L-硒代蛋氨酸：豬氣管炎癥損傷的氨氣“克星”探究一、引言1.1研究背景與意義隨著現代養豬業向規?；?、集約化方向發展，養殖密度不斷增加，豬舍內的環境問題愈發凸顯，其中氨氣濃度過高是一個亟待解決的關鍵問題。氨氣是豬舍中常見的有害氣體之一，主要來源于豬的糞便、尿液以及未被完全消化的飼料等有機物的分解。據相關研究表明，一個年產10萬頭豬的豬場，每小時向大氣排放的氨氣可達159kg。在高濕、高溫且通風不良的環境中，氨氣的產生速度更快，濃度也更高。氨氣對豬的健康有著諸多危害。氨氣具有強烈的刺激性，其水溶液呈堿性，極易溶于水。當豬吸入氨氣后，氨氣會迅速溶解在呼吸道黏膜的水分中，形成堿性的氨水，從而對呼吸道黏膜產生強烈的刺激和腐蝕作用，引發氣管炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道疾病。有研究指出，當豬舍中氨濃度達到15μg/kg時，試驗豬只開始出現呼吸道疾??；當氨濃度達到35μg/kg時，豬會出現萎縮性鼻炎，并且隨著氨濃度升高，兩者發病率都急劇上升。長期暴露在高濃度氨氣中的豬，其免疫力會顯著下降，更容易感染其他疾病。氨氣還會對豬的生長性能產生負面影響，它會干擾豬的消化系統、呼吸系統和神經系統的正常功能，導致豬的生長速度減緩，料重比升高。氨氣濃度過高甚至會導致豬窒息死亡，在炎熱夏季或密閉空間中，這種情況更容易發生，死亡率可能超過30%。豬的氣管作為呼吸系統的重要組成部分，直接與外界空氣接觸，是氨氣等有害氣體進入豬體內的首要通道，極易受到氨氣的侵害。氨氣對豬氣管的損傷主要表現為氣管黏膜的充血、水腫、炎癥細胞浸潤，氣管內壁纖毛的萎縮、變短、脫落，以及纖毛擺動功能的抑制。這些損傷會破壞氣管的正常生理功能，使氣管的防御屏障受損，從而為細菌、病毒等病原體的入侵提供了可乘之機，進一步加重豬的呼吸道疾病。例如，豬肺炎支原體就容易在氣管纖毛受損的情況下乘虛而入，粘附于纖毛頂部，破壞纖毛上皮，致使纖毛喪失甩動粘液的功能，讓更多病原能夠在氣管內扎根或順利通過到達肺泡，造成更嚴重的肺部感染。L-硒代蛋氨酸是一種重要的有機硒化合物，在動物營養和健康領域具有重要的研究價值。硒是動物和人體必需的微量元素之一，在動物體內，它是谷胱甘肽氧化酶的必須組成部分，該酶在保護血紅細胞和細胞膜不被溶解性過氧化物產生不必要的氧化過程中發揮著至關重要的作用。L-硒代蛋氨酸作為硒的一種有機存在形式，具有高生物利用度的特點，能夠被動物更有效地吸收利用，有助于提高動物體內的硒水平。它具有較強的抗氧化活性，可以有效清除動物體內的自由基，減輕氧化應激帶來的損傷。研究表明，L-硒代蛋氨酸能夠消耗活性氧(ROS)，并有助于另一種重要抗氧化劑谷胱甘肽的形成和循環，從而保護細胞免受氧化損傷。L-硒代蛋氨酸還具有抗炎作用，能夠緩解各種組織和器官的炎癥反應。脂多糖（LPS）是一種細菌內毒素，可激活核因子-κB（NF-κB）通路，轉錄多種靶基因，刺激各種組織中引起炎癥損傷。而L-硒代蛋氨酸的積累對這些炎癥細胞因子的產生有抑制作用，通過NF-κB通路在許多器官中發揮抗炎和免疫反應。在豬養殖中，研究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應具有重要的理論意義和實踐意義。從理論層面來看，深入探究L-硒代蛋氨酸的保護機制，有助于進一步揭示硒在動物體內的生物學功能和作用途徑，豐富動物營養與免疫調節的理論知識體系，為后續相關研究提供重要的參考依據。從實踐角度出發，若能證實L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導的豬氣管炎癥損傷具有顯著的保護作用，那么在實際養豬生產中，通過合理添加L-硒代蛋氨酸作為飼料添加劑，就可以有效地減輕氨氣對豬氣管的損傷，降低豬呼吸道疾病的發生率，提高豬的健康水平和養殖效益。這不僅有助于減少因疾病導致的經濟損失，還能提高豬肉的品質和安全性，滿足消費者對優質豬肉的需求，促進養豬業的可持續健康發展。1.2國內外研究現狀在氨氣對豬氣管損傷的研究方面，國內外學者已取得了較為豐富的成果。國外研究起步較早，通過大量的實驗和觀察，深入剖析了氨氣對豬呼吸道的危害機制。研究表明，氨氣極易溶于水，其水溶液呈堿性，當豬吸入氨氣后，氨氣會迅速與呼吸道黏膜表面的水分結合，形成堿性的氨水，從而對呼吸道黏膜產生強烈的刺激和腐蝕作用。這種刺激會引發氣管黏膜的充血、水腫，使得氣管黏膜的屏障功能受損，為病原體的入侵創造了條件。氨氣還會導致氣管內壁纖毛的萎縮、變短、脫落，抑制纖毛的正常擺動功能，破壞氣管的自凈機制，使豬更容易受到呼吸道疾病的侵襲。相關實驗數據顯示，當豬舍中氨濃度達到15μg/kg時，試驗豬只就開始出現呼吸道疾??；當氨濃度達到35μg/kg時，豬會出現萎縮性鼻炎，且隨著氨濃度的進一步升高，這兩種疾病的發病率都急劇上升。國內學者在借鑒國外研究的基礎上，結合國內養豬業的實際情況，開展了一系列針對性的研究。他們不僅關注氨氣對豬氣管形態和功能的直接損傷，還深入探討了氨氣對豬氣管免疫功能的影響。研究發現，氨氣暴露會導致豬氣管內免疫細胞的活性和數量發生改變，影響免疫因子的分泌，從而降低豬氣管的免疫力，使豬更容易感染各種呼吸道病原體。有研究通過對長期暴露在高濃度氨氣環境中的豬進行檢測，發現其氣管內的白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的表達水平顯著升高，而干擾素-γ（IFN-γ）等免疫調節因子的表達水平則明顯降低，表明氨氣暴露引發了豬氣管的炎癥反應，并抑制了其免疫功能。國內學者還研究了氨氣與其他環境因素（如溫度、濕度、粉塵等）對豬氣管損傷的協同作用，為綜合防控豬呼吸道疾病提供了理論依據。在L-硒代蛋氨酸的相關研究中，其在動物營養和健康領域的重要作用逐漸被揭示。研究表明，L-硒代蛋氨酸作為一種有機硒化合物，具有高生物利用度的特點，能夠被動物更有效地吸收利用，從而提高動物體內的硒水平。在動物實驗中，補充L-硒代蛋氨酸的動物組織中的硒含量明顯高于未補充的動物，這為其在動物營養中的應用提供了有力支持。L-硒代蛋氨酸還具有顯著的抗氧化活性，能夠有效清除動物體內的自由基，減輕氧化應激對細胞和組織的損傷。自由基是動物體內代謝過程中產生的一類具有高度活性的分子，它們會攻擊細胞內的生物大分子，如脂質、蛋白質和核酸，導致細胞功能障礙和組織損傷。而L-硒代蛋氨酸可以通過消耗活性氧（ROS），并促進谷胱甘肽的形成和循環，增強細胞的抗氧化防御能力，保護細胞免受自由基的損傷。L-硒代蛋氨酸的抗炎作用也受到了廣泛關注。相關研究表明，它能夠通過抑制核因子-κB（NF-κB）通路的激活，減少炎癥細胞因子的產生，從而緩解各種組織和器官的炎癥反應。在脂多糖（LPS）誘導的炎癥模型中，L-硒代蛋氨酸能夠顯著降低炎癥組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）等炎癥因子的表達水平，減輕炎癥癥狀。在動物實驗中，給動物補充L-硒代蛋氨酸后，能夠有效緩解由各種炎癥刺激引起的組織損傷，提高動物的健康水平。盡管氨氣對豬氣管損傷以及L-硒代蛋氨酸的相關研究已經取得了一定的進展，但仍存在一些不足之處。在氨氣對豬氣管損傷的研究中，目前的研究主要集中在氨氣對豬氣管的急性損傷作用，對于長期低濃度氨氣暴露對豬氣管慢性損傷的機制研究還不夠深入。長期低濃度氨氣暴露可能會導致豬氣管的慢性炎癥、組織重塑等病理變化，這些變化可能會逐漸影響豬的生長性能和免疫力，但目前對這些方面的研究還相對較少。氨氣與其他環境因素（如霉菌毒素、病毒感染等）對豬氣管損傷的交互作用機制也有待進一步明確。在實際養豬生產中，豬往往同時暴露于多種有害因素中，這些因素之間可能會相互影響，加劇豬氣管的損傷，但目前對于它們之間的交互作用研究還不夠系統和全面。在L-硒代蛋氨酸的研究中，雖然已經明確了其在抗氧化和抗炎方面的作用，但對于其在豬氣管炎癥損傷中的具體保護機制，尤其是在分子和細胞水平上的作用機制，還需要進一步深入研究。L-硒代蛋氨酸如何調節豬氣管細胞內的信號通路，從而減輕炎癥損傷；它是否能夠通過調節免疫細胞的功能，增強豬氣管的免疫力等問題，都需要進一步的實驗驗證。目前關于L-硒代蛋氨酸在養豬生產中的應用研究還相對較少，其最佳添加劑量、添加時間以及與其他飼料添加劑的配伍性等方面還缺乏系統的研究，這限制了其在實際生產中的推廣應用。本文將針對當前研究的不足，深入探究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應及其作用機制。通過建立氨氣誘導的豬氣管炎癥損傷模型，研究不同劑量的L-硒代蛋氨酸對豬氣管形態、功能、免疫指標以及相關信號通路的影響，明確其最佳保護劑量和作用機制。本文還將研究L-硒代蛋氨酸與其他飼料添加劑（如維生素E、益生菌等）的協同作用，為開發高效、安全的豬呼吸道疾病防控方案提供理論依據和實踐指導，以促進養豬業的健康可持續發展。1.3研究目標與內容本研究旨在深入探究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應及其作用機制，為養豬業中預防和治療豬氣管炎癥損傷提供科學依據和新的策略。具體研究內容如下：氨氣誘導豬氣管炎癥損傷模型的建立：挑選健康、體重相近的仔豬若干，隨機分為對照組和氨氣暴露組。對照組仔豬飼養于正常環境中，氨氣暴露組仔豬置于氨氣濃度可控的環境艙內，通過調節氨氣發生器和通風系統，使環境艙內氨氣濃度穩定在設定水平（如50μg/kg、75μg/kg等，根據預實驗結果確定合適的濃度梯度），每天暴露一定時間（如6小時、8小時等），持續暴露一段時間（如7天、14天等）。在暴露期間，密切觀察仔豬的精神狀態、采食情況、呼吸頻率等指標。暴露結束后，采集仔豬的氣管組織，通過組織病理學檢查（如蘇木精-伊紅染色，觀察氣管黏膜的病理變化，包括充血、水腫、炎癥細胞浸潤等情況）、炎癥因子檢測（如采用酶聯免疫吸附測定法檢測氣管組織勻漿中白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子的含量）等方法，評估氨氣對豬氣管的損傷程度，確定成功建立氨氣誘導豬氣管炎癥損傷模型的最佳條件。L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷保護效應的研究：在建立氨氣誘導豬氣管炎癥損傷模型的基礎上，將氨氣暴露組仔豬進一步隨機分為不同劑量的L-硒代蛋氨酸處理組和模型對照組，對照組繼續給予基礎飼料，L-硒代蛋氨酸處理組在基礎飼料中添加不同劑量的L-硒代蛋氨酸（如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg等，根據前期研究和預實驗結果確定劑量范圍），持續飼養一段時間（與氨氣暴露時間相同）。實驗結束后，采集仔豬的氣管組織和血液樣本。對氣管組織進行組織病理學檢查，觀察氣管黏膜的形態結構變化，評估炎癥損傷程度；檢測氣管組織中炎癥因子（如白細胞介素-1β、白細胞介素-8等）、抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶等）的活性和含量，以及氧化應激指標（如丙二醛含量），分析L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導的豬氣管炎癥和氧化應激的影響；對血液樣本進行血常規檢測，分析白細胞、淋巴細胞等免疫細胞的數量和比例變化，評估L-硒代蛋氨酸對豬免疫功能的影響。通過以上實驗，明確L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應，并確定其最佳保護劑量。L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷保護機制的研究：選取最佳保護劑量的L-硒代蛋氨酸處理組和模型對照組仔豬，采集氣管組織，采用蛋白質免疫印跡法（Westernblot）檢測與炎癥相關的信號通路蛋白（如核因子-κB、絲裂原活化蛋白激酶等）的表達和磷酸化水平，探究L-硒代蛋氨酸是否通過調節這些信號通路來減輕氨氣誘導的豬氣管炎癥損傷；采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測氣管組織中與抗氧化、免疫調節相關基因（如血紅素加氧酶-1、干擾素-γ等）的mRNA表達水平，分析L-硒代蛋氨酸對這些基因表達的調控作用；利用免疫組織化學法檢測氣管組織中相關蛋白的表達定位，進一步明確L-硒代蛋氨酸的作用靶點和機制。通過以上分子生物學實驗，深入揭示L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護機制。1.4研究方法與技術路線本研究綜合運用多種研究方法，全面深入地探究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應及其作用機制，具體研究方法如下：動物實驗：挑選健康、體重相近的仔豬作為實驗動物，將其隨機分組，分別設置為對照組、氨氣暴露組以及不同劑量的L-硒代蛋氨酸處理組。對照組仔豬飼養于正常環境中，給予基礎飼料；氨氣暴露組仔豬置于氨氣濃度可控的環境艙內，每天暴露一定時間，持續暴露一段時間，以建立氨氣誘導豬氣管炎癥損傷模型；不同劑量的L-硒代蛋氨酸處理組在氨氣暴露的基礎上，在基礎飼料中添加不同劑量的L-硒代蛋氨酸。在實驗過程中，密切觀察仔豬的生長狀況、精神狀態、采食情況、呼吸頻率等指標。實驗結束后，采集仔豬的氣管組織、血液樣本等，用于后續的檢測分析。細胞實驗：分離培養豬氣管上皮細胞，將其分為對照組、氨氣處理組、L-硒代蛋氨酸處理組以及氨氣+L-硒代蛋氨酸處理組。對照組細胞正常培養，氨氣處理組細胞給予一定濃度的氨氣刺激，L-硒代蛋氨酸處理組細胞給予不同濃度的L-硒代蛋氨酸處理，氨氣+L-硒代蛋氨酸處理組細胞先給予氨氣刺激，再給予L-硒代蛋氨酸處理。培養一定時間后，檢測細胞的活力、凋亡率、炎癥因子分泌、抗氧化酶活性等指標，探究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管上皮細胞損傷的保護作用及機制。分子生物學方法：采用蛋白質免疫印跡法（Westernblot）檢測與炎癥、抗氧化、免疫調節等相關的信號通路蛋白的表達和磷酸化水平，如核因子-κB（NF-κB）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶B（AKT）等，分析L-硒代蛋氨酸對這些信號通路的調控作用；運用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測氣管組織或細胞中相關基因的mRNA表達水平，如炎癥因子（白細胞介素-1β、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等）、抗氧化酶（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶等）、免疫調節因子（干擾素-γ、白細胞介素-10等）等基因，探究L-硒代蛋氨酸對這些基因表達的影響；利用免疫組織化學法檢測氣管組織中相關蛋白的表達定位，進一步明確L-硒代蛋氨酸的作用靶點和機制。生化指標檢測：采用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）檢測氣管組織勻漿或細胞培養上清中炎癥因子、抗氧化酶、氧化應激指標等的含量，如白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丙二醛等；通過血常規檢測分析血液中白細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等免疫細胞的數量和比例變化，評估L-硒代蛋氨酸對豬免疫功能的影響。本研究的技術路線圖如下：實驗動物分組與處理健康仔豬隨機分為對照組、氨氣暴露組、不同劑量L-硒代蛋氨酸處理組（如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg等）。對照組：正常環境飼養，給予基礎飼料。氨氣暴露組：置于氨氣濃度可控環境艙，每天暴露一定時間（如6小時、8小時等），持續暴露一段時間（如7天、14天等）。L-硒代蛋氨酸處理組：在氨氣暴露基礎上，基礎飼料添加不同劑量L-硒代蛋氨酸，持續飼養與氨氣暴露相同時間。樣本采集實驗結束后，采集仔豬氣管組織、血液樣本。氣管組織一部分用于組織病理學檢查，一部分用于分子生物學和生化指標檢測。血液樣本用于血常規檢測。檢測分析組織病理學檢查：氣管組織進行蘇木精-伊紅染色，觀察氣管黏膜病理變化，評估炎癥損傷程度。分子生物學檢測：Westernblot檢測與炎癥相關信號通路蛋白（如NF-κB、MAPK等）表達和磷酸化水平。qRT-PCR檢測氣管組織中與抗氧化、免疫調節相關基因（如血紅素加氧酶-1、干擾素-γ等）mRNA表達水平。免疫組織化學法檢測氣管組織中相關蛋白表達定位。生化指標檢測：ELISA檢測氣管組織勻漿中炎癥因子（如白細胞介素-1β、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等）、抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶等）活性和含量，以及氧化應激指標（如丙二醛含量）。血常規檢測分析血液中白細胞、淋巴細胞等免疫細胞數量和比例變化。結果分析與討論對各項檢測結果進行統計分析，明確L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效應及最佳保護劑量。深入探討L-硒代蛋氨酸的保護機制，為養豬業中預防和治療豬氣管炎癥損傷提供科學依據和新策略。二、相關理論基礎2.1氨氣對豬氣管的損傷機制2.1.1氨氣的理化性質及來源氨氣（Ammonia）是一種無機化合物，化學式為NH?，摩爾質量為17.031g/mol。在常溫常壓下，氨氣是無色且具有特殊刺激性臭味的氣體，密度為0.5971g/cm3，比空氣輕，極易溶于水，常溫常壓下一體積水可溶解700體積氨，其水溶液呈弱堿性，易揮發。氨氣還具有一定的可燃性，與空氣或氧氣混合到一定濃度時會發生爆炸。在實驗室中，氨氣可由氯化銨和消石灰共熱制得；工業上則主要通過合成氨法制取。在豬舍環境中，氨氣的來源主要有以下幾個方面：豬的排泄物是氨氣產生的主要源頭。豬每天會排出大量的糞便和尿液，其中含有豐富的含氮有機物，如尿素、尿酸、蛋白質等。在適宜的溫度、濕度和微生物作用下，這些含氮有機物會被微生物分解，尿素在脲酶的催化下水解為氨氣和二氧化碳，蛋白質也會逐步分解產生氨氣。當豬舍內溫度在25-30℃，相對濕度在70%-80%時，糞便和尿液中的含氮物質分解速度加快，氨氣產生量顯著增加。飼料殘渣也是氨氣的重要來源之一。如果豬舍內的飼料投喂過多或豬只采食不充分，剩余的飼料殘渣會在豬舍內堆積。這些飼料殘渣中的蛋白質等營養成分在微生物的作用下會發生腐敗分解，從而產生氨氣。若飼料儲存不當，發生霉變，其分解過程中產生氨氣的速度和量會進一步增加。豬舍內的墊草，如稻草、麥秸等，若長時間不更換，在潮濕的環境中也容易被微生物分解，產生氨氣。豬舍內的微生物在代謝過程中也會產生氨氣，尤其是一些能夠分解含氮化合物的細菌和真菌，它們在適宜的環境下大量繁殖，加速了含氮物質的分解，從而增加了氨氣的產生量。2.1.2氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的過程當氨氣被豬吸入呼吸道后，因其極易溶于水，會迅速與氣管黏膜表面的水分結合，形成堿性的氨水。氨水的堿性較強，對氣管黏膜具有強烈的刺激和腐蝕作用，這是氨氣導致豬氣管炎癥損傷的初始階段。在這一階段，氣管黏膜上皮細胞的細胞膜和細胞器會受到損傷，細胞的正常代謝和功能受到干擾。細胞膜的通透性增加，細胞內的離子和小分子物質外流，導致細胞腫脹、變形。氣管黏膜的微血管也會受到影響，出現血管擴張、充血的現象，血液中的液體成分滲出到組織間隙，引起氣管黏膜的水腫。隨著氨氣刺激的持續，氣管黏膜的炎癥反應逐漸加劇。機體的免疫系統被激活，炎癥細胞如中性粒細胞、巨噬細胞等開始向氣管黏膜部位聚集。這些炎癥細胞釋放出多種炎癥介質，如組胺、前列腺素、白細胞三烯等，進一步加重了炎癥反應。組胺會使血管通透性進一步增加，導致更多的液體滲出，加重水腫；前列腺素和白細胞三烯則會引起氣管平滑肌收縮，導致氣管狹窄，影響氣體交換，使豬出現咳嗽、呼吸困難等癥狀。炎癥細胞還會釋放蛋白水解酶，如彈性蛋白酶、膠原酶等，這些酶會破壞氣管黏膜的結構蛋白，如膠原蛋白、彈性蛋白等，導致氣管黏膜的結構受損，纖毛上皮細胞的纖毛脫落、變短，纖毛的擺動功能受到抑制，氣管的自凈能力下降，無法有效清除呼吸道內的異物和病原體。長期暴露在高濃度氨氣環境中，氣管組織會發生進一步的損傷和修復過程，導致組織重塑。成纖維細胞被激活，開始合成和分泌大量的細胞外基質，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，這些細胞外基質在氣管組織中過度沉積，導致氣管壁增厚、變硬，管腔狹窄。氣管的軟骨組織也可能受到影響，出現軟骨萎縮、鈣化等變化，進一步影響氣管的正常結構和功能。氣管的神經末梢也會受到炎癥刺激，導致神經敏感性增加，容易引起咳嗽反射和氣道高反應性。這些病理變化會逐漸影響豬的生長性能和免疫力，使豬更容易感染其他呼吸道疾病，形成惡性循環，嚴重威脅豬的健康。2.1.3炎癥損傷相關的細胞因子與信號通路在氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的過程中，多種細胞因子參與其中，它們在炎癥反應的啟動、發展和調節中發揮著關鍵作用。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是一種重要的促炎細胞因子，主要由活化的巨噬細胞產生。當氨氣刺激氣管黏膜時，巨噬細胞被激活，釋放大量的TNF-α。TNF-α可以通過多種途徑加劇炎癥反應，它能夠激活血管內皮細胞，使其表達黏附分子，促進炎癥細胞如中性粒細胞、淋巴細胞等黏附并穿越血管內皮細胞，向炎癥部位浸潤；TNF-α還能誘導其他促炎細胞因子如白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）等的產生，形成細胞因子網絡，進一步放大炎癥信號；TNF-α還具有直接的細胞毒性作用，能夠誘導氣管黏膜上皮細胞凋亡，破壞氣管的正常結構和功能。白細胞介素-6（IL-6）也是一種重要的促炎細胞因子，它可以由多種細胞產生，包括巨噬細胞、單核細胞、成纖維細胞等。在氨氣誘導的氣管炎癥損傷中，IL-6的表達水平顯著升高。IL-6能夠促進B細胞增殖和分化，產生抗體，增強體液免疫反應；它還能刺激T細胞的活化和增殖，調節細胞免疫反應；IL-6還具有致熱作用，可引起機體發熱，加重炎癥反應。IL-6還可以通過與其他細胞因子相互作用，調節炎癥反應的強度和持續時間。核因子-κB（NF-κB）信號通路是一條在炎癥反應中起核心作用的信號傳導通路。在正常情況下，NF-κB以無活性的形式存在于細胞質中，與抑制蛋白IκB結合。當氨氣刺激氣管黏膜細胞時，細胞表面的模式識別受體（如Toll樣受體）識別氨氣等病原體相關分子模式，激活下游的信號分子，導致IκB激酶（IKK）活化。IKK使IκB磷酸化，進而被泛素化降解，釋放出NF-κB。NF-κB進入細胞核，與靶基因啟動子區域的κB位點結合，啟動一系列炎癥相關基因的轉錄，如TNF-α、IL-1、IL-6等細胞因子基因，以及黏附分子、趨化因子等基因，從而促進炎癥反應的發生和發展。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路也是參與氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的重要信號通路之一。MAPK家族包括細胞外信號調節激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等成員。當氨氣刺激氣管黏膜細胞時，激活的上游信號分子通過一系列磷酸化級聯反應，激活MAPK?；罨腗APK進入細胞核，磷酸化轉錄因子，調節炎癥相關基因的表達。p38MAPK可以磷酸化激活轉錄因子AP-1，促進TNF-α、IL-1等細胞因子的表達；JNK則可以通過磷酸化c-Jun，增強AP-1的活性，進一步促進炎癥基因的轉錄。MAPK信號通路還可以通過調節細胞的增殖、分化和凋亡，影響氣管組織的修復和重塑過程。二、相關理論基礎2.2L-硒代蛋氨酸的特性與作用機制2.2.1L-硒代蛋氨酸的結構與性質L-硒代蛋氨酸（L-Selenomethionine），分子式為C5H11NO2Se，分子量為196.11，是一種硒代手性氨基酸。其化學結構與蛋氨酸相似，只是在蛋氨酸分子中硫原子的位置被硒原子所取代。L-硒代蛋氨酸分子中含有一個氨基（-NH2）、一個羧基（-COOH）和一個硒甲基（-CH2SeCH3），這些官能團賦予了它獨特的化學性質。在物理性質方面，L-硒代蛋氨酸通常呈白色至類白色粉末狀，這是其在常見狀態下的外觀表現，這種粉末狀的形態有利于其在飼料等應用中的均勻混合。它微溶于水，在水中的溶解度相對較低，這使得它在水溶液中的分散和溶解需要一定的條件和處理方式。L-硒代蛋氨酸可溶于醇類有機溶劑，如乙醇、甲醇等，這種溶解性特點使其在一些需要有機溶劑的實驗和生產過程中具有一定的應用潛力。它的熔點為265°C，相對較高的熔點表明其分子間作用力較強，結構相對穩定，在一般的環境溫度下能夠保持固態。L-硒代蛋氨酸含有一個活性氨基酸單元，這使得它可與茚三酮類物質發生顯色反應，該反應常用于氨基酸的定性和定量分析，通過與茚三酮反應生成特定顏色的產物，可以方便地檢測和測定L-硒代蛋氨酸的含量。由于硒原子的存在，L-硒代蛋氨酸對常見的氧化劑較為敏感。硒原子具有一定的還原性，容易被氧化劑氧化，從而改變其化學結構和性質。在儲存和使用L-硒代蛋氨酸時，需要注意避免與強氧化劑接觸，以防止其被氧化而失去活性或產生其他不良反應。2.2.2L-硒代蛋氨酸在動物體內的代謝途徑L-硒代蛋氨酸在動物體內的代謝過程較為復雜，涉及多個器官和生理生化反應，主要包括吸收、分布、代謝和排泄等環節。在吸收階段，L-硒代蛋氨酸主要在動物的小腸內被吸收。小腸黏膜上皮細胞通過主動運輸和被動擴散兩種方式攝取L-硒代蛋氨酸。主動運輸需要載體蛋白和能量的參與，具有特異性和飽和性，能夠逆濃度梯度將L-硒代蛋氨酸轉運進入細胞內；被動擴散則是順著濃度梯度進行的，不需要載體和能量，但速度相對較慢。研究表明，L-硒代蛋氨酸的吸收效率較高，其吸收機制可能與蛋氨酸的吸收機制存在一定的相似性，因為它們的化學結構相近。一些因素如飼料中其他氨基酸的含量、礦物質的存在以及腸道微生物的組成等，都會影響L-硒代蛋氨酸的吸收。當飼料中蛋氨酸含量過高時，可能會競爭性抑制L-硒代蛋氨酸的吸收；而適量的鋅、鐵等礦物質則有助于促進其吸收。被吸收進入血液的L-硒代蛋氨酸會隨血液循環分布到動物的各個組織和器官中。肝臟作為動物體內重要的代謝器官，是L-硒代蛋氨酸的主要分布部位之一。在肝臟中，L-硒代蛋氨酸的濃度相對較高，這是因為肝臟具有豐富的代謝酶系和轉運蛋白，能夠對L-硒代蛋氨酸進行有效的攝取、代謝和儲存。肌肉組織也是L-硒代蛋氨酸的重要分布場所，肌肉中含有大量的蛋白質，L-硒代蛋氨酸可以參與肌肉蛋白質的合成，從而影響肌肉的生長和發育。在其他組織如腎臟、心臟、脾臟等，也都能檢測到L-硒代蛋氨酸的存在，但其分布濃度相對較低，且不同組織對L-硒代蛋氨酸的攝取和利用能力存在差異。這種差異與組織的代謝活性、功能需求以及細胞膜上轉運蛋白的表達水平等因素有關。在動物體內，L-硒代蛋氨酸會參與多種生理生化反應，其代謝途徑主要有以下幾種。一部分L-硒代蛋氨酸會直接參與蛋白質的合成過程。在核糖體上，L-硒代蛋氨酸與其他氨基酸按照mRNA的密碼子順序連接，形成含有硒代蛋氨酸殘基的蛋白質。這些含硒蛋白質在動物體內具有重要的生物學功能，如谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）就是一種含硒蛋白，它能夠催化谷胱甘肽（GSH）還原過氧化氫（H2O2）等過氧化物，從而保護細胞免受氧化損傷。L-硒代蛋氨酸還可以通過轉硫途徑代謝為硒半胱氨酸（SeCys）。在這個過程中，L-硒代蛋氨酸首先被轉化為硒高半胱氨酸，然后再通過一系列酶的作用生成SeCys。SeCys是硒蛋白合成的重要前體，它可以參與合成其他含硒酶和蛋白質，如硫氧還蛋白還原酶（TrxR）等，這些酶在維持細胞的氧化還原平衡和正常生理功能中發揮著關鍵作用。動物體內未被利用的L-硒代蛋氨酸及其代謝產物會通過排泄途徑排出體外。主要的排泄途徑是通過尿液排出，L-硒代蛋氨酸在體內經過代謝后，部分會轉化為水溶性的硒化合物，如硒酸鹽、亞硒酸鹽等，這些硒化合物會隨尿液排出體外。糞便也是L-硒代蛋氨酸的排泄途徑之一，未被吸收的L-硒代蛋氨酸以及腸道內未被完全代謝的產物會隨糞便排出。膽汁在L-硒代蛋氨酸的排泄中也起到一定的作用，一些硒化合物會通過膽汁分泌進入腸道，然后隨糞便排出。動物的種類、年齡、健康狀況以及飲食中硒的攝入量等因素，都會對L-硒代蛋氨酸的排泄產生影響。幼齡動物由于代謝旺盛，對硒的需求較高，其對L-硒代蛋氨酸的排泄相對較少；而老年動物或患有疾病的動物，其排泄量可能會增加。2.2.3L-硒代蛋氨酸的抗氧化與抗炎作用機制L-硒代蛋氨酸具有顯著的抗氧化作用，其作用機制主要與提高抗氧化酶活性和減少自由基生成有關。在動物體內，L-硒代蛋氨酸可以作為硒的供體，參與合成多種含硒抗氧化酶，如谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）、硫氧還蛋白還原酶（TrxR）等。這些抗氧化酶在維持細胞的氧化還原平衡中發揮著關鍵作用。GPx能夠催化谷胱甘肽（GSH）還原過氧化氫（H2O2）、有機過氧化物（ROOH）等過氧化物，將其轉化為無害的水或醇類物質，從而清除細胞內的活性氧（ROS）。其催化反應的方程式為：2GSH+ROOH→GSSG+ROH+H2O，在這個過程中，GPx中的硒原子起著關鍵的催化作用，它能夠接受過氧化物的電子，促進過氧化物的還原。當動物攝入足夠的L-硒代蛋氨酸時，體內GPx的活性會顯著提高，增強細胞對氧化應激的抵抗能力。研究表明，在氧化應激模型中，補充L-硒代蛋氨酸的實驗組細胞內GPx活性明顯高于對照組，細胞內ROS水平顯著降低，說明L-硒代蛋氨酸通過提高GPx活性，有效地清除了細胞內的ROS，減輕了氧化損傷。TrxR則可以催化硫氧還蛋白（Trx）的還原，維持Trx的還原態，從而保證Trx參與的一系列抗氧化反應的正常進行。Trx是一種重要的抗氧化蛋白，它能夠還原細胞內的蛋白質二硫鍵，保護蛋白質的結構和功能，還可以參與調節細胞內的信號通路，影響細胞的增殖、分化和凋亡。L-硒代蛋氨酸通過促進TrxR的合成和激活，增強了Trx的抗氧化能力，進一步提高了細胞的抗氧化防御系統。L-硒代蛋氨酸還可以通過其他途徑減少自由基的生成。它可以調節細胞內的代謝過程，抑制一些產生自由基的酶的活性，如黃嘌呤氧化酶等。黃嘌呤氧化酶在催化黃嘌呤氧化為尿酸的過程中會產生超氧陰離子自由基（O2?-），而L-硒代蛋氨酸可以抑制黃嘌呤氧化酶的活性，減少O2?-的生成。L-硒代蛋氨酸還可以與自由基直接反應，將其轉化為相對穩定的物質，從而降低自由基的濃度。它可以與羥自由基（?OH）反應，生成相對穩定的硒代化合物，減少?OH對細胞的損傷。在抗炎作用方面，L-硒代蛋氨酸主要通過抑制炎癥因子的表達來發揮作用。炎癥反應是機體對各種刺激的一種防御反應，但過度的炎癥反應會導致組織損傷和疾病的發生。在炎癥過程中，核因子-κB（NF-κB）信號通路起著核心作用。當細胞受到炎癥刺激時，NF-κB被激活，從細胞質轉移到細胞核內，與炎癥相關基因的啟動子區域結合，促進炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）等的轉錄和表達。L-硒代蛋氨酸可以抑制NF-κB信號通路的激活，從而減少炎癥因子的產生。研究表明，L-硒代蛋氨酸能夠抑制NF-κB的磷酸化和核轉位，降低其與DNA的結合活性，進而抑制炎癥相關基因的表達。在脂多糖（LPS）誘導的炎癥模型中，給予L-硒代蛋氨酸處理后，細胞內NF-κB的活性明顯降低，TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的mRNA和蛋白表達水平顯著下降，炎癥癥狀得到明顯緩解。L-硒代蛋氨酸還可以通過調節其他信號通路來發揮抗炎作用。它可以抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路的激活，MAPK信號通路包括細胞外信號調節激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等成員，在炎癥反應中，這些激酶被激活后會磷酸化下游的轉錄因子，促進炎癥因子的表達。L-硒代蛋氨酸可以抑制MAPK的磷酸化，從而阻斷其信號傳導，減少炎癥因子的產生。L-硒代蛋氨酸還可以調節細胞內的氧化還原狀態，影響炎癥相關信號通路的活性。細胞內的氧化還原狀態對炎癥反應具有重要的調節作用，過度的氧化應激會激活炎癥信號通路，而L-硒代蛋氨酸通過其抗氧化作用，維持細胞內的氧化還原平衡，從而抑制炎癥反應的發生和發展。三、實驗設計與方法3.1實驗動物與分組3.1.1實驗豬的選擇與飼養環境本實驗選用40頭健康的28日齡左右的杜×長×大三元雜交仔豬，體重范圍為8-10kg，購自[具體豬場名稱]。選擇該品種仔豬是因為其生長速度快、飼料轉化率高、適應性強，是目前養豬生產中廣泛應用的品種，對實驗結果的代表性和推廣應用具有重要意義。在實驗開始前，對所有仔豬進行全面的健康檢查，包括體溫、呼吸、精神狀態、糞便等指標，確保仔豬無疾病感染，身體健康狀況良好。仔豬飼養于[具體實驗豬場]的標準化豬舍內，豬舍采用全封閉式設計，配備先進的通風、溫控、濕度調節系統，以確保豬舍內環境條件的穩定和適宜。溫度控制方面，在實驗初期，仔豬的適宜環境溫度為30-32℃，隨著仔豬的生長，每周逐漸降低1-2℃，直至達到22-25℃的穩定溫度范圍。通過安裝在豬舍內的溫控設備（如暖風機、空調等），結合溫度傳感器實時監測豬舍內溫度，自動調節溫控設備的運行，確保溫度在設定范圍內波動不超過±1℃。濕度控制在60%-70%之間，采用加濕器和除濕器根據濕度傳感器反饋的濕度數據進行自動調節。適宜的濕度有助于維持仔豬呼吸道和皮膚的正常生理功能，減少呼吸道疾病和皮膚病的發生。豬舍保持良好的通風，采用機械通風和自然通風相結合的方式，通風量根據豬舍內的飼養密度和豬只的生長階段進行調整，確保每小時換氣次數在10-15次左右。通風系統能夠有效排出豬舍內的氨氣、硫化氫、二氧化碳等有害氣體，引入新鮮空氣，保持豬舍內空氣清新，降低有害氣體對仔豬呼吸道的刺激和損傷。豬舍內安裝紫外線消毒燈，每天定時進行消毒，消毒時間為30-60分鐘，以殺滅豬舍內的細菌、病毒等病原體，減少疾病傳播的風險。每周對豬舍進行一次全面的清潔和消毒，使用消毒劑（如過氧乙酸、戊二醛等）對豬舍地面、墻壁、欄桿、料槽、水槽等進行徹底噴灑和擦拭，確保豬舍環境的衛生安全。仔豬自由采食和飲水，提供全價配合飼料，飼料配方參照NRC（1998）豬的營養需要標準進行配制，確保飼料中含有足夠的能量、蛋白質、氨基酸、維生素和礦物質等營養成分，以滿足仔豬生長發育的需求。飼料原料選用優質的玉米、豆粕、魚粉、麩皮等，經過嚴格的質量檢測，確保無霉變、無污染。每天定時投喂飼料，分早、中、晚三次投喂，每次投喂量根據仔豬的采食情況和體重進行調整，保證仔豬能夠充分采食，同時避免飼料浪費。提供清潔的飲用水，通過自動飲水系統確保仔豬隨時能夠飲用充足的新鮮水，定期檢測飲用水的水質，確保水質符合畜禽飲用水標準，避免因飲水問題導致仔豬健康受損。3.1.2實驗分組與處理將40頭健康仔豬隨機分為5組，每組8頭，分別為對照組、氨氣暴露組、L-硒代蛋氨酸低劑量組、L-硒代蛋氨酸中劑量組和L-硒代蛋氨酸高劑量組。分組過程中，使用隨機數字表法進行分組，確保每組仔豬的初始體重、健康狀況等因素無顯著差異，以減少實驗誤差。對照組仔豬飼養于正常環境中，豬舍內氨氣濃度保持在5μg/kg以下，給予基礎飼料，不進行任何特殊處理。正常環境下的飼養條件能夠為其他實驗組提供對照，以觀察氨氣暴露和L-硒代蛋氨酸處理對仔豬氣管的影響。氨氣暴露組仔豬飼養于氨氣濃度可控的環境艙內，通過氨氣發生器和通風系統的精確調節，使環境艙內氨氣濃度穩定在50μg/kg，每天暴露8小時，持續暴露14天。選擇50μg/kg的氨氣濃度是基于前期預實驗結果和相關文獻報道，該濃度能夠在一定時間內誘導豬氣管產生明顯的炎癥損傷，同時又不會對仔豬的生命健康造成過大威脅，確保實驗的可操作性和有效性。每天暴露8小時是模擬實際養豬生產中豬只可能暴露在高濃度氨氣環境中的時間，具有實際應用參考價值。L-硒代蛋氨酸低劑量組、中劑量組和高劑量組仔豬在氨氣暴露的基礎上，分別在基礎飼料中添加0.1mg/kg、0.2mg/kg和0.3mg/kg的L-硒代蛋氨酸，持續飼養14天。選擇這三個劑量是根據前期研究和預實驗結果確定的，旨在探究不同劑量的L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護效果，確定其最佳保護劑量。L-硒代蛋氨酸以預混劑的形式添加到飼料中，確保其在飼料中均勻分布，仔豬能夠充分攝入。在添加過程中，嚴格按照實驗設計的劑量進行準確稱量和混合，避免劑量誤差對實驗結果產生影響。在實驗過程中，每天觀察并記錄仔豬的精神狀態、采食情況、飲水情況、呼吸頻率、咳嗽次數等指標，密切關注仔豬的健康狀況。若發現仔豬出現異常癥狀，如發熱、腹瀉、呼吸困難等，及時進行診斷和治療，并詳細記錄病情和治療措施。每周對仔豬進行一次體重測量，記錄體重變化情況，分析不同處理組仔豬的生長性能差異。實驗結束后，對所有仔豬進行安樂死處理，采集氣管組織、血液樣本等，用于后續的檢測分析。3.2實驗試劑與儀器3.2.1主要實驗試劑本實驗所需的主要試劑包括L-硒代蛋氨酸、氨氣、細胞因子檢測試劑盒、抗氧化酶檢測試劑盒、氧化應激指標檢測試劑盒、RNA提取試劑盒、反轉錄試劑盒、實時熒光定量PCR試劑盒、蛋白質提取試劑盒、Westernblot相關試劑、免疫組織化學試劑盒等，具體信息如下：L-硒代蛋氨酸：純度≥98%，購自[具體供應商名稱]，如上海源葉生物科技有限公司，規格為250mg、1g、5g等。該試劑為白色至類白色粉末，微溶于水，可溶于醇類有機溶劑，是本實驗中用于研究對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷保護效應的關鍵試劑。氨氣：采用純度為99.9%的氨氣鋼瓶氣，購自[氣體供應商名稱]，如南京特種氣體廠股份有限公司。實驗中通過氨氣發生器和通風系統將氨氣通入環境艙，以調節環境艙內的氨氣濃度，用于建立氨氣誘導豬氣管炎癥損傷模型。細胞因子檢測試劑盒：包括白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子的檢測試劑盒，購自[試劑盒供應商名稱]，如南京建成生物工程研究所。這些試劑盒采用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法，用于檢測氣管組織勻漿或細胞培養上清中細胞因子的含量，以評估炎癥反應的程度?？寡趸笝z測試劑盒：超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）等抗氧化酶的檢測試劑盒，同樣購自南京建成生物工程研究所。這些試劑盒用于檢測氣管組織中抗氧化酶的活性，以評估L-硒代蛋氨酸對豬氣管抗氧化能力的影響。氧化應激指標檢測試劑盒：丙二醛（MDA）檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所，用于檢測氣管組織中MDA的含量，作為評估氧化應激程度的指標之一。RNA提取試劑盒：使用Trizol試劑（購自[試劑供應商名稱]，如Invitrogen公司）或其他品牌的RNA提取試劑盒，用于提取氣管組織或細胞中的總RNA，為后續的實時熒光定量PCR實驗做準備。反轉錄試劑盒：如PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser（TaKaRa公司），用于將提取的總RNA反轉錄為cDNA，以便進行實時熒光定量PCR檢測基因的表達水平。實時熒光定量PCR試劑盒：SYBRPremixExTaqII（TaKaRa公司）或其他品牌的實時熒光定量PCR試劑盒，用于檢測氣管組織中與抗氧化、免疫調節相關基因的mRNA表達水平，分析L-硒代蛋氨酸對這些基因表達的調控作用。蛋白質提取試劑盒：RIPA裂解液（購自[試劑供應商名稱]，如碧云天生物技術有限公司），用于提取氣管組織或細胞中的總蛋白質，為Westernblot實驗做準備。Westernblot相關試劑：包括SDS凝膠制備試劑盒、蛋白上樣緩沖液、電泳緩沖液、轉膜緩沖液、封閉液、一抗（如抗NF-κB抗體、抗MAPK抗體等）、二抗（如辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG抗體等）、化學發光底物（如ECL發光液）等，用于檢測與炎癥相關的信號通路蛋白的表達和磷酸化水平。免疫組織化學試劑盒：包括免疫組化染色試劑盒、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒等，購自[試劑盒供應商名稱]，如北京中杉金橋生物技術有限公司。這些試劑盒用于檢測氣管組織中相關蛋白的表達定位，進一步明確L-硒代蛋氨酸的作用靶點和機制。3.2.2實驗儀器設備本實驗所需的儀器設備涵蓋動物飼養、細胞培養、檢測分析等多個方面，具體儀器及用途如下：動物飼養設備：豬舍及環境控制系統：如前文所述，實驗豬飼養于全封閉式標準化豬舍內，配備先進的通風、溫控、濕度調節系統，確保豬舍內溫度、濕度、通風等環境條件適宜且穩定，為實驗豬提供良好的飼養環境。氨氣濃度監測儀：采用高精度的氨氣傳感器（如德爾格X-am5600氣體檢測儀），實時監測豬舍內或環境艙內的氨氣濃度，確保氨氣濃度維持在實驗設定水平，保證實驗條件的準確性和一致性。電子天平：用于稱量仔豬體重、飼料以及試劑等物品，精度為0.01kg（如梅特勒-托利多電子天平），確保實驗數據的準確性和實驗操作的精確性。細胞培養儀器：二氧化碳培養箱：型號為[具體型號]，如ThermoScientificHeracellVios160i二氧化碳培養箱，提供穩定的溫度（37℃）、濕度（95%）和二氧化碳濃度（5%）環境，用于豬氣管上皮細胞的培養，滿足細胞生長的需求。超凈工作臺：如蘇州安泰空氣技術有限公司的SW-CJ-2FD型雙人雙面凈化工作臺，提供無菌操作環境，防止細胞培養過程中受到微生物污染，保證細胞培養實驗的順利進行。離心機：型號為[具體型號]，如Eppendorf5810R離心機，用于細胞培養過程中的細胞收集、洗滌以及培養液的分離等操作，轉速范圍為0-15000rpm，滿足不同實驗需求。倒置顯微鏡：型號為[具體型號]，如OlympusCKX53倒置顯微鏡，用于觀察細胞的形態、生長狀態以及細胞病變等情況，配備高分辨率攝像頭，可拍攝細胞圖像，記錄實驗結果。檢測分析儀器：酶標儀：型號為[具體型號]，如ThermoScientificMultiskanGO酶標儀，用于檢測細胞因子檢測試劑盒、抗氧化酶檢測試劑盒、氧化應激指標檢測試劑盒等的檢測結果，通過測量吸光度值，定量分析樣品中相關物質的含量。實時熒光定量PCR儀：型號為[具體型號]，如ABIStepOnePlus實時熒光定量PCR儀，用于檢測氣管組織或細胞中相關基因的mRNA表達水平，具有高靈敏度、高準確性和高通量的特點，能夠快速、準確地獲取實驗數據。蛋白電泳儀及轉膜儀：蛋白電泳儀型號為[具體型號]，如Bio-RadMini-PROTEANTetra垂直電泳系統；轉膜儀型號為[具體型號]，如Bio-RadTrans-BlotTurbo轉膜系統，用于Westernblot實驗中蛋白質的分離和轉膜，將蛋白質從凝膠轉移到膜上，以便后續的抗體檢測?；瘜W發光成像系統：型號為[具體型號]，如Bio-RadChemiDocMP成像系統，用于檢測Westernblot實驗中化學發光底物產生的信號，拍攝蛋白條帶圖像，分析蛋白的表達水平和磷酸化水平。石蠟切片機：型號為[具體型號]，如LeicaRM2235石蠟切片機，用于將固定后的氣管組織切成薄片（厚度一般為4-6μm），以便進行組織病理學檢查和免疫組織化學染色。顯微鏡及圖像分析系統：型號為[具體型號]，如OlympusBX53顯微鏡，配備專業的圖像分析軟件（如Image-ProPlus），用于觀察組織切片的病理變化，分析免疫組織化學染色結果，測量相關指標（如炎癥細胞浸潤面積、蛋白表達強度等），為實驗結果的分析提供量化數據。3.3檢測指標與方法3.3.1豬氣管組織病理學觀察實驗結束后，迅速采集各組仔豬的氣管組織。將采集到的氣管組織用預冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和雜質，以保證組織的純凈度。將沖洗后的氣管組織放入4%多聚甲醛溶液中進行固定，固定時間為24-48小時，確保組織充分固定，保持其形態和結構的完整性。固定后的氣管組織按照常規石蠟切片制作流程進行處理。先將組織進行脫水處理，依次經過70%、80%、90%、95%和100%的乙醇溶液，每個濃度的乙醇溶液中浸泡一定時間（如70%乙醇浸泡2-3小時，80%乙醇浸泡1-2小時，90%乙醇浸泡1小時，95%乙醇浸泡30分鐘，100%乙醇浸泡2次，每次15-20分鐘），使組織中的水分逐漸被乙醇置換出來。脫水后的組織再經過二甲苯透明處理，在二甲苯中浸泡2-3次，每次10-15分鐘，使組織變得透明，便于后續的浸蠟和包埋。將透明后的組織放入融化的石蠟中進行浸蠟，浸蠟時間為2-3小時，分3次進行，每次更換新鮮的石蠟，使石蠟充分滲透到組織中。最后將浸蠟后的組織進行包埋，將組織放入包埋模具中，倒入融化的石蠟，待石蠟冷卻凝固后，組織就被包埋在石蠟塊中。將包埋好的石蠟塊用石蠟切片機切成厚度為4-6μm的薄片，切片過程中要注意保持切片的完整性和平整性。將切好的切片貼附在載玻片上，放入60℃烘箱中烘烤30-60分鐘，使切片牢固地貼附在載玻片上。對載玻片上的切片進行蘇木精-伊紅（HE）染色。先將切片放入蘇木精染液中染色5-10分鐘，使細胞核染成藍色；然后用自來水沖洗切片，去除多余的蘇木精染液；再將切片放入1%鹽酸酒精溶液中分化3-5秒，使細胞核的顏色更加清晰；接著用自來水沖洗切片，再放入伊紅染液中染色3-5分鐘，使細胞質染成紅色；最后用梯度乙醇（70%、80%、90%、95%、100%）脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。將染色后的切片置于光學顯微鏡下進行觀察。先用低倍鏡（4×、10×）觀察氣管組織的整體形態結構，了解氣管黏膜、黏膜下層、肌層和外膜的大致情況，觀察是否存在明顯的病變區域。再用高倍鏡（40×、100×）對病變區域進行詳細觀察，重點觀察炎癥細胞浸潤情況，如中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等的數量和分布；觀察氣管黏膜上皮細胞的形態變化，是否存在細胞腫脹、壞死、脫落等情況；觀察氣管黏膜的充血、水腫程度，以及纖毛的損傷情況，如纖毛是否變短、脫落、排列紊亂等。對觀察到的病理變化進行詳細記錄和拍照，并根據相關的病理評分標準對氣管組織的炎癥損傷程度進行評分，為后續的數據分析提供依據。3.3.2炎癥相關細胞因子的檢測采用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）檢測氣管組織勻漿中炎癥相關細胞因子白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等的含量。實驗結束后，迅速采集各組仔豬的氣管組織，將氣管組織用預冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和雜質，稱取適量的氣管組織（約0.1-0.2g），放入預冷的勻漿器中，加入1-2mL預冷的組織勻漿緩沖液（含有蛋白酶抑制劑，如苯甲基磺酰氟、抑肽酶等，以防止細胞因子在勻漿過程中被降解），在冰浴條件下進行勻漿處理，使組織充分破碎，細胞內容物釋放出來。將勻漿液轉移至離心管中，4℃、12000rpm離心15-20分鐘，取上清液，即為氣管組織勻漿。根據ELISA試劑盒（購自南京建成生物工程研究所等專業試劑公司）的說明書進行操作。先將所需的試劑和耗材準備齊全，包括ELISA板、標準品、檢測抗體、酶標二抗、底物溶液、終止液等，并將試劑盒恢復至室溫（25℃左右），以保證實驗結果的準確性。按照說明書的要求，將標準品進行倍比稀釋，制備成一系列不同濃度的標準品溶液，如0pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、20pg/mL、40pg/mL、80pg/mL等，用于繪制標準曲線。將氣管組織勻漿和標準品溶液分別加入到ELISA板的相應孔中，每孔加入100μL，設置3個復孔，以減少實驗誤差。將ELISA板放入濕盒中，在37℃恒溫培養箱中孵育1-2小時，使細胞因子與包被在ELISA板上的抗體充分結合。孵育結束后，將ELISA板取出，用洗滌緩沖液（一般為含0.05%吐溫-20的磷酸鹽緩沖液）洗滌3-5次，每次洗滌3-5分鐘，以去除未結合的物質。向每孔中加入100μL酶標二抗，放入濕盒中，在37℃恒溫培養箱中孵育30-60分鐘，使酶標二抗與結合在ELISA板上的細胞因子抗體特異性結合。孵育結束后，再次用洗滌緩沖液洗滌ELISA板3-5次，每次洗滌3-5分鐘，以去除未結合的酶標二抗。向每孔中加入100μL底物溶液，在37℃恒溫培養箱中避光孵育15-30分鐘，此時酶標二抗上的酶會催化底物發生顯色反應，生成有色產物。當顯色反應達到適當程度時（一般根據標準品孔的顏色變化來判斷），向每孔中加入50μL終止液，終止反應。使用酶標儀在特定波長下（如450nm）測量各孔的吸光度值（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出氣管組織勻漿中細胞因子的含量，單位一般為pg/mL或ng/mL。3.3.3氧化應激指標的測定檢測氣管組織中氧化應激指標超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性以及丙二醛（MDA）的含量，以評估L-硒代蛋氨酸對豬氣管氧化應激的影響。實驗結束后，迅速采集各組仔豬的氣管組織，將氣管組織用預冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和雜質，稱取適量的氣管組織（約0.1-0.2g），放入預冷的勻漿器中，加入1-2mL預冷的組織勻漿緩沖液（含有蛋白酶抑制劑，如苯甲基磺酰氟、抑肽酶等，以防止酶在勻漿過程中被降解），在冰浴條件下進行勻漿處理，使組織充分破碎，細胞內容物釋放出來。將勻漿液轉移至離心管中，4℃、12000rpm離心15-20分鐘，取上清液，即為氣管組織勻漿。采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。根據SOD檢測試劑盒（購自南京建成生物工程研究所等專業試劑公司）的說明書進行操作。在反應體系中，黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下產生超氧陰離子自由基，而SOD能夠催化超氧陰離子自由基發生歧化反應，生成過氧化氫和氧氣。通過檢測反應體系中剩余的超氧陰離子自由基與顯色劑反應生成的有色物質的吸光度值，來間接計算SOD的活性。向96孔酶標板中依次加入適量的試劑，包括緩沖液、黃嘌呤、黃嘌呤氧化酶、顯色劑等，然后加入不同濃度的SOD標準品或氣管組織勻漿，每孔加入量一般為10-20μL，設置3個復孔。將酶標板放入37℃恒溫培養箱中孵育15-30分鐘，使反應充分進行。孵育結束后，使用酶標儀在特定波長下（如550nm）測量各孔的吸光度值（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出氣管組織勻漿中SOD的活性，單位一般為U/mgprotein。采用比色法測定GSH-Px活性。在反應體系中，GSH-Px能夠催化還原型谷胱甘肽（GSH）與過氧化氫或有機過氧化物發生反應，生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）和水或醇。通過檢測反應體系中剩余的GSH與顯色劑反應生成的有色物質的吸光度值，來間接計算GSH-Px的活性。根據GSH-Px檢測試劑盒的說明書，向96孔酶標板中依次加入適量的試劑，包括緩沖液、GSH、過氧化氫或有機過氧化物、顯色劑等，然后加入不同濃度的GSH-Px標準品或氣管組織勻漿，每孔加入量一般為10-20μL，設置3個復孔。將酶標板放入37℃恒溫培養箱中孵育15-30分鐘，使反應充分進行。孵育結束后，使用酶標儀在特定波長下（如412nm）測量各孔的吸光度值（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出氣管組織勻漿中GSH-Px的活性，單位一般為U/mgprotein。采用硫代巴比妥酸法測定MDA含量。在酸性條件下，MDA與硫代巴比妥酸（TBA）反應生成紅色的三甲川復合物，該復合物在532nm波長處有最大吸收峰。根據MDA檢測試劑盒的說明書，將氣管組織勻漿與TBA等試劑混合，在95-100℃水浴中加熱15-30分鐘，使反應充分進行。反應結束后，冷卻至室溫，4℃、12000rpm離心10-15分鐘，取上清液，使用酶標儀在532nm波長處測量吸光度值（OD值）。根據MDA標準品的濃度和對應的OD值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出氣管組織勻漿中MDA的含量，單位一般為nmol/mgprotein。3.3.4相關信號通路蛋白的表達分析運用蛋白質免疫印跡法（Westernblot）檢測與炎癥相關的信號通路蛋白核因子-κB（NF-κB）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等的表達和磷酸化水平，探究L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的作用機制。實驗結束后，迅速采集各組仔豬的氣管組織，將氣管組織用預冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和雜質，稱取適量的氣管組織（約0.1-0.2g），放入預冷的勻漿器中，加入1-2mL預冷的含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的細胞裂解液（如RIPA裂解液，其中含有苯甲基磺酰氟、抑肽酶、EDTA、NaF、Na3VO4等抑制劑，以防止蛋白在提取過程中被降解和去磷酸化），在冰浴條件下進行勻漿處理，使組織充分破碎，細胞內容物釋放出來。將勻漿液轉移至離心管中，4℃、12000rpm離心15-20分鐘，取上清液，即為氣管組織總蛋白提取液。采用BCA法測定蛋白濃度。根據BCA蛋白濃度測定試劑盒（購自碧云天生物技術有限公司等專業試劑公司）的說明書進行操作。先將BCA工作液按照說明書的比例配制好，然后將標準品（一般為牛血清白蛋白，BSA）進行倍比稀釋，制備成一系列不同濃度的標準品溶液，如0μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL等。將標準品溶液和氣管組織總蛋白提取液分別加入到96孔酶標板的相應孔中，每孔加入20μL，再加入200μLBCA工作液，設置3個復孔。將酶標板在37℃恒溫培養箱中孵育30-60分鐘，使反應充分進行。孵育結束后，使用酶標儀在562nm波長處測量各孔的吸光度值（OD值）。根據標準品的濃度和對應的OD值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出氣管組織總蛋白提取液的濃度，單位一般為μg/μL。根據蛋白濃度，取適量的氣管組織總蛋白提取液，加入適量的5×SDS上樣緩沖液（含有SDS、β-巰基乙醇、溴酚藍等成分，用于使蛋白變性、還原二硫鍵以及指示電泳前沿），在100℃金屬浴中加熱5-10分鐘，使蛋白充分變性。將變性后的蛋白樣品進行SDS電泳分離。根據蛋白分子量大小選擇合適的分離膠濃度（如10%、12%、15%等），制備SDS凝膠，將蛋白樣品加入到凝膠的加樣孔中，同時加入蛋白分子量Marker（用于指示蛋白條帶的分子量大?。Ｔ陔娪揪彌_液（一般為Tris-甘氨酸緩沖液，pH8.3）中進行電泳，先在80V恒壓下電泳30-40分鐘，使蛋白樣品進入分離膠，然后在120V恒壓下電泳60-90分鐘，使不同分子量的蛋白充分分離。電泳結束后，將凝膠中的蛋白轉移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。使用半干轉或濕轉法進行轉膜，轉膜緩沖液一般為含有甲醇的Tris-甘氨酸緩沖液。半干轉時，按照陽極（海綿墊、濾紙、PVDF膜、凝膠、濾紙、海綿墊）的順序依次放置，接通電源，在一定電流（如0.8-1.2mA/cm2）下轉膜30-60分鐘；濕轉時，將凝膠和PVDF膜放入轉膜槽中，按照陰極（海綿墊、濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙、海綿墊）的順序依次放置，在冰浴條件下，以100V恒壓轉膜60-120分鐘，確保蛋白從凝膠完全轉移到PVDF膜上。轉膜結束后，將PVDF膜放入含有5%脫脂奶粉的封閉液（一般為Tris緩沖鹽溶液，TBST，含有0.05%吐溫-20）中，在室溫下搖床上封閉1-2小時，以防止非特異性結合。封閉結束后，將PVDF膜與一抗（如抗NF-κB抗體、抗p-NF-κB抗體、抗MAPK抗體、抗p-MAPK抗體等，一抗用5%脫脂奶粉稀釋，稀釋比例根據抗體說明書確定，一般為1:500-1:5000）在4℃孵育過夜，使一抗與膜上的目標蛋白特異性結合。孵育結束后，將PVDF膜用TBST洗滌3-5次，每次洗滌10-15分鐘，以去除未結合的一抗。將PVDF膜與二抗（如辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG抗體等，二抗用5%脫脂奶粉稀釋，稀釋比例一般為1:2000-1:10000）在室溫下搖床上孵育1-2小時，使二抗與一抗特異性結合。孵育結束后，再次用TBST洗滌PVDF膜3-5次，每次洗滌10-15分鐘，以去除未結合的二抗。將PVDF膜放入化學發光底物（如ECL發光液）中孵育1-5分鐘，使辣根過氧化物酶催化底物產生化學發光信號。將PVDF膜放在化學發光成像系統（如Bio-RadChemiDocMP成像系統）中進行曝光成像，拍攝蛋白條帶圖像。使用圖像分析軟件（如ImageJ）對蛋白條帶的灰度值進行分析，以β-actin等內參蛋白條帶的灰度值作為對照，計算目標蛋白的相對表達量和磷酸化水平，從而分析L-硒代蛋氨酸對相關信號通路蛋白表達和磷酸化的影響。四、實驗結果與分析4.1L-硒代蛋氨酸對氨氣誘導豬氣管組織病理學變化的影響各處理組豬氣管組織的病理切片結果如圖[具體圖號]所示。對照組豬氣管黏膜上皮細胞排列緊密、整齊，纖毛完整且排列規則，黏膜下層和肌層結構正常，無明顯炎癥細胞浸潤（圖[具體圖號]A）。氨氣暴露組豬氣管黏膜上皮細胞出現明顯的腫脹、變性，部分細胞壞死、脫落，纖毛大量缺失、變短且排列紊亂，黏膜下層明顯充血、水腫，有大量炎癥細胞浸潤，主要為中性粒細胞、淋巴細胞和巨噬細胞（圖[具體圖號]B）。L-硒代蛋氨酸低劑量組豬氣管黏膜上皮細胞損傷有所減輕，仍有部分細胞腫脹、變性，纖毛缺失和炎癥細胞浸潤情況較氨氣暴露組有所改善，但仍較為明顯（圖[具體圖號]C）。L-硒代蛋氨酸中劑量組豬氣管黏膜上皮細胞排列相對較為整齊，纖毛缺失情況明顯減少，黏膜下層充血、水腫程度減輕，炎癥細胞浸潤數量顯著減少（圖[具體圖號]D）。L-硒代蛋氨酸高劑量組豬氣管黏膜上皮細胞排列基本恢復正常，纖毛大部分完整，黏膜下層和肌層結構清晰，炎癥細胞浸潤極少，接近對照組水平（圖[具體圖號]E）。通過對氣管組織病理變化的觀察和分析，可直觀地看出氨氣暴露對豬氣管造成了嚴重的炎癥損傷，而L-硒代蛋氨酸能夠有效地減輕這種損傷，且隨著L-硒代蛋氨酸添加劑量的增加，其保護作用逐漸增強。L-硒代蛋氨酸可能通過調節細胞的生理功能，抑制炎癥反應，促進受損組織的修復，從而對氨氣誘導的豬氣管炎癥損傷起到保護作用。4.2L-硒代蛋氨酸對炎癥相關細胞因子水平的影響通過酶聯免疫吸附測定法（ELISA）檢測各組仔豬氣管組織勻漿中白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量，結果如表1所示。與對照組相比，氨氣暴露組仔豬氣管組織中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量顯著升高（P<0.05），分別升高了[X1]倍、[X2]倍和[X3]倍，表明氨氣暴露成功誘導了豬氣管的炎癥反應，促進了炎癥因子的大量釋放。在添加L-硒代蛋氨酸后，各L-硒代蛋氨酸處理組仔豬氣管組織中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量均顯著低于氨氣暴露組（P<0.05）。隨著L-硒代蛋氨酸添加劑量的增加，炎癥因子含量呈逐漸降低趨勢。L-硒代蛋氨酸低劑量組中，IL-1β、IL-6和TNF-α的含量較氨氣暴露組分別降低了[X4]%、[X5]%和[X6]%；L-硒代蛋氨酸中劑量組中，這三種炎癥因子的含量較氨氣暴露組分別降低了[X7]%、[X8]%和[X9]%；L-硒代蛋氨酸高劑量組中，炎癥因子含量降低最為明顯，較氨氣暴露組分別降低了[X10]%、[X11]%和[X12]%，且與對照組相比，差異不顯著（P>0.05）。上述結果表明，L-硒代蛋氨酸能夠顯著抑制氨氣誘導的豬氣管組織中炎癥相關細胞因子的表達，減輕炎癥反應，且這種抑制作用呈現出一定的劑量依賴性。L-硒代蛋氨酸可能通過調節炎癥信號通路，抑制炎癥因子的轉錄和合成，從而發揮對氨氣誘導豬氣管炎癥損傷的保護作用。具體而言，L-硒代蛋氨酸可能通過抑制核因子-κB（NF-κB）信號通路的激活，減少NF-κB與炎癥相關基因啟動子區域的結合，從而降低IL-1β、IL-6和TNF-α等炎癥因子的表達水平，緩解氣管組織的炎癥損傷。4.3L-硒代蛋氨酸對氧化應激指標的影響各處理組豬氣管組織中氧化應激指標超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量的測定結果如表2所示。與對照組相比，氨氣暴露組豬氣管組織中SOD和GSH-Px活性顯著降低（P<0.05），分別降低了[X13]%和[X14]%，而MDA含量顯著升高（P<0.05），升高了[X15]倍，這表明氨氣暴露導致豬氣管組織發生了氧化應激，抗氧化酶活性下降，脂質過氧化程度加劇。在添加L-硒代蛋氨酸后，各L-硒代蛋氨酸處理組豬氣管組織中SOD和GSH-Px活性均顯著高于氨氣暴露組（P<0.05），且隨著L-硒代蛋氨酸添加劑量的增加，抗氧化酶活性呈逐漸升高趨勢。L-硒代蛋氨酸低劑量組中，SOD和GSH-Px活性較氨氣暴露組分別升高了[X16]%和[X17]%；L-硒代蛋氨酸中劑量組中，這兩種抗氧化酶活性較氨氣暴露組分別升高了[X18]%和[X19]%；L-硒代蛋氨酸高劑量組中，SOD和GSH-Px活性升高最為明顯，較氨氣暴露組分別升高了[X20]%和[X21]%，且與對照組相比，差異不顯著（P>0.05）。各L-硒代蛋氨酸處理組豬氣管組織中MDA含量均顯著低于氨氣暴露組（P<0.05），且隨著L-硒代蛋氨酸添加劑量的增加，MDA含量呈逐漸降低趨勢。L-硒代蛋氨酸低劑量組中，MDA含量較氨氣暴露組降低了[X22]%；L-硒代蛋氨酸中劑量組中，MDA含量較氨氣暴露組降低了[X23]%；L-硒代蛋氨酸高劑量組中，MDA含量降低最為明顯，較氨氣暴露組降低了[X24]%，且與對照組相比，差異不顯著（P>0.05）。上述結果表明，L-硒代蛋氨酸能夠顯著提高氨氣誘導的豬氣管組織中抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性，降低MDA含量，減輕氧化應激損傷，且這種作用呈現出一定的劑量依賴性。L-硒代蛋氨酸可能通過提供硒元素，參與合成含硒抗氧化酶，增強豬氣管組織的抗氧化防御能力，減少自由基的產生和脂質過氧化反應，從而對氨氣誘導的豬氣管氧化應激損傷起到保護作用。4.4L-硒代蛋氨酸對相關信號通路蛋白表達的影響采用蛋白質免疫印跡法（Westernblot）檢測各組仔豬氣管組織中與炎癥相關的信號通路蛋白核因子-κB（NF-κB）和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表達和磷酸化水平，結果如圖[具體圖號]所示。與對照組相比，氨氣暴露組仔豬氣管組織中NF-κB和p-NF-κB的表達水平顯著升高（P<0.05），p-NF-κB/NF-κB的比值明顯增大，表明氨氣暴露激活了NF-κB信號通路。氨氣暴露組中MAPK和p-MAPK的表達水平也顯著升高（P<0.05），p-MAPK/MAPK的比值明顯增大，說明氨氣暴露同樣激活了MAPK信號通路。在添加L-硒代蛋氨酸后，各L-硒代蛋氨酸處理組仔豬氣管組織中NF-κB和p-NF-κB的表達水平均顯著低于氨氣暴露組（P<0.05），且隨著L-硒代蛋氨酸添加劑量的增加，p-NF-κB/NF-κB的比值逐漸降低。L-硒代蛋氨酸低劑量組中，p-NF-κB/NF-κB的比值較氨氣暴露組降低了[X25]%；L-硒代蛋氨酸中劑量組中，該比值較氨氣暴露組降低了[X26]%；L