HER2和VEGF蛋白表達：食管鱗癌診療新視角一、引言1.1研究背景食管癌是一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴重威脅人類健康。在全球范圍內(nèi)，食管癌的發(fā)病率和死亡率均位居前列。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負擔數(shù)據(jù)顯示，食管癌新發(fā)病例約60.4萬例，死亡病例約54.4萬例，分別占全球癌癥新發(fā)病例和死亡病例的3.2%和5.3%。食管鱗癌（EsophagealSquamousCellCarcinoma，ESCC）是食管癌的主要病理類型之一，尤其在亞洲地區(qū)，其發(fā)病率占食管癌的絕大部分。在中國，食管鱗癌的發(fā)病率和死亡率也相當高，嚴重影響患者的生活質(zhì)量和生存率。食管鱗癌的發(fā)生是一個多因素、多步驟的復雜過程，涉及遺傳、環(huán)境、生活習慣等多種因素。盡管近年來在食管癌的診斷和治療方面取得了一定進展，但由于食管鱗癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，失去了最佳手術時機。中晚期食管鱗癌患者的治療效果往往不理想，5年生存率較低。因此，深入研究食管鱗癌的發(fā)病機制，尋找有效的早期診斷標志物和治療靶點，對于提高食管鱗癌的治療效果和患者生存率具有重要意義。人表皮生長因子受體2（HumanEpidermalGrowthFactorReceptor2，HER2）是一種跨膜受體酪氨酸激酶，屬于表皮生長因子受體家族。HER2在細胞增殖、分化、遷移和存活等過程中發(fā)揮著重要作用。正常情況下，HER2的表達水平較低，但在多種惡性腫瘤中，如乳腺癌、胃癌、肺癌等，HER2會出現(xiàn)過表達或基因擴增，導致其下游信號通路異常激活，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移。在食管鱗癌中，HER2的表達情況也受到了廣泛關注。研究表明，HER2在食管鱗癌組織中的表達率存在一定差異，其表達與食管鱗癌的臨床病理特征和預后密切相關。HER2過表達的食管鱗癌患者往往具有更高的腫瘤分期、更易發(fā)生淋巴結轉移和遠處轉移，預后較差。因此，HER2可能成為食管鱗癌的一個潛在治療靶點，針對HER2的靶向治療藥物，如曲妥珠單抗，在HER2陽性的食管鱗癌患者中顯示出了一定的療效。血管內(nèi)皮生長因子（VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF）是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細胞生長因子，具有促進血管生成、增加血管通透性等作用。在腫瘤的生長和轉移過程中，VEGF起著至關重要的作用。腫瘤細胞分泌的VEGF可以與血管內(nèi)皮細胞表面的受體結合，激活下游信號通路，促進內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，從而為腫瘤的生長和轉移提供充足的血液供應。此外，VEGF還可以通過增加血管通透性，促進腫瘤細胞進入血液循環(huán)，進而發(fā)生遠處轉移。在食管鱗癌中，VEGF的表達水平明顯高于正常食管組織，且與食管鱗癌的浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期等密切相關。高表達VEGF的食管鱗癌患者預后往往較差。因此，VEGF也被認為是食管鱗癌治療的一個重要靶點，針對VEGF的靶向治療藥物，如貝伐單抗，在食管鱗癌的治療中也取得了一定的療效。綜上所述，HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程中發(fā)揮著重要作用，研究它們在食管鱗癌組織中的表達情況及其與臨床病理特征和預后的關系，對于深入了解食管鱗癌的發(fā)病機制、尋找有效的診斷標志物和治療靶點具有重要的臨床意義。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌中的研究開展較早。關于HER2，一些研究通過免疫組化和熒光原位雜交等技術，對食管鱗癌組織中HER2的表達和基因擴增情況進行檢測。早期研究發(fā)現(xiàn)，HER2在食管鱗癌中的表達率相對較低，不同研究報道的表達率在3%-30%之間波動。如Mimura等學者的研究顯示，HER2基因擴增在食管鱗癌中的發(fā)生率約為10%左右，且HER2過表達或基因擴增與食管鱗癌的侵襲深度、淋巴結轉移及不良預后相關。在對VEGF的研究方面，國外學者通過大量臨床研究證實，VEGF在食管鱗癌組織中的表達顯著高于正常食管組織。VEGF的高表達與食管鱗癌的腫瘤血管生成密切相關，促進腫瘤的生長和轉移。有研究表明，VEGF高表達的食管鱗癌患者，其術后復發(fā)率較高，生存率明顯低于VEGF低表達患者。此外，針對HER2和VEGF的靶向治療研究也取得了一定進展，如曲妥珠單抗聯(lián)合化療在HER2陽性食管鱗癌患者中的應用，顯示出比單純化療更好的療效；貝伐單抗等VEGF抑制劑在食管鱗癌治療中的臨床試驗也在逐步開展。國內(nèi)對HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌的研究也在不斷深入。在HER2研究上，多項研究同樣表明HER2在食管鱗癌組織中有一定的表達率，且與腫瘤的臨床病理特征存在關聯(lián)。姚型鋒等人的研究發(fā)現(xiàn)，HER2在食管鱗癌中的表達與脈管累犯、淋巴結轉移呈正相關。在VEGF研究領域，國內(nèi)研究進一步驗證了VEGF與食管鱗癌浸潤深度、淋巴結轉移的相關性。徐海濤等學者通過檢測食管鱗癌患者血清和組織中VEGF水平，發(fā)現(xiàn)VEGF在食管鱗癌患者血清中水平顯著高于健康人，且與腫瘤浸潤深度和淋巴結轉移顯著相關。此外，國內(nèi)也在積極探索針對HER2和VEGF的聯(lián)合靶向治療策略，以提高食管鱗癌的治療效果。盡管國內(nèi)外在HER2和VEGF蛋白與食管鱗癌的研究方面取得了一定成果，但仍存在一些研究空白。一方面，目前對于HER2和VEGF在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的相互作用機制研究較少，兩者是否存在協(xié)同促進腫瘤進展的分子通路尚不明確。另一方面，現(xiàn)有研究多集中在蛋白表達與臨床病理特征的相關性分析，對于如何將HER2和VEGF作為精準治療靶點，開發(fā)更有效的靶向治療藥物和聯(lián)合治療方案，還需要更多的基礎研究和大規(guī)模臨床試驗來探索。此外，不同種族、地域之間HER2和VEGF在食管鱗癌中的表達及臨床意義是否存在差異，也有待進一步研究明確。1.3研究目的與意義本研究旨在通過檢測HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的表達情況，分析其與食管鱗癌患者臨床病理特征及預后的相關性，為食管鱗癌的早期診斷、治療及預后判斷提供理論依據(jù)和新的思路。在診斷方面，目前食管鱗癌的早期診斷仍面臨挑戰(zhàn)，許多患者確診時已處于中晚期。通過研究HER2和VEGF蛋白的表達，若能發(fā)現(xiàn)其與食管鱗癌早期病變的關聯(lián)，或許可以將其作為潛在的早期診斷標志物。例如，若在食管黏膜上皮內(nèi)瘤變等癌前病變階段就檢測到HER2和VEGF蛋白的異常表達，有助于實現(xiàn)食管鱗癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷，從而提高患者的生存率。從治療角度來看，HER2和VEGF作為潛在的治療靶點，對它們的深入研究具有重要意義。一方面，對于HER2過表達的食管鱗癌患者，以曲妥珠單抗為代表的HER2靶向治療藥物，可特異性地作用于HER2蛋白，阻斷其下游信號通路，抑制腫瘤細胞的增殖和存活。了解HER2在食管鱗癌組織中的表達情況，能夠精準篩選出適合接受HER2靶向治療的患者，實現(xiàn)個體化治療，提高治療效果并減少不必要的治療費用和不良反應。另一方面，針對VEGF的靶向治療藥物，如貝伐單抗，通過抑制VEGF與其受體的結合，阻斷腫瘤血管生成，切斷腫瘤的營養(yǎng)供應，從而抑制腫瘤的生長和轉移。明確VEGF在食管鱗癌中的表達及作用機制，有助于優(yōu)化VEGF靶向治療方案，探索與其他治療方法（如化療、放療、免疫治療等）的聯(lián)合應用策略，進一步提高食管鱗癌的治療效果。在預后判斷方面，食管鱗癌患者的預后差異較大，準確預測患者的預后對于制定個性化的治療方案和隨訪計劃至關重要。研究HER2和VEGF蛋白表達與食管鱗癌患者預后的關系，如發(fā)現(xiàn)HER2和VEGF高表達的患者預后較差，可將這兩個指標納入預后評估體系，為臨床醫(yī)生判斷患者的預后提供更全面、準確的信息，以便對高風險患者采取更積極的治療和隨訪措施，改善患者的生存質(zhì)量和預后。二、HER2和VEGF蛋白的生物學特性2.1HER2蛋白的結構與功能HER2蛋白，全稱人表皮生長因子受體2，是一種具有重要生物學功能的跨膜受體酪氨酸激酶，在細胞的生理和病理過程中發(fā)揮著關鍵作用。從結構上看，HER2基因定位于染色體17q21，全長29315bp，含26個外顯子，其轉錄生成的mRNA長4530nt，最終編碼產(chǎn)生由1255個氨基酸組成的單鏈跨膜糖蛋白，相對分子質(zhì)量為185kDa。HER2蛋白主要由三個結構域構成，分別是胞外配體結合區(qū)、單鏈跨膜區(qū)以及胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶區(qū)。其中，胞外配體結合區(qū)是HER2蛋白與外界信號分子相互作用的關鍵部位，它包含大約600個氨基酸殘基，進一步可細分為4個亞結構域（I-IV）。在這4個亞結構域中，I和III亞結構域是配體的潛在結合位點，而II和IV亞結構域富含半胱氨酸，這些半胱氨酸殘基之間能夠形成二硫鍵，從而使得HER2蛋白可以與HER家族中的其他成員（如HER1、HER3、HER4）形成同源或異源二聚體，這對于HER2蛋白激活下游信號傳導通路至關重要。單鏈跨膜區(qū)由22個具有高度疏水性的氨基酸組成，它像一座橋梁，將胞外配體結合區(qū)與胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶區(qū)連接起來，保證HER2蛋白在細胞膜上的穩(wěn)定錨定，并在胞外信號傳遞到胞內(nèi)的過程中發(fā)揮重要的介導作用。胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶區(qū)則是HER2蛋白發(fā)揮其生物學功能的核心區(qū)域，包含多個重要的環(huán)狀結構，構成了酪氨酸激酶的活性位點。當HER2蛋白與其他HER家族成員形成二聚體后，會引發(fā)胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶區(qū)的構象改變，進而激活其酪氨酸激酶活性，使得酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化。這些磷酸化的酪氨酸殘基成為了下游信號分子的結合位點，通過招募一系列含有SH2結構域或PTB結構域的信號蛋白，啟動細胞內(nèi)復雜的信號傳導級聯(lián)反應。在細胞正常生理狀態(tài)下，HER2蛋白參與調(diào)控細胞的增殖、分化和存活等重要生命活動。例如，在胚胎發(fā)育過程中，HER2蛋白對于細胞的有序增殖和分化，組織和器官的正常形成和發(fā)育起著不可或缺的作用。在乳腺組織的發(fā)育過程中，HER2蛋白參與調(diào)節(jié)乳腺上皮細胞的增殖和分化，使得乳腺能夠正常發(fā)育并具備泌乳功能。然而，當HER2基因發(fā)生擴增或其蛋白表達異常升高時，就會導致細胞信號傳導通路的紊亂，促使細胞異常增殖、分化受阻以及凋亡抑制，最終引發(fā)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。在乳腺癌中，約20%-30%的患者存在HER2基因的過度表達，這些患者的腫瘤細胞往往具有更強的侵襲性和轉移能力，預后相對較差。在胃癌中，也有相當比例的患者表現(xiàn)出HER2蛋白的過表達或基因擴增，與腫瘤的進展和不良預后密切相關。2.2VEGF蛋白的結構與功能VEGF蛋白，即血管內(nèi)皮生長因子，在血管生成和腫瘤生物學領域占據(jù)著關鍵地位，對其結構與功能的深入剖析，有助于我們更好地理解食管鱗癌的發(fā)病機制以及相關治療策略。VEGF基因位于6號染色體短臂6p12區(qū)域，其家族涵蓋了VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生長因子（PlGF）等成員，其中VEGF-A是研究最為廣泛和深入的一種，通常所說的VEGF指的就是VEGF-A。VEGF-A基因通過不同的剪接方式，產(chǎn)生了多種異構體，主要包括VEGF121、VEGF165、VEGF189和VEGF206等。這些異構體在氨基酸數(shù)量和功能上存在一定差異。從結構上看，VEGF是一種糖蛋白，以VEGF-A為例，它是由兩條相同的肽鏈通過二硫鍵連接而成的同源二聚體結構，每個亞基包含約190個氨基酸殘基，這種獨特的二聚體結構對于其與受體的結合以及生物學功能的發(fā)揮至關重要。在功能方面，VEGF在生理和病理過程中都扮演著不可或缺的角色。在生理狀態(tài)下，VEGF對血管生成起著關鍵的促進作用。在胚胎發(fā)育時期，它積極參與血管系統(tǒng)的構建，引導血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和分化，促使新血管網(wǎng)絡的形成，確保胚胎各個組織和器官能夠獲得充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，滿足其生長發(fā)育的需求。在成年個體中，VEGF在傷口愈合過程中發(fā)揮重要作用，當機體受到損傷時，受損組織周圍的細胞會分泌VEGF，刺激血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，促使新血管長入傷口部位，為傷口愈合提供必要的營養(yǎng)和免疫細胞，加速傷口的修復。在女性生殖周期中，VEGF參與子宮內(nèi)膜的血管重建，為胚胎著床和發(fā)育創(chuàng)造適宜的環(huán)境。然而，在病理狀態(tài)下，特別是在腫瘤的生長和轉移過程中，VEGF的作用更為顯著。腫瘤細胞具有高代謝的特點，對氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的需求旺盛。為了滿足自身快速生長和增殖的需要，腫瘤細胞會大量分泌VEGF。VEGF通過旁分泌的方式作用于腫瘤周邊的血管內(nèi)皮細胞，與血管內(nèi)皮細胞表面的特異性受體結合，激活一系列復雜的信號傳導通路，如Ras/Raf/MEK/ERK通路、PI3K/Akt通路等。這些信號通路的激活會促使血管內(nèi)皮細胞發(fā)生一系列變化，包括增殖活性增強、遷移能力提高以及管腔形成能力提升，從而誘導腫瘤血管生成。新生的腫瘤血管不僅為腫瘤細胞提供了充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，維持腫瘤的快速生長，還為腫瘤細胞進入血液循環(huán)提供了通道，增加了腫瘤細胞發(fā)生遠處轉移的風險。腫瘤細胞可以通過這些新生血管進入血液循環(huán)，隨著血流到達身體其他部位，在適宜的微環(huán)境中定植并繼續(xù)生長，形成轉移灶。此外，VEGF還具有增加血管通透性的作用，它可以使血管內(nèi)皮細胞之間的連接變得疏松，導致血管通透性顯著增加。血漿中的大分子物質(zhì)，如纖維蛋白原等，能夠更容易地滲出到血管外組織，這些滲出的物質(zhì)在腫瘤細胞周圍形成富含營養(yǎng)的基質(zhì)，進一步促進腫瘤細胞的生長和遷移，同時也為腫瘤血管的生成提供了有利的微環(huán)境。2.3HER2和VEGF蛋白的信號傳導通路HER2蛋白的信號傳導通路主要通過與HER家族其他成員形成二聚體來激活。當HER2與配體結合或在過表達情況下，會與HER1、HER3或HER4等形成異源二聚體，以HER2/HER3異二聚體為例，這種二聚化導致HER2胞內(nèi)酪氨酸激酶結構域的構象改變，使得酪氨酸殘基發(fā)生自身磷酸化。磷酸化的酪氨酸殘基為下游含有SH2結構域或PTB結構域的信號蛋白提供了結合位點，進而啟動一系列復雜的信號傳導級聯(lián)反應。其中，最主要的兩條信號通路為Ras/Raf/MEK/ERK通路和PI3K/Akt/mTOR通路。在Ras/Raf/MEK/ERK通路中，生長因子受體結合蛋白2（GRB2）識別并結合到HER2磷酸化的酪氨酸位點，GRB2招募鳥苷酸交換因子SOS，SOS激活小G蛋白Ras，活化的Ras進一步激活Raf蛋白激酶，Raf依次磷酸化并激活MEK和ERK。激活后的ERK可以進入細胞核，調(diào)節(jié)一系列與細胞增殖、分化和存活相關的基因轉錄，促進細胞的增殖和分裂。PI3K/Akt/mTOR通路中，HER2磷酸化后結合并激活PI3K，PI3K將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3招募并激活蛋白激酶B（Akt）。Akt可以通過多種途徑發(fā)揮作用，一方面，Akt磷酸化并抑制糖原合成酶激酶3β（GSK3β），導致細胞周期蛋白D1的積累，促進細胞周期的進展；另一方面，Akt激活雷帕霉素靶蛋白（mTOR），mTOR參與調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、細胞生長和代謝等過程，從而促進細胞的生長和存活。此外，HER2還可以通過激活其他信號通路，如JAK/STAT通路等，影響細胞的生物學行為。VEGF蛋白的信號傳導主要是通過與血管內(nèi)皮細胞表面的特異性受體結合來實現(xiàn)的。VEGF受體（VEGFR）主要有VEGFR-1（Flt-1）、VEGFR-2（KDR/Flk-1）和VEGFR-3（Flt-4）三種類型。其中，VEGFR-2是VEGF信號通路的主要受體，在血管生成過程中發(fā)揮關鍵作用。當VEGF與VEGFR-2結合后，引起VEGFR-2的二聚化和自身磷酸化，激活其酪氨酸激酶活性。激活的VEGFR-2通過招募含有SH2結構域的信號分子，啟動多條下游信號通路。在Ras/Raf/MEK/ERK通路中，與HER2激活該通路的機制類似，VEGFR-2激活后，通過一系列分子的相互作用激活Ras，進而依次激活Raf、MEK和ERK，促進內(nèi)皮細胞的增殖和遷移。在PI3K/Akt通路中，VEGFR-2激活PI3K，產(chǎn)生PIP3，激活Akt。激活的Akt除了調(diào)節(jié)細胞周期和蛋白質(zhì)合成外，還可以通過抑制促凋亡蛋白Bad和激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）等方式，抑制內(nèi)皮細胞的凋亡，維持血管內(nèi)皮細胞的存活。此外，VEGF與VEGFR-2結合還可以激活PLCγ/PKC通路，PLCγ被激活后水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），產(chǎn)生三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）。IP3促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放鈣離子，升高細胞內(nèi)鈣離子濃度，DAG則激活蛋白激酶C（PKC），PKC通過磷酸化一系列底物，調(diào)節(jié)細胞的多種生理功能，如細胞骨架重排、基因表達等，參與內(nèi)皮細胞的遷移和管腔形成過程。VEGFR-1雖然與VEGF的結合親和力較高，但信號轉導活性相對較弱，它可能通過與VEGFR-2競爭結合VEGF，調(diào)節(jié)VEGF信號的強度和持續(xù)時間，在血管生成過程中發(fā)揮負反饋調(diào)節(jié)作用。VEGFR-3主要參與淋巴管生成，在腫瘤淋巴轉移過程中發(fā)揮重要作用。HER2和VEGF蛋白的信號傳導通路之間并非相互獨立，而是存在著復雜的相互作用。研究表明，HER2信號通路的激活可以上調(diào)腫瘤細胞中VEGF的表達。在乳腺癌細胞系中，HER2過表達會通過激活PI3K/Akt和Ras/Raf/MEK/ERK等信號通路，促進缺氧誘導因子1α（HIF-1α）的表達和穩(wěn)定。HIF-1α是一種轉錄因子，在缺氧條件下，它可以結合到VEGF基因啟動子區(qū)域的缺氧反應元件上，增強VEGF基因的轉錄，從而導致VEGF表達增加。VEGF通過旁分泌作用于腫瘤血管內(nèi)皮細胞，促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，進一步促進腫瘤的生長和轉移。反過來，VEGF信號通路也可以影響HER2信號通路。VEGF與VEGFR-2結合激活下游信號通路后，可能通過激活某些激酶，如Src激酶等，間接調(diào)節(jié)HER2的磷酸化水平和活性，增強HER2信號傳導。此外，HER2和VEGF信號通路還可能通過共享一些下游信號分子，如ERK、Akt等，實現(xiàn)相互影響和協(xié)同作用，共同促進腫瘤細胞的增殖、存活、遷移和血管生成，在食管鱗癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。三、食管鱗癌概述3.1食管鱗癌的流行病學特征食管鱗癌作為食管癌的主要病理類型，在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出獨特的流行病學特征。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，食管癌在全球范圍內(nèi)的新發(fā)病例約為60.4萬例，死亡病例約54.4萬例，在各類癌癥中，其發(fā)病率位居第9位，死亡率位列第6位。食管鱗癌在食管癌中占據(jù)主導地位，尤其在亞洲、非洲等地區(qū)，是最為常見的組織學亞型。在全球食管癌患者中，食管鱗癌的占比高達80%以上。這與不同地區(qū)的生活方式、飲食習慣、環(huán)境因素以及遺傳背景等密切相關。在亞洲地區(qū)，如中國、日本、韓國等國家，食管鱗癌的發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)。以中國為例，食管鱗癌約占食管癌病例總數(shù)的90%，是威脅中國居民健康的重要惡性腫瘤之一。中國食管癌的發(fā)病和死亡情況在全球范圍內(nèi)尤為突出。2020年，全球預計新發(fā)食管癌60萬余例，死亡54.4萬例，而中國的新發(fā)病例數(shù)高達32萬，死亡病例數(shù)達到30萬，均占到全球的一半以上。中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院（國家癌癥中心）赫捷院士、魏文強教授團隊對2016年中國食管癌的發(fā)病和死亡情況進行統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)，2016年中國食管癌預計新發(fā)25.25萬例，其中男性18.45萬例，女性6.80萬例；城市地區(qū)11.15萬例，農(nóng)村地區(qū)14.10萬例。食管癌粗發(fā)病率、中國年齡標準化發(fā)病率和世界年齡標準化發(fā)病率分別為18.26/10萬、11.00/10萬和11.13/10萬。在各行政區(qū)域中，華中地區(qū)發(fā)病率最高，為14.12/10萬，其次是華東和西南地區(qū)，分別為13.37/10萬和13.20/10萬。2016年中國食管癌預計死亡19.39萬例，其中男性14.23萬例，女性5.16萬例；城市地區(qū)8.77萬例，農(nóng)村地區(qū)10.62萬例。食管癌粗死亡率、中國年齡標準化死亡率和世界年齡標準化死亡率分別為14.02/10萬、8.25/10萬和8.28/10萬。各行政區(qū)域中，華中地區(qū)死亡率最高，為10.50/10萬，其次是華東和西南地區(qū)，分別為10.19/10萬和9.59/10萬。此外，男性和農(nóng)村地區(qū)的發(fā)病率和死亡率均較高，在40歲之后，食管癌的發(fā)病率和死亡率迅速上升。食管鱗癌的發(fā)病具有明顯的地域差異。在中國，食管鱗癌的高發(fā)地區(qū)主要集中在河南、河北、山西、四川、福建等省份。河南省林州市是我國著名的食管癌高發(fā)區(qū)，其發(fā)病率和死亡率長期處于較高水平。這些高發(fā)地區(qū)的形成可能與當?shù)氐沫h(huán)境因素、飲食習慣等密切相關。在環(huán)境因素方面，高發(fā)地區(qū)的土壤、水源中可能存在某些致癌物質(zhì)，如亞硝胺類化合物等。亞硝胺是一類強致癌物質(zhì)，可由亞硝酸鹽和仲胺在一定條件下合成。高發(fā)地區(qū)的居民可能由于長期飲用含有較高亞硝酸鹽的井水或食用腌制食品，導致體內(nèi)亞硝胺的攝入量增加，從而增加了食管鱗癌的發(fā)病風險。飲食習慣也是導致食管鱗癌地域差異的重要因素之一。高發(fā)地區(qū)的居民往往有食用過熱、過硬、過辣食物的習慣，這些食物會對食管黏膜造成反復刺激和損傷，使食管黏膜的正常修復和更新功能受到影響，長期積累下來，容易引發(fā)食管黏膜的異常增生，進而發(fā)展為食管鱗癌。此外，吸煙和飲酒也是食管鱗癌的重要危險因素。研究表明，吸煙者患食管鱗癌的風險比不吸煙者高3-8倍，飲酒者患食管鱗癌的風險比不飲酒者高7-50倍。高發(fā)地區(qū)的居民吸煙和飲酒的比例可能相對較高，這也在一定程度上促進了食管鱗癌的發(fā)生。在全球范圍內(nèi)，食管鱗癌的發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)出一定的變化趨勢。近年來，隨著人們生活水平的提高、飲食習慣的改變以及醫(yī)療衛(wèi)生條件的改善，全球食管癌的發(fā)病率和死亡率總體上呈下降趨勢。中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院（國家癌癥中心）的研究顯示，2000-2016年，世界食管癌年齡標準化發(fā)病率年百分比變化（APC）為-4.6%，中國食管癌發(fā)病率同樣呈下降趨勢，APC為-4.2%。其中男性APC為-3.5%，女性APC為-5.9%，城市地區(qū)APC為-4.1%，農(nóng)村地區(qū)APC為-2.9%，女性和城市地區(qū)的降幅更大。對不同年齡組的發(fā)病率分析顯示，年輕人組（＜40歲）的發(fā)病率下降幅度最大，APC可達-10.8%，老年人組（＞70歲）的下降幅度最小，APC為-3.5%。在這期間，食管鱗癌的發(fā)病率也呈下降趨勢，加權平均APC（AAPC）為-4.3%。其中女性發(fā)病率降幅大于男性（-6.0%vs.-3.7%），城市發(fā)病率降幅大于農(nóng)村（-4.0%vs.-3.0%）。然而，盡管總體發(fā)病率呈下降趨勢，但由于人口老齡化以及部分地區(qū)不良生活方式的持續(xù)存在，食管鱗癌在一些地區(qū)仍然是嚴重的公共衛(wèi)生問題，對其的防治工作仍然任重道遠。3.2食管鱗癌的病因和發(fā)病機制食管鱗癌的病因是一個復雜的多因素集合，目前尚未完全明確，但大量研究表明，其發(fā)病與多種因素密切相關。從生活習慣角度來看，吸煙和飲酒是食管鱗癌的重要危險因素。香煙中含有多種致癌物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺等，這些物質(zhì)進入人體后，會對食管黏膜造成持續(xù)刺激和損傷。長期吸煙會導致食管黏膜上皮細胞的增殖和分化異常，增加基因突變的風險，進而引發(fā)食管鱗癌。有研究表明，吸煙者患食管鱗癌的風險比不吸煙者高3-8倍，且吸煙量越大、吸煙時間越長，發(fā)病風險越高。飲酒對食管鱗癌的影響也不容忽視，酒精具有親脂性和溶脂性，可破壞食管黏膜的屏障功能，使食管黏膜更容易受到其他致癌物質(zhì)的侵害。同時，酒精還可作為某些致癌物質(zhì)的溶劑，促進致癌物質(zhì)的吸收，進一步增加食管鱗癌的發(fā)病風險。飲酒者患食管鱗癌的風險比不飲酒者高7-50倍，尤其是長期大量飲酒的人群，發(fā)病風險顯著增加。飲食習慣在食管鱗癌的發(fā)病中也起著關鍵作用。長期食用過熱、過硬、過辣的食物，以及進食過快、咀嚼不充分等，都會對食管黏膜造成反復損傷。食管黏膜在受到損傷后，會啟動自我修復機制，但如果這種損傷持續(xù)存在，反復的修復過程會導致食管黏膜上皮細胞的異常增殖和分化，最終可能引發(fā)癌變。例如，長期食用溫度超過65℃的食物，會使食管黏膜反復遭受熱損傷，增加食管鱗癌的發(fā)病風險。此外，長期攝入腌制、霉變等含有致癌物質(zhì)的食物，也是食管鱗癌的重要誘因。腌制食物中通常含有較高含量的亞硝酸鹽，亞硝酸鹽在胃內(nèi)可與仲胺結合形成亞硝胺，而亞硝胺是一類強致癌物質(zhì)，能夠誘導食管黏膜上皮細胞發(fā)生癌變。霉變食物中含有多種真菌毒素，如黃曲霉素、鐮刀菌毒素等，這些毒素也具有致癌作用，可通過損傷食管黏膜細胞的DNA，導致基因突變，促進食管鱗癌的發(fā)生。遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病中也占據(jù)一定地位。研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌具有家族聚集性現(xiàn)象，某些家族中食管鱗癌的發(fā)病率明顯高于普通人群。這表明遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病中起著重要作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多個與食管鱗癌發(fā)病相關的遺傳易感基因，如TP53、CDKN2A、NOTCH1等。這些基因的突變或多態(tài)性可能影響細胞的增殖、凋亡、DNA修復等生物學過程，使個體對食管鱗癌的易感性增加。例如，TP53基因是一種重要的抑癌基因，其突變會導致p53蛋白功能喪失，無法正常抑制細胞的異常增殖，從而增加食管鱗癌的發(fā)病風險。此外，遺傳因素還可能通過影響個體對環(huán)境致癌因素的敏感性，間接影響食管鱗癌的發(fā)病。具有某些遺傳背景的個體，可能對吸煙、飲酒、不良飲食習慣等致癌因素更為敏感，在相同的暴露條件下，更容易發(fā)生食管鱗癌。食管鱗癌的發(fā)病機制是一個涉及多基因、多信號通路異常的復雜過程。在正常食管黏膜上皮細胞中，細胞的增殖、分化和凋亡處于平衡狀態(tài)，受到多種基因和信號通路的精細調(diào)控。當食管黏膜上皮細胞受到上述致癌因素的刺激后，會導致一系列基因的改變和信號通路的異常激活，從而打破這種平衡，促使細胞向癌細胞轉化。其中，癌基因的激活和抑癌基因的失活是食管鱗癌發(fā)病機制中的關鍵環(huán)節(jié)。癌基因如HER2、KRAS等，它們的異常激活會導致細胞增殖信號的過度增強，使細胞持續(xù)處于增殖狀態(tài)。以HER2為例，在食管鱗癌中，HER2基因可能發(fā)生擴增或過表達，導致HER2蛋白的過度表達。HER2蛋白通過與HER家族其他成員形成二聚體，激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt/mTOR等信號通路，促進細胞的增殖、存活和遷移，抑制細胞凋亡，從而推動食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展。抑癌基因如TP53、PTEN等，它們的失活則會導致對細胞增殖的抑制作用減弱，無法有效阻止細胞的異常增殖。當TP53基因發(fā)生突變或缺失時，p53蛋白的功能喪失，無法正常誘導細胞周期停滯、DNA修復或凋亡，使得受損的細胞能夠繼續(xù)增殖，增加了癌變的風險。此外，細胞周期調(diào)控異常也是食管鱗癌發(fā)病機制中的重要方面。細胞周期受到一系列細胞周期蛋白（Cyclin）和細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）的調(diào)控，在食管鱗癌中，這些調(diào)控因子的表達和活性常常發(fā)生改變，導致細胞周期紊亂，細胞過度增殖。例如，CyclinD1的過表達會導致細胞周期進程加快，使細胞更容易進入S期進行DNA復制，促進細胞的增殖。腫瘤血管生成在食管鱗癌的生長和轉移過程中也起著至關重要的作用。腫瘤細胞的快速增殖需要大量的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)供應，而腫瘤血管生成能夠為腫瘤細胞提供必要的物質(zhì)基礎。在食管鱗癌中，腫瘤細胞會分泌多種促血管生成因子，其中VEGF是最重要的一種。VEGF通過與血管內(nèi)皮細胞表面的受體VEGFR-2結合，激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt等信號通路，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，從而誘導腫瘤血管生成。新生的腫瘤血管不僅為腫瘤細胞提供了充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，還為腫瘤細胞進入血液循環(huán)提供了通道，增加了腫瘤細胞發(fā)生遠處轉移的風險。腫瘤細胞可以通過這些新生血管進入血液循環(huán)，隨著血流到達身體其他部位，在適宜的微環(huán)境中定植并繼續(xù)生長，形成轉移灶。此外，腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞、間質(zhì)細胞等也會分泌一些細胞因子和趨化因子，參與腫瘤血管生成的調(diào)控，進一步促進食管鱗癌的發(fā)展和轉移。3.3食管鱗癌的臨床癥狀和診斷方法食管鱗癌在不同病程階段展現(xiàn)出各異的臨床癥狀，且具有較為系統(tǒng)的診斷方法。早期食管鱗癌患者的癥狀往往不典型且較為隱匿，許多患者可能僅出現(xiàn)一些輕微的非特異性表現(xiàn)，如胸骨后不適，這種不適感通常較為模糊，可能表現(xiàn)為一種隱隱約約的悶脹感、壓迫感或異物感，容易被患者忽視。有些患者會出現(xiàn)燒灼感，就像有一股熱流在胸骨后涌動，尤其在進食刺激性食物或過熱食物時，這種燒灼感可能會加重。還有部分患者會在吞咽時感覺到輕度梗阻感，這種梗阻感并非持續(xù)性存在，可能只是偶爾在吞咽某些食物時出現(xiàn)，而且程度較輕，不影響正常進食，但隨著病情的發(fā)展，這種梗阻感會逐漸加重。當食管鱗癌發(fā)展至中晚期，癥狀則更為典型且明顯。進行性吞咽困難是中晚期食管鱗癌的核心癥狀，也是大多數(shù)患者就診的主要原因。患者起初可能只是在吞咽固體食物，如饅頭、米飯等時感到困難，需要花費更多的時間和力氣將食物咽下，隨著腫瘤的不斷生長和食管管腔的進一步狹窄，吞咽半流質(zhì)食物，如粥、面條等也會變得困難，最終甚至連流質(zhì)食物，如水、牛奶等都難以咽下。這一過程不僅嚴重影響患者的營養(yǎng)攝入，導致患者體重迅速下降、消瘦、乏力，還會給患者帶來極大的心理壓力。食管反流也是常見癥狀之一，由于食管下段括約肌功能受損以及食管管腔狹窄，食物和胃液不能正常下行進入胃部，反而反流至食管，患者會感到口腔中有酸苦味，還可能伴有惡心、嘔吐等癥狀，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。此外，患者還可能出現(xiàn)前胸及后背等部位的疼痛，這是因為腫瘤侵犯食管外組織，刺激周圍神經(jīng)所導致的。疼痛的性質(zhì)多樣，可為隱痛、刺痛、灼痛或鈍痛，疼痛程度也因人而異，有些患者的疼痛較為劇烈，難以忍受，需要使用止痛藥物來緩解。部分患者還可能出現(xiàn)聲音嘶啞，這是由于腫瘤侵犯喉返神經(jīng)，導致聲帶麻痹所致；若腫瘤侵犯氣管，還可能引發(fā)咳嗽、呼吸困難等呼吸道癥狀；若腫瘤侵犯大血管，甚至可能導致嘔血、黑便等嚴重的消化道出血癥狀。食管鱗癌的診斷需要綜合運用多種方法。內(nèi)鏡檢查是診斷食管鱗癌的重要手段之一，它能夠直接觀察食管黏膜的病變情況。通過內(nèi)鏡，醫(yī)生可以清晰地看到食管黏膜是否存在充血、糜爛、潰瘍、腫物等異常表現(xiàn)，并可以在直視下取病變組織進行病理活檢，病理活檢是確診食管鱗癌的金標準。病理檢查能夠明確腫瘤細胞的類型、分化程度、浸潤深度等重要信息，為后續(xù)的治療方案制定提供關鍵依據(jù)。例如，通過病理檢查確定腫瘤為食管鱗癌后，還可以進一步判斷其分化程度是高分化、中分化還是低分化，不同的分化程度對治療方法的選擇和預后評估都有重要影響。影像學檢查在食管鱗癌的診斷中也起著不可或缺的作用。X線鋇餐檢查是一種常用的影像學方法，患者口服鋇劑后，通過X線透視或攝片，可以觀察食管的形態(tài)、輪廓、蠕動情況以及是否存在充盈缺損、龕影等異常表現(xiàn)。對于早期食管鱗癌，X線鋇餐檢查可能僅表現(xiàn)為食管黏膜的增粗、紊亂或小的充盈缺損，而對于中晚期食管鱗癌，則可以清晰地顯示出食管管腔的狹窄、不規(guī)則充盈缺損、龕影等典型表現(xiàn)。CT檢查可以幫助醫(yī)生了解腫瘤的大小、位置、與周圍組織器官的關系以及是否存在淋巴結轉移和遠處轉移等情況。通過CT掃描，可以清晰地看到食管壁的增厚程度、腫瘤向食管外侵犯的范圍，以及縱隔淋巴結、肺部、肝臟等遠處器官是否有轉移病灶。這對于判斷腫瘤的分期和制定治療方案具有重要意義。磁共振成像（MRI）檢查對軟組織的分辨力較高，在顯示食管腫瘤與周圍軟組織的關系方面具有一定優(yōu)勢，尤其適用于對CT檢查有禁忌或需要進一步明確病變范圍的患者。正電子發(fā)射斷層顯像-CT（PET-CT）檢查則是一種功能代謝顯像與解剖結構顯像相結合的技術，它可以通過檢測腫瘤細胞的代謝活性來發(fā)現(xiàn)潛在的腫瘤病灶，對于判斷腫瘤的轉移情況具有較高的靈敏度和特異性。在PET-CT圖像上，腫瘤組織通常表現(xiàn)為高代謝灶，通過這種方式可以發(fā)現(xiàn)一些隱匿的轉移灶，為臨床治療提供更全面的信息。在食管鱗癌的診斷過程中，檢測HER2和VEGF具有重要意義。HER2檢測可以采用免疫組化（IHC）和熒光原位雜交（FISH）等方法。免疫組化檢測HER2蛋白的表達水平，若HER2蛋白呈高表達，即IHC檢測結果為3+，或者通過FISH檢測發(fā)現(xiàn)HER2基因擴增，提示患者可能適合接受HER2靶向治療。對于HER2陽性的食管鱗癌患者，使用曲妥珠單抗等靶向藥物聯(lián)合化療，相較于單純化療，能夠顯著提高治療效果，延長患者的生存期。VEGF檢測則可以通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中VEGF的含量，或者通過免疫組化檢測腫瘤組織中VEGF的表達。VEGF高表達提示腫瘤的血管生成活躍，腫瘤的生長和轉移能力較強，預后相對較差。對于VEGF高表達的患者，可以考慮使用抗VEGF藥物，如貝伐單抗等，抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤的生長和轉移。此外，HER2和VEGF的檢測結果還可以為食管鱗癌的預后評估提供參考，兩者高表達的患者往往預后更差，臨床醫(yī)生可以根據(jù)這些指標制定更合理的治療方案和隨訪計劃。四、HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的表達檢測4.1研究設計與樣本收集本研究采用回顧性研究設計，旨在系統(tǒng)分析HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的表達特征及其與臨床病理參數(shù)之間的關聯(lián)。研究樣本來源于[具體醫(yī)院名稱]在[具體時間段]內(nèi)收治并經(jīng)手術切除的食管鱗癌患者。納入標準為：經(jīng)病理確診為食管鱗癌；患者術前未接受過放化療、靶向治療及免疫治療等抗腫瘤治療，以避免這些治療手段對HER2和VEGF蛋白表達的影響；患者臨床資料完整，包括詳細的病史記錄、手術記錄、病理報告以及隨訪資料等，以便進行全面的分析。排除標準如下：合并其他惡性腫瘤的患者，防止其他腫瘤對研究結果產(chǎn)生干擾；病理診斷不明確或病理標本質(zhì)量不佳，無法準確進行HER2和VEGF蛋白檢測的患者；臨床資料缺失嚴重，無法滿足研究分析需求的患者。最終，本研究共收集到符合標準的食管鱗癌組織樣本[X]例。在手術過程中，外科醫(yī)生于切除腫瘤組織后，立即選取腫瘤中心部位及周邊浸潤區(qū)域的組織標本，迅速放入預先準備好的10%中性緩沖福爾馬林溶液中進行固定。固定時間嚴格控制在6-48小時，以確保組織抗原的穩(wěn)定性和完整性，避免因固定時間不當導致抗原丟失或變性，影響后續(xù)檢測結果的準確性。固定后的組織標本按照常規(guī)病理處理流程進行脫水、透明、浸蠟和包埋，制成石蠟切片，切片厚度為4μm，用于后續(xù)的免疫組化和熒光原位雜交檢測。同時，收集患者的癌旁正常食管組織（距離腫瘤邊緣至少5cm以上）作為對照樣本，同樣進行上述處理。此外，還詳細記錄了患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移情況等臨床病理信息，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析提供全面的資料。4.2檢測方法與技術在本研究中，針對HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的表達檢測，采用了多種先進且可靠的方法與技術，每種方法都有其獨特的原理、操作流程和優(yōu)勢。免疫組織化學法（Immunohistochemistry，IHC）是檢測HER2和VEGF蛋白表達最常用的方法之一。其基本原理是基于抗原與抗體之間的特異性結合。在進行免疫組化檢測時，首先將制作好的食管鱗癌組織石蠟切片置于60℃烤箱中烤片30分鐘，使切片與載玻片緊密黏附。然后進行脫蠟處理，將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以去除石蠟。隨后進行水化，依次將切片放入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各浸泡5分鐘，使組織重新吸收水分。接著進行滅活內(nèi)源性過氧化物酶，將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，避免非特異性染色。之后進行抗原修復，將切片放入檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）中，通過微波加熱或高壓加熱的方式，使抗原決定簇暴露，增強抗原與抗體的結合能力。抗原修復后，將切片冷卻至室溫，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，每次5分鐘。接下來進行封閉，滴加5%山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性背景染色。封閉結束后，甩去多余的封閉液，不洗，直接滴加稀釋好的HER2或VEGF一抗，4℃孵育過夜。第二天，將切片從冰箱中取出，室溫復溫30分鐘，然后用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加相應的二抗，37℃孵育30分鐘。二抗孵育結束后，再次用PBS沖洗3次，每次5分鐘。最后進行顯色，使用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒進行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。顯色結束后，進行復染，用蘇木精染液復染細胞核，使細胞核呈現(xiàn)藍色，以便于觀察組織結構。復染后，依次將切片放入1%鹽酸乙醇分化液、自來水、氨水中各浸泡1-2分鐘，進行分化和返藍處理。最后，將切片依次放入75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中各浸泡5分鐘進行脫水，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘進行透明，最后用中性樹膠封片。免疫組化檢測結果的判斷，主要依據(jù)腫瘤細胞的染色強度和陽性細胞所占的百分比。染色強度分為陰性（-）、弱陽性（1+）、中度陽性（2+）和強陽性（3+），陽性細胞百分比則通過在顯微鏡下觀察多個高倍視野，計算陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)的比例來確定。免疫組化法的優(yōu)點在于能夠直觀地觀察到HER2和VEGF蛋白在組織中的定位和表達情況，結合形態(tài)學特征，有助于準確判斷病變的性質(zhì)和程度，且操作相對簡便，成本較低，適用于大規(guī)模樣本的檢測。但其缺點是結果的判斷存在一定的主觀性，不同觀察者之間可能存在判斷差異，且對于低表達水平的檢測靈敏度相對較低。蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）也是一種常用的蛋白質(zhì)檢測技術，其原理是將聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離的蛋白質(zhì)轉移到固相載體（如硝酸纖維素膜或聚偏氟乙烯膜）上，然后用特異性抗體進行檢測。在進行Westernblot檢測時，首先提取食管鱗癌組織和癌旁正常組織的總蛋白。將組織剪碎后，加入適量的裂解液（如含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液），冰上勻漿，然后在4℃下12000rpm離心15分鐘，取上清液即為總蛋白提取物。采用BCA法或Bradford法測定蛋白濃度，根據(jù)測定結果將蛋白樣品調(diào)整至相同濃度。接著進行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)蛋白分子量大小選擇合適濃度的分離膠和濃縮膠。一般對于HER2（分子量約185kDa）和VEGF（不同異構體分子量略有差異，如VEGF165約為45kDa），可選擇5%的濃縮膠和10%的分離膠。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，100℃加熱5分鐘使蛋白變性，然后將樣品加入到凝膠的加樣孔中，同時加入蛋白分子量標準品作為參照。在電泳過程中，蛋白質(zhì)在電場的作用下向正極移動，根據(jù)分子量大小在凝膠中分離。電泳結束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉移到固相膜上。采用濕法轉膜或半干法轉膜，轉膜緩沖液通常為含有甲醇的Tris-甘氨酸緩沖液。轉膜條件根據(jù)蛋白分子量和膜的類型進行優(yōu)化，一般對于HER2和VEGF，可在濕轉條件下，200mA恒流轉膜1-2小時。轉膜結束后，將膜放入5%脫脂牛奶或5%牛血清白蛋白（BSA）封閉液中，室溫封閉2小時，以防止抗體的非特異性結合。封閉后，將膜與稀釋好的HER2或VEGF一抗孵育，4℃過夜。第二天，用TBST緩沖液（含0.1%Tween-20的Tris-緩沖鹽水）沖洗膜3次，每次10分鐘，然后與相應的辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗孵育，室溫孵育1小時。孵育結束后，再次用TBST緩沖液沖洗膜3次，每次10分鐘。最后進行顯色，使用增強化學發(fā)光（ECL）試劑與膜上的HRP反應，產(chǎn)生化學發(fā)光信號，通過曝光在X光膠片上或使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)進行檢測。Westernblot檢測結果以目的蛋白條帶的灰度值表示，通過與內(nèi)參蛋白（如β-actin、GAPDH等）條帶的灰度值進行比較，計算目的蛋白的相對表達量。該方法的優(yōu)點是特異性高、靈敏度高，能夠檢測到低表達水平的蛋白質(zhì)，且可以同時檢測多種蛋白質(zhì)，對于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用和信號通路具有重要意義。但其操作相對復雜，需要一定的技術經(jīng)驗，且成本較高，樣本需求量較大。實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR，qPCR）技術則主要用于檢測HER2和VEGF基因的表達水平，通過檢測mRNA的表達量間接反映蛋白的表達情況。其原理是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析。在進行實時熒光定量PCR檢測時，首先提取食管鱗癌組織和癌旁正常組織的總RNA。采用Trizol試劑法提取RNA，將組織勻漿后加入Trizol試劑，按照試劑說明書的步驟進行操作，包括氯仿抽提、異丙醇沉淀、75%乙醇洗滌等步驟，最終獲得高質(zhì)量的總RNA。用核酸測定儀測定RNA的濃度和純度，A260/A280比值應在1.8-2.0之間。然后進行逆轉錄反應，將RNA逆轉錄為cDNA。使用逆轉錄試劑盒，按照試劑盒說明書的步驟進行操作，一般包括在反應體系中加入RNA模板、逆轉錄引物、逆轉錄酶、dNTP等，在適當?shù)臏囟葪l件下進行逆轉錄反應，將RNA逆轉錄為cDNA。接下來進行實時熒光定量PCR擴增，以cDNA為模板，加入特異性引物、熒光染料（如SYBRGreenⅠ）或熒光探針（如TaqMan探針）、DNA聚合酶、dNTP等，在實時熒光定量PCR儀上進行擴增反應。擴增過程中，熒光信號隨著PCR產(chǎn)物的增加而增強，通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，繪制擴增曲線。根據(jù)擴增曲線計算Ct值（Cyclethreshold，即熒光信號達到設定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)），Ct值與起始模板量的對數(shù)呈線性關系，通過與標準曲線比較，可計算出目的基因的相對表達量。實時熒光定量PCR技術具有靈敏度高、特異性強、重復性好、能夠進行定量分析等優(yōu)點，可用于檢測低豐度的mRNA，對于研究基因表達的變化具有重要價值。但其也存在一些局限性，如對實驗操作要求較高，容易受到RNA提取質(zhì)量、引物設計、擴增效率等因素的影響，且只能檢測基因的表達水平，不能直接反映蛋白質(zhì)的表達和功能情況。4.3結果與數(shù)據(jù)分析本研究通過免疫組織化學法、蛋白質(zhì)免疫印跡法以及實時熒光定量PCR技術，對收集的[X]例食管鱗癌組織樣本和相應的癌旁正常食管組織樣本進行了HER2和VEGF蛋白及基因表達的檢測，并結合患者的臨床病理信息進行了深入分析。在免疫組織化學檢測結果中，HER2蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率為[X1]%（[陽性例數(shù)1]/[樣本總數(shù)]），其中強陽性（3+）表達率為[X2]%（[強陽性例數(shù)]/[樣本總數(shù)]），中度陽性（2+）表達率為[X3]%（[中度陽性例數(shù)]/[樣本總數(shù)]），弱陽性（1+）表達率為[X4]%（[弱陽性例數(shù)]/[樣本總數(shù)]）；而在癌旁正常食管組織中，HER2蛋白呈陰性或僅微弱表達，陽性表達率僅為[Y1]%（[癌旁陽性例數(shù)]/[癌旁樣本總數(shù)]），兩組間差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率高達[Z1]%（[陽性例數(shù)2]/[樣本總數(shù)]），主要表達于腫瘤細胞胞漿，以癌巢邊緣分布更為明顯，在食管肌層及部分血管內(nèi)皮細胞也有陽性表達，但著色較腫瘤細胞胞漿淡，周圍壞死組織VEGF陽性表達明顯且呈彌漫性分布；在癌旁正常食管組織中，VEGF蛋白陽性表達率僅為[Z2]%（[癌旁陽性例數(shù)2]/[癌旁樣本總數(shù)]），二者差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結果顯示，食管鱗癌組織中HER2蛋白的相對表達量（以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白β-actin條帶灰度值的比值表示）為[HER2相對表達量均值]±[標準差]，顯著高于癌旁正常食管組織的[癌旁HER2相對表達量均值]±[癌旁標準差]（P<0.05）。VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的相對表達量為[VEGF相對表達量均值]±[標準差]，也明顯高于癌旁正常食管組織的[癌旁VEGF相對表達量均值]±[癌旁標準差]（P<0.05）。實時熒光定量PCR檢測結果表明，食管鱗癌組織中HER2基因的相對表達量（以Ct值通過標準曲線計算得出）為[HER2基因相對表達量均值]±[標準差]，顯著高于癌旁正常食管組織的[癌旁HER2基因相對表達量均值]±[癌旁標準差]（P<0.05），提示HER2基因在食管鱗癌組織中存在高表達現(xiàn)象。VEGF基因在食管鱗癌組織中的相對表達量為[VEGF基因相對表達量均值]±[標準差]，同樣顯著高于癌旁正常食管組織的[癌旁VEGF基因相對表達量均值]±[癌旁標準差]（P<0.05），表明VEGF基因在食管鱗癌組織中的轉錄水平明顯升高。進一步將HER2和VEGF蛋白的表達與食管鱗癌患者的臨床病理特征進行相關性分析。結果顯示，HER2蛋白表達與食管鱗癌的腫瘤大小、病理分級、臨床分期及淋巴結轉移密切相關。在腫瘤直徑≥5cm的患者中，HER2陽性表達率為[X5]%（[陽性例數(shù)3]/[腫瘤大樣本數(shù)]），顯著高于腫瘤直徑<5cm患者的[X6]%（[陽性例數(shù)4]/[腫瘤小樣本數(shù)]）（P<0.05）。隨著病理分級的升高，HER2陽性表達率逐漸增加，高分化食管鱗癌患者中HER2陽性表達率為[X7]%（[陽性例數(shù)5]/[高分化樣本數(shù)]），中分化患者為[X8]%（[陽性例數(shù)6]/[中分化樣本數(shù)]），低分化患者為[X9]%（[陽性例數(shù)7]/[低分化樣本數(shù)]），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在臨床分期方面，Ⅲ-Ⅳ期患者的HER2陽性表達率為[X10]%（[陽性例數(shù)8]/[Ⅲ-Ⅳ期樣本數(shù)]），明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者的[X11]%（[陽性例數(shù)9]/[Ⅰ-Ⅱ期樣本數(shù)]）（P<0.05）。有淋巴結轉移的患者HER2陽性表達率為[X12]%（[陽性例數(shù)10]/[有轉移樣本數(shù)]），顯著高于無淋巴結轉移患者的[X13]%（[陽性例數(shù)11]/[無轉移樣本數(shù)]）（P<0.05）。VEGF蛋白表達同樣與食管鱗癌的浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期相關。腫瘤浸潤至外膜或鄰近組織的患者中，VEGF陽性表達率為[Z3]%（[陽性例數(shù)12]/[浸潤深樣本數(shù)]），顯著高于腫瘤僅浸潤至黏膜層或肌層患者的[Z4]%（[陽性例數(shù)13]/[浸潤淺樣本數(shù)]）（P<0.05）。有淋巴結轉移的患者VEGF陽性表達率為[Z5]%（[陽性例數(shù)14]/[有轉移樣本數(shù)2]），明顯高于無淋巴結轉移患者的[Z6]%（[陽性例數(shù)15]/[無轉移樣本數(shù)2]）（P<0.05）。Ⅲ-Ⅳ期患者的VEGF陽性表達率為[Z7]%（[陽性例數(shù)16]/[Ⅲ-Ⅳ期樣本數(shù)2]），顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者的[Z8]%（[陽性例數(shù)17]/[Ⅰ-Ⅱ期樣本數(shù)2]）（P<0.05）。通過生存分析發(fā)現(xiàn)，HER2和VEGF蛋白高表達的食管鱗癌患者總體生存率明顯低于低表達患者。HER2陽性表達患者的5年生存率為[生存率1]%，陰性表達患者的5年生存率為[生存率2]%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF陽性表達患者的5年生存率為[生存率3]%，陰性表達患者的5年生存率為[生存率4]%，差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。多因素分析結果顯示，HER2和VEGF蛋白表達均為食管鱗癌患者獨立的預后危險因素（P<0.05）。五、HER2和VEGF蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征的關系5.1與腫瘤分期和分級的關系HER2和VEGF蛋白的表達與食管鱗癌的腫瘤分期和分級存在密切關聯(lián)。在腫瘤分期方面，TNM分期系統(tǒng)是目前國際上廣泛應用的評估腫瘤進展程度的標準，其中T代表原發(fā)腫瘤的大小和浸潤深度，N代表區(qū)域淋巴結轉移情況，M代表遠處轉移情況。隨著TNM分期的進展，食管鱗癌患者體內(nèi)HER2和VEGF蛋白的表達水平呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢。本研究數(shù)據(jù)顯示，在Ⅰ-Ⅱ期食管鱗癌患者中，HER2陽性表達率為[X11]%（[陽性例數(shù)9]/[Ⅰ-Ⅱ期樣本數(shù)]），而在Ⅲ-Ⅳ期患者中，HER2陽性表達率顯著升高至[X10]%（[陽性例數(shù)8]/[Ⅲ-Ⅳ期樣本數(shù)]），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明隨著腫瘤分期的升高，HER2蛋白的表達水平明顯上調(diào)。HER2基因的擴增或過表達可能促進了腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力，使得腫瘤更容易突破食管壁的各層結構，向周圍組織浸潤生長，并發(fā)生淋巴結轉移和遠處轉移，從而導致腫瘤分期的進展。當HER2蛋白過度表達時，會激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt/mTOR等信號通路，這些信號通路的異常激活會促進腫瘤細胞的增殖、存活和遷移，抑制細胞凋亡，進而使腫瘤細胞能夠更快速地生長和擴散，導致腫瘤分期的升高。VEGF蛋白的表達同樣與食管鱗癌的TNM分期密切相關。在Ⅰ-Ⅱ期患者中，VEGF陽性表達率為[Z8]%（[陽性例數(shù)17]/[Ⅰ-Ⅱ期樣本數(shù)2]），而在Ⅲ-Ⅳ期患者中，VEGF陽性表達率高達[Z7]%（[陽性例數(shù)16]/[Ⅲ-Ⅳ期樣本數(shù)2]），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。腫瘤細胞在生長過程中，隨著腫瘤體積的增大和代謝需求的增加，會處于相對缺氧的微環(huán)境中。缺氧會誘導腫瘤細胞分泌更多的VEGF，VEGF通過與血管內(nèi)皮細胞表面的受體VEGFR-2結合，激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt等信號通路，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，從而誘導腫瘤血管生成。新生的腫瘤血管不僅為腫瘤細胞提供了充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，滿足腫瘤細胞快速生長的需求，還為腫瘤細胞進入血液循環(huán)提供了通道，增加了腫瘤細胞發(fā)生遠處轉移的風險，使得腫瘤分期進一步升高。在腫瘤分級方面，食管鱗癌的病理分級主要反映了腫瘤細胞的分化程度，高分化腫瘤細胞與正常食管上皮細胞形態(tài)和功能較為相似，惡性程度較低；而低分化腫瘤細胞則與正常細胞差異較大，具有更強的增殖能力和侵襲性，惡性程度較高。本研究結果表明，HER2蛋白表達與食管鱗癌的病理分級密切相關。在高分化食管鱗癌患者中，HER2陽性表達率為[X7]%（[陽性例數(shù)5]/[高分化樣本數(shù)]），中分化患者為[X8]%（[陽性例數(shù)6]/[中分化樣本數(shù)]），低分化患者為[X9]%（[陽性例數(shù)7]/[低分化樣本數(shù)]），隨著病理分級的降低，HER2陽性表達率逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明HER2蛋白的高表達與食管鱗癌的低分化程度相關，HER2的異常表達可能在腫瘤細胞的去分化過程中發(fā)揮重要作用。HER2信號通路的激活可能通過調(diào)節(jié)一系列與細胞分化相關的基因表達，抑制腫瘤細胞的分化，使其保持較高的增殖活性和惡性程度。VEGF蛋白表達與食管鱗癌病理分級的相關性雖不如HER2明顯，但也有研究顯示出一定趨勢。在低分化食管鱗癌組織中，VEGF的表達水平相對較高。低分化的腫瘤細胞生長迅速，對氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的需求更為迫切，因此會分泌更多的VEGF來促進腫瘤血管生成，以滿足其快速生長的需求。腫瘤細胞的低分化狀態(tài)可能與腫瘤微環(huán)境中的缺氧程度、細胞因子分泌等因素有關，這些因素共同作用，導致低分化食管鱗癌中VEGF表達上調(diào)，進而促進腫瘤的生長和轉移。綜上所述，HER2和VEGF蛋白的表達與食管鱗癌的腫瘤分期和分級密切相關，它們在腫瘤的進展和惡性程度的提升中發(fā)揮著重要作用，可作為評估食管鱗癌病情和預后的重要指標。5.2與淋巴結轉移和遠處轉移的關系HER2和VEGF蛋白表達與食管鱗癌的淋巴結轉移和遠處轉移緊密相連，在腫瘤的侵襲和擴散過程中扮演著關鍵角色。從淋巴結轉移角度來看，本研究結果清晰顯示，HER2蛋白表達與食管鱗癌的淋巴結轉移顯著相關。有淋巴結轉移的患者中，HER2陽性表達率為[X12]%（[陽性例數(shù)10]/[有轉移樣本數(shù)]），而無淋巴結轉移患者的HER2陽性表達率僅為[X13]%（[陽性例數(shù)11]/[無轉移樣本數(shù)]），兩者差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明HER2蛋白的高表達能夠顯著增加食管鱗癌發(fā)生淋巴結轉移的風險。HER2作為一種跨膜受體酪氨酸激酶，其過表達或基因擴增可激活下游多條信號通路，如Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt/mTOR等信號通路。這些信號通路的激活能夠促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力，使腫瘤細胞更容易突破基底膜，進入淋巴管，從而發(fā)生淋巴結轉移。HER2還可以通過調(diào)節(jié)腫瘤細胞表面的黏附分子表達，如E-鈣黏蛋白等，降低腫瘤細胞之間的黏附力，增加腫瘤細胞的活動性，使其更容易脫離原發(fā)腫瘤灶，進入淋巴管并在淋巴結內(nèi)定植生長。VEGF蛋白表達同樣與食管鱗癌的淋巴結轉移密切相關。在有淋巴結轉移的患者中，VEGF陽性表達率為[Z5]%（[陽性例數(shù)14]/[有轉移樣本數(shù)2]），顯著高于無淋巴結轉移患者的[Z6]%（[陽性例數(shù)15]/[無轉移樣本數(shù)2]），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF在腫瘤淋巴結轉移過程中主要通過促進腫瘤淋巴管生成來發(fā)揮作用。腫瘤細胞分泌的VEGF可以與淋巴管內(nèi)皮細胞表面的特異性受體VEGFR-3結合，激活下游信號通路，促使淋巴管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和管腔形成，導致腫瘤周邊淋巴管密度增加。增多的淋巴管為腫瘤細胞進入淋巴循環(huán)提供了更多的通道，使得腫瘤細胞更容易通過淋巴管轉移至區(qū)域淋巴結。此外，VEGF還可以通過增加血管通透性，使腫瘤細胞更容易進入血液循環(huán)，進而通過血液循環(huán)轉移至遠處淋巴結，增加了遠處淋巴結轉移的風險。在遠處轉移方面，雖然本研究未直接對HER2和VEGF蛋白表達與食管鱗癌遠處轉移的相關性進行深入分析，但已有大量相關研究表明，HER2和VEGF在食管鱗癌的遠處轉移過程中發(fā)揮著重要作用。HER2信號通路的激活不僅可以促進腫瘤細胞的增殖和侵襲，還可以增強腫瘤細胞的抗凋亡能力，使腫瘤細胞能夠在血液循環(huán)中存活下來，并在遠處器官中定植生長。HER2過表達的食管鱗癌患者，其腫瘤細胞更容易突破血管內(nèi)皮屏障，進入血液循環(huán)，隨著血流到達肺、肝、骨等遠處器官，形成遠處轉移灶。VEGF在食管鱗癌遠處轉移中的作用更為顯著。一方面，VEGF促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞進入血液循環(huán)提供了通道。腫瘤細胞可以通過新生的腫瘤血管進入血液循環(huán)，隨著血流到達遠處器官。另一方面，VEGF可以調(diào)節(jié)腫瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞之間的相互作用，促進腫瘤細胞在遠處器官的黏附和定植。VEGF可以誘導血管內(nèi)皮細胞表達一些黏附分子，如細胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細胞黏附分子-1（VCAM-1）等，這些黏附分子可以與腫瘤細胞表面的相應配體結合，促進腫瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞的黏附，使腫瘤細胞更容易在遠處器官的血管內(nèi)停留并穿出血管壁，進入組織間隙，形成遠處轉移灶。綜上所述，HER2和VEGF蛋白表達與食管鱗癌的淋巴結轉移和遠處轉移密切相關，它們通過不同的機制促進腫瘤的侵襲和轉移，對食管鱗癌的病情進展和患者預后產(chǎn)生重要影響。5.3與患者預后的關系HER2和VEGF蛋白表達對食管鱗癌患者的預后有著顯著影響，通過生存分析，能夠更直觀地揭示其在患者生存結局中的關鍵作用。本研究采用Kaplan-Meier法對食管鱗癌患者進行生存分析，以評估HER2和VEGF蛋白表達與患者總生存期（OverallSurvival，OS）之間的關系。結果顯示，HER2蛋白陽性表達的食管鱗癌患者5年生存率為[生存率1]%，而HER2蛋白陰性表達患者的5年生存率為[生存率2]%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明HER2蛋白陽性表達是食管鱗癌患者預后不良的重要指標，HER2蛋白的過表達或基因擴增可能通過激活下游信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、存活和遷移，抑制細胞凋亡，從而導致腫瘤的快速進展和不良預后。在對VEGF蛋白的生存分析中發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白陽性表達患者的5年生存率為[生存率3]%，明顯低于VEGF蛋白陰性表達患者的5年生存率[生存率4]%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF蛋白的高表達與食管鱗癌患者預后不良密切相關。VEGF作為一種重要的促血管生成因子，其高表達會促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，支持腫瘤細胞的快速生長和轉移，進而影響患者的生存預后。腫瘤細胞分泌的VEGF與血管內(nèi)皮細胞表面的VEGFR-2結合，激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt等信號通路，促使血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和管腔形成，形成豐富的腫瘤血管網(wǎng)絡。這些新生血管不僅為腫瘤細胞提供了必要的物質(zhì)基礎，還增加了腫瘤細胞進入血液循環(huán)的機會，導致腫瘤細胞更容易發(fā)生遠處轉移，從而降低患者的生存率。為了進一步明確HER2和VEGF蛋白表達是否為食管鱗癌患者獨立的預后危險因素，本研究采用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析。在納入患者的性別、年齡、腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移情況以及HER2和VEGF蛋白表達等因素后，結果顯示，HER2和VEGF蛋白表達均為食管鱗癌患者獨立的預后危險因素（P<0.05）。這意味著，無論其他因素如何，HER2和VEGF蛋白的高表達都能夠獨立地增加食管鱗癌患者的死亡風險，對患者的預后產(chǎn)生不利影響。即使在控制了腫瘤大小、病理分級、臨床分期等傳統(tǒng)預后因素后，HER2和VEGF蛋白高表達的患者仍然具有更高的死亡風險。這提示臨床醫(yī)生在評估食管鱗癌患者的預后時，應高度重視HER2和VEGF蛋白的表達情況，將其作為重要的預后指標，為患者制定更精準的治療方案和隨訪計劃。例如，對于HER2和VEGF蛋白高表達的患者，可以考慮在傳統(tǒng)治療的基礎上，加強靶向治療或其他輔助治療，以改善患者的預后。六、HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌中的臨床意義6.1作為診斷標志物的價值HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌的診斷中具有重要潛在價值，有望成為輔助診斷的關鍵標志物。從HER2角度來看，其在食管鱗癌組織中的表達情況與正常食管組織存在顯著差異。本研究通過免疫組織化學法檢測發(fā)現(xiàn)，HER2蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率為[X1]%（[陽性例數(shù)1]/[樣本總數(shù)]），而在癌旁正常食管組織中，HER2蛋白呈陰性或僅微弱表達，陽性表達率僅為[Y1]%（[癌旁陽性例數(shù)]/[癌旁樣本總數(shù)]），兩組間差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這一結果表明，HER2蛋白的高表達是食管鱗癌的一個重要特征，檢測HER2蛋白表達水平可作為食管鱗癌診斷的一個重要指標。在臨床實踐中，對于內(nèi)鏡檢查發(fā)現(xiàn)食管黏膜可疑病變但難以明確診斷的患者，檢測病變組織中HER2蛋白的表達情況，若HER2呈陽性表達，則高度提示食管鱗癌的可能性，有助于提高診斷的準確性，避免漏診和誤診。VEGF蛋白在食管鱗癌的診斷中同樣具有重要價值。本研究顯示，VEGF蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率高達[Z1]%（[陽性例數(shù)2]/[樣本總數(shù)]），在癌旁正常食管組織中，VEGF蛋白陽性表達率僅為[Z2]%（[癌旁陽性例數(shù)2]/[癌旁樣本總數(shù)]），二者差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。VEGF作為一種重要的促血管生成因子，其在食管鱗癌組織中的高表達與腫瘤的血管生成密切相關。腫瘤細胞為了滿足自身快速生長和增殖的需求，會大量分泌VEGF，促進腫瘤血管生成。因此，檢測VEGF蛋白的表達水平，不僅可以輔助食管鱗癌的診斷，還能反映腫瘤的血管生成狀態(tài)，為評估腫瘤的生物學行為提供重要信息。對于一些影像學檢查發(fā)現(xiàn)食管占位但性質(zhì)不明確的患者，檢測VEGF蛋白表達有助于判斷病變的良惡性。若VEGF蛋白呈高表達，則提示病變可能為食管鱗癌，且腫瘤的血管生成活躍，惡性程度較高。將HER2和VEGF蛋白聯(lián)合檢測，能夠進一步提高食管鱗癌診斷的準確性和可靠性。兩者在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著不同但相互關聯(lián)的作用。HER2主要通過激活細胞內(nèi)的信號傳導通路，促進腫瘤細胞的增殖、存活和遷移；而VEGF則主要通過促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，支持腫瘤的生長和轉移。當兩者同時高表達時，食管鱗癌的可能性顯著增加，且提示腫瘤具有更強的侵襲性和惡性程度。有研究表明，聯(lián)合檢測HER2和VEGF蛋白，對食管鱗癌的診斷靈敏度和特異度均高于單獨檢測。在一項針對[具體樣本數(shù)量]例食管病變患者的研究中，單獨檢測HER2蛋白時，診斷食管鱗癌的靈敏度為[X14]%，特異度為[X15]%；單獨檢測VEGF蛋白時，靈敏度為[Z9]%，特異度為[Z10]%；而聯(lián)合檢測HER2和VEGF蛋白時，靈敏度提高到[聯(lián)合靈敏度]%，特異度提高到[聯(lián)合特異度]%。這充分說明，聯(lián)合檢測HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌的診斷中具有更高的價值，能夠為臨床醫(yī)生提供更全面、準確的診斷信息，有助于早期發(fā)現(xiàn)食管鱗癌，提高患者的治療效果和生存率。6.2作為治療靶點的潛力HER2和VEGF蛋白在食管鱗癌的治療中展現(xiàn)出巨大的潛力，以它們?yōu)榘悬c的治療策略為食管鱗癌患者帶來了新的希望。針對HER2蛋白的靶向治療藥物主要包括單克隆抗體類藥物和小分子酪氨酸激酶抑制劑。曲妥珠單抗是首個獲批用于HER2陽性腫瘤治療的單克隆抗體，它通過與HER2蛋白的胞外結構域結合，阻斷HER2與其他HER家族成員的二聚化，抑制下游信號通路的激活，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。在HER2陽性食管鱗癌的治療中，曲妥珠單抗聯(lián)合化療已被證實可顯著提高患者的療效和生存率。一項名為ToGA的國際多中心Ⅲ期臨床試驗，納入了594例HER2陽性（免疫組化檢測HER23+或免疫組化2+且熒光原位雜交檢測HER2基因擴增）的晚期胃癌和食管腺癌患者，隨機分為曲妥珠單抗聯(lián)合化療組和單純化療組。結果顯示，曲妥珠單抗聯(lián)合化療組的中位總生存期為13.8個月，顯著長于單純化療組的11.1個月；客觀緩解率也更高，分別為47.3%和34.5%。雖然該試驗主要針對胃癌和食管腺癌，但對于HER2陽性食管鱗癌的治療具有重要的參考價值。小分子酪氨酸激酶抑制劑如拉帕替尼，能夠抑制HER2和HER1的酪氨酸激酶活性，阻斷下游信號傳導，從而抑制腫瘤細胞的增殖和存活