番木瓜環(huán)斑病毒的研究進(jìn)展馮黎霞李華平周?chē)?guó)輝（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)資環(huán)學(xué)院植物病毒實(shí)驗(yàn)室）摘要：番木瓜環(huán)斑病毒病是世界上番木瓜生產(chǎn)最重要的病毒病害之一。本文將從番木瓜環(huán)斑病毒的生物理化特性、分子生物學(xué)、防治研究等方面進(jìn)行綜述。尤其是對(duì)近幾年的防治研究進(jìn)展做了較為詳盡的綜述。關(guān)鍵詞：番木瓜環(huán)斑病毒生物學(xué)和理化特性分子生物學(xué)防治研究番木瓜（Caricapapaya，pawpaw）原產(chǎn)中南美洲地區(qū)，廣泛分布于美洲、亞洲和大洋州的熱帶亞熱帶地區(qū)，具有較高的食用、加工、醫(yī)藥、觀賞等價(jià)值。屬多年生、長(zhǎng)綠草本果樹(shù)。然而，許多病毒病成為番木瓜生產(chǎn)發(fā)展的主要限制因素。這些病毒病主要包括番木瓜環(huán)斑病毒（papayaringspotvirusPRSV）、番木瓜花葉病毒（PMV）、番木瓜頂端壞死病毒（PANV）、番木瓜凋萎病毒（PDNV）等。在我國(guó)華南地區(qū),番木瓜環(huán)斑病毒是番木瓜病毒病的最主要病原。共有4個(gè)株系和一個(gè)分離物，Ys、Sm、Vb、Lc株系以及Ys和Vb混合侵染的分離物，其中Ys為華南地區(qū)的優(yōu)勢(shì)株系，Sm為強(qiáng)毒株系，Lc不常見(jiàn)(蔡建和等，1994)。PRSV嚴(yán)重影響了番木瓜的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，使番木瓜由多年生果樹(shù)變?yōu)橐荒晟麡?shù)，喪失了常年產(chǎn)果的習(xí)性。隨著對(duì)PRSV的研究深入、病害認(rèn)識(shí)的不斷加深，以基因工程為手段的抗病毒工程也在多個(gè)國(guó)家和地區(qū)開(kāi)展。肖火根（1995）對(duì)PRSV曾經(jīng)有過(guò)一篇綜述。本文就PRSV的這幾年來(lái)新的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。1生物學(xué)和理化特性1.1寄主范圍和分類PRSV的寄主范圍比較窄，吳方城等在接種的15個(gè)科，50種植物中，只有番木瓜科和葫蘆科的若干種為PRSV所侵染，并產(chǎn)生系統(tǒng)癥狀。根據(jù)寄主范圍可劃分為P型和W型兩大類。P型株系是番木瓜生產(chǎn)的重要病原，寄主主要為葫蘆科、藜科、番木瓜科；W型（即西瓜花葉病毒一號(hào)）是葫蘆科作物的主要病原，雖然和P類型的株系或分離物血清學(xué)反應(yīng)密切相關(guān)，但是不侵染番木瓜。隨著W型株系在世界范圍內(nèi)危害的加重。W型株系的研究在近幾年來(lái)也越來(lái)越被重視。PRSV—P類型的株系或分離物，國(guó)內(nèi)外迄今已報(bào)道的約有36個(gè)，我國(guó)華南地區(qū)有一個(gè)分離物和5個(gè)株系，分別根據(jù)在寄主西葫蘆上的癥狀反應(yīng)命名為Ys、Vb、Lc、Sm、Ml。通過(guò)對(duì)PRSV株系的生物學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)研究，表明廣東省番木瓜的病毒毒源種類只有PRSV。（蔡建和等，1994；賀國(guó)安等，2001）1.2株系和癥狀反應(yīng)在番木瓜上Ys、Vb、Lc、Sm株系的田間癥狀反應(yīng)基本相同，主要為花葉、斑駁、葉畸形和（或）卷曲、莖干上水漬狀斑點(diǎn)、和（或）條斑、果上水漬狀斑點(diǎn)或（和）環(huán)狀斑等。在西葫蘆上癥狀有所不同,接種后Ys葉上有黃色斑點(diǎn)；Vb沿葉脈產(chǎn)生灰白色帶；Sm重花葉；Lc葉片卷曲（蔡建和等，1994）。肖火根等（1994）通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)Sm株系容易侵染昆若藜和莧色藜，并產(chǎn)生局部枯斑，其余3個(gè)株系不容易侵染。4株系的血清學(xué)密切相關(guān)，其外殼蛋白氨基酸序列同源率高，Ys和Sm為94.4%，Ys與Sm為96.9%。它們?cè)诩闹髦参锷习Y狀反應(yīng)和潛育期，在西葫蘆上的增殖和運(yùn)轉(zhuǎn)速度，以及它們的外殼蛋白的氨基酸組成等方面有一定差異。在西葫蘆植株體內(nèi)，Sm株系病毒增殖最快，濃度最高，運(yùn)轉(zhuǎn)也最快，依此為Vb、Ys。又根據(jù)癥狀反應(yīng)，致病力最強(qiáng)的為Sm，依此為Ys、Vb。賀國(guó)安等（2001）采用RTPCR方法合成了本研究室保存的番木瓜畸葉病毒(PMALV)的外殼蛋白(CP)基因,將其CP基因克隆,并進(jìn)行了序列分析。結(jié)果表明,PMALV基因核苷酸序列全長(zhǎng)為861ｎｔ,推導(dǎo)其編碼287個(gè)氨基酸。與番木瓜環(huán)斑病毒(PRSV)美國(guó)夏威夷HA株系和澳大利亞W株系的CP基因相比,在第66ｎｔ處開(kāi)始連續(xù)缺失3個(gè)核苷酸。與PRSV的華南Ys、Sm和G株系以及夏威夷的HA和澳大利亞的W株系相比,其CP基因序列同源率為90%左右，其推導(dǎo)的氨基酸序列同源率達(dá)95%以上。此結(jié)果表明,PMALV屬于PRSV的一個(gè)株系。稱其為番木瓜環(huán)斑病毒畸葉株系(ML株系)。2PRSV的分子生物學(xué)2.1基因組結(jié)構(gòu)PRSV屬于馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)，粒體大小約為（500800nm×12nm），為線狀，病組織超薄切片電鏡觀察發(fā)現(xiàn)4個(gè)株系均為典型的風(fēng)輪狀內(nèi)含體。屬于單鏈RNA病毒（+ssRNA）PRSV夏威夷株系HARNA基因組的全部核苷酸序列共有10326個(gè)核苷酸（不包括3′端的PolyA尾巴）PRSV—HARNA的堿基組成為A31.2%U27.0%G23.0%C18.0%和其它Potyviruses相似，5′端含85核苷酸，3′端非編碼區(qū)含209個(gè)核苷酸,3′端為保守序列，只有一個(gè)閱讀框架（OpenReadingFrame），其閱讀的起始點(diǎn)在10118—10120核苷酸處，此閱讀框架可編碼一個(gè)由3344個(gè)氨基酸的復(fù)合蛋白，其分子量為381088。除HA51外，國(guó)內(nèi)外還有16個(gè)PRSV株系或分離物的CP基因被克隆和測(cè)序。它們的差異主要在5′端。2.2檢測(cè)方法研究在病毒檢測(cè)上，已發(fā)展有快速、靈敏、可靠的ELISA法和cDNA分子探針?lè)ǎ@對(duì)PRSV的進(jìn)一步研究，如田間分離物的鑒定、PRSV株系的鑒定、分類及其親緣關(guān)系的分析、弱株系篩選、無(wú)毒苗木和抗病品種的篩選及檢測(cè)，以及PRSV的田間流行病學(xué)的分析等帶來(lái)很大方便。陳枝楠等（1994）成功地建立了檢測(cè)PRSV的間接DOT—ELISA。檢測(cè)PRSV4個(gè)株系Ys、Sm、Vb、Lc的靈敏度都達(dá)到了ng水平，比常規(guī)ELISA靈敏度提高10倍，操作過(guò)程也更為快速、簡(jiǎn)便、觀察結(jié)果直觀。陳枝楠還利用PRSV—RNA3′末端具有PolyA尾巴結(jié)構(gòu)和病毒的外殼蛋白編碼基因靠近3′端合成了編號(hào)為PYs6的克隆，當(dāng)用A32P標(biāo)記PYs6cDNA時(shí)，檢測(cè)PRSV4個(gè)株系的靈敏度都在pg水平，比DOTELISA更準(zhǔn)確，更靈敏。而且比常規(guī)ELISA靈敏度高幾千倍。肖火根（2000）建立了以PCR方法為核心的核苷酸檢測(cè)方法，如一步法RTPCR，免疫捕捉PCR，以及與PCR相結(jié)合的ELISA、Northern、Southern核酸雜交方法等。賀國(guó)安等（2002年）以PRSV株系特異性引物對(duì)PRSV的PRSV126(PRSV日本分離物)、Ys、Vb和Sm等株系進(jìn)行RTPCR方法鑒定，用限制性內(nèi)切酶HaeII、Sau3AI和HinfI對(duì)PRSV的PRSV126、Ys、Vb和Sm等株系進(jìn)行單酶切RTPCRRFLP分析,HinfI能把PRSV126與Ys、Vb和Sm鑒別開(kāi)來(lái),Sau3AI能把Ys與Vb和Sm鑒別開(kāi)來(lái),HaeII則能把Ys與PRSV126、Vb和Sm鑒別開(kāi)來(lái)。利用特異性引物對(duì)Vb、Ys和Sm株系進(jìn)行RTPCRRFLPSSCP分析,結(jié)果能一次把三者較好地分別開(kāi)來(lái)。3防治研究3.1輻射誘變育種由于番木瓜栽培種中缺乏抗原，常規(guī)的雜交育種方法不能培育出抗病品種，試圖通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交使野生種的抗病基因轉(zhuǎn)移到栽培種中的實(shí)驗(yàn)一直未能成功。利用輻射處理誘發(fā)生物基因突變?cè)怼Ｓ《仍椛湔T變培育出了早熟，高產(chǎn)品種。自1992年以來(lái)，我們研究室一直致力于輻射誘變培育番木瓜抗（耐）病品種的工作。從Co60Y射線處理種子的誘變一代中獲得了一株表現(xiàn)高度耐病的變異植株。誘變獲得了番木瓜栽培種的第一個(gè)抗病基因PYs，該誘變植株所結(jié)果實(shí)無(wú)籽，進(jìn)行了組織擴(kuò)繁和耐病性初步研究。其植株體內(nèi)病毒含量比原親本要低，周?chē)?guó)輝博士（2000年）對(duì)其耐病機(jī)制、遺傳規(guī)律、分子標(biāo)記等進(jìn)行了深入一步的研究。結(jié)果表明突變抗病性具有病毒株系專化性，該突變體能抗華南優(yōu)勢(shì)株系Ys和Vb，而不抗強(qiáng)毒株系Sm。小規(guī)模的大田成株期抗病性觀察結(jié)果表明，F(xiàn)3代抗感病植株分離比為1：1；表明突變抗病性由顯性單基因控制，即命名為Pys，理論上在M3中存在突變抗病基因純合型植株。本研究室已經(jīng)M3中篩選出第十棵為純合型植株，記作為M310阮小蕾等（2002）小規(guī)模田間種植三年實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果表明M310后代具有較強(qiáng)的抗病性。周?chē)?guó)輝等（2000）還采用微量RTPCR一步法，對(duì)PRSV在番木瓜感病品種及抗病突變體植株體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)動(dòng)態(tài)進(jìn)行了檢測(cè)。初步實(shí)驗(yàn)顯示，該突變體可能阻礙了病毒在植株體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)。GosalvesD（1998）等利用改進(jìn)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化法，用粒子輻射番木瓜Sunrise栽培種的體細(xì)胞胚，在27個(gè)抗卡那霉素的植株中，篩選出25株抗夏威夷株系，還有一些抗包括夏威夷株系在內(nèi)的澳大利亞、臺(tái)灣、牙買(mǎi)加、巴拿馬、巴西的株系。3.2交互保護(hù)作用植物病毒株系間的交互保護(hù)作用是植物系統(tǒng)地感染病毒的某一株系后，可以免受同種病毒其它株系侵染的現(xiàn)象。在番木瓜病毒方面，Yeh和Gonsalves（1984）通過(guò)利用亞硝酸誘變，獲得了弱毒株系HA51和HA61。其中HA51株系對(duì)夏威夷野生株系HA有較高的保護(hù)作用。在我國(guó)臺(tái)灣，HA51株系的應(yīng)用已成為綜合防治措施之一。但是只能降低一年生番木瓜的發(fā)病率和減少損失，而不能恢復(fù)番木瓜成為多年生果樹(shù)。肖火根（1993）研究發(fā)現(xiàn)HA51對(duì)華南株系的保護(hù)作用很差，只能保護(hù)12個(gè)月，而PRSV華南株系間的交互保護(hù)作用較強(qiáng)，在番木瓜上都可維持120天以上，進(jìn)一步研究表明PRSV華南株系間親緣關(guān)系較密切，而HA51株系則與華南株系間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。所以PRSV株系間的交互保護(hù)作用程度與它們之間的親緣關(guān)系呈正相關(guān)。因此各個(gè)國(guó)家和地區(qū)要利用弱株系來(lái)防治番木瓜環(huán)斑病，必須從當(dāng)?shù)豍RSV株系中選擇一個(gè)優(yōu)勢(shì)株系來(lái)進(jìn)行誘變篩選弱株系。在PRSV株系間的交互保護(hù)作用中，保護(hù)株系病毒不能完全阻止攻擊株系病毒侵入受保護(hù)的植株，也不能阻止攻擊株系病毒在植株體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)，攻擊株系可以侵入到受保護(hù)的植株體內(nèi)進(jìn)行增殖。但其增殖卻在一定程度上受到保護(hù)株系病毒的抑制。研究還表明PRSV株系間的交互保護(hù)作用機(jī)理明顯與攻擊株系病毒侵染過(guò)程的侵入或復(fù)制有關(guān)，而不會(huì)是攻擊株系病毒的系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)受到抑制。HA51對(duì)Sm株系的保護(hù)作用的崩潰是由于強(qiáng)毒株系在植株頂端葉片中的病毒濃度越來(lái)越高所致。SheenTF(1998)等用亞硝酸誘變的HA61無(wú)介體傳播的網(wǎng)室和自然田間同時(shí)接種番木瓜植株，6個(gè)月后所接種植株，網(wǎng)室內(nèi)發(fā)病率為0.3%，田間的為96%，表明在無(wú)介體傳播的情況下，交互保護(hù)作用可以得到很好的應(yīng)用，同時(shí)也表明交互保護(hù)作用在田間的防治效果受許多其它因素的影響。在外界壓力小的情況下，交互保護(hù)作用效果好。而且要想使交互保護(hù)作用在田間得到很好的應(yīng)用，還需要進(jìn)一步的基礎(chǔ)性研究，同時(shí)田間的釋放工作也同樣需要進(jìn)一步的工作。3.3轉(zhuǎn)基因工程抗病性自1929年Mckinney發(fā)現(xiàn)交互保護(hù)現(xiàn)象（Crossprotection），利用交互保護(hù)原理由外殼蛋白（CoatproteinCP）基因介導(dǎo)的抗病性已在黃瓜花葉病毒，馬鈴薯Y病毒等30多種病毒上得到廣泛應(yīng)用。PRSVCP基因的構(gòu)建和表達(dá)也取得了很大進(jìn)展。Magel等（1985）合成并克隆了PRSVWRNA3′端cDNA推測(cè)PRSVCP基因位于病毒RNA3′端。葉長(zhǎng)明克隆了PRSV華南優(yōu)勢(shì)株系—黃斑株系（Ys）CP基因，序列分析結(jié)果表明Ys的CP基因全長(zhǎng)858核苷酸。Quemada等（1990）合成并克隆了PRSVHA51RNA3′端cDNA。90年代初，人們開(kāi)始對(duì)番木瓜進(jìn)行抗環(huán)斑病毒的育種工作，夏威夷大學(xué)于1992年報(bào)道了用基因槍法將PRSVCP基因轉(zhuǎn)入再生的番木瓜植株，并證實(shí)了轉(zhuǎn)基因植株對(duì)PRSV具有一定的抗性。1998年。在美國(guó)轉(zhuǎn)CP基因的番木瓜得到商品化生產(chǎn)。這是世界上第一商品化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因多年生果樹(shù)。在華南地區(qū)PRSVCP基因的構(gòu)建和番木瓜的轉(zhuǎn)基因研究工作也正在進(jìn)行。PRSV華南地區(qū)優(yōu)勢(shì)株系Ys、Sm株系和海南分離物的CP基因都得到了很好的克隆。葉長(zhǎng)明和范懷忠等（1994）建立了以胚性組織為受體的共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體系，并通過(guò)體胚發(fā)生途徑獲得了2株表達(dá)YsCP基因的轉(zhuǎn)基因植株，周鵬和劉俊君等（1993）通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)獲得了表達(dá)Sm株系CP基因的番木瓜，周鵬等（1997）還分離獲得了雙價(jià)基因（PRSV外殼蛋白基因—核酸酶SN基因PRSVCPSN），小規(guī)模田間攻毒實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)PRSVCPSN基因的大田自然攻毒表現(xiàn)對(duì)PRSV的抵抗能力比轉(zhuǎn)PRSVCP基因的植株強(qiáng)。Yeh等（1997）對(duì)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因番木瓜進(jìn)行組培繁殖后代，并進(jìn)行了田間實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明38個(gè)品系的的轉(zhuǎn)基因番木瓜中有9個(gè)品系對(duì)PRSV的臺(tái)灣株系、泰國(guó)株系、夏威夷株系具有廣譜性高抗，其編號(hào)為1601，1701，和1705，種植在不同地點(diǎn)。田間實(shí)驗(yàn)表明，種植一年后只有0、2、0%的植株感病，對(duì)照植株種植8個(gè)月后100%感病，而另一處的植株在外界十分高的病害壓力下，種植5個(gè)月后只有1020%感病，對(duì)照株3個(gè)月后100%感病，此研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)CP基因的番木瓜在田間能夠達(dá)到較理想的抗病效果。但是常規(guī)農(nóng)桿菌介導(dǎo)和粒子輻射轉(zhuǎn)CP基因植株轉(zhuǎn)化率低，ChengYinghuey等利用雙Ti質(zhì)粒介體pBGCP（NPT2作為篩選標(biāo)記）。首先在不含卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)23個(gè)周，再經(jīng)過(guò)卡那霉素篩選，經(jīng)PCR和Westernblot檢測(cè)可知CP基因轉(zhuǎn)入成熟的提細(xì)胞中，通過(guò)這種方法把轉(zhuǎn)化率提高了15.9%，比常規(guī)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化率高10100倍。同時(shí)轉(zhuǎn)復(fù)制酶基因的研究工作現(xiàn)在得到了較大的進(jìn)展．陳谷等獲得了番木瓜環(huán)斑病毒復(fù)制酶基因的番木瓜，部分轉(zhuǎn)基因植株對(duì)PRSV有高度抗性，且優(yōu)于PRSV外殼蛋白介導(dǎo)的抗病性，在人工接種3次后繼續(xù)接受自然接種，始終未見(jiàn)任何癥狀，開(kāi)花結(jié)果正常，果實(shí)風(fēng)味未見(jiàn)異常。我們實(shí)驗(yàn)室也已經(jīng)得到了轉(zhuǎn)復(fù)制酶基因的抗病番木瓜。進(jìn)一步的研究正在進(jìn)行（馮黎霞等，2001）。4結(jié)束語(yǔ)目前雖然應(yīng)用于防治PRSV的策略很多。也有較大發(fā)展。但是能夠達(dá)到抗病免疫程度的抗病策略還沒(méi)有找到，許多人準(zhǔn)備利用復(fù)合基因策略以達(dá)到轉(zhuǎn)基因植株高度抗病的目的。利用輻射誘變篩選植株，具有很大的隨機(jī)性，在篩選時(shí)要從大量的樣本中篩選。而且輻射誘變植株后代會(huì)發(fā)生性狀分離，抗病突變體的園藝性狀需要改良，突變抗病性和交互保護(hù)作用都具有病毒株系專化性。在抗病突變體品種推廣種植后，原來(lái)分布不廣的株系有可能上升為優(yōu)勢(shì)株系，抗病突變體的抗病機(jī)制現(xiàn)已初步探明是抗體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)，具體抗PRSV的胞間運(yùn)轉(zhuǎn)，還是抗PRSV在維管束韌皮部長(zhǎng)距離運(yùn)轉(zhuǎn)還有待于進(jìn)一步的探討。而要研究病毒的體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)又需要高靈敏度的病毒檢測(cè)方法，利用血清學(xué)方法要配制高效價(jià)的抗血清。為保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)，對(duì)輻射誘變番木瓜利用RAPD方法篩選特異性引物的工作亟需解決，這將為抗病番木瓜商品化生產(chǎn)提供良好的先決條件。具體工作本實(shí)驗(yàn)室正在進(jìn)行（王家鋒，2002）。交互保護(hù)作用具有高度株系專化性，每個(gè)國(guó)家和地區(qū)都要篩選和本地區(qū)優(yōu)勢(shì)株系血緣關(guān)系近的弱株系，而弱株系的篩選需要大量的工作。而交互保護(hù)作用的機(jī)制還需要進(jìn)一步的探討，這有助于交互保護(hù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用。轉(zhuǎn)復(fù)制酶基因的植株雖然介導(dǎo)的抗性強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，但是作用范圍相對(duì)較窄。轉(zhuǎn)基因工程植株在生產(chǎn)上是否推廣應(yīng)用也有待于時(shí)間的檢驗(yàn)，目前小規(guī)模的田間實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行。參考文獻(xiàn)：蔡健和,范懷忠.1994.華南番木瓜病毒病及環(huán)斑病毒株系的調(diào)查鑒定.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),15（4）:13~17肖火根,范懷忠.1996.番木瓜環(huán)斑病毒株系,分子生物學(xué)及防治研究進(jìn)展.中國(guó)病毒學(xué),11（2）:103~109肖火根,范懷忠.1994.番木瓜環(huán)斑病毒的生物學(xué)和血清學(xué)研究.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，15（3）：5054肖火根,范懷忠.2000.番木瓜環(huán)斑病毒PCR檢測(cè)技術(shù)的研究.中國(guó)病毒學(xué),15（3）:367372肖火根,范懷忠.1994.交互保護(hù)作用及其在植物病毒病防治上的應(yīng)用.中國(guó)病毒學(xué),9（1）:17周?chē)?guó)輝.2000.輻射誘變番木瓜抗環(huán)斑病毒突變體的初步研究.博士論文阮小蕾.2002.輻射誘變番木瓜抗病性研究.碩士論文周?chē)?guó)輝,李華平,張曙光,范懷忠.2001.番木瓜抗病突變體阻礙環(huán)斑病毒體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn).中國(guó)病毒學(xué),16（1）:55~58肖火根,范懷忠.1995.番木瓜環(huán)斑病毒弱病毒株系交互保護(hù)作用的研究.中國(guó)病毒學(xué),10（2）:155~160周鵬,鄭學(xué)勤,劉向民,劉北洋.1997.轉(zhuǎn)基因番木瓜小規(guī)模田間攻毒試驗(yàn).熱帶作物學(xué)報(bào),18（1）:59~62葉長(zhǎng)明,范懷忠,葉寅,田波.1997.番木瓜環(huán)斑病毒Ys株系CP基因的序列分析和植物表達(dá)載體的構(gòu)建.中國(guó)病毒學(xué),9（1）:1~6陳谷,葉長(zhǎng)明,李寶健.1999.植物抗病毒基因工程的研究進(jìn)展.生物技術(shù)通報(bào),6:1722劉俊君,彭學(xué)賢,李荔,莽克強(qiáng),1993.番木瓜環(huán)斑病毒華南強(qiáng)株系cDNA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