p16、p53、EGFR和Ki67：宮頸病變進(jìn)程中的關(guān)鍵分子標(biāo)記物一、引言1.1研究背景宮頸癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅女性健康的常見惡性腫瘤之一，在女性癌癥相關(guān)死亡原因中位居前列。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)年全球?qū)m頸癌新發(fā)病例約60.4萬(wàn)例，死亡病例約34.2萬(wàn)例。在我國(guó)，宮頸癌同樣是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的高發(fā)疾病，嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量和生命健康。由于人口基數(shù)龐大，盡管近年來隨著篩查和防治工作的推進(jìn)，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率有所下降，但新發(fā)病例數(shù)仍不容小覷。宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）作為宮頸癌的癌前病變，其發(fā)生發(fā)展與宮頸癌密切相關(guān)。CIN是一組與宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的癌前病變的統(tǒng)稱，反映了宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程，包括宮頸不典型增生和宮頸原位癌。根據(jù)病變程度，CIN可分為CIN1、CIN2和CIN3級(jí)，級(jí)別越高，發(fā)展為浸潤(rùn)癌的風(fēng)險(xiǎn)越大。從CIN發(fā)展為宮頸癌通常需要經(jīng)歷較長(zhǎng)的時(shí)間，約10-20年不等，這為早期診斷和干預(yù)提供了時(shí)間窗。然而，并非所有的CIN都會(huì)進(jìn)展為宮頸癌，部分低級(jí)別CIN（如CIN1）具有一定的自然消退傾向，而高級(jí)別CIN（如CIN2和CIN3）若不及時(shí)治療，則有較高的癌變風(fēng)險(xiǎn)。臨床上對(duì)于CIN的準(zhǔn)確診斷和分級(jí)存在一定的挑戰(zhàn)，由于病變的復(fù)雜性和多樣性，僅依靠傳統(tǒng)的組織學(xué)形態(tài)學(xué)觀察，有時(shí)難以準(zhǔn)確判斷病變的程度和發(fā)展趨勢(shì)，容易導(dǎo)致漏診或誤診。因此，尋找有效的生物學(xué)標(biāo)志物，對(duì)于提高CIN的診斷準(zhǔn)確性、預(yù)測(cè)病變的進(jìn)展以及指導(dǎo)臨床治療具有重要的意義。p16、p53、EGFR和Ki67作為與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的分子，在宮頸癌及CIN的研究中備受關(guān)注。p16是一種重要的抑癌基因，其編碼的蛋白能夠通過抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）和細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的復(fù)合物活性，從而阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，對(duì)細(xì)胞增殖起到負(fù)調(diào)控作用。在正常宮頸組織中，p16的表達(dá)水平較低，但在CIN和宮頸癌組織中，由于人乳頭瘤病毒（HPV）感染等因素導(dǎo)致的細(xì)胞周期紊亂，p16的表達(dá)常常出現(xiàn)異常升高，且其表達(dá)水平與病變的嚴(yán)重程度相關(guān)，可作為CIN和宮頸癌診斷及分級(jí)的重要參考指標(biāo)。p53基因是一種廣泛研究的抑癌基因，其編碼的p53蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。正常情況下，p53蛋白通過監(jiān)測(cè)細(xì)胞DNA的完整性，當(dāng)DNA受損時(shí)，p53蛋白被激活，促使細(xì)胞停滯在G1期進(jìn)行DNA修復(fù)，若修復(fù)失敗，則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而防止細(xì)胞惡變。然而，在腫瘤發(fā)生過程中，p53基因常發(fā)生突變，導(dǎo)致p53蛋白功能異常，無法正常發(fā)揮其抑癌作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在宮頸癌及CIN中，p53基因的突變和蛋白表達(dá)異常較為常見，與病變的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)。EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）是一種跨膜受體酪氨酸激酶，屬于ErbB受體家族成員。EGFR通過與配體結(jié)合激活下游信號(hào)通路，如Ras-Raf-MEK-ERK和PI3K-AKT等，參與細(xì)胞的增殖、分化、遷移和存活等生物學(xué)過程。在許多惡性腫瘤中，包括宮頸癌，EGFR常呈過表達(dá)狀態(tài)，其過表達(dá)與腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移能力以及不良預(yù)后相關(guān)。在CIN和宮頸癌中，EGFR的異常表達(dá)可能促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞的異常增殖和轉(zhuǎn)化，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Ki67是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核抗原，在細(xì)胞增殖的G1、S、G2和M期均有表達(dá)，而在靜止期（G0期）則不表達(dá)。Ki67的表達(dá)水平可反映細(xì)胞的增殖活性，其陽(yáng)性表達(dá)率越高，表明細(xì)胞增殖越活躍。在腫瘤組織中，Ki67的高表達(dá)通常與腫瘤的惡性程度、侵襲性和預(yù)后不良相關(guān)。在CIN和宮頸癌中，檢測(cè)Ki67的表達(dá)有助于評(píng)估病變組織的細(xì)胞增殖情況，對(duì)判斷病變的進(jìn)展和預(yù)后具有重要價(jià)值。綜上所述，p16、p53、EGFR和Ki67在宮頸癌及CIN的發(fā)生發(fā)展過程中均扮演著重要角色。深入研究它們?cè)贑IN及宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義，對(duì)于揭示宮頸癌的發(fā)病機(jī)制、提高早期診斷水平、優(yōu)化臨床治療方案以及改善患者預(yù)后具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2研究目的本研究旨在通過免疫組織化學(xué)等方法，系統(tǒng)檢測(cè)p16、p53、EGFR和Ki67在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，分析它們?cè)诓煌∽兘M織中的表達(dá)差異，探討這四種分子在CIN向?qū)m頸鱗癌發(fā)展過程中的作用機(jī)制，明確它們與CIN分級(jí)、宮頸鱗癌的臨床病理參數(shù)（如腫瘤分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間的相關(guān)性。期望通過本研究，為CIN和宮頸鱗癌的早期診斷、病情評(píng)估、預(yù)后判斷以及臨床治療方案的選擇提供新的生物學(xué)標(biāo)志物和理論依據(jù)，從而提高對(duì)這兩種疾病的診治水平，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。二、材料與方法2.1研究對(duì)象選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]期間收治的患者作為研究對(duì)象。其中，宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者共[X]例，包括CIN1級(jí)[X1]例、CIN2級(jí)[X2]例、CIN3級(jí)[X3]例；宮頸鱗癌患者[Y]例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或其他針對(duì)宮頸病變的特殊治療，且均簽署了知情同意書，自愿參與本研究。同時(shí)，選取因子宮肌瘤等良性疾病行子宮切除術(shù)時(shí)切除的正常宮頸組織[Z]例作為對(duì)照。CIN患者年齡范圍在[最小年齡1]-[最大年齡1]歲，平均年齡為（[平均年齡1]±[標(biāo)準(zhǔn)差1]）歲；宮頸鱗癌患者年齡范圍在[最小年齡2]-[最大年齡2]歲，平均年齡為（[平均年齡2]±[標(biāo)準(zhǔn)差2]）歲；正常宮頸組織來源患者年齡范圍在[最小年齡3]-[最大年齡3]歲，平均年齡為（[平均年齡3]±[標(biāo)準(zhǔn)差3]）歲。對(duì)三組患者的年齡進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示無顯著性差異（P>0.05），具有可比性。所有研究對(duì)象的組織標(biāo)本均經(jīng)過病理科醫(yī)師嚴(yán)格的病理學(xué)診斷，依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診和分級(jí)。CIN及宮頸鱗癌的診斷均結(jié)合了宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）、陰道鏡檢查及組織活檢結(jié)果，確保診斷的準(zhǔn)確性。正常宮頸組織標(biāo)本經(jīng)病理檢查證實(shí)無上皮內(nèi)瘤變及其他病變。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1免疫組化實(shí)驗(yàn)免疫組化實(shí)驗(yàn)采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（SP）法，具體操作步驟如下：首先，將收集的組織標(biāo)本制成4μm厚的石蠟切片，將切片置于60℃恒溫箱中烘烤2小時(shí)，使切片牢固附著于載玻片上。隨后進(jìn)行脫蠟水化處理，依次將切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15分鐘以脫蠟，再分別放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘，接著依次經(jīng)過95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡3分鐘，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片浸入0.01mol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，采用微波修復(fù)法，將裝有切片和緩沖液的容器放入微波爐中，高火加熱至沸騰后斷電，間隔5分鐘，反復(fù)3次，使抗原充分暴露。修復(fù)完成后自然冷卻至室溫，用PBS緩沖液（pH7.2-7.4）沖洗切片3次，每次5分鐘。為了阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，將3%過氧化氫溶液滴加在切片上，室溫孵育15分鐘，之后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，以減少非特異性染色。甩去多余的封閉液，不洗，分別滴加兔抗人p16單克隆抗體、兔抗人p53單克隆抗體、兔抗人EGFR單克隆抗體和兔抗人Ki67單克隆抗體（抗體稀釋度均按照試劑盒說明書進(jìn)行稀釋），4℃冰箱孵育過夜。次日取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30分鐘，再用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30分鐘，然后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。顯色時(shí)，使用DAB顯色試劑盒，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，將適量的DAB顯色液滴加在切片上，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3分鐘，自來水沖洗返藍(lán)。依次經(jīng)過梯度乙醇脫水（75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ各浸泡3分鐘），二甲苯透明（二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡5分鐘），最后用中性樹膠封片。實(shí)驗(yàn)過程中，用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。所用主要試劑包括兔抗人p16單克隆抗體、兔抗人p53單克隆抗體、兔抗人EGFR單克隆抗體、兔抗人Ki67單克隆抗體（均購(gòu)自[抗體生產(chǎn)公司名稱]），免疫組化檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自[試劑盒生產(chǎn)公司名稱]），DAB顯色試劑盒（購(gòu)自[顯色試劑盒生產(chǎn)公司名稱]），枸櫞酸鹽緩沖液、PBS緩沖液等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。主要儀器包括石蠟切片機(jī)（型號(hào)：[切片機(jī)型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[切片機(jī)生產(chǎn)公司名稱]），恒溫箱（型號(hào)：[恒溫箱型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[恒溫箱生產(chǎn)公司名稱]），微波爐（型號(hào)：[微波爐型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[微波爐生產(chǎn)公司名稱]），光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：[顯微鏡型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[顯微鏡生產(chǎn)公司名稱]）。2.2.2結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法在光學(xué)顯微鏡下對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行判讀。p16、p53、EGFR陽(yáng)性染色主要定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，Ki67陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性染色。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分與染色強(qiáng)度得分相乘，0分為陰性（-），1-4分為弱陽(yáng)性（+），5-8分為陽(yáng)性（++），9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。2.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，多組間比較采用卡方檢驗(yàn)，兩兩比較采用Bonferroni校正法。分析p16、p53、EGFR和Ki67的表達(dá)與CIN分級(jí)、宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性時(shí)，采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、研究結(jié)果3.1p16在CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示，p16在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率存在明顯差異。在正常宮頸組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率較低，僅為[X1]%（[陽(yáng)性例數(shù)1]/[總例數(shù)1]），且陽(yáng)性表達(dá)主要呈弱陽(yáng)性，多位于基底層細(xì)胞。在CIN1級(jí)組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率為[X2]%（[陽(yáng)性例數(shù)2]/[總例數(shù)2]），其中部分為弱陽(yáng)性表達(dá)，部分為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞分布范圍較正常宮頸組織有所擴(kuò)大，但仍主要集中在鱗狀上皮的下1/3層。在CIN2級(jí)組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)一步升高至[X3]%（[陽(yáng)性例數(shù)3]/[總例數(shù)3]），陽(yáng)性強(qiáng)度多為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮的下2/3層。CIN3級(jí)組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[X4]%（[陽(yáng)性例數(shù)4]/[總例數(shù)4]），大部分呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞幾乎累及整個(gè)鱗狀上皮層。在宮頸鱗癌組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到[X5]%（[陽(yáng)性例數(shù)5]/[總例數(shù)5]），均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布于整個(gè)癌組織。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p16在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體卡方值]，P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果顯示，正常宮頸組織與CIN1級(jí)組織、CIN1級(jí)組織與CIN2級(jí)組織、CIN2級(jí)組織與CIN3級(jí)組織、CIN3級(jí)組織與宮頸鱗癌組織之間p16陽(yáng)性表達(dá)率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，Bonferroni校正法）。這表明隨著CIN病變程度的加重以及向?qū)m頸鱗癌的發(fā)展，p16的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，且陽(yáng)性強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，提示p16的異常高表達(dá)與CIN的進(jìn)展及宮頸鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。3.2p53在CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)結(jié)果免疫組化染色顯示，p53在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)存在顯著差異。在正常宮頸組織中，p53呈低表達(dá)或幾乎不表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為[Y1]%（[陽(yáng)性例數(shù)Y1]/[總例數(shù)Y1]），且主要為陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于基底層少量細(xì)胞。在CIN1級(jí)組織中，p53陽(yáng)性表達(dá)率為[Y2]%（[陽(yáng)性例數(shù)Y2]/[總例數(shù)Y2]），部分呈弱陽(yáng)性，部分呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞較正常宮頸組織有所增多，但仍局限于鱗狀上皮下1/3層的部分細(xì)胞。CIN2級(jí)組織中，p53陽(yáng)性表達(dá)率上升至[Y3]%（[陽(yáng)性例數(shù)Y3]/[總例數(shù)Y3]），陽(yáng)性強(qiáng)度多為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮下2/3層。CIN3級(jí)組織中，p53陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)一步升高至[Y4]%（[陽(yáng)性例數(shù)Y4]/[總例數(shù)Y4]），多數(shù)為陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞幾乎累及整個(gè)鱗狀上皮層。在宮頸鱗癌組織中，p53陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[Y5]%（[陽(yáng)性例數(shù)Y5]/[總例數(shù)Y5]），以強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主，陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布于癌組織中。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p53在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體卡方值]，P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果表明，正常宮頸組織與CIN1級(jí)組織、CIN1級(jí)組織與CIN2級(jí)組織、CIN2級(jí)組織與CIN3級(jí)組織、CIN3級(jí)組織與宮頸鱗癌組織之間p53陽(yáng)性表達(dá)率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，Bonferroni校正法）。這說明隨著CIN病變程度的加重以及向?qū)m頸鱗癌的發(fā)展，p53的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，陽(yáng)性強(qiáng)度也逐漸增強(qiáng)，提示p53表達(dá)的異常改變?cè)贑IN的進(jìn)展和宮頸鱗癌的發(fā)生過程中可能發(fā)揮重要作用。3.3EGFR在CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)結(jié)果免疫組化染色顯示，EGFR在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)存在明顯差異。在正常宮頸組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率較低，為[Z1]%（[陽(yáng)性例數(shù)Z1]/[總例數(shù)Z1]），且主要呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于鱗狀上皮的基底層及副基底層，染色部位主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈現(xiàn)淡黃色顆粒狀。在CIN1級(jí)組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率為[Z2]%（[陽(yáng)性例數(shù)Z2]/[總例數(shù)Z2]），陽(yáng)性強(qiáng)度以弱陽(yáng)性和陽(yáng)性為主，陽(yáng)性細(xì)胞分布范圍較正常宮頸組織有所擴(kuò)大，可累及鱗狀上皮下1/3-1/2層，細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)均可見棕黃色陽(yáng)性染色顆粒。CIN2級(jí)組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率上升至[Z3]%（[陽(yáng)性例數(shù)Z3]/[總例數(shù)Z3]），陽(yáng)性強(qiáng)度多為陽(yáng)性，部分呈強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮下2/3層，染色強(qiáng)度較CIN1級(jí)組織增強(qiáng)，棕黃色染色顆粒更為明顯。CIN3級(jí)組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)一步升高至[Z4]%（[陽(yáng)性例數(shù)Z4]/[總例數(shù)Z4]），多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞幾乎累及整個(gè)鱗狀上皮層，細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)均可見深棕褐色陽(yáng)性染色顆粒。在宮頸鱗癌組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[Z5]%（[陽(yáng)性例數(shù)Z5]/[總例數(shù)Z5]），均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布于整個(gè)癌組織，染色強(qiáng)度深，呈現(xiàn)棕褐色，細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)的陽(yáng)性染色均十分顯著。為進(jìn)一步探究EGFR基因在CIN及宮頸鱗癌中的變化情況，采用熒光原位雜交（FISH）技術(shù)對(duì)部分組織標(biāo)本進(jìn)行了EGFR基因擴(kuò)增檢測(cè)。結(jié)果顯示，在正常宮頸組織中，未檢測(cè)到EGFR基因擴(kuò)增現(xiàn)象。在CIN1級(jí)組織中，EGFR基因擴(kuò)增率為[擴(kuò)增例數(shù)CIN1/總例數(shù)CIN1]；CIN2級(jí)組織中，EGFR基因擴(kuò)增率為[擴(kuò)增例數(shù)CIN2/總例數(shù)CIN2]；CIN3級(jí)組織中，EGFR基因擴(kuò)增率為[擴(kuò)增例數(shù)CIN3/總例數(shù)CIN3]；宮頸鱗癌組織中，EGFR基因擴(kuò)增率明顯升高，達(dá)到[擴(kuò)增例數(shù)宮頸鱗癌/總例數(shù)宮頸鱗癌]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，EGFR在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體卡方值]，P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果表明，正常宮頸組織與CIN1級(jí)組織、CIN1級(jí)組織與CIN2級(jí)組織、CIN2級(jí)組織與CIN3級(jí)組織、CIN3級(jí)組織與宮頸鱗癌組織之間EGFR陽(yáng)性表達(dá)率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，Bonferroni校正法）。同時(shí)，EGFR基因擴(kuò)增率在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織之間也存在顯著差異（χ2=[具體卡方值]，P＜0.05），且隨著病變程度的加重，EGFR基因擴(kuò)增率逐漸升高。這提示EGFR的過表達(dá)及基因擴(kuò)增與CIN的進(jìn)展及宮頸鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，在宮頸病變的發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用。3.4Ki67在CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示，Ki67在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度存在明顯差異。在正常宮頸組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率較低，僅為[W1]%（[陽(yáng)性例數(shù)W1]/[總例數(shù)W1]），且陽(yáng)性細(xì)胞主要位于基底層及副基底層，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度多為弱陽(yáng)性，細(xì)胞核呈現(xiàn)淡黃色染色。在CIN1級(jí)組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率為[W2]%（[陽(yáng)性例數(shù)W2]/[總例數(shù)W2]），陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮下1/3-1/2層，陽(yáng)性強(qiáng)度以弱陽(yáng)性和陽(yáng)性為主，細(xì)胞核染色較正常宮頸組織加深，呈現(xiàn)棕黃色。CIN2級(jí)組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率上升至[W3]%（[陽(yáng)性例數(shù)W3]/[總例數(shù)W3]），陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮下2/3層，陽(yáng)性強(qiáng)度多為陽(yáng)性，部分呈強(qiáng)陽(yáng)性，細(xì)胞核染色進(jìn)一步加深，棕黃色更為明顯。CIN3級(jí)組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[W4]%（[陽(yáng)性例數(shù)W4]/[總例數(shù)W4]），陽(yáng)性細(xì)胞幾乎累及整個(gè)鱗狀上皮層，多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞核染色深，呈現(xiàn)棕褐色。在宮頸鱗癌組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到[W5]%（[陽(yáng)性例數(shù)W5]/[總例數(shù)W5]），均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞彌漫分布于整個(gè)癌組織，細(xì)胞核染色極為顯著，呈現(xiàn)深棕褐色。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Ki67在正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織及宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=[具體卡方值]，P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果表明，正常宮頸組織與CIN1級(jí)組織、CIN1級(jí)組織與CIN2級(jí)組織、CIN2級(jí)組織與CIN3級(jí)組織、CIN3級(jí)組織與宮頸鱗癌組織之間Ki67陽(yáng)性表達(dá)率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，Bonferroni校正法）。這表明隨著CIN病變程度的加重以及向?qū)m頸鱗癌的發(fā)展，Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，陽(yáng)性強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，提示Ki67的高表達(dá)與細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)密切相關(guān)，在CIN的進(jìn)展和宮頸鱗癌的發(fā)生過程中，細(xì)胞的增殖活性逐漸增強(qiáng)，可能是病變發(fā)展的重要因素之一。3.5四種標(biāo)志物表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果采用Spearman秩相關(guān)分析對(duì)p16、p53、EGFR和Ki67在CIN及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：p16與p53在CIN及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)1]，P＜0.05），即隨著p16表達(dá)水平的升高，p53的表達(dá)水平也隨之升高。p16與EGFR的表達(dá)同樣呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)2]，P＜0.05），表明p16表達(dá)增強(qiáng)時(shí)，EGFR的表達(dá)也增強(qiáng)。p16與Ki67的表達(dá)亦呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)3]，P＜0.05），說明p16表達(dá)升高與細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)相關(guān)。p53與EGFR的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)4]，P＜0.05），即p53表達(dá)水平的增加伴隨著EGFR表達(dá)的升高。p53與Ki67的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)5]，P＜0.05），提示p53表達(dá)的變化與細(xì)胞增殖活性的改變密切相關(guān)。EGFR與Ki67的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)6]，P＜0.05），表明EGFR的過表達(dá)與細(xì)胞增殖活性的增強(qiáng)存在關(guān)聯(lián)。這表明在CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中，p16、p53、EGFR和Ki67這四種標(biāo)志物之間存在密切的相互關(guān)系，它們可能通過共同參與某些信號(hào)通路或生物學(xué)過程，協(xié)同促進(jìn)病變的進(jìn)展。四、討論4.1p16與CIN及宮頸鱗癌的關(guān)系本研究結(jié)果顯示，p16在正常宮頸組織中呈低表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為[X1]%，且主要為弱陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞局限于基底層。隨著CIN病變程度從CIN1級(jí)向CIN3級(jí)進(jìn)展，p16的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，分別為[X2]%、[X3]%、[X4]%，陽(yáng)性強(qiáng)度也逐漸增強(qiáng)，在宮頸鱗癌組織中，p16陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[X5]%，且均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。這與以往大量研究結(jié)果一致，表明p16的表達(dá)與CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。p16作為一種重要的細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，在正常細(xì)胞中，其表達(dá)水平較低，對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控作用較為穩(wěn)定。在CIN和宮頸鱗癌的發(fā)生過程中，高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染是關(guān)鍵因素之一。HR-HPV的E7蛋白能夠與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）結(jié)合，使其磷酸化并失活，從而解除pRb對(duì)轉(zhuǎn)錄因子E2F的抑制作用，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，細(xì)胞異常增殖。而p16作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，在這種異常增殖的細(xì)胞中被激活，其表達(dá)水平顯著升高。p16通過與細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）形成復(fù)合物，抑制CDK4的活性，阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而對(duì)細(xì)胞的異常增殖起到負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。但在腫瘤細(xì)胞中，這種調(diào)節(jié)機(jī)制可能逐漸失衡，雖然p16表達(dá)升高，但細(xì)胞仍持續(xù)增殖，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。從本研究結(jié)果來看，p16在不同級(jí)別CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示p16可以作為評(píng)估CIN病變程度和預(yù)測(cè)其進(jìn)展為宮頸鱗癌風(fēng)險(xiǎn)的重要生物學(xué)標(biāo)志物。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于宮頸病變的診斷，傳統(tǒng)的組織學(xué)檢查存在一定的主觀性和局限性，尤其是在區(qū)分CIN1級(jí)和CIN2級(jí)病變時(shí)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)診斷不一致的情況。而p16免疫組化檢測(cè)可以為病理診斷提供重要的輔助信息。當(dāng)p16呈彌漫性強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，高度提示病變?yōu)楦呒?jí)別CIN或?qū)m頸鱗癌，有助于提高診斷的準(zhǔn)確性，避免漏診和誤診。此外，p16的表達(dá)水平還可能與患者的預(yù)后相關(guān)。有研究表明，在宮頸鱗癌患者中，p16高表達(dá)的患者其無病生存期和總生存期可能較短，提示p16高表達(dá)可能預(yù)示著不良預(yù)后。因此，p16在CIN及宮頸鱗癌的診斷、病情評(píng)估和預(yù)后判斷中均具有重要的價(jià)值，有望為臨床治療方案的選擇提供有力的依據(jù)。4.2p53在CIN及宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的意義本研究顯示，p53在正常宮頸組織中低表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為[Y1]%，且多為陰性或弱陽(yáng)性。隨著CIN級(jí)別升高，從CIN1級(jí)到CIN3級(jí)，p53陽(yáng)性表達(dá)率逐漸上升，分別為[Y2]%、[Y3]%、[Y4]%，陽(yáng)性強(qiáng)度也逐漸增強(qiáng)，在宮頸鱗癌組織中，p53陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[Y5]%，以強(qiáng)陽(yáng)性為主。這表明p53表達(dá)異常與CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)。p53基因作為重要的抑癌基因，其編碼的p53蛋白在維持細(xì)胞基因組穩(wěn)定性、調(diào)控細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)p53蛋白水平維持在較低水平，當(dāng)細(xì)胞受到如DNA損傷、氧化應(yīng)激、缺氧等外界刺激時(shí)，p53蛋白被激活，通過磷酸化、乙酰化等修飾方式，穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)并增強(qiáng)其活性。活化的p53蛋白可與特定的DNA序列結(jié)合，啟動(dòng)下游一系列靶基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而發(fā)揮多種生物學(xué)功能。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，p53可誘導(dǎo)p21基因表達(dá)，p21蛋白與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）及細(xì)胞周期蛋白（Cyclin）形成復(fù)合物，抑制CDK的活性，使細(xì)胞停滯于G1期或G2期，為DNA修復(fù)爭(zhēng)取時(shí)間。若DNA損傷無法修復(fù)，p53則通過激活促凋亡基因Bax等，抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而避免受損細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。然而，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，p53基因常發(fā)生突變，突變類型主要包括錯(cuò)義突變、無義突變、缺失突變等，其中錯(cuò)義突變最為常見。突變后的p53蛋白不僅喪失了正常的抑癌功能，還可能獲得新的促癌功能，即所謂的“功能獲得性突變”。在CIN和宮頸鱗癌中，p53基因突變的發(fā)生頻率與病變程度相關(guān)。研究表明，高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染是宮頸病變的主要病因，HR-HPV的E6蛋白能夠與p53蛋白結(jié)合，通過泛素化途徑促進(jìn)p53蛋白降解，導(dǎo)致p53蛋白功能喪失。同時(shí)，HPV感染還可引起宿主細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定，增加p53基因發(fā)生突變的概率。當(dāng)p53基因發(fā)生突變后，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的監(jiān)測(cè)和修復(fù)能力下降，細(xì)胞周期失控，異常增殖的細(xì)胞無法被及時(shí)清除，從而促進(jìn)CIN的進(jìn)展和宮頸鱗癌的發(fā)生。從本研究結(jié)果來看，p53在不同級(jí)別CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示p53可以作為評(píng)估CIN病變程度和預(yù)測(cè)其進(jìn)展為宮頸鱗癌風(fēng)險(xiǎn)的重要生物學(xué)標(biāo)志物。p53蛋白的表達(dá)情況與宮頸鱗癌的臨床病理參數(shù)如腫瘤分期、組織分化程度等也可能存在相關(guān)性。有研究報(bào)道，在宮頸鱗癌中，p53高表達(dá)與腫瘤分期較晚、組織分化程度差相關(guān)，提示p53高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤具有更強(qiáng)的侵襲性和不良預(yù)后。因此，檢測(cè)p53的表達(dá)對(duì)于判斷宮頸鱗癌患者的病情和預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。此外，p53作為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)，針對(duì)p53基因突變的治療策略也在不斷研究中，如通過基因治療方法恢復(fù)突變p53的功能，或開發(fā)針對(duì)突變p53蛋白的小分子抑制劑等，為宮頸鱗癌的治療提供了新的思路和方向。4.3EGFR在宮頸癌發(fā)生中的作用及機(jī)制本研究結(jié)果表明，EGFR在正常宮頸組織中呈低表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為[Z1]%，隨著CIN病變程度從CIN1級(jí)向CIN3級(jí)進(jìn)展，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，分別為[Z2]%、[Z3]%、[Z4]%，在宮頸鱗癌組織中，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[Z5]%，且均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。同時(shí)，通過FISH技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，EGFR基因擴(kuò)增率也隨著病變程度的加重而逐漸升高，在正常宮頸組織中未檢測(cè)到EGFR基因擴(kuò)增，而在宮頸鱗癌組織中EGFR基因擴(kuò)增率明顯升高。這提示EGFR的過表達(dá)及基因擴(kuò)增與CIN的進(jìn)展及宮頸鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。EGFR是一種跨膜受體酪氨酸激酶，屬于ErbB受體家族成員，其結(jié)構(gòu)包含胞外配體結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)酪氨酸激酶活性區(qū)。當(dāng)EGFR與其配體如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）等結(jié)合后，受體發(fā)生二聚化，激活胞內(nèi)酪氨酸激酶活性，使受體自身及下游底物的酪氨酸殘基磷酸化，進(jìn)而激活一系列下游信號(hào)通路，包括Ras-Raf-MEK-ERK通路和PI3K-AKT通路等。Ras-Raf-MEK-ERK通路主要參與細(xì)胞的增殖、分化和存活等過程，活化的ERK可進(jìn)入細(xì)胞核，磷酸化多種轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Myc等，促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)，使細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。PI3K-AKT通路在細(xì)胞存活、代謝、增殖和遷移等方面發(fā)揮重要作用，AKT可通過磷酸化多種底物，如Bad、GSK-3β等，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖。在宮頸癌發(fā)生過程中，EGFR的過表達(dá)及基因擴(kuò)增可能通過多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。一方面，EGFR的持續(xù)激活導(dǎo)致下游增殖相關(guān)信號(hào)通路的過度活化，使宮頸上皮細(xì)胞異常增殖，打破細(xì)胞增殖與凋亡的平衡，從而促進(jìn)CIN的發(fā)生和進(jìn)展。另一方面，EGFR信號(hào)通路的激活還可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。研究表明，EGFR激活后可上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，如MMP-2、MMP-9等，這些蛋白酶能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供條件。此外，EGFR信號(hào)通路還與腫瘤血管生成密切相關(guān)，通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因，HR-HPV感染與EGFR的異常表達(dá)之間也存在一定的關(guān)聯(lián)。有研究發(fā)現(xiàn)，HR-HPV的E6和E7蛋白可能通過多種途徑影響EGFR的表達(dá)和活性。E6蛋白可通過與EGFR的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，上調(diào)EGFR的轉(zhuǎn)錄水平；E7蛋白則可通過與細(xì)胞內(nèi)的一些信號(hào)分子相互作用，間接激活EGFR信號(hào)通路。此外，HPV感染導(dǎo)致的細(xì)胞周期紊亂和基因組不穩(wěn)定，也可能增加EGFR基因發(fā)生擴(kuò)增和突變的概率，進(jìn)一步促進(jìn)EGFR信號(hào)通路的異常激活。從本研究結(jié)果來看，EGFR在不同級(jí)別CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示EGFR可以作為評(píng)估CIN病變程度和預(yù)測(cè)其進(jìn)展為宮頸鱗癌風(fēng)險(xiǎn)的重要生物學(xué)標(biāo)志物。EGFR的表達(dá)情況與宮頸鱗癌的臨床病理參數(shù)如腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等也可能存在相關(guān)性。有研究報(bào)道，在宮頸鱗癌中，EGFR高表達(dá)與腫瘤分期較晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性相關(guān)，提示EGFR高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤具有更強(qiáng)的侵襲性和不良預(yù)后。因此，檢測(cè)EGFR的表達(dá)對(duì)于判斷宮頸鱗癌患者的病情和預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。此外，EGFR作為腫瘤治療的重要靶點(diǎn)，針對(duì)EGFR的靶向治療藥物如吉非替尼、厄洛替尼等酪氨酸激酶抑制劑，以及西妥昔單抗等單克隆抗體，在宮頸癌的治療研究中也取得了一定的進(jìn)展，為宮頸鱗癌的治療提供了新的選擇。4.4Ki67與宮頸病變細(xì)胞增殖的關(guān)聯(lián)本研究中，Ki67在正常宮頸組織中呈低表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為[W1]%，且陽(yáng)性細(xì)胞局限于基底層及副基底層，隨著CIN病變程度從CIN1級(jí)向CIN3級(jí)進(jìn)展，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，分別為[W2]%、[W3]%、[W4]%，在宮頸鱗癌組織中，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[W5]%，均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。這表明Ki67的表達(dá)水平與宮頸病變細(xì)胞的增殖活性密切相關(guān)，隨著病變的進(jìn)展，細(xì)胞增殖活性逐漸增強(qiáng)。Ki67是一種核蛋白，僅在細(xì)胞增殖周期的G1、S、G2和M期表達(dá)，而在靜止期（G0期）不表達(dá)，其表達(dá)水平可準(zhǔn)確反映細(xì)胞的增殖活性。在正常宮頸組織中，細(xì)胞增殖相對(duì)穩(wěn)定，Ki67的表達(dá)處于較低水平，陽(yáng)性細(xì)胞主要位于基底層及副基底層，這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力，負(fù)責(zé)維持宮頸上皮的正常更新。當(dāng)宮頸發(fā)生病變時(shí)，如CIN的發(fā)生，高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染是重要的啟動(dòng)因素。HR-HPV感染后，病毒基因整合到宿主細(xì)胞基因組中，導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，細(xì)胞異常增殖。此時(shí)，Ki67的表達(dá)被激活，陽(yáng)性表達(dá)率升高，陽(yáng)性細(xì)胞范圍擴(kuò)大。在CIN1級(jí)病變中，Ki67陽(yáng)性細(xì)胞可累及鱗狀上皮下1/3-1/2層，表明病變細(xì)胞的增殖活性開始增強(qiáng)，但仍處于相對(duì)較低的水平。隨著病變進(jìn)展到CIN2級(jí)和CIN3級(jí)，Ki67陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)一步升高，陽(yáng)性細(xì)胞范圍進(jìn)一步擴(kuò)大，分別可累及鱗狀上皮下2/3層和幾乎整個(gè)鱗狀上皮層，這說明病變細(xì)胞的增殖活性不斷增強(qiáng)，病變逐漸加重。在宮頸鱗癌組織中，Ki67的高表達(dá)表明癌細(xì)胞具有極強(qiáng)的增殖能力，癌細(xì)胞不斷分裂和增殖，導(dǎo)致腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。研究表明，Ki67的高表達(dá)不僅與宮頸病變細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)有關(guān)，還與病變的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。有研究對(duì)CIN患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn)，Ki67高表達(dá)的CIN患者進(jìn)展為宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于Ki67低表達(dá)的患者。這是因?yàn)镵i67高表達(dá)的細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力和侵襲能力，更容易突破基底膜，向周圍組織浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。此外，Ki67還可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響細(xì)胞的增殖和分化。例如，Ki67可以與細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）相互作用，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。同時(shí)，Ki67還可以調(diào)節(jié)一些轉(zhuǎn)錄因子的活性，如E2F等，影響細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)。從本研究結(jié)果來看，Ki67在不同級(jí)別CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Ki67可以作為評(píng)估CIN病變程度和預(yù)測(cè)其進(jìn)展為宮頸鱗癌風(fēng)險(xiǎn)的重要生物學(xué)標(biāo)志物。在臨床實(shí)踐中，檢測(cè)Ki67的表達(dá)有助于判斷宮頸病變的活躍程度，為臨床治療方案的選擇提供重要依據(jù)。對(duì)于Ki67高表達(dá)的CIN患者，應(yīng)加強(qiáng)隨訪和監(jiān)測(cè)，及時(shí)采取有效的治療措施，以預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。對(duì)于宮頸鱗癌患者，Ki67的表達(dá)水平還可能與患者的預(yù)后相關(guān)。有研究報(bào)道，在宮頸鱗癌中，Ki67高表達(dá)與患者的無病生存期和總生存期縮短相關(guān)，提示Ki67高表達(dá)可能預(yù)示著不良預(yù)后。因此，Ki67在CIN及宮頸鱗癌的診斷、病情評(píng)估和預(yù)后判斷中均具有重要的價(jià)值，有望為臨床治療提供有力的支持。4.5四種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的臨床價(jià)值單一標(biāo)志物的檢測(cè)在CIN和宮頸鱗癌的診斷及病情評(píng)估中雖有一定價(jià)值，但存在局限性。聯(lián)合檢測(cè)p16、p53、EGFR和Ki67，能夠從細(xì)胞周期調(diào)控、抑癌基因功能、細(xì)胞增殖信號(hào)傳導(dǎo)以及細(xì)胞增殖活性等多個(gè)層面，全面反映宮頸病變的生物學(xué)特性，顯著提高診斷的準(zhǔn)確性和可靠性。在CIN的診斷和分級(jí)方面，研究結(jié)果顯示，隨著CIN級(jí)別從CIN1級(jí)向CIN3級(jí)進(jìn)展，p16、p53、EGFR和Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度均逐漸升高，且兩兩之間存在顯著正相關(guān)。這表明這四種標(biāo)志物在CIN的發(fā)展過程中協(xié)同發(fā)揮作用，聯(lián)合檢測(cè)能夠更準(zhǔn)確地判斷CIN的病變程度。例如，在一些難以明確分級(jí)的CIN病例中，若p16呈彌漫性強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，同時(shí)p53、EGFR和Ki67也均為高表達(dá)，則高度提示病變?yōu)楦呒?jí)別CIN，有助于避免因誤診為低級(jí)別CIN而導(dǎo)致的治療延誤。有研究報(bào)道，聯(lián)合檢測(cè)這四種標(biāo)志物對(duì)高級(jí)別CIN的診斷敏感性和特異性分別可達(dá)[X]%和[Y]%，明顯高于單一標(biāo)志物檢測(cè)。對(duì)于宮頸鱗癌的診斷，聯(lián)合檢測(cè)同樣具有重要價(jià)值。本研究中，宮頸鱗癌組織中p16、p53、EGFR和Ki67均呈高表達(dá)，且與正常宮頸組織、CIN各級(jí)別組織相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明這四種標(biāo)志物在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)生了顯著變化，聯(lián)合檢測(cè)可以為宮頸鱗癌的診斷提供更全面的依據(jù)。臨床上，當(dāng)患者的宮頸活檢組織中這四種標(biāo)志物均呈現(xiàn)異常高表達(dá)時(shí)，強(qiáng)烈提示宮頸鱗癌的可能性，有助于早期明確診斷，為及時(shí)治療爭(zhēng)取時(shí)間。一項(xiàng)納入[樣本數(shù)量]例宮頸鱗癌患者的研究表明，聯(lián)合檢測(cè)p16、p53、EGFR和Ki67對(duì)宮頸鱗癌的診斷準(zhǔn)確性可達(dá)[Z]%，顯著優(yōu)于單一標(biāo)志物檢測(cè)。在預(yù)后評(píng)估方面，p16、p53、EGFR和Ki67的表達(dá)水平均與宮頸鱗癌的預(yù)后相關(guān)。p16高表達(dá)、p53突變型高表達(dá)、EGFR過表達(dá)以及Ki67高表達(dá)均提示患者預(yù)后不良。聯(lián)合檢測(cè)這四種標(biāo)志物，能夠更全面地評(píng)估患者的預(yù)后情況。例如，若患者的宮頸鱗癌組織中p16、p53、EGFR和Ki67均為高表達(dá)，則其復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和死亡風(fēng)險(xiǎn)可能更高，臨床醫(yī)生可據(jù)此制定更積極的治療方案，加強(qiáng)隨訪和監(jiān)測(cè)。有研究通過對(duì)[隨訪樣本數(shù)量]例宮頸鱗癌患者的長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)這四種標(biāo)志物高表達(dá)的患者，其5年生存率明顯低于低表達(dá)患者，進(jìn)一步證實(shí)了聯(lián)合