12規范性引用文件 (不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版木。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適NY5035無公害食品肉雞飼養獸藥使用準則NY5036無公害食品肉雞飼養獸醫防疫準則NY/T5038無公害食品肉雞飼養管理準則中華人民共和國動物防疫法(第八屆全國人大常委會1997年7月3日頒布)中華人民共和國獸藥典(2000版)3術語和定義商品肉雞大腸桿菌病型，是日前危害商品肉雞業的一種重要的細菌性疾病之一。4.1診斷原則4.2流行特點4.2.1發病日齡各年齡商品肉雞均易感。20～45日齡的商品肉雞發病流行最普遍。臍炎型發病較早，出生后即可能發生。其他病型4~10日齡即可能發生，通常30日齡前后的肉仔雞發病較多。4.2.2發病率和病死率生條件、防治措施是否及時有效而差異較大。一般發病率為11%~69%,病死率3.8%~72.9%。4.2.3發病季節4.2.4.1消化道飼料及飲水被大腸桿菌污染，肉仔雞采食或飲用后通過消化道而感染。24.2.4.2呼吸道4.3臨床癥狀b)臍炎型：主要發生于孵化后期的胚胎及出殼后的雛雞。病死率為3%~10%,有時高達40%。c)腸炎型：主要表現腹瀉，類便呈黃綠色水樣，消瘦，脫水，最后衰竭死亡。d)氣囊炎型：多由敗血型轉變而米，發生氣囊炎與肺炎，3周齡以上肉仔雞多發。縮、凹陷，失明(多數為單側失明)。g)腦炎型：發病雞以嗜睡為主要特征。4.4.2臍炎型4.4.5關節炎型3病變關節(以跗關節多見)腫脹，滑液增多、混濁，關節囊內有干酪樣物，有時出現關節粘連。4.5病原學診斷4.5.1病料的采集當雞群發病后，最好將典型病例活體或整個4.5.2病原檢驗程序病原檢驗程序應按圖1所示進行。待檢病料待檢病料增菌培養血清學試驗鑒別培養圖1大腸桿菌分離培養與鑒定程序框圖4.5.3病原分離培養培養基上或增菌肉湯中，37℃培養24h。用抗菌藥物治療過的病雞，在初步分離細菌時，應先進行增菌培養，然后進行鑒別培養。送檢尸體剖開后應先進行接種培養，然后觀察各內臟器官的病理變化。4.5.4病原體形態學觀察4.5.4.1菌落特征大腸桿菌在營養瓊脂平板培養基上形成的菌落邊緣整齊、表面光滑、小、無色半透明、露珠樣菌落；在麥康凱瓊脂培養基上菌落呈粉紅4.5.4.2細菌形態芽胞的短小桿菌，多單在或成雙而不形成長鏈，多數有鞭毛，能運動。4.5.5生化試驗鑒定4取分離物24h肉湯培養物腹腔接種18g~22g小鼠，每4.5.7血清學檢測5防治5.1.1每批雞出欄后應對雞舍、用具進行典》的規定。清理完畢到下次進雞前空舍至少2周。5.2飼養方式5.3飲水管理5.4喂料管理自由采食或定期飼喂。不應飼喂發霉變質的飼料。上市前7d,飼料中應不含任何藥物或藥物飼5.6藥物防治5(規范性附錄)A.1糖發酵試驗A.1.1試驗原理鑒別上具有一定的意義，是進行大腸桿菌鑒A.1.2培養基蛋白胨10g,牛肉浸膏3g,氯化鈉5g,I.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1ml作指示劑，蒸餾水1000ml,調至pH7.4-7.6,分裝于事先裝有小倒管的小試管內，于121℃高壓滅菌15min。供發酵試驗常用的糖有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露務種糖的加量一般為0.5%～1%,但以1%為好。除萄萄糖、甘露醇在培養基高壓滅菌前加入外，乳糖、蔗糖和麥芽糖則需先配制成10%～20%水溶液，過濾除菌或115℃加熱15min滅菌后，以無菌A.1.3試驗方法以無菌操作，用接種環取少量供試大腸桿菌純培養物接種于糖發酵培養基中，37℃恒溫培養，每天觀察并記錄結果，根據需要可培養觀察10d。A.1.4結果判定或產氣。大多數菌株在24h內能分解乳糖、麥芽糖，半數菌株能發酵蔗糖。也可采用半固體瓊脂培養基，即在上述培養基內按0.4%～0.6%加入瓊脂，省去小倒管，做穿刺接種。若分解糖、醇類產酸產氣，則培養基變為黃色且沿穿刺線或管壁及管底處有微小氣泡形成。A.2甲基紅(MR)試驗A.2.1試驗原理細菌在葡萄糖代謝中生成丙酮酸，丙酮酸再被分解生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，使pH降至4.5或更低，甲基紅指示劑呈現紅色。A.2.2培養基磷酸氫二鉀(K?HPO?)5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,蒸餾水1000ml。各成分溶解后調至pH7.2,過濾，分裝試管，121℃高壓滅菌15min備用。A.2.3指示劑甲基紅0.1g,95%酒精300ml,蒸餾水200mlA.2.4試驗方法與結果判定在培養基中接種少量大腸桿菌培養物，于37℃培養2d~5d,然后于每5ml培養物中加入甲基紅指示劑5滴～6滴，立即觀察結果，呈鮮紅色的判為陽性反應，弱陽性的為橘紅色，陰性的為黃色。若48h培養物為陰性的(可取部分培養液試驗),則應繼續培養4d~5d重試。A.3維-培(V-P)二氏試驗A.3.1試驗原理6A.3.2培養基A.3.3試劑A.3.3.1奧梅拉(O-Meara)氏法試劑肌酸0.3g,氫氧化鉀(KOH)40g,蒸餾水100m1。將KOII溶于蒸餾水中后加入肌酸。A.3.3.2貝克脫(Barrit)氏法試劑甲液為6%a-萘酚酒精溶液；乙液為40%KOH水溶液。A.3.4.1奧梅拉氏法取少量營養瓊脂幼齡培養物接種，37℃培養48h,在每1ml培養物中加入相應試劑1ml,充分混勻后置于室溫或37℃下4h觀察結果，呈現紅色者為陽性。A.3.4.2貝克脫氏法按A.3.4.1的方法接種并培養4d后，在每2.5ml培養物中加入相應試劑甲液0.6ml,再加乙液0.2ml,充分混勻，陽性反應即刻或在5min內呈現紅色，若無紅色出現，可靜置于室溫或37℃下2h內觀察結果，仍不呈現紅色者判為陰性。大腸桿菌的維-培(V-P)二氏試驗陰性。A.4靛基質(吲哚，indole)試驗A.4.1試驗原理細菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成丙酮酸、淀基質(吲哚)、氨等，靛基質與試劑中的對二甲基A.4.2培養基蛋白胨(或胰蛋白陳)20g,氯化鈉5g,蒸餾水1000ml。溶解后調至pll7.4,分裝小試管，121A.4.3試劑對二甲氨基苯甲醛1g,95%灑精95ml,純濃鹽酸20ml。A.4.3.2柯凡克(Kovac)氏試劑對二甲氨基苯甲醛5g,純戊醇75ml,純濃鹽酸25ml。A.4.4試驗方法與結果判定取純培養物少量接種后置于37℃培養24h~48h(必要時可培養4d~5d)后，每2ml培養物中加入上述試劑中的任何一種試劑2滴~3滴，輕搖試管，呈紅色者為陽性。或先加少量已醚或二甲苯，A.5.1試驗原理A.5.2培養基7氯化鈉5g,硫酸鎂(MgS0?·7H?O)0.2g,磷酸二氫銨1g,磷酸二氫鉀1g,檸檬酸鈉2g,瓊脂15g,0.2%溴麝香草酚藍40ml,蒸餾水1000ml。將各成分(指示劑除外)加熱溶解后調至pH6.8,然后加入溴麝香草酚藍指示劑，混勻后分裝試管，121℃高壓滅菌15min,制成斜面備用。A.5.3試驗方法及結果判定8B.1紙片擴散法B.1.3菌液的準備18h,取出作為原菌液。再用普通肉湯培養基或1%無菌蛋白胨水把原菌液作1:1000倍稀釋后備用。B.1.4操作步驟B.1.4.1涂菌B.1.4.2放置紙片B.1.5結果判定B.1.6注意事項B.2稀釋法B.2.1藥液的準備B.2.2培養基準備普通肉湯培養基，分裝成13