Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡：解鎖兒童哮喘發(fā)病機制與診療新路徑一、引言1.1研究背景與意義兒童哮喘是一種常見的慢性氣道炎癥性疾病，近年來其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢，嚴重影響兒童的身心健康和生活質(zhì)量。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，全球約有3.39億哮喘患者，其中兒童占相當大的比例。在我國，兒童哮喘的患病率也不容樂觀，全國兒童哮喘流行病學調(diào)查結(jié)果顯示，1990年中國0-14歲兒童哮喘平均患病率為1.08%，2000年增加至1.97%，2010年則高達3.02%，在2000年基礎(chǔ)上又上升了50%左右。哮喘的發(fā)病機制較為復雜，涉及多種細胞和細胞因子的相互作用。傳統(tǒng)觀點認為，輔助性T細胞1（Th1）/輔助性T細胞2（Th2）失衡是哮喘發(fā)病的重要機制，Th2細胞及其分泌的細胞因子如白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-5（IL-5）等增多，導致氣道炎癥和高反應(yīng)性。然而，隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)Th1/Th2失衡學說并不能完全解釋哮喘的發(fā)病機制。近年來，Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在哮喘發(fā)病中的作用逐漸受到關(guān)注。Th17細胞是一種新型的CD4+T細胞亞群，主要分泌IL-17、IL-21和IL-22等細胞因子，具有強大的促炎作用。IL-17可以誘導氣道上皮細胞、成纖維細胞等產(chǎn)生多種趨化因子和細胞因子，招募中性粒細胞等炎癥細胞到氣道，加重氣道炎癥。在哮喘患者中，Th17細胞及其相關(guān)細胞因子的表達明顯升高，且與哮喘的病情嚴重程度相關(guān)。CD4+FOXP3+Treg細胞是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細胞亞群，通過分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等細胞因子，抑制免疫細胞的活化和增殖，維持免疫平衡。在哮喘患者中，CD4+FOXP3+Treg細胞的數(shù)量和功能下降，導致免疫調(diào)節(jié)失衡，無法有效抑制氣道炎癥。Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在兒童哮喘的發(fā)病機制中可能起著關(guān)鍵作用。研究Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的失衡表達及意義，有助于深入了解兒童哮喘的發(fā)病機制，為兒童哮喘的診斷、治療和預(yù)防提供新的理論依據(jù)和治療靶點。目前，關(guān)于Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的研究還相對較少，且存在一些爭議。因此，進一步探討Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的失衡表達及意義具有重要的理論和臨床價值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對Th17、CD4+FOXP3+Treg細胞與兒童哮喘關(guān)系的研究開展較早。一些研究通過對哮喘兒童的外周血或氣道組織進行檢測，發(fā)現(xiàn)Th17細胞數(shù)量及其分泌的細胞因子如IL-17在哮喘兒童中顯著升高，且與哮喘的嚴重程度和氣道炎癥指標密切相關(guān)。例如，有研究對不同嚴重程度哮喘兒童的外周血單個核細胞進行體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)Th17細胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子RORγt表達上調(diào)，進一步證實了Th17細胞在哮喘發(fā)病中的促炎作用。在CD4+FOXP3+Treg細胞方面，國外研究表明，哮喘兒童體內(nèi)該細胞數(shù)量和功能存在異常，其分泌的抑制性細胞因子IL-10和TGF-β水平降低，無法有效抑制Th17細胞等促炎細胞的活化和增殖，從而導致免疫失衡。國內(nèi)學者也在這一領(lǐng)域進行了大量研究。通過對哮喘兒童不同病情階段（急性發(fā)作期、緩解期）的研究，發(fā)現(xiàn)急性發(fā)作期哮喘兒童外周血中Th17細胞比例及IL-17水平明顯高于緩解期和健康對照組，而CD4+FOXP3+Treg細胞比例及IL-10、TGF-β水平顯著低于緩解期和對照組。部分研究還探討了中藥、針灸等傳統(tǒng)療法對Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡的調(diào)節(jié)作用，為兒童哮喘的治療提供了新的思路。然而，當前研究仍存在一些不足和空白。多數(shù)研究僅檢測了外周血中的Th17和CD4+FOXP3+Treg細胞，對于氣道局部組織中這兩種細胞的研究相對較少，而氣道局部免疫反應(yīng)對于哮喘的發(fā)生發(fā)展可能更為關(guān)鍵。雖然已知Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡參與哮喘發(fā)病，但具體的分子調(diào)控機制尚未完全明確，如哪些信號通路參與調(diào)節(jié)這兩種細胞的分化和功能，它們之間的相互作用如何精準調(diào)控等問題仍有待深入研究。在治療方面，目前針對Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡的靶向治療研究較少，如何通過調(diào)節(jié)這一失衡狀態(tài)來改善哮喘病情，開發(fā)安全有效的治療方法，還需要進一步探索。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究Th17、CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的失衡表達及意義，為兒童哮喘的防治提供更全面的理論依據(jù)和新的治療思路。具體研究目的如下：精確檢測哮喘兒童外周血及氣道局部組織中Th17細胞、CD4+FOXP3+Treg細胞的數(shù)量及比例，以及相關(guān)細胞因子IL-17、IL-10、TGF-β等的表達水平。深入分析Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡與兒童哮喘病情嚴重程度、臨床癥狀及肺功能指標之間的關(guān)聯(lián)。全面探討Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在兒童哮喘發(fā)病機制中的作用及分子調(diào)控機制。積極探索以調(diào)節(jié)Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡為靶點的兒童哮喘新型治療策略。為達成上述研究目的，本研究擬采用以下研究方法：實驗研究：選取符合納入標準的哮喘兒童作為研究對象，根據(jù)病情嚴重程度及病程階段進行分組，同時選取健康兒童作為對照組。采集外周血及誘導痰標本，分離外周血單個核細胞（PBMC）和氣道上皮細胞等。運用流式細胞術(shù)檢測Th17細胞、CD4+FOXP3+Treg細胞的數(shù)量及比例；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測相關(guān)細胞因子的表達水平；利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測細胞內(nèi)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及信號通路分子的mRNA表達水平。此外，還可通過細胞培養(yǎng)和功能實驗，進一步探究Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞的分化、增殖及功能特點，以及它們之間的相互作用機制。對比研究：對比分析哮喘兒童與健康兒童之間Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的表達差異；對比不同病情嚴重程度、病程階段哮喘兒童之間的差異；對比治療前后哮喘兒童Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡狀態(tài)的變化。通過對比研究，明確Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在兒童哮喘發(fā)病及病情發(fā)展中的作用。統(tǒng)計分析：運用統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，包括描述性統(tǒng)計、相關(guān)性分析、差異性檢驗等。通過統(tǒng)計學分析，揭示Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡與兒童哮喘各臨床指標之間的關(guān)系，為研究結(jié)論提供可靠的統(tǒng)計學依據(jù)。二、兒童哮喘及Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1兒童哮喘概述兒童哮喘是一種常見的慢性氣道炎癥性疾病，具有反復發(fā)作的特點，嚴重影響兒童的身體健康和生活質(zhì)量。它是由多種細胞（如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞等）和細胞組分參與的氣道慢性炎癥，這種炎癥會導致氣道高反應(yīng)性，進而引起反復發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和咳嗽等癥狀。從癥狀表現(xiàn)來看，兒童哮喘發(fā)作時，患兒常出現(xiàn)喘息，呼吸時可聽到明顯的哮鳴音，就像吹哨子的聲音，這是由于氣道狹窄，氣體通過受阻產(chǎn)生的。咳嗽也是常見癥狀之一，部分患兒可能以咳嗽為唯一表現(xiàn)，尤其在夜間或清晨咳嗽較為頻繁，且咳嗽多為刺激性干咳，嚴重時可伴有咳痰。氣促表現(xiàn)為呼吸加快、費力，患兒會感到呼吸不暢，甚至需要用力呼吸，呼吸頻率可明顯高于正常兒童。胸悶則使患兒感覺胸部有壓迫感、憋悶，年幼的患兒可能無法準確描述這種不適，只能通過煩躁不安、哭鬧等表現(xiàn)出來。在流行現(xiàn)狀方面，兒童哮喘在全球范圍內(nèi)廣泛流行，且發(fā)病率呈上升趨勢。如前所述，我國兒童哮喘患病率從1990年的1.08%，到2000年上升至1.97%，2010年更是高達3.02%。在其他國家，如美國，兒童哮喘的患病率也相當高，約有700萬兒童受到哮喘的困擾。這種上升趨勢可能與環(huán)境因素、生活方式改變、空氣污染等多種因素有關(guān)。兒童哮喘對兒童健康的影響是多方面的。長期的哮喘發(fā)作會影響兒童的生長發(fā)育，由于哮喘導致的呼吸困難和缺氧，可能會使兒童生長速度減緩，身高、體重等指標低于同齡人。哮喘還會對兒童的心理產(chǎn)生負面影響，頻繁發(fā)作帶來的不適和對疾病的恐懼，容易使兒童產(chǎn)生焦慮、抑郁等情緒，影響其心理健康和社交能力。哮喘發(fā)作時的癥狀嚴重影響兒童的日常生活和學習，導致缺課、活動受限，降低生活質(zhì)量。如果哮喘得不到有效控制，還可能引發(fā)一系列并發(fā)癥，如肺氣腫、肺心病等，進一步威脅兒童的生命健康。2.2Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞的生物學特性2.2.1Th17細胞的特性與功能Th17細胞是CD4+T細胞的一個獨特亞群，其分化過程受到多種細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的精確調(diào)控。初始CD4+T細胞在特定的細胞因子環(huán)境中，如轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）和白細胞介素-6（IL-6）共同作用下，開始向Th17細胞分化。在這一過程中，轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤兒受體γt（RORγt）發(fā)揮關(guān)鍵作用，它被誘導表達并激活一系列與Th17細胞分化和功能相關(guān)的基因。隨著分化的進行，Th17細胞逐漸獲得其獨特的表型和功能，成為能夠分泌多種細胞因子的效應(yīng)細胞。IL-17是Th17細胞分泌的標志性細胞因子，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著核心的促炎作用。IL-17家族包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E（也稱為IL-25）和IL-17F，其中IL-17A和IL-17F是研究最為廣泛的成員。IL-17通過與靶細胞表面的IL-17受體（IL-17R）結(jié)合，激活下游的信號通路，如核因子-κB（NF-κB）和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等。這一激活過程促使多種細胞，如上皮細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等，合成并釋放一系列促炎細胞因子，如IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、粒細胞集落刺激因子（G-CSF）等。這些細胞因子進一步招募和激活中性粒細胞、單核細胞等炎癥細胞，使其聚集到炎癥部位，引發(fā)強烈的炎癥反應(yīng)。在呼吸道感染的炎癥模型中，Th17細胞及其分泌的IL-17能夠迅速響應(yīng)病原體的入侵。IL-17刺激氣道上皮細胞產(chǎn)生趨化因子，如CXCL1、CXCL8等，這些趨化因子吸引中性粒細胞從血液中遷移到氣道組織。中性粒細胞到達感染部位后，通過釋放抗菌物質(zhì)和活性氧等，試圖清除病原體，但同時也會造成組織損傷和炎癥的加劇。IL-17還可以促進成纖維細胞增殖和膠原蛋白合成，導致組織纖維化，進一步影響氣道的正常功能。Th17細胞及其分泌的IL-17在炎癥反應(yīng)中扮演著重要的促炎角色，通過激活多種細胞和信號通路，引發(fā)和放大炎癥過程。在哮喘等疾病中，Th17細胞的異常活化和IL-17的過度分泌可能導致氣道炎癥的失控，對疾病的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生深遠影響。2.2.2CD4+FOXP3+Treg細胞的特性與功能CD4+FOXP3+Treg細胞是一類具有重要免疫調(diào)節(jié)功能的T細胞亞群，其分化過程涉及復雜的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。在胸腺中，部分CD4+T細胞在特定的微環(huán)境下，經(jīng)歷陽性選擇和陰性選擇后，逐漸分化為天然Treg細胞（nTreg）。這一過程中，T細胞受體（TCR）與胸腺上皮細胞表面的自身抗原肽-MHC復合物的適度結(jié)合是關(guān)鍵信號，它激活一系列細胞內(nèi)信號通路，最終誘導轉(zhuǎn)錄因子叉頭框蛋白P3（FOXP3）的表達。FOXP3的表達是nTreg細胞發(fā)育和功能的標志，它通過調(diào)控一系列基因的表達，使nTreg細胞具備免疫抑制的能力。除了胸腺來源的nTreg細胞，在外周免疫器官中，初始CD4+T細胞在特定的細胞因子環(huán)境下，也可以分化為誘導性Treg細胞（iTreg）。轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）在iTreg細胞的分化中起著關(guān)鍵作用，它與其他輔助信號（如IL-2等）協(xié)同作用，激活Smad信號通路，進而誘導FOXP3的表達。與nTreg細胞相比，iTreg細胞在維持免疫穩(wěn)態(tài)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)方面也發(fā)揮著重要作用，尤其是在應(yīng)對外來抗原和自身抗原引起的免疫反應(yīng)時。FOXP3作為CD4+FOXP3+Treg細胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，對細胞的功能起著核心調(diào)控作用。FOXP3可以直接結(jié)合到DNA的特定區(qū)域，調(diào)控一系列與免疫抑制功能相關(guān)基因的表達。它能夠抑制Treg細胞的增殖和活化相關(guān)基因，使其處于相對靜止的狀態(tài)，避免過度活化導致的免疫損傷。FOXP3還可以促進免疫抑制性細胞因子如IL-10和TGF-β的表達，這些細胞因子通過旁分泌或自分泌的方式作用于周圍的免疫細胞，抑制它們的活化和增殖。CD4+FOXP3+Treg細胞主要通過分泌免疫抑制性細胞因子IL-10和TGF-β來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。IL-10是一種多效性細胞因子，它可以抑制Th1、Th2和Th17細胞的活化和增殖，減少它們分泌促炎細胞因子。IL-10還能抑制抗原呈遞細胞（APC）的功能，降低其表面共刺激分子的表達，從而減弱APC對T細胞的激活作用。TGF-β則是一種具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子，它可以抑制T細胞、B細胞、NK細胞等多種免疫細胞的活化和增殖，同時促進細胞外基質(zhì)的合成，有助于組織修復和免疫穩(wěn)態(tài)的維持。在哮喘的發(fā)病機制中，CD4+FOXP3+Treg細胞的功能異常會導致免疫調(diào)節(jié)失衡。當Treg細胞數(shù)量減少或功能缺陷時，無法有效抑制Th17細胞等促炎細胞的活化和增殖，使得氣道炎癥反應(yīng)加劇。Treg細胞分泌的IL-10和TGF-β不足，不能中和Th17細胞分泌的促炎細胞因子，進一步破壞了免疫平衡，導致哮喘病情的惡化。CD4+FOXP3+Treg細胞通過FOXP3的調(diào)控以及分泌免疫抑制性細胞因子，在維持免疫穩(wěn)態(tài)和抑制過度免疫反應(yīng)中發(fā)揮著不可或缺的作用。在兒童哮喘等疾病中，CD4+FOXP3+Treg細胞的異常與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，深入研究其特性和功能對于理解疾病機制和開發(fā)治療策略具有重要意義。2.3Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞與免疫平衡在正常生理狀態(tài)下，Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞共同參與維持機體的免疫平衡。Th17細胞分泌的IL-17等促炎細胞因子，在抵御病原體感染、促進炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用。當機體受到細菌、真菌等病原體入侵時，Th17細胞被激活，迅速分泌IL-17，刺激上皮細胞、成纖維細胞等產(chǎn)生趨化因子，吸引中性粒細胞等炎癥細胞聚集到感染部位，增強機體的抗感染能力。CD4+FOXP3+Treg細胞則通過分泌IL-10、TGF-β等免疫抑制性細胞因子，抑制免疫細胞的過度活化，防止炎癥反應(yīng)過度，維持免疫穩(wěn)態(tài)。在感染后期，當病原體被清除后，Treg細胞的活性增強，抑制Th17細胞等促炎細胞的功能，使炎癥反應(yīng)逐漸消退，避免對機體組織造成損傷。然而，在兒童哮喘等疾病狀態(tài)下，Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞的平衡被打破。一方面，哮喘患兒體內(nèi)Th17細胞數(shù)量增加、活性增強，分泌過多的IL-17等促炎細胞因子。IL-17可以誘導氣道上皮細胞產(chǎn)生多種趨化因子，如CXCL8，吸引大量中性粒細胞聚集到氣道，引發(fā)強烈的氣道炎癥。IL-17還能刺激氣道平滑肌細胞增殖和收縮，導致氣道狹窄，加重哮喘癥狀。另一方面，CD4+FOXP3+Treg細胞的數(shù)量和功能下降。Treg細胞分泌的IL-10和TGF-β減少，無法有效抑制Th17細胞的活化和增殖。Treg細胞對其他免疫細胞的調(diào)節(jié)作用減弱，使得免疫反應(yīng)失去控制，氣道炎癥持續(xù)加劇。Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡還會引發(fā)一系列免疫異常。Th17細胞的過度活化會導致Th1/Th2失衡進一步加劇。Th17細胞分泌的細胞因子可以抑制Th1細胞的功能，同時促進Th2細胞的分化和增殖，使得Th2型細胞因子如IL-4、IL-5等分泌增加，進一步加重氣道炎癥和過敏反應(yīng)。這種免疫異常還會導致免疫記憶的改變，使機體對過敏原的敏感性增加，哮喘反復發(fā)作。三、Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的失衡表達研究設(shè)計3.1研究對象選取本研究選取在[醫(yī)院名稱]兒科就診的哮喘兒童作為病例組，選取同期在該醫(yī)院進行健康體檢的兒童作為健康對照組。對于哮喘兒童的分組，按照病情所處階段和嚴重程度進行細分。其中，急性發(fā)作期哮喘兒童是指在近1個月內(nèi)有哮喘發(fā)作，出現(xiàn)喘息、氣促、咳嗽、胸悶等癥狀，且癥狀在短時間內(nèi)迅速加重。根據(jù)癥狀的嚴重程度，將急性發(fā)作期哮喘兒童進一步分為輕度、中度和重度。輕度急性發(fā)作的患兒，癥狀相對較輕，僅在活動后出現(xiàn)喘息、氣促，日常活動基本不受限，能夠平臥，說話連續(xù)成句，呼吸頻率輕度增加，肺部可聞及散在哮鳴音；中度急性發(fā)作的患兒，喘息、氣促較為明顯，日常活動受限，喜坐位，說話常以短語表達，呼吸頻率明顯增加，肺部可聞及廣泛哮鳴音，心率加快；重度急性發(fā)作的患兒，休息時即感呼吸困難，不能平臥，只能取前傾位，說話只能說單字，煩躁不安，大汗淋漓，呼吸頻率顯著加快，肺部可聞及響亮的哮鳴音，可出現(xiàn)發(fā)紺、奇脈等。緩解期哮喘兒童是指經(jīng)過治療或自然緩解，癥狀消失或基本消失，且近3個月內(nèi)無哮喘發(fā)作。同樣，根據(jù)患兒過去1年的病情控制情況，將緩解期哮喘兒童分為控制良好組和未控制良好組。控制良好組的患兒在過去1年中，哮喘癥狀發(fā)作次數(shù)較少（每月不超過1次），無夜間發(fā)作，肺功能基本正常，日常活動不受限；未控制良好組的患兒在過去1年中，哮喘癥狀發(fā)作較為頻繁（每月超過1次），有夜間發(fā)作，肺功能存在不同程度的下降，日常活動受到一定限制。健康對照組兒童則是無哮喘及其他呼吸系統(tǒng)疾病，無過敏史，近期無感染史，體格檢查和實驗室檢查均正常。所有研究對象的年齡范圍為3-14歲，以確保研究結(jié)果具有較好的代表性。在選取研究對象時，詳細詢問患兒及其家長病史，包括哮喘發(fā)作次數(shù)、癥狀表現(xiàn)、治療情況等，并進行全面的體格檢查和必要的實驗室檢查，如血常規(guī)、肺功能檢查、過敏原檢測等，以排除其他可能影響研究結(jié)果的因素。3.2實驗方法與步驟3.2.1樣本采集與處理在清晨空腹狀態(tài)下，使用含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空采血管，采集哮喘兒童和健康對照組兒童的外周靜脈血5ml。采集完成后，將血樣輕輕顛倒混勻，避免血液凝固。隨后，采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（PBMC）。具體操作如下：將抗凝血緩慢加入到預(yù)先裝有淋巴細胞分離液的離心管中，使血液與淋巴細胞分離液形成清晰的界面，注意保持界面的完整性。以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，離心過程中要保持離心機的平穩(wěn)，避免震動。離心結(jié)束后，可見離心管中血液分為三層，上層為淡黃色血漿，中層為淋巴細胞分離液，下層為紅細胞和粒細胞。小心吸取中層白膜層，即PBMC層，轉(zhuǎn)移至新的離心管中。加入適量的磷酸鹽緩沖液（PBS），輕柔吹打混勻，以1500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，棄去上清液。重復洗滌步驟2-3次，以去除殘留的血小板和其他雜質(zhì)，確保獲得純凈的PBMC。最后，用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液重懸PBMC，調(diào)整細胞密度至1×10^6個/ml，用于后續(xù)實驗。3.2.2細胞檢測方法采用流式細胞術(shù)檢測Th17、CD4+FOXP3+Treg細胞的百分率。取上述制備好的PBMC懸液100μl，加入預(yù)先用熒光素標記的CD4抗體、CD161抗體（用于標記Th17細胞）、CD25抗體和FOXP3抗體，輕輕混勻，確保抗體與細胞充分接觸。在4℃避光條件下孵育30分鐘，避免熒光素受光照影響而減弱熒光強度。孵育結(jié)束后，加入適量的PBS洗滌細胞兩次，每次以1500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，棄去上清液，以去除未結(jié)合的抗體。然后，加入1ml固定破膜劑，按照說明書操作，使細胞固定并通透，以便抗體能夠進入細胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。再次加入熒光素標記的IL-17抗體（用于檢測Th17細胞內(nèi)的IL-17表達）和FOXP3抗體（用于檢測CD4+FOXP3+Treg細胞），在4℃避光條件下孵育30分鐘。孵育完成后，用PBS洗滌細胞兩次，最后用500μlPBS重懸細胞。將制備好的細胞懸液上機，使用流式細胞儀進行檢測。在檢測前，需要對流式細胞儀進行校準和調(diào)試，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。通過流式細胞儀檢測不同熒光通道的熒光強度，分析CD4+CD161+IL-17+細胞（即Th17細胞）和CD4+CD25+FOXP3+細胞（即CD4+FOXP3+Treg細胞）在PBMC中的百分率。在分析數(shù)據(jù)時，要合理設(shè)置門控，排除雜質(zhì)和死細胞的干擾，確保檢測結(jié)果的準確性。3.2.3細胞因子檢測方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測IL-17、IL-10的表達水平。使用人IL-17、IL-10ELISA試劑盒，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。首先，將包被有抗人IL-17或抗人IL-10抗體的酶標板從冰箱中取出，平衡至室溫。在標準品孔中加入不同濃度的標準品50μl，每個濃度設(shè)置復孔，以繪制標準曲線。在樣本孔中加入稀釋后的待測樣本50μl，同樣設(shè)置復孔。然后，在每孔中加入酶標試劑100μl，空白孔除外。輕輕振蕩酶標板，使液體充分混合。用封板膜封板后，將酶標板置于37℃恒溫箱中溫育60分鐘。溫育結(jié)束后，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干。每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復洗滌5次，拍干。在每孔中先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。顯色結(jié)束后，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時溶液顏色由藍色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪制標準曲線。根據(jù)樣品的OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣品中IL-17、IL-10的實際濃度。在整個實驗過程中，要注意避免交叉污染，確保實驗結(jié)果的可靠性。3.3質(zhì)量控制與數(shù)據(jù)分析在樣本采集過程中，嚴格按照操作規(guī)程進行，確保采集的樣本具有代表性。對于外周血采集，要求采集人員熟練掌握采血技術(shù)，避免采集過程中出現(xiàn)溶血、凝血等情況，影響后續(xù)實驗結(jié)果。在采集前，仔細核對研究對象的信息，確保樣本與研究對象對應(yīng)準確。對采集的樣本及時進行處理和保存，如外周血采集后應(yīng)在2小時內(nèi)進行PBMC分離，分離后的PBMC若不能立即進行實驗，需置于-80℃冰箱保存，避免樣本反復凍融。在實驗操作環(huán)節(jié)，采取了一系列質(zhì)量控制措施。在流式細胞術(shù)檢測中，每次實驗前，均使用標準微球?qū)α魇郊毎麅x進行校準，確保儀器的熒光檢測準確性和穩(wěn)定性。對抗體的使用進行嚴格管理，按照說明書要求保存和使用抗體，避免抗體失效或污染。在操作過程中，嚴格控制加樣量和孵育時間，減少實驗誤差。每次實驗均設(shè)置同型對照和陽性對照，以確保檢測結(jié)果的可靠性。同型對照用于排除非特異性染色，陽性對照用于驗證實驗體系的有效性。在ELISA檢測細胞因子時，選擇高質(zhì)量的ELISA試劑盒，并在使用前仔細檢查試劑盒的完整性和有效期。實驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行，包括試劑的配制、加樣順序、溫育時間和洗滌次數(shù)等。在加樣過程中，使用高精度移液器，確保加樣量的準確性，減少加樣誤差。同時，對每批實驗設(shè)置標準曲線，標準曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99，以保證檢測結(jié)果的準確性。每次實驗均設(shè)置空白對照和復孔，空白對照用于扣除背景值，復孔用于減少實驗誤差，提高實驗結(jié)果的可靠性。采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進一步采用LSD法進行兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進行兩兩比較。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用\chi^2檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，探討Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子與兒童哮喘病情嚴重程度、肺功能指標等之間的相關(guān)性。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。四、實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)分析4.1Th17細胞及其相關(guān)細胞因子的表達結(jié)果通過流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，哮喘兒童外周血中Th17細胞百分率顯著高于健康兒童對照組。具體數(shù)據(jù)顯示，哮喘兒童Th17細胞百分率平均值為（6.85±1.56）%，而健康兒童僅為（2.34±0.87）%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在哮喘兒童不同病情階段，Th17細胞百分率也存在明顯差異。急性發(fā)作期哮喘兒童Th17細胞百分率為（8.96±2.12）%，顯著高于緩解期的（4.52±1.03）%（P<0.05）。進一步分析急性發(fā)作期不同嚴重程度的哮喘兒童，輕度急性發(fā)作組Th17細胞百分率為（7.25±1.89）%，中度組為（9.56±2.34）%，重度組高達（12.05±2.87）%，重度組與輕度組、中度組比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且中度組與輕度組比較差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明隨著哮喘病情的加重，Th17細胞百分率逐漸升高。采用ELISA檢測IL-17的表達水平，結(jié)果表明哮喘兒童外周血漿中IL-17表達水平顯著高于健康兒童。哮喘兒童IL-17表達水平平均值為（55.68±10.25）pg/ml，健康兒童為（20.12±5.67）pg/ml，兩組差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在不同病情階段，急性發(fā)作期哮喘兒童IL-17表達水平為（78.56±15.34）pg/ml，明顯高于緩解期的（35.21±8.45）pg/ml（P<0.05）。急性發(fā)作期不同嚴重程度比較，輕度組IL-17表達水平為（60.34±12.56）pg/ml，中度組為（85.43±16.78）pg/ml，重度組為（105.67±20.12）pg/ml，重度組與輕度組、中度組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），中度組與輕度組比較差異也有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對Th17細胞百分率與IL-17表達水平進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著正相關(guān)（r=0.817，P<0.0001）。這說明Th17細胞百分率越高，IL-17的表達水平也越高。進一步分析Th17細胞百分率及IL-17表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度的相關(guān)性，結(jié)果顯示均呈正相關(guān)（r=0.649，0.873，P<0.05）。即哮喘病情越嚴重，Th17細胞百分率及IL-17表達水平越高。4.2CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的表達結(jié)果經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，哮喘兒童外周血中CD4+FOXP3+Treg細胞百分率明顯低于健康兒童對照組。哮喘兒童CD4+FOXP3+Treg細胞百分率平均值為（3.25±0.98）%，健康兒童則為（6.56±1.54）%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在不同病情階段，急性發(fā)作期哮喘兒童CD4+FOXP3+Treg細胞百分率為（2.13±0.67）%，顯著低于緩解期的（4.56±1.12）%（P<0.05）。進一步分析急性發(fā)作期不同嚴重程度的哮喘兒童，輕度急性發(fā)作組CD4+FOXP3+Treg細胞百分率為（2.56±0.89）%，中度組為（2.01±0.78）%，重度組為（1.56±0.56）%，重度組與輕度組、中度組比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），中度組與輕度組比較差異也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明隨著哮喘病情的加重，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率逐漸降低。采用ELISA檢測IL-10的表達水平，結(jié)果顯示哮喘兒童外周血漿中IL-10表達水平顯著低于健康兒童。哮喘兒童IL-10表達水平平均值為（25.67±8.45）pg/ml，健康兒童為（55.23±12.34）pg/ml，兩組差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在不同病情階段，急性發(fā)作期哮喘兒童IL-10表達水平為（15.21±5.67）pg/ml，明顯低于緩解期的（35.68±9.87）pg/ml（P<0.05）。急性發(fā)作期不同嚴重程度比較，輕度組IL-10表達水平為（20.34±7.89）pg/ml，中度組為（13.56±6.54）pg/ml，重度組為（10.12±4.56）pg/ml，重度組與輕度組、中度組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），中度組與輕度組比較差異也有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對CD4+FOXP3+Treg細胞百分率與IL-10表達水平進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著正相關(guān)（r=0.765，P<0.0001）。即CD4+FOXP3+Treg細胞百分率越高，IL-10的表達水平也越高。進一步分析CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度的相關(guān)性，結(jié)果顯示均呈負相關(guān)（r=-0.599，-0.241，P<0.05）。這表明哮喘病情越嚴重，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平越低。4.3相關(guān)性分析結(jié)果通過Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，Th17細胞百分率與IL-17表達水平呈顯著正相關(guān)（r=0.817，P<0.0001）。這意味著Th17細胞數(shù)量越多，其分泌的IL-17水平也越高，進一步表明Th17細胞在哮喘炎癥反應(yīng)中通過分泌IL-17發(fā)揮促炎作用。CD4+FOXP3+Treg細胞百分率與IL-10表達水平同樣呈顯著正相關(guān)（r=0.765，P<0.0001），說明CD4+FOXP3+Treg細胞數(shù)量的增加伴隨著IL-10分泌的增多，體現(xiàn)了CD4+FOXP3+Treg細胞通過分泌IL-10發(fā)揮免疫抑制功能。對Th17細胞與CD4+FOXP3+Treg細胞之間的相關(guān)性進行分析，結(jié)果顯示兩者呈顯著負相關(guān)（r=-0.672，P<0.0001）。這表明在兒童哮喘患者中，Th17細胞數(shù)量增多的同時，CD4+FOXP3+Treg細胞數(shù)量減少，兩者呈現(xiàn)明顯的失衡狀態(tài)。這種失衡可能打破了正常的免疫調(diào)節(jié)機制，導致促炎反應(yīng)增強，免疫抑制作用減弱，進而促進哮喘的發(fā)生發(fā)展。將Th17細胞、CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子與哮喘病情嚴重程度進行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，Th17細胞百分率及IL-17表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度呈正相關(guān)（r=0.649，0.873，P<0.05），即哮喘病情越嚴重，Th17細胞百分率及IL-17表達水平越高。CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度呈負相關(guān)（r=-0.599，-0.241，P<0.05），說明哮喘病情越嚴重，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平越低。這進一步證實了Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡與兒童哮喘病情嚴重程度密切相關(guān)，Th17細胞及其相關(guān)細胞因子的升高和CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的降低在哮喘病情進展中起到重要作用。五、Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡表達對兒童哮喘的意義5.1失衡表達與兒童哮喘發(fā)病機制的關(guān)聯(lián)Th17細胞及其分泌的IL-17在兒童哮喘發(fā)病機制中扮演著關(guān)鍵的促炎角色。當機體接觸過敏原或受到其他刺激時，Th17細胞被激活并大量增殖。IL-17作為Th17細胞的標志性細胞因子，具有強大的促炎活性。它可以直接作用于氣道上皮細胞，促使其分泌多種趨化因子，如CXCL8、CXCL1等。這些趨化因子能夠吸引中性粒細胞從血液中遷移到氣道組織，中性粒細胞在氣道內(nèi)聚集并釋放大量的蛋白酶、活性氧等物質(zhì)，導致氣道上皮細胞損傷，破壞氣道的正常結(jié)構(gòu)和功能。IL-17還能刺激氣道平滑肌細胞增殖和收縮。在哮喘患者中，氣道平滑肌細胞的異常增殖和收縮是導致氣道狹窄和高反應(yīng)性的重要原因之一。IL-17通過激活相關(guān)信號通路，促進氣道平滑肌細胞的增殖和收縮，使氣道管徑變小，氣流受限，從而引發(fā)喘息、氣促等哮喘癥狀。IL-17還可以誘導氣道成纖維細胞合成和分泌膠原蛋白等細胞外基質(zhì)成分，導致氣道壁增厚、纖維化，進一步加重氣道阻塞。CD4+FOXP3+Treg細胞及其分泌的IL-10則在兒童哮喘發(fā)病中發(fā)揮著重要的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。正常情況下，CD4+FOXP3+Treg細胞能夠抑制免疫細胞的過度活化，維持免疫平衡。在哮喘兒童體內(nèi)，CD4+FOXP3+Treg細胞數(shù)量減少或功能缺陷，無法有效發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-10作為CD4+FOXP3+Treg細胞分泌的主要免疫抑制性細胞因子，具有廣泛的抗炎作用。它可以抑制Th17細胞的活化和增殖，減少IL-17等促炎細胞因子的分泌。IL-10還能抑制抗原呈遞細胞（APC）的功能，降低其表面共刺激分子的表達，從而減弱APC對T細胞的激活作用，抑制炎癥反應(yīng)的啟動和放大。IL-10可以調(diào)節(jié)其他免疫細胞的功能，如抑制嗜酸性粒細胞的活化和脫顆粒，減少其釋放的炎癥介質(zhì)，減輕氣道炎癥。當CD4+FOXP3+Treg細胞數(shù)量減少或功能下降時，IL-10的分泌也相應(yīng)減少，無法有效抑制Th17細胞的活化和炎癥反應(yīng)。這使得Th17細胞及其分泌的IL-17等促炎細胞因子大量增加，打破了免疫平衡，導致氣道炎癥持續(xù)加劇，促進了兒童哮喘的發(fā)生和發(fā)展。5.2失衡表達對兒童哮喘病情評估的價值Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞的失衡表達與兒童哮喘病情嚴重程度之間存在緊密的關(guān)聯(lián)，這使得其在兒童哮喘病情評估方面具有重要價值。從本研究的實驗結(jié)果來看，Th17細胞百分率及IL-17表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度呈正相關(guān)。隨著哮喘病情從輕度向重度發(fā)展，Th17細胞百分率逐漸升高，IL-17表達水平也顯著增加。這表明Th17細胞及其分泌的IL-17在哮喘病情進展中發(fā)揮著重要的促炎作用，其表達水平的變化可以直觀地反映哮喘病情的嚴重程度。在臨床實踐中，Th17細胞及其相關(guān)細胞因子的檢測可以為哮喘病情評估提供有力的依據(jù)。例如，通過檢測外周血中Th17細胞的百分率和IL-17的表達水平，醫(yī)生可以更準確地判斷患兒哮喘的嚴重程度。對于Th17細胞百分率和IL-17表達水平較高的患兒，提示其哮喘病情可能較為嚴重，需要更積極的治療和密切的監(jiān)測。這有助于醫(yī)生及時調(diào)整治療方案，如增加糖皮質(zhì)激素的劑量或聯(lián)合使用其他抗炎藥物，以控制氣道炎癥，緩解哮喘癥狀。CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平與兒童哮喘病情嚴重程度呈負相關(guān)。哮喘病情越嚴重，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平越低。這說明CD4+FOXP3+Treg細胞及其分泌的IL-10在哮喘病情發(fā)展中起著重要的免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，其數(shù)量和功能的下降與哮喘病情的惡化密切相關(guān)。檢測CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子也為哮喘病情評估提供了重要信息。當檢測到患兒外周血中CD4+FOXP3+Treg細胞百分率較低，IL-10表達水平也較低時，提示患兒的免疫調(diào)節(jié)功能可能受損，哮喘病情可能處于進展狀態(tài)，需要加強免疫調(diào)節(jié)治療。通過監(jiān)測這些指標的變化，醫(yī)生可以評估治療效果，判斷病情是否得到有效控制。如果在治療過程中，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率逐漸升高，IL-10表達水平也有所增加，說明治療可能有效，免疫調(diào)節(jié)功能正在恢復，哮喘病情得到改善。Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡表達在兒童哮喘病情評估中具有重要的應(yīng)用前景。與傳統(tǒng)的哮喘病情評估指標如肺功能檢測、癥狀評分等相比，Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的檢測具有獨特的優(yōu)勢。肺功能檢測雖然能反映氣道阻塞的程度，但在哮喘發(fā)作間歇期，部分患兒的肺功能可能恢復正常，無法準確反映氣道炎癥的狀態(tài)。而Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的檢測可以更直接地反映哮喘的免疫病理機制，即使在癥狀不明顯或肺功能正常時，也能檢測到免疫失衡的存在，為早期診斷和病情評估提供依據(jù)。將Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡表達指標與其他臨床指標相結(jié)合，可以提高哮喘病情評估的準確性和全面性。例如，將Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞指標與肺功能檢測、呼出氣一氧化氮（FeNO）檢測、過敏原檢測等相結(jié)合，醫(yī)生可以從多個角度了解患兒的哮喘病情，制定更個性化、精準的治療方案。5.3失衡表達對兒童哮喘治療的啟示Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡表達為兒童哮喘治療提供了新的靶點和方向。調(diào)節(jié)這兩種細胞的失衡狀態(tài)成為治療兒童哮喘的關(guān)鍵策略之一。從細胞層面來看，可通過調(diào)節(jié)Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞的分化、增殖和功能來實現(xiàn)。在細胞分化方面，研究發(fā)現(xiàn)某些細胞因子和信號通路在Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞分化中起關(guān)鍵作用。如TGF-β與IL-6共同作用可促進Th17細胞分化，而單獨的TGF-β則可誘導CD4+FOXP3+Treg細胞分化。因此，通過調(diào)節(jié)這些細胞因子的水平或干預(yù)相關(guān)信號通路，有可能調(diào)控Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞的分化方向，恢復其平衡狀態(tài)。在細胞增殖方面，可尋找能夠抑制Th17細胞增殖，同時促進CD4+FOXP3+Treg細胞增殖的方法。一些藥物或生物制劑可能具有這樣的作用，例如某些中藥提取物可能通過調(diào)節(jié)細胞周期相關(guān)蛋白的表達，抑制Th17細胞的增殖，同時促進CD4+FOXP3+Treg細胞的增殖。在細胞功能方面，可通過調(diào)節(jié)Th17細胞和CD4+FOXP3+Treg細胞分泌的細胞因子來改善其功能。如使用IL-17抗體阻斷IL-17的作用，可減輕Th17細胞介導的炎癥反應(yīng)；補充外源性IL-10或TGF-β，可增強CD4+FOXP3+Treg細胞的免疫抑制功能。以細胞因子為靶點的治療也是基于Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡表達的重要治療思路。IL-17作為Th17細胞分泌的關(guān)鍵促炎細胞因子，成為治療兒童哮喘的重要靶點。目前，針對IL-17的單克隆抗體已在一些臨床試驗中進行研究。這些抗體能夠特異性地結(jié)合IL-17，阻斷其與受體的結(jié)合，從而抑制IL-17介導的炎癥信號通路，減輕氣道炎癥。在一些哮喘動物模型中，使用IL-17單克隆抗體治療后，氣道炎癥明顯減輕，肺功能得到改善。IL-10作為CD4+FOXP3+Treg細胞分泌的重要免疫抑制性細胞因子，也具有潛在的治療價值。通過基因治療或細胞治療的方法，增加哮喘兒童體內(nèi)IL-10的表達或活性，可能有助于恢復免疫平衡，抑制氣道炎癥。例如，將攜帶IL-10基因的載體導入哮喘兒童的免疫細胞中，使其表達并分泌更多的IL-10；或者將體外擴增的高表達IL-10的CD4+FOXP3+Treg細胞回輸?shù)交純后w內(nèi)，增強免疫抑制功能。除了IL-17和IL-10，其他與Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞相關(guān)的細胞因子如IL-23、TGF-β等也可作為治療靶點。IL-23是Th17細胞分化和存活的關(guān)鍵細胞因子，阻斷IL-23信號通路可能抑制Th17細胞的活化和增殖。TGF-β在調(diào)節(jié)Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞平衡中也起著重要作用，通過調(diào)節(jié)TGF-β的活性或信號通路，可能改善免疫失衡狀態(tài)。調(diào)節(jié)Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡及以細胞因子為靶點的治療為兒童哮喘治療帶來了新的希望。未來需要進一步深入研究這些治療策略的具體機制和應(yīng)用效果，開發(fā)更加安全、有效的治療方法，以提高兒童哮喘的治療水平，改善患兒的生活質(zhì)量。六、結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論本研究通過對哮喘兒童和健康兒童的對比研究，深入分析了Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞在兒童哮喘中的失衡表達及意義。研究結(jié)果表明，哮喘兒童外周血中Th17細胞百分率及IL-17表達水平顯著高于健康兒童，且在急性發(fā)作期高于緩解期，隨著哮喘病情嚴重程度的增加而升高。這充分說明Th17細胞及其分泌的IL-17作為促炎因素，積極參與了兒童哮喘的發(fā)病過程，并且與哮喘病情的嚴重程度密切相關(guān)。Th17細胞的活化和IL-17的大量分泌，引發(fā)了強烈的氣道炎癥反應(yīng)，導致氣道組織損傷和功能障礙。哮喘兒童外周血中CD4+FOXP3+Treg細胞百分率及IL-10表達水平顯著低于健康兒童，在急性發(fā)作期低于緩解期，且隨著哮喘病情嚴重程度的增加而降低。這表明CD4+FOXP3+Treg細胞及其分泌的IL-10在兒童哮喘發(fā)病中發(fā)揮著重要的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。CD4+FOXP3+Treg細胞數(shù)量的減少和功能的缺陷，以及IL-10分泌的不足，使得免疫調(diào)節(jié)失衡，無法有效抑制氣道炎癥，從而促進了哮喘的發(fā)生和發(fā)展。相關(guān)性分析進一步證實，Th17細胞百分率與IL-17表達水平呈顯著正相關(guān)，CD4+FOXP3+Treg細胞百分率與IL-10表達水平呈顯著正相關(guān)。Th17細胞與CD4+FOXP3+Treg細胞呈顯著負相關(guān)。Th17細胞、CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子與兒童哮喘病情嚴重程度密切相關(guān)。這些相關(guān)性結(jié)果清晰地揭示了Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在兒童哮喘發(fā)病機制中的關(guān)鍵作用，Th17細胞的增多和CD4+FOXP3+Treg細胞的減少打破了正常的免疫平衡，導致促炎反應(yīng)增強，免疫抑制作用減弱，進而推動哮喘病情的進展。Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞失衡在兒童哮喘的發(fā)病機制中起著核心作用，與哮喘病情的嚴重程度緊密相連。這一研究結(jié)果為兒童哮喘的發(fā)病機制提供了新的視角，彌補了傳統(tǒng)Th1/Th2失衡學說的不足，進一步完善了兒童哮喘的發(fā)病機制理論。同時，也為兒童哮喘的診斷、治療和預(yù)防提供了重要的理論依據(jù)和潛在的治療靶點。在臨床實踐中，可以通過檢測Th17/CD4+FOXP3+Treg細胞及其相關(guān)細胞因子的表達水平，更準確地評估哮喘兒童的病情嚴重程度和預(yù)后。以調(diào)節(jié)Th17/