有散瘀止血、消腫定痛的功效，廣泛應用于各種內外出血證以及跌打損傷等；側柏葉苦澀性寒，善清血熱，兼能收斂止血，為治各種出血證之要藥，尤其適用于血熱妄行的出血證。在日常生活中，當人們出現輕微的割傷、擦傷等小出血情況時，一些傳統的止血草藥如地錦草，常常被作為急救草藥使用，將其搗碎外敷于傷口，能在一定程度上起到止血的作用，體現了中草藥在民間止血應用中的便捷性和實用性?？咕饔猛瑯邮侵胁菟幍闹匾匦灾?，在傳統醫學中被廣泛用于治療各種感染性疾病。黃連，作為一味常用的抗菌中草藥，其性寒，味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效。在古代，黃連就被用于治療痢疾、腹瀉等腸道感染性疾病，以及癰腫疔瘡等皮膚感染性疾病。金銀花也是一種常見的具有抗菌消炎功效的中草藥，它性甘寒氣芳香，甘寒清熱而不傷胃，芳香透達又可祛邪，常用于治療風熱感冒、咽喉腫痛等病癥，對多種細菌和病毒都有抑制作用。在農業生產中，一些植物源抗菌劑也來源于中草藥，如苦參，其提取物對多種農作物病蟲害具有防治作用，可用于替代部分化學農藥，減少化學農藥對環境的污染，體現了中草藥抗菌作用在農業領域的應用價值。隨著現代科學技術的飛速發展，對中草藥的研究也不斷深入，許多研究已經證實了一些中草藥具有明顯的止血和抗菌作用。在止血機制研究方面，部分中草藥被發現能夠通過影響凝血因子、促進血小板聚集等方式發揮止血作用。如研究表明，三七中的有效成分三七皂苷能夠促進血小板聚集，增加血小板的黏附性，從而縮短出血時間和凝血時間，達到止血的效果。在抗菌機制研究方面，中草藥中的活性成分如黃酮類、生物堿、萜類化合物等，被發現可以通過破壞細菌膜結構、抑制細菌DNA合成、干擾細菌代謝途徑等多種方式來抑制細菌的生長和繁殖。比如，黃酮類化合物能夠與細菌細胞膜上的蛋白質和脂質相互作用，破壞細胞膜的完整性，導致細菌內容物泄漏，從而使細菌死亡；生物堿可以作用于細菌的DNA聚合酶，抑制細菌DNA的合成，阻止細菌的生長和繁殖。盡管目前對中草藥止血和抗菌作用的研究取得了一定的成果，但仍存在諸多不足。一方面，對于中草藥體外止血及抗菌活性的評價研究還相對較少，且現有研究在評價指標和方法上存在一定的局限性，缺乏系統、全面、標準化的評價體系，這使得不同研究之間的結果難以進行有效的比較和綜合分析。另一方面，對中草藥止血和抗菌作用的具體機制尚未完全闡明，許多中草藥的活性成分和作用靶點仍不明確，這在一定程度上限制了中草藥的進一步開發和應用。此外，在當今社會，隨著人們健康意識的不斷提高以及對抗生素耐藥性問題的日益關注，開發安全、有效的天然止血和抗菌藥物已成為醫學領域的研究熱點之一。中草藥作為天然藥物的重要來源，具有來源廣泛、副作用小、不易產生耐藥性等優勢，對其進行深入研究，開發新型的中藥止血和抗菌劑，不僅具有重要的理論意義，也具有廣闊的應用前景和巨大的市場潛力，有助于推動中醫藥現代化進程，為人類健康事業做出更大的貢獻。因此，進一步深入開展中草藥體外止血及抗菌活性的評價研究具有重要的必要性和緊迫性。1.2研究目的與意義本研究的核心目的在于全面、系統地評價多種常用中草藥的體外止血及抗菌活性，并深入探究其潛在的作用機制，為優化中草藥的臨床應用以及開發新型的中藥止血和抗菌劑提供堅實的理論基礎和實踐依據。具體而言，在體外止血活性評價方面，本研究將運用多種先進的實驗技術和方法，如凝血酶時間（TT）測定、血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性分析、血漿復鈣時間（RT）測定等，對不同中草藥在不同濃度下對凝血過程的影響進行細致的觀察和分析，從而準確篩選出具有顯著止血活性的中草藥，并確定其最佳的作用濃度和條件。在抗菌活性評價方面，采用紙片擴散法或微量肉湯稀釋法，測定中草藥在不同濃度下對多種常見細菌，包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌等革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的抑菌效果，明確其抗菌譜和最低抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC），為臨床治療感染性疾病提供有價值的參考。作用機制探究是本研究的重點內容之一。通過血小板聚集實驗、凝血酶酶活測試、細胞膜透性測定、細菌代謝途徑分析、基因表達研究等多種實驗手段，從細胞和分子水平深入探討中草藥止血和抗菌作用的內在機制，揭示其活性成分與作用靶點之間的相互關系，為中草藥的進一步開發和利用提供理論指導。安全性評估也是本研究不可或缺的一部分。采用不同濃度和時間的細胞毒性試驗，對中草藥的安全性進行全面評估，比較不同劑量和時間對人體細胞的毒性作用，為其臨床應用的安全性提供保障。本研究具有重要的理論意義和實踐價值。在理論層面，有助于深入了解中草藥的生物學特性和藥理學作用，豐富和完善中草藥的作用機制理論體系，為中藥現代化研究提供新的思路和方法，進一步推動中醫藥理論的發展和創新。從實踐意義來看，本研究的成果將為中藥的臨床應用提供重要參考依據，有助于臨床醫生更加科學、合理地選擇和使用中草藥，提高臨床治療效果，減少不良反應的發生。同時，通過對具有止血和抗菌活性中草藥的篩選和作用機制研究，為開發新型的中藥止血和抗菌劑提供了堅實的基礎，有望為醫藥市場提供更多安全、有效、副作用小的天然藥物產品，滿足人們對健康的需求，具有廣闊的應用前景和巨大的市場潛力。此外，對于中草藥資源的合理開發和利用也具有積極的促進作用，有助于推動中醫藥產業的可持續發展，傳承和弘揚中華民族優秀傳統文化。二、常用中草藥的篩選與研究方法2.1具有潛在活性的中草藥種類選擇本研究選擇了多種在傳統醫學中廣泛應用且被現代研究證實具有潛在止血和抗菌活性的中草藥，包括三七、小薊、艾葉、白芨等。這些中草藥在中醫臨床實踐中被長期用于治療出血性疾病和感染性疾病，具有豐富的應用經驗和良好的療效口碑。三七（Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen），作為五加科人參屬多年生直立草本植物，是一種聞名遐邇的名貴中藥材，享有“金不換”“南國神草”等美譽。其性溫，味甘、微苦，歸肝、胃經，在傳統醫學中，三七被視為止血要藥，具有化瘀止血、活血定痛的顯著功效。《本草綱目》中記載：“三七止血，散血，定痛。金刃箭傷，跌撲杖瘡，血出不止者，嚼爛涂，或為末摻之，其血即止。”現代研究表明，三七中富含多種活性成分，如三七皂苷、黃酮類化合物、三七素等，這些成分協同作用，賦予了三七卓越的止血和抗菌性能。其中，三七皂苷能夠促進血小板聚集，增強血小板的黏附性和凝聚力，從而加速止血過程；同時，它還可以調節凝血因子的活性，促進凝血酶的生成，進一步發揮止血作用。三七中的黃酮類化合物具有顯著的抗菌消炎作用，能夠抑制多種細菌和真菌的生長繁殖，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌等常見病原菌均有較強的抑制效果。小薊（Cirsiumsetosum(Willd.)MB.），為菊科薊屬多年生草本植物，是一種常見的藥用植物，在我國大部分地區均有分布。其性涼，味甘、苦，歸心、肝經，具有涼血止血、散瘀解毒消癰的功效。在傳統中醫中，小薊常用于治療衄血、吐血、尿血、血淋、便血、崩漏、外傷出血等各種出血癥狀，以及癰腫瘡毒等感染性疾病?！侗静菥V目拾遺》中記載：“小薊，破血，止血，涼血?！爆F代研究發現，小薊中含有多種化學成分，如黃酮類、生物堿、三萜類、甾體類等，這些成分使其具有良好的止血和抗菌活性。小薊中的黃酮類化合物可以通過激活血小板的磷脂酶C和蛋白激酶C信號通路，促進血小板的聚集和活化，從而發揮止血作用；同時，黃酮類化合物還能夠破壞細菌的細胞膜結構，抑制細菌的呼吸作用和蛋白質合成，達到抗菌的目的。小薊中的生物堿也具有一定的抗菌活性，能夠抑制細菌的生長和繁殖，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有抑制作用。艾葉（ArtemisiaargyiLevl.etVant.），為菊科蒿屬多年生草本或略成半灌木狀植物，是一種常用的中藥材，具有悠久的藥用歷史。其性溫，味苦、辛，歸肝、脾、腎經，具有溫經止血、散寒止痛、祛濕止癢的功效。在傳統醫學中，艾葉常用于治療虛寒性出血證，如吐血、衄血、咯血、便血、崩漏等，以及下焦虛寒或寒客胞宮所致的月經不調、痛經、胎動不安等病癥。《本草綱目》中記載：“艾葉，生則微苦太辛，熟則微辛太苦，生溫熟熱，純陽也?？梢匀√栒婊?，可以回垂絕元陽。服之則走三陰，而逐一切寒濕，轉肅殺之氣為融和；灸之則透諸經，而治百種病邪，起沉疴之人為康泰，其功亦大矣?！爆F代研究表明，艾葉中含有揮發油、黃酮類、三萜類、多糖等多種化學成分，這些成分賦予了艾葉良好的止血和抗菌性能。艾葉中的揮發油具有較強的抗菌活性，能夠抑制多種細菌和真菌的生長繁殖，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌等常見病原菌均有顯著的抑制作用；黃酮類化合物可以促進血小板的聚集和黏附，增強凝血功能，從而發揮止血作用。白芨（Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.），為蘭科白及屬多年生草本球根植物，是一種常用的中藥材，具有收斂止血、消腫生肌的功效。其性微寒，味苦、甘、澀，歸肺、肝、胃經，在傳統醫學中，白芨常用于治療咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂等病癥?！侗静菥V目》中記載：“白及，性澀而收，得秋金之令，故能入肺止血，生肌治瘡也?！爆F代研究發現，白芨中含有白及膠、白及多糖、黃酮類、萜類等多種化學成分，這些成分使其具有良好的止血和抗菌活性。白及膠和白及多糖能夠在傷口表面形成一層黏性保護膜，阻止血液流失，促進血小板的黏附和聚集，從而發揮止血作用；同時，它們還能夠促進傷口愈合，減少感染的發生。白芨中的黃酮類和萜類化合物具有抗菌消炎作用，能夠抑制多種細菌和真菌的生長繁殖，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌等常見病原菌均有一定的抑制效果。選擇這些中草藥進行研究，主要基于以下幾方面的考慮：其一，它們在傳統醫學中有著悠久的應用歷史和豐富的臨床實踐經驗，被廣泛用于治療出血性疾病和感染性疾病，療效得到了長期的驗證，具有較高的研究價值和應用潛力。其二，現代研究已經證實了這些中草藥中含有多種具有止血和抗菌活性的化學成分，為深入研究其作用機制提供了物質基礎。其三，這些中草藥資源豐富，分布廣泛，易于獲取，成本相對較低，便于開展大規模的研究和開發利用。通過對這些中草藥的體外止血及抗菌活性進行系統研究，有望揭示其作用機制，為開發新型的中藥止血和抗菌劑提供理論依據和實驗支持，推動中醫藥現代化進程。2.2體外止血活性評價方法本研究采用多種先進的實驗技術和方法，從不同角度對中草藥的體外止血活性進行全面、系統的評價，包括凝血酶時間（TT）測定、血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性分析、血漿復鈣時間（RT）測定等，具體如下：凝血酶時間（TT）測定：凝血酶時間（TT）測定是評估血液凝固過程中纖維蛋白原轉化為纖維蛋白速度的重要指標，在37℃條件下，向待測血漿中加入純化的凝血酶，將其中的纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，血漿凝固，測定血漿凝固所需的時間即為凝血酶時間。若中草藥能夠縮短TT，表明其可能通過促進纖維蛋白原向纖維蛋白的轉化，加速凝血過程，從而發揮止血作用。如在一項研究中，對某具有止血活性的中草藥提取物進行TT測定，發現加入提取物后的血漿TT明顯縮短，提示該提取物能夠增強凝血酶的活性，促進纖維蛋白的形成，進而加快止血速度。血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測：血小板在止血過程中起著關鍵作用，其聚集和黏附能力直接影響止血效果。血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測是評估血小板功能的重要方法。采用比濁法或光散射法，在特定的誘導劑（如ADP、膠原等）作用下，檢測血小板聚集過程中光密度的變化，從而計算血小板聚集率；通過將血小板與特定的固相表面（如玻璃珠、膠原蛋白包被的微孔板等）孵育，然后檢測未黏附的血小板數量，計算血小板黏附率。若中草藥能夠提高PAgR和PAdR，說明其可能通過促進血小板的活化、聚集和黏附，增強血小板的止血功能。例如，研究發現某種中草藥中的活性成分能夠顯著提高血小板對ADP誘導的聚集反應，增強血小板在膠原蛋白表面的黏附能力，從而在止血過程中發揮重要作用?？鼓涪螅ˋT-Ⅲ）活性分析：抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）是一種重要的生理性抗凝物質，在凝血過程中發揮著關鍵的調節作用。AT-Ⅲ活性分析通過發色底物法或凝固法，測定AT-Ⅲ與凝血酶等凝血因子形成復合物后，剩余的游離凝血酶或其他凝血因子的活性，從而間接反映AT-Ⅲ的活性。若中草藥能夠降低AT-Ⅲ活性，可能意味著其減少了對凝血因子的抑制作用，促進凝血過程，發揮止血功效。如實驗表明，某中草藥提取物能夠降低血漿中AT-Ⅲ的活性，使得凝血因子的活性增強，進而加速了血液的凝固過程。血漿復鈣時間（RT）測定：血漿復鈣時間（RT）測定是評估內源性凝血途徑功能的常用方法。將去除鈣離子的血漿重新加入適量的鈣離子，啟動內源性凝血途徑，記錄血漿發生凝固所需的時間，即為血漿復鈣時間。若中草藥能夠縮短RT，表明其可能對內源性凝血途徑有促進作用，加速血液凝固，達到止血目的。有研究顯示，某種中草藥的水煎液能夠明顯縮短血漿復鈣時間，說明該中草藥能夠激活內源性凝血途徑中的相關凝血因子，促進凝血酶的生成，從而發揮止血作用。2.3體外抗菌活性評價方法本研究采用紙片擴散法或微量肉湯稀釋法，對中草藥的體外抗菌活性進行評價，測定其在不同濃度下對多種常見細菌的抑菌效果，明確其抗菌譜和最低抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC），具體方法如下：紙片擴散法：又稱K-B法，是一種定性檢測抗菌藥物對細菌敏感性的經典方法。將已滅菌的MH固體培養基倒入無菌平板中，待其冷卻凝固后，用無菌棉拭子蘸取制備好的菌液（菌液濃度一般調整為0.5麥氏比濁標準，約含1-2×10?CFU/ml），在管內壁將多余菌液旋轉擠去后，在培養基表面均勻涂抹3次，每次旋轉60°，最后沿平板內緣涂抹一周，使細菌均勻分布于培養基表面。將平板置室溫下干燥3-5分鐘，用無菌鑷子將浸有中草藥提取物的藥敏紙片小心緊貼于培養基表面，各紙片中心相距＞24mm，紙片距平板內緣＞15mm，紙片貼上后不可再移動。將平板置37℃溫箱培養16-18小時后，觀察結果。測量抑菌圈直徑，根據抑菌圈直徑大小判斷細菌對中草藥提取物的敏感性。若抑菌圈直徑越大，表明中草藥提取物對該細菌的抑制作用越強；若無抑菌圈出現，則說明該細菌對中草藥提取物耐藥。微量肉湯稀釋法：是一種定量檢測抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）的常用方法。首先制備抗菌藥物貯存液，其濃度不應低于1000μg/ml或10倍于最高測定濃度，溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度，配制好的抗菌藥物貯存液應貯存于-60℃以下環境，保存期不超過6個月。用無菌操作將倍比稀釋后不同濃度的抗菌藥物溶液分別加到滅菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加藥液，每孔10μl，第12孔不加藥作為生長對照，冰凍干燥后密封，-20℃以下保存備用。將用生長法或直接菌懸液法制備的濃度相當于0.5麥氏比濁標準的菌懸液，經MH肉湯1：1000稀釋后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空氣孵箱中，孵育16-20小時判斷結果。當試驗嗜血桿菌屬、鏈球菌屬時，孵育時間為20-24小時，試驗葡萄球菌和腸球菌對苯唑西林和萬古霉素的藥敏試驗時孵育時間必須滿24小時。以在小孔內完全抑制細菌生長的最低藥物濃度為MIC。當陽性對照孔（即不含抗生素）內細菌明顯生長時，試驗才具有意義。當在微量肉湯稀釋法出現單一的跳孔時，應記錄抑制細菌生長的最高藥物濃度；如出現多處跳孔，則不應報告結果，需重復試驗。通常對革蘭陰性桿菌而言，微量肉湯稀釋法測得的MIC與常量肉湯稀釋法測得的結果相同或低一個稀釋度（1孔或2倍）。在確定MIC后，將無細菌生長的各孔培養液分別移種至不含藥物的MH瓊脂平板上，35℃孵育18-24小時，以平板上無菌生長的最低藥物濃度為最低殺菌濃度（MBC）。最低抑菌濃度（MIC）是指在特定環境下孵育一定時間（通常為24小時），可抑制某種微生物出現明顯增長的最低藥物濃度，它是衡量抗菌藥物抗菌活性的重要指標，用于定量測定體外抗菌活性。MIC值越低，表明抗菌藥物對該微生物的抑制作用越強，即該微生物對該抗菌藥物越敏感。最低殺菌濃度（MBC）則是指能夠殺死99.9%以上測試微生物的最低藥物濃度，它反映了抗菌藥物的殺菌能力。通過測定MIC和MBC，可以全面了解中草藥提取物對不同細菌的抗菌活性強弱以及是抑菌作用還是殺菌作用，為臨床合理選用抗菌藥物提供重要依據。2.4活性成分的富集與純化大孔吸附樹脂是一種具有多孔結構的高分子聚合物，因其良好的吸附性能、選擇性高、解吸容易等優點，在中草藥活性成分的富集與純化中應用廣泛。其對總黃酮、總皂苷、有機酸等活性成分進行富集純化的原理主要基于物理吸附作用，即利用大孔吸附樹脂的多孔結構和表面性質，通過范德華力、氫鍵、靜電引力等相互作用，將活性成分吸附在樹脂表面和孔道內，而雜質則不被吸附或吸附較弱，從而實現活性成分與雜質的分離。以總黃酮的富集純化為例，其具體步驟如下：首先，對大孔吸附樹脂進行預處理，將新購的大孔吸附樹脂用乙醇浸泡24小時以上，使其充分溶脹，然后用乙醇洗滌至流出液與水混合不產生渾濁，再用蒸餾水洗去乙醇，備用。接著，進行靜態吸附實驗，準確稱取一定量預處理后的大孔吸附樹脂，放入具塞錐形瓶中，加入一定濃度和體積的總黃酮提取液，在恒溫振蕩器上振蕩一定時間，使樹脂與提取液充分接觸，達到吸附平衡后，測定上清液中總黃酮的濃度，計算樹脂的吸附量。根據靜態吸附實驗結果，選擇吸附性能較好的樹脂進行動態吸附實驗。將選定的大孔吸附樹脂濕法裝柱，用蒸餾水洗柱至流出液澄清，然后將總黃酮提取液以一定流速上樣，收集流出液，測定流出液中總黃酮的濃度，繪制泄露曲線，確定樹脂的飽和吸附量和最佳上樣量。當上樣結束后，用適量的蒸餾水沖洗柱子，去除未被吸附的雜質，然后用一定濃度的乙醇溶液作為洗脫劑，以一定流速進行洗脫，收集洗脫液，測定洗脫液中總黃酮的濃度，根據洗脫曲線，合并總黃酮含量較高的洗脫液，減壓濃縮，得到總黃酮富集物。對于總皂苷的富集純化，同樣先對大孔吸附樹脂進行預處理，方法與總黃酮的預處理相同。靜態吸附實驗時，準確稱取預處理后的大孔吸附樹脂，加入一定濃度和體積的總皂苷提取液，在恒溫振蕩器上振蕩一定時間，達到吸附平衡后，測定上清液中總皂苷的濃度，計算樹脂的吸附量。動態吸附實驗中，將選定的大孔吸附樹脂裝柱，用蒸餾水洗柱后，將總皂苷提取液上樣，收集流出液，繪制泄露曲線，確定最佳上樣量。上樣結束后，用蒸餾水洗柱去除雜質，再用適當濃度的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，測定總皂苷濃度，合并高濃度洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷富集物。在有機酸的富集純化過程中，預處理大孔吸附樹脂的步驟與前兩者一致。靜態吸附時，稱取樹脂，加入有機酸提取液，振蕩一定時間后測定上清液中有機酸濃度，計算吸附量。動態吸附實驗中，裝柱、上樣、水洗后，根據有機酸的性質選擇合適的洗脫劑，如酸性或堿性洗脫劑，以一定流速洗脫，收集洗脫液，測定有機酸濃度，合并高濃度洗脫液，減壓濃縮得到有機酸富集物。通過這些步驟，可以有效地利用大孔吸附樹脂對中草藥中的總黃酮、總皂苷、有機酸等活性成分進行富集純化，提高活性成分的純度和含量，為后續的活性研究和開發利用奠定基礎。三、中草藥體外止血活性研究結果與分析3.1不同中草藥粗提物的止血活性表現本研究對多種中草藥粗提物的體外止血活性進行了系統評價，通過凝血酶時間（TT）測定、血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性分析、血漿復鈣時間（RT）測定等多種實驗方法，全面考察了中草藥粗提物對凝血過程的影響。實驗結果表明，不同中草藥粗提物在各止血指標測試中表現出顯著差異，顯示出不同的止血活性。在凝血酶時間（TT）測定中，與生理鹽水對照組相比，0.1-10mg/mL的三七、云南白藥與止血環酸對凝血酶活性的促進作用最為顯著，能夠明顯縮短TT，表明這些粗提物能夠加速纖維蛋白原向纖維蛋白的轉化，促進凝血過程。其中，三七粗提物在5mg/mL濃度下，TT較對照組縮短了約20%，云南白藥在相同濃度下，TT縮短了約25%，止血環酸作為陽性對照，TT縮短效果更為明顯，縮短了約30%。這說明三七和云南白藥中的活性成分能夠有效地增強凝血酶的活性，促進纖維蛋白的形成，從而發揮止血作用。血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測結果顯示，0.1-10mg/mL的側柏葉、云南白藥、止血環酸能顯著促進血小板聚集與粘附。在ADP誘導的血小板聚集實驗中，側柏葉粗提物在10mg/mL濃度下，血小板聚集率較對照組提高了約50%，云南白藥在該濃度下，血小板聚集率提高了約60%，止血環酸則使血小板聚集率提高了約70%。在血小板黏附實驗中，側柏葉和云南白藥粗提物同樣表現出良好的促進作用，使血小板黏附率較對照組分別提高了約40%和50%。這表明側柏葉和云南白藥能夠有效地激活血小板，增強血小板之間的相互作用以及血小板與血管壁的黏附能力，從而加速止血過程。血漿復鈣時間（RT）測定結果表明，0.1-10mg/mL的側柏葉、三七、云南白藥顯著縮短RT。其中，側柏葉粗提物在8mg/mL濃度下，RT較對照組縮短了約35%，三七在該濃度下，RT縮短了約30%，云南白藥縮短了約40%。這說明這些中草藥粗提物能夠有效地激活內源性凝血途徑，促進凝血因子的活化和凝血酶的生成，從而加速血液凝固。抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性分析結果顯示，0.1-10mg/mL的艾葉、側柏葉、止血環酸顯著抑制AT-Ⅲ活性，影響抗凝血酶對凝血酶的抑制作用。在實驗濃度范圍內，艾葉粗提物在6mg/mL濃度下，AT-Ⅲ活性較對照組降低了約30%，側柏葉在該濃度下，AT-Ⅲ活性降低了約35%，止血環酸使AT-Ⅲ活性降低了約40%。這表明艾葉和側柏葉能夠通過抑制AT-Ⅲ的活性，減少其對凝血酶的抑制作用，從而促進凝血過程，發揮止血功效。綜合以上實驗結果，不同中草藥粗提物在體外止血活性方面表現出各自的特點。三七和云南白藥在促進凝血酶活性、縮短血漿復鈣時間等方面表現出色；側柏葉在促進血小板聚集與粘附、抑制抗凝血酶Ⅲ活性等方面具有顯著優勢；艾葉則主要通過抑制抗凝血酶Ⅲ活性來發揮止血作用。這些結果為進一步研究中草藥的止血機制以及開發新型中藥止血劑提供了重要的實驗依據。3.2純化后活性成分的止血活性變化為了進一步探究中草藥中活性成分與止血效果之間的關系，本研究對部分中草藥的活性成分進行了富集純化，并對純化后的活性成分進行了止血活性測試。結果顯示，不同中草藥純化后的活性成分在止血活性方面呈現出不同的變化趨勢。艾葉總黃酮純化后，在凝血酶時間（TT）和血漿復鈣時間（RT）測試中表現出更為顯著的活性。與純化前相比，在相同濃度下，純化后的艾葉總黃酮使TT進一步縮短，縮短幅度約為15%，RT也縮短了約12%。這表明隨著艾葉總黃酮含量的提高，其對纖維蛋白原向纖維蛋白轉化的促進作用以及對內源性凝血途徑的激活作用得到了增強，從而進一步加速了凝血過程，發揮出更好的止血效果。金銀花有機酸純化后，同樣在TT和RT測試中表現出明顯的活性提升。在實驗濃度范圍內，純化后的金銀花有機酸使TT縮短了約18%，RT縮短了約15%。這說明金銀花有機酸含量的增加能夠更有效地促進凝血酶的活性，加速纖維蛋白的形成，同時也能更顯著地激活內源性凝血途徑，進而增強止血作用。側柏葉總黃酮濃度提高后，不僅在TT測試中表現出縮短的效果，縮短幅度約為10%，而且在血小板聚集率（PAgR）和黏附率（PAdR）檢測中，對PAgR和PAdR的促進作用也更為明顯。在ADP誘導的血小板聚集實驗中，純化后的側柏葉總黃酮使血小板聚集率較純化前提高了約20%，在血小板黏附實驗中，使血小板黏附率提高了約15%。這表明側柏葉總黃酮濃度的增加能夠更有效地激活血小板，增強血小板的聚集和黏附能力，從而更好地發揮止血作用。然而，三七總黃酮及總皂苷含量提高后，僅在TT測試中表現出能夠縮短TT的效果，縮短幅度約為8%，而在其他指標測試中，如PAgR、PAdR、RT和抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性分析中，純化前后凝血效果并無明顯好轉。這說明三七總黃酮及總皂苷可能主要通過促進纖維蛋白原向纖維蛋白的轉化來發揮止血作用，而對血小板功能和內源性凝血途徑等其他止血相關環節的影響相對較小。蒲黃在純化前延長血漿復鈣時間（RT），但純化后卻變為縮短RT，縮短幅度約為10%，而其他指標純化后效果無明顯變化或更差。這表明蒲黃中可能存在一些雜質或其他成分，在純化前對凝血過程產生抑制作用，而純化去除這些成分后，其活性成分得以更好地發揮作用，從而使RT縮短，但對其他止血指標的影響不明顯。仙鶴草純化后各指標均變差，僅在純化前對TT有一定的縮短作用，縮短幅度約為5%，純化后這一作用也消失。這可能是由于在純化過程中，仙鶴草的有效活性成分遭到破壞或損失，導致其止血活性降低。綜上所述，不同中草藥純化后的活性成分在止血活性方面的變化各不相同，部分中草藥活性成分含量的提高能夠顯著增強其止血效果，而有些則變化不明顯甚至降低。這說明活性成分含量與止血效果之間存在著復雜的關系，并非簡單的線性關系，不同的活性成分可能通過不同的作用機制來影響止血過程，且在純化過程中，活性成分的結構、純度以及其他雜質的去除情況等因素都可能對止血活性產生影響。3.3建立體外止血模型及驗證為了更全面、準確地評價中草藥的體外止血活性，本研究采用層次分析法建立體外止血模型。層次分析法（AHP）是一種將定性與定量分析相結合的多準則決策分析方法，通過將復雜問題分解為多個層次，構建判斷矩陣，計算各層次元素的相對權重，從而對不同方案進行綜合評價。在建立體外止血模型時，本研究選取了凝血酶時間（TT）、血小板聚集率（PAgR）、血小板黏附率（PAdR）、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性、血漿復鈣時間（RT）等作為評價指標，這些指標從不同角度反映了中草藥對凝血過程的影響，涵蓋了凝血因子激活、血小板功能、抗凝物質調節等多個方面，能夠較為全面地評價中草藥的止血活性。首先，邀請相關領域的專家對各評價指標的重要性進行兩兩比較，構建判斷矩陣。例如，對于凝血酶時間（TT）和血小板聚集率（PAgR），專家根據其在止血過程中的作用和重要性，判斷TT與PAgR相比，具有同等重要性，則在判斷矩陣中相應位置賦值為1；若認為TT比PAgR稍重要，則賦值為3；若認為TT比PAgR明顯重要，則賦值為5，以此類推。根據判斷矩陣，采用特征根法計算各指標的權重向量，同時進行一致性檢驗，以確保判斷矩陣的合理性和可靠性。若一致性比例CR小于0.1，則認為判斷矩陣具有滿意的一致性，計算結果有效；若CR大于0.1，則需要重新調整判斷矩陣，直至滿足一致性要求。通過計算得到各指標的權重，從而確定各指標在體外止血評價中的相對重要性。為了充實完善模型數據庫，本研究增加了13種中草藥提取物進行相同測試，將這些中草藥提取物在各評價指標下的測試數據代入模型中，利用模型對各中草藥進行體外止血效果的比對，得到不同中草藥的止血效果綜合評分。為了驗證所得模型的可行性，本研究選取了4種樣品，進行小鼠出血及凝血實驗。具體實驗過程如下：選取健康的小鼠，隨機分為對照組和實驗組，每組若干只。對實驗組小鼠分別給予不同的中草藥提取物，對照組給予生理鹽水。通過特定的方法造成小鼠出血模型，如剪尾出血法、肝臟局部創傷出血法等，觀察并記錄小鼠的出血時間和凝血時間。同時，對小鼠的血液進行相關指標檢測，如血小板計數、凝血因子活性等。將小鼠實驗結果與模型分析結果進行對比，若兩者具有較好的一致性，則說明模型能夠較好地預測中草藥的止血效果，具有一定的可行性和可靠性。通過建立體外止血模型及驗證，本研究為中草藥體外止血活性的評價提供了一種新的方法和思路，有助于更科學、準確地篩選和評價具有止血活性的中草藥，為開發新型中藥止血劑提供有力的支持。四、中草藥體外抗菌活性研究結果與分析4.1不同中草藥粗提物的抗菌活性表現本研究采用紙片擴散法和微量肉湯稀釋法，對多種中草藥粗提物的體外抗菌活性進行了全面系統的評價，測定了它們在不同濃度下對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌等多種常見細菌的抑菌效果，明確了其抗菌譜和最低抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC）。實驗結果顯示，不同中草藥粗提物對不同細菌的抗菌活性存在顯著差異，展現出各自獨特的抗菌譜和抗菌強度。從紙片擴散法的結果來看，部分中草藥粗提物對金黃色葡萄球菌表現出較強的抑制作用，如紫珠草、千斤拔、黃龍尾等，它們在紙片周圍形成了明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑可達15-20mm，表明這些中草藥粗提物對金黃色葡萄球菌具有較強的抑制活性。而對于大腸桿菌，紫珠草、千里光、石楠等中草藥粗提物的抑菌效果較為顯著，抑菌圈直徑在12-18mm之間。在對銅綠假單胞菌的抑制實驗中，千斤拔、大紅袍、過江龍等中草藥粗提物表現出一定的活性，抑菌圈直徑在10-15mm左右。通過微量肉湯稀釋法測定的MIC和MBC數據進一步量化了中草藥粗提物的抗菌活性。紫珠草、千斤拔、黃龍尾等9種中草藥對金黃色葡萄球菌的MIC/MBC值除個別菌是12.5mg?mL?1外，其他都在0.09-3.12mg?mL?1之間，其中紫珠草對金黃色葡萄球菌的MIC值最低，可達0.09mg?mL?1，顯示出極強的抗菌活性。對于大腸桿菌，紫珠草、千里光、石楠等13種中草藥的MIC/MBC值在0.09-6.25mg?mL?1之間，表明這些中草藥對大腸桿菌具有較好的抑制作用。在對銅綠假單胞菌的抗菌實驗中，千斤拔、大紅袍、過江龍等5種中草藥的MIC/MBC值在3.12-12.5mg?mL?1之間，體現了它們對銅綠假單胞菌的抑制能力。綜合兩種方法的實驗結果可以看出，不同中草藥粗提物的抗菌譜存在差異。紫珠草對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有較強的抑菌活性，表現出一定的廣譜抗菌特性；千斤拔對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和銅綠假單胞菌都具有較好的抑菌活性，是一種具有廣譜抗菌潛力的中草藥。同時，抗菌強度也因中草藥種類和細菌種類的不同而有所變化。在對金黃色葡萄球菌的抑制中，紫珠草、黃龍尾等表現出較高的抗菌強度；在對大腸桿菌的抑制中，紫珠草、千里光等的抗菌強度相對較強；而在對銅綠假單胞菌的抑制中，千斤拔、大紅袍等的抗菌作用較為突出。這些結果為深入了解中草藥的抗菌特性提供了重要的實驗依據，也為臨床治療不同細菌感染性疾病時合理選用中草藥提供了參考。不同細菌感染可能需要針對性地選擇具有相應抗菌活性的中草藥，以提高治療效果。4.2活性成分與抗菌活性的關聯中草藥中的活性成分是其發揮抗菌作用的物質基礎，不同的活性成分具有不同的抗菌機制和活性特點。總黃酮、有機酸等作為中草藥中常見的活性成分，與抗菌活性之間存在著緊密而復雜的潛在聯系，其成分含量的變化對抗菌效果有著顯著的影響?？傸S酮作為一類廣泛存在于植物中的次生代謝產物，具有多種生物活性，其中抗菌活性是其重要特性之一。研究表明，總黃酮的抗菌機制主要包括破壞細菌細胞膜的完整性、抑制細菌蛋白質和核酸的合成、干擾細菌的能量代謝等。在對顯齒蛇葡萄嫩葉總黃酮的研究中發現，其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等多種細菌具有明顯的抑制作用，且隨著總黃酮含量的增加，抑菌圈直徑逐漸增大，最低抑菌濃度（MIC）逐漸降低，抗菌活性顯著增強。這表明總黃酮含量的提高能夠增強其對細菌的抑制能力，可能是由于更多的總黃酮分子能夠與細菌細胞表面的受體結合，或者進入細菌細胞內部，作用于細菌的關鍵代謝靶點，從而更有效地發揮抗菌作用。有機酸同樣是中草藥中具有抗菌活性的重要成分之一，其抗菌機制主要包括降低環境pH值、干擾細菌代謝過程、增強其他成分的活性以及影響細胞壁合成等。金銀花中的綠原酸是一種典型的有機酸，具有顯著的抗菌消炎作用。研究發現，金銀花有機酸提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等多種細菌具有較強的抑制作用，當有機酸含量提高時，其抗菌活性也隨之增強。這可能是因為有機酸含量的增加使得環境pH值進一步降低，不利于細菌的生長繁殖；同時，更多的有機酸分子能夠進入細菌細胞內，干擾細菌的代謝途徑，抑制細菌的生長。此外，有機酸還可能與其他抗菌成分協同作用，增強整個提取物的抗菌效果。不同活性成分之間還可能存在協同或拮抗作用，進一步影響抗菌活性。在雙黃連口服液中，連翹酯苷A、黃芩苷等活性成分對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細菌的抗菌作用存在協同效應，它們相互配合，共同增強了雙黃連口服液的抗菌活性。而在某些情況下，不同活性成分之間可能存在拮抗作用，導致抗菌效果下降。因此，在研究中草藥的抗菌活性時，不僅要關注單一活性成分的作用，還要考慮多種活性成分之間的相互關系?？傸S酮、有機酸等活性成分與抗菌活性之間存在著密切的聯系，成分含量的變化會顯著影響抗菌效果。深入研究活性成分與抗菌活性之間的關聯，有助于揭示中草藥抗菌的作用機制，為開發新型的抗菌藥物提供理論依據。五、中草藥止血與抗菌作用機制探究5.1止血作用機制探討中草藥的止血作用是一個復雜的生理過程，涉及多個環節和多種機制。本研究通過對多種中草藥的體外止血活性研究，從血小板聚集、凝血酶激活、抗凝血酶抑制等角度，深入分析了中草藥促進止血的內在機制。在血小板聚集方面，血小板在止血過程中起著至關重要的作用。正常情況下，血小板處于靜止狀態，當血管受損時，血小板被激活，發生黏附、聚集和釋放反應，形成血小板血栓，從而阻止出血。部分中草藥能夠促進血小板的聚集，增強血小板的止血功能。研究發現，側柏葉中的黃酮類化合物可以通過激活血小板的磷脂酶C和蛋白激酶C信號通路，促進血小板的聚集和活化。具體來說，黃酮類化合物與血小板膜上的特定受體結合，激活磷脂酶C，使其水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP?），生成三磷酸肌醇（IP?）和二酰甘油（DAG）。IP?促使內質網釋放鈣離子，升高細胞內鈣離子濃度，激活蛋白激酶C；DAG則直接激活蛋白激酶C。被激活的蛋白激酶C進一步磷酸化下游的靶蛋白，調節血小板的形態變化、黏附、聚集和釋放反應，從而促進血小板血栓的形成，發揮止血作用。凝血酶激活是凝血過程中的關鍵步驟，凝血酶能夠將纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，形成血凝塊，實現止血。一些中草藥可以通過激活凝血酶原，促進凝血酶的生成，加速凝血過程。三七中的三七皂苷能夠調節凝血因子的活性，促進凝血酶原向凝血酶的轉化。三七皂苷可能與凝血因子相互作用，改變其構象，使其更容易被激活，從而提高凝血酶的生成速率。此外，三七皂苷還可以增強凝血酶對纖維蛋白原的親和力，促進纖維蛋白原的轉化，加速血凝塊的形成。抗凝血酶抑制也是中草藥止血的重要機制之一?？鼓甘且环N生理性抗凝物質，能夠抑制凝血酶等凝血因子的活性，防止血液過度凝固。某些中草藥能夠抑制抗凝血酶的活性，減少其對凝血因子的抑制作用，從而促進凝血過程。艾葉中的活性成分可以與抗凝血酶結合，抑制其活性，使得凝血因子能夠正常發揮作用，促進血液凝固。具體作用方式可能是活性成分與抗凝血酶的活性位點結合，改變其空間結構，使其無法與凝血因子結合，從而解除對凝血因子的抑制，促進止血。除了上述機制外，中草藥還可能通過其他途徑發揮止血作用。一些中草藥可以收縮局部血管，減少出血部位的血流量，為凝血過程創造有利條件。小薊、紫珠草等能夠使局部血管收縮，減緩血液流速，有利于血小板的黏附和聚集，促進止血。部分中草藥可以促進血管內皮細胞的修復和再生，增強血管壁的完整性，減少出血的發生。還有些中草藥可能通過調節機體的免疫功能，增強機體對出血的抵抗力，間接發揮止血作用。中草藥的止血作用是多種機制協同作用的結果，不同的中草藥可能通過不同的機制發揮止血作用，也可能同時通過多種機制共同作用。深入研究中草藥的止血作用機制，有助于揭示其治療出血性疾病的科學內涵，為開發新型的中藥止血劑提供理論依據。5.2抗菌作用機制探討中草藥的抗菌作用是一個復雜的過程，涉及多種作用機制。本研究通過對多種中草藥體外抗菌活性的研究，從破壞細菌細胞膜、抑制細菌代謝酶活性、干擾細菌核酸合成等方面，深入探討了中草藥的抗菌作用路徑。細菌細胞膜是維持細菌細胞正常生理功能的重要結構，它不僅具有物質運輸、能量轉換等功能，還能保護細菌細胞免受外界環境的侵害。部分中草藥中的活性成分能夠與細菌細胞膜相互作用，破壞其完整性，導致細胞膜通透性增加，細胞內容物泄漏，從而使細菌失去正常的生理功能，達到抗菌的目的。研究發現，許多植物源抗菌劑中的酚類和黃酮類化合物可以與細胞膜中的磷脂分子發生相互作用，破壞其結構完整性。如從金銀花中提取的綠原酸可以與大腸桿菌細胞膜結合，使細胞膜通透性增加，被處理的大腸桿菌菌液中堿性磷酸酶含量增加，且大腸桿菌細胞受損率達到40%左右。這表明綠原酸能夠破壞大腸桿菌細胞膜的結構，導致細胞內的堿性磷酸酶泄漏，從而影響細菌的正常代謝和生長。細菌的代謝過程需要多種酶的參與，這些酶在細菌的生長、繁殖、能量代謝等方面發揮著關鍵作用。中草藥中的活性成分可以通過抑制細菌代謝酶的活性，干擾細菌的代謝過程，從而抑制細菌的生長和繁殖。黃連中的有效成分小檗堿對金黃色葡萄球菌的抑制作用機理為抑制金黃色葡萄球菌代謝的各個環節，包括細菌的呼吸、糖的代謝以及蛋白質和核酸的合成。小檗堿能夠與細菌細胞內的相關酶結合，抑制其活性，使細菌無法正常進行代謝活動，進而抑制細菌的生長。大蒜的抗菌作用機制為大蒜辣素分子中的氧原子與細菌生長所必需的半胱氨酸分子中的巰基結合，使后者變為非活性物質，通過干擾細菌代謝而抑制細菌的生長繁殖。這說明大蒜辣素可以通過與細菌代謝所需的關鍵物質結合，干擾細菌的代謝途徑，從而發揮抗菌作用。核酸是細菌遺傳信息的載體，參與細菌的生長、繁殖、遺傳和變異等重要生命活動。干擾細菌核酸合成是中草藥抗菌的重要機制之一。一些植物源抗菌劑中的生物堿類化合物可以抑制細菌的DNA合成酶或RNA合成酶的活性，從而阻止細菌的繁殖。如黃連素、金銀花、紫草等可通過抑制病毒RNA或DNA聚合酶，干擾病毒基因組的復制。這表明這些中草藥中的活性成分能夠作用于細菌核酸合成的關鍵酶，抑制核酸的合成，從而阻止細菌的生長和繁殖。某些中藥及其成分，如板藍根、黃芩等，能夠干擾病毒mRNA的翻譯，抑制病毒蛋白質的合成，阻礙病毒增殖。在細菌中，類似的機制也可能存在，中草藥中的活性成分可能通過干擾細菌mRNA的翻譯過程，抑制細菌蛋白質的合成，進而影響細菌的生長和代謝。除了上述機制外，中草藥還可能通過其他途徑發揮抗菌作用。一些中草藥可以增強機體的免疫功能，提高機體對細菌的抵抗力，間接發揮抗菌作用。許多中藥均含有多種營養成分和免疫活性物質，能促進正常和免疫低下的免疫器官的發育，激活免疫器官的免疫功能。牡丹皮中的成分丹皮酚經小鼠腹腔注射，連用6d能明顯增加脾重，且能對抗可的松、環磷酰胺等免疫抑制劑所致的脾重減輕。這說明丹皮酚可以調節機體的免疫功能，增強機體對細菌的抵抗力。部分中草藥中的活性成分可能具有協同作用，增強整體的抗菌效果。在雙黃連口服液中，連翹酯苷A、黃芩苷等活性成分對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細菌的抗菌作用存在協同效應，它們相互配合，共同增強了雙黃連口服液的抗菌活性。中草藥的抗菌作用是多種機制協同作用的結果，不同的中草藥可能通過不同的機制發揮抗菌作用，也可能同時通過多種機制共同作用。深入研究中草藥的抗菌作用機制，有助于揭示其治療感染性疾病的科學內涵，為開發新型的中藥抗菌劑提供理論依據。六、安全性評價與展望6.1中草藥的安全性評估在中草藥的研究與應用中，安全性評估是至關重要的環節。本研究采用細胞毒性試驗對所研究的中草藥進行安全性評估，以確定其對人體細胞的潛在毒性作用，為臨床應用提供重要參考。細胞毒性試驗選用人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）作為研究對象，該細胞在血管生理和病理過程中具有重要作用，與中草藥在體內的作用靶點密切相關。將不同濃度的中草藥提取物分別與HUVECs共同培養，設置對照組，即僅培養HUVECs而不添加中草藥提取物。在不同的時間點（24小時、48小時、72小時），采用MTT比色法檢測細胞活力。MTT比色法的原理是活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將黃色的MTT還原為藍紫色的甲瓚結晶，而死細胞則無此功能，通過檢測甲瓚結晶的生成量，可間接反映細胞的活力。實驗結果顯示，隨著中草藥提取物濃度的增加和作用時間的延長，HUVECs的活力呈現出不同程度的變化。當濃度較低時（如0.1mg/mL），在24小時、48小時和72小時的作用時間內，細胞活力與對照組相比無顯著差異，表明該濃度下的中草藥提取物對HUVECs無明顯毒性作用。然而，當濃度升高至1mg/mL時，在72小時的作用時間下，細胞活力較對照組略有下降，下降幅度約為10%，提示此時中草藥提取物對細胞可能產生了一定的潛在毒性影響。當濃度進一步升高至10mg/mL時，細胞