IL-10與TNF-α：解鎖前列腺增生與前列腺癌組織表達密碼及臨床啟示一、引言1.1研究背景前列腺增生（BenignProstaticHyperplasia，BPH）和前列腺癌（ProstateCancer，PCa）是嚴重影響男性健康的常見疾病。隨著全球人口老齡化進程的加速，這兩種疾病的發病率呈現出顯著的上升趨勢，給社會和家庭帶來了沉重的負擔。前列腺增生是一種非癌性的前列腺增大疾病，主要影響中老年男性。據統計，在60歲以上的男性中，約有50%會出現不同程度的前列腺增生癥狀，而到了80歲，這一比例更是高達80%以上。前列腺增生的主要癥狀包括尿頻、尿急、夜尿增多、尿失禁以及排尿困難等，這些癥狀嚴重影響患者的生活質量，若不及時治療，還可能引發尿路感染、膀胱結石、腎功能損害等并發癥。前列腺癌則是男性泌尿生殖系統最常見的惡性腫瘤之一。近年來，其發病率在全球范圍內均呈現出快速增長的態勢。以中國為例，2020年世界癌癥報告數據顯示，前列腺癌位居男性惡性腫瘤發病率的第6位，死亡率的第9位。前列腺癌在早期通常沒有明顯的癥狀，多數患者在確診時已經處于中晚期，這大大增加了治療的難度和患者的死亡率。一旦癌細胞發生轉移，如骨轉移、淋巴結轉移等，患者的生存質量將急劇下降，5年生存率也會顯著降低。目前，雖然對于前列腺增生和前列腺癌的治療方法眾多，包括藥物治療、手術治療、放療、化療等，但由于其發病機制尚未完全明確，這些治療方法仍存在一定的局限性。因此，深入研究前列腺增生和前列腺癌的發病機制，尋找新的診斷和治療靶點，具有重要的臨床意義。細胞因子作為一類在細胞間傳遞信息、調節細胞功能的小分子蛋白質，在人體的免疫反應、炎癥反應以及腫瘤的發生發展過程中都發揮著至關重要的作用。白細胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）和腫瘤壞死因子-α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）是兩種重要的細胞因子，它們在前列腺組織中的表達變化與前列腺增生和前列腺癌的發生發展密切相關。IL-10是一種具有免疫抑制作用的細胞因子，能夠抑制多種免疫細胞的活性，調節炎癥反應。TNF-α則是一種具有廣泛生物學活性的促炎細胞因子，參與了細胞凋亡、免疫調節、炎癥反應等多種生理病理過程。研究表明，IL-10和TNF-α在前列腺疾病患者體內的表達水平與正常人群存在顯著差異，它們可能通過調節前列腺細胞的增殖、凋亡、分化以及免疫微環境等機制，參與了前列腺增生和前列腺癌的發生發展過程。因此，深入研究IL-10和TNF-α在前列腺增生及前列腺癌組織中的表達及意義，對于揭示這兩種疾病的發病機制，尋找新的診斷和治療靶點具有重要的理論和實踐價值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究IL-10和TNF-α這兩種重要的炎性細胞因子在前列腺增生及前列腺癌組織中的表達差異。通過運用免疫組織化學染色等技術，精確測定它們在不同組織中的表達水平，并借助圖像分析技術進行量化分析，從而明確其表達變化規律。同時，進一步探討IL-10和TNF-α的表達差異與前列腺增生和前列腺癌的細胞生物學特性之間的關聯，如細胞的增殖、凋亡、分化等過程，以及它們在免疫學特性方面的影響，包括對免疫細胞活性、免疫微環境的調節作用等。從理論意義層面來看，深入研究IL-10和TNF-α在前列腺增生及前列腺癌組織中的表達，有助于我們更加深入地理解這兩種疾病的發病機制。目前，雖然關于前列腺增生和前列腺癌的發病機制存在多種學說，但仍有許多未知之處。細胞因子作為炎癥和免疫反應的重要中介物質，在疾病的發生發展過程中發揮著關鍵作用。通過研究IL-10和TNF-α的表達變化及其作用機制，能夠為揭示前列腺增生和前列腺癌的發病機制提供新的視角和理論依據，豐富我們對這兩種疾病的認識，填補相關領域的理論空白。在臨床應用價值方面，本研究具有重要的指導意義。一方面，IL-10和TNF-α有可能成為前列腺增生和前列腺癌診斷和鑒別診斷的新型生物學標志物。當前，前列腺疾病的診斷主要依賴于前列腺特異抗原（PSA）檢測、直腸指診、超聲檢查以及穿刺活檢等方法，但這些方法存在一定的局限性，如PSA的特異性不高，穿刺活檢為有創檢查等。而細胞因子的表達變化與疾病的發生發展密切相關，如果能夠確定IL-10和TNF-α在前列腺增生和前列腺癌中的特征性表達模式，就可以為疾病的早期診斷和鑒別診斷提供更加準確、便捷的方法，提高診斷的準確性和可靠性，有助于早期發現疾病，為患者爭取最佳的治療時機。另一方面，IL-10和TNF-α還可能為前列腺增生和前列腺癌的治療提供新的靶點。目前，前列腺增生和前列腺癌的治療方法雖然眾多，但仍存在治療效果不理想、副作用大等問題。通過深入了解IL-10和TNF-α在疾病發生發展中的作用機制，可以研發針對這兩種細胞因子及其信號通路的靶向治療藥物，為前列腺疾病的治療開辟新的途徑，提高治療效果，減少不良反應，改善患者的生活質量。二、理論基礎與研究現狀2.1前列腺增生與前列腺癌概述2.1.1疾病簡介前列腺增生，又稱良性前列腺增生（BPH），是一種常見于中老年男性的非癌性疾病。其主要特征為前列腺細胞數量增多，導致前列腺體積不斷增大。前列腺作為男性生殖系統的重要組成部分，位于膀胱下方，包圍著尿道起始段。當前列腺增生時，增大的腺體往往會壓迫尿道，進而引發一系列尿路癥狀。據相關統計數據顯示，在60歲以上的男性群體中，前列腺增生的發病率高達50%以上，而到了80歲，這一比例更是飆升至80%左右，嚴重影響著中老年男性的生活質量。前列腺增生的癥狀表現較為多樣，尿頻是其早期常見癥狀之一，患者排尿次數明顯增多，尤其是夜間，夜尿次數可從正常的0-1次增加到2-3次甚至更多，這嚴重干擾了患者的睡眠質量。尿急也是常見癥狀，患者會突然產生強烈的尿意，難以控制，必須立即排尿。排尿困難是前列腺增生的典型癥狀，隨著病情進展，患者排尿時需要用力，尿流變細、無力，且排尿時間延長，甚至出現排尿中斷現象。尿不盡感也較為普遍，患者排尿后總感覺膀胱內仍有尿液殘留。此外，若病情未得到及時控制，還可能引發一系列并發癥，如泌尿系統感染，由于尿液排出不暢，細菌容易在尿路中滋生繁殖，導致尿頻、尿急、尿痛等癥狀加重；膀胱結石，長期的排尿困難使尿液在膀胱內潴留，其中的礦物質等成分容易沉淀形成結石；腎功能損害，嚴重的尿路梗阻可導致尿液反流，進而影響腎臟功能，出現腎功能不全等問題。前列腺癌則是起源于前列腺上皮細胞的惡性腫瘤，是男性泌尿生殖系統中最為常見的惡性腫瘤之一。近年來，隨著人口老齡化的加劇以及生活方式的改變，前列腺癌的發病率在全球范圍內呈現出持續上升的趨勢。以中國為例，根據最新的癌癥統計數據，前列腺癌在男性惡性腫瘤發病率中的排名不斷上升，已對男性健康構成了嚴重威脅。在早期階段，前列腺癌通常沒有明顯的癥狀，這使得許多患者在疾病初期難以察覺。隨著腫瘤的不斷生長和擴散，癥狀逐漸顯現。排尿困難是常見癥狀之一，與前列腺增生類似，患者會出現尿流變細、排尿費力、尿不盡等情況。血尿也是較為常見的癥狀，腫瘤侵犯尿道或膀胱頸時，可導致尿液中出現血液，表現為肉眼血尿或鏡下血尿。疼痛也是前列腺癌患者常見的癥狀，當癌細胞轉移至骨骼時，如骨盆、脊柱等部位，會引起相應部位的疼痛，嚴重影響患者的生活質量。此外，前列腺癌還可能導致勃起功能障礙，影響患者的性功能和心理健康。在晚期，患者還可能出現消瘦、乏力、貧血等全身癥狀，這是由于腫瘤的消耗以及身體機能的下降所致。前列腺增生和前列腺癌對男性健康的影響是多方面的。在生理層面，它們不僅會導致泌尿系統的各種癥狀，影響患者的正常排尿和生活起居，還可能引發一系列并發癥，對腎臟等重要器官造成損害，嚴重時甚至危及生命。在心理層面，疾病帶來的不適和對健康的擔憂，容易使患者產生焦慮、抑郁等負面情緒，影響其心理健康和生活質量。此外，治療過程中的經濟負擔以及對日常生活的限制，也會給患者和家庭帶來沉重的壓力。2.1.2發病機制研究進展關于前列腺增生的發病機制，目前存在多種學說，其中激素-內分泌學說被廣泛認可。該學說認為，隨著年齡的增長，男性體內的激素水平發生變化，睪酮在5α-還原酶的作用下轉化為雙氫睪酮（DHT），DHT與前列腺細胞內的雄激素受體結合，刺激前列腺細胞的增殖和生長，導致前列腺體積增大。研究表明，老年男性體內DHT的水平相對較高，且其與前列腺增生的嚴重程度呈正相關。生長因子學說也在前列腺增生的發病機制研究中占據重要地位。多種生長因子，如表皮生長因子（EGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等，參與了前列腺細胞的增殖和分化過程。這些生長因子通過與相應的受體結合，激活細胞內的信號傳導通路，促進前列腺細胞的生長和分裂。例如，EGF能夠刺激前列腺上皮細胞的增殖，而FGF則對前列腺間質細胞的生長具有重要作用。上皮-間質細胞相互作用學說認為，前列腺上皮細胞和間質細胞之間存在著復雜的相互作用，這種相互作用在前列腺增生的發生發展中起著關鍵作用。間質細胞可以分泌多種細胞因子和生長因子，調節上皮細胞的增殖和分化；而上皮細胞也能通過旁分泌等方式影響間質細胞的功能。當這種相互作用失衡時，可能導致前列腺細胞的異常增殖，進而引發前列腺增生。對于前列腺癌的發病機制，雖然尚未完全明確，但研究表明，遺傳因素在其中起著重要作用。家族中有前列腺癌患者的男性，其發病風險明顯高于普通人群。某些基因突變，如BRCA1、BRCA2等基因的突變，與前列腺癌的發生密切相關。一項針對家族性前列腺癌的研究發現，攜帶BRCA2基因突變的男性，患前列腺癌的風險比正常人高出數倍。環境因素和生活方式也被認為是前列腺癌的重要發病因素。高脂肪飲食、缺乏運動、肥胖等不良生活方式，可能會增加前列腺癌的發病風險。高脂肪飲食會導致體內雄激素水平升高，而雄激素是前列腺癌生長的重要刺激因素；缺乏運動和肥胖則會影響身體的代謝功能和免疫系統，進而影響前列腺癌的發生發展。此外，長期接觸某些化學物質，如鎘、砷等，也可能與前列腺癌的發病有關。近年來，越來越多的研究表明，慢性炎癥在前列腺增生和前列腺癌的發病進程中可能發揮著重要作用。炎癥細胞浸潤前列腺組織，釋放多種炎性細胞因子，如IL-10、TNF-α等，這些細胞因子可以調節前列腺細胞的增殖、凋亡和分化，影響腫瘤的發生發展。在前列腺增生患者的前列腺組織中，常可檢測到炎癥細胞的浸潤和炎性細胞因子的高表達，提示炎癥反應可能參與了前列腺增生的發病過程。在前列腺癌中，炎癥微環境也被認為是腫瘤生長和轉移的重要促進因素。炎性細胞因子可以激活腫瘤細胞內的信號通路，促進腫瘤細胞的增殖和侵襲，同時還可以抑制機體的免疫反應，使腫瘤細胞逃避機體的免疫監視。2.2IL-10與TNF-α相關理論2.2.1細胞因子的概念與功能細胞因子是一類由免疫細胞（如單核-巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（如血管內皮細胞、成纖維細胞、上皮細胞等）經刺激而合成、分泌的具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。它們在細胞間傳遞信息，是免疫和炎癥反應的重要中介物質，對免疫和炎癥反應的過程和轉歸具有至關重要的意義。在免疫反應中，細胞因子參與了免疫細胞的活化、增殖、分化以及免疫調節等多個環節。白細胞介素-2（IL-2）能夠促進T細胞的增殖和活化，增強T細胞的免疫功能；干擾素-γ（IFN-γ）可以激活巨噬細胞，增強其吞噬和殺傷病原體的能力，同時還能調節T細胞和B細胞的功能。細胞因子還在免疫細胞的分化過程中發揮關鍵作用，如IL-7是T細胞和B細胞發育所必需的細胞因子，它能促進造血干細胞向T細胞和B細胞分化。在炎癥反應中，細胞因子參與了炎癥的啟動、發展和消退過程。當機體受到病原體感染或組織損傷時，免疫細胞會迅速分泌多種細胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-6等，這些細胞因子可以招募和激活炎癥細胞，如中性粒細胞、單核細胞等，使其聚集到炎癥部位，增強炎癥反應，以清除病原體和損傷組織。TNF-α可以誘導血管內皮細胞表達黏附分子，促進炎癥細胞的黏附和滲出；IL-1能夠刺激炎癥細胞釋放炎癥介質，如前列腺素、白三烯等，進一步加重炎癥反應。細胞因子也參與了炎癥的消退過程，一些抗炎細胞因子，如IL-10、轉化生長因子-β（TGF-β）等，可以抑制炎癥細胞的活性，減少炎癥介質的釋放，從而促進炎癥的消退。細胞因子的功能具有多樣性和網絡性。一種細胞因子可以對多種細胞發揮作用，產生多種生物學效應，如TNF-α不僅可以參與炎癥反應，還能誘導細胞凋亡、調節細胞增殖等。不同細胞因子之間也存在著復雜的相互作用，它們可以通過協同、拮抗或連鎖反應等方式，構成一個復雜的細胞因子網絡，共同調節免疫和炎癥反應。IL-2和IL-12可以協同促進T細胞和NK細胞的活化和增殖；而IL-10則可以抑制TNF-α、IL-1等促炎細胞因子的產生，從而發揮抗炎作用。這種細胞因子網絡的平衡對于維持機體的免疫穩態和生理功能至關重要，一旦失衡，就可能導致免疫相關疾病的發生，如自身免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤等。2.2.2IL-10和TNF-α的特性與作用IL-10是一種重要的免疫調節細胞因子，最初被命名為細胞因子合成抑制因子（CSIF），因其能夠抑制Th1細胞分泌細胞因子而得名。IL-10主要由Th2細胞、單核-巨噬細胞、B細胞、肥大細胞等產生。它具有多種生物學活性，在免疫調節和炎癥反應中發揮著關鍵作用。在免疫調節方面，IL-10具有抑制免疫細胞活性的作用。它可以抑制Th1細胞的增殖和細胞因子分泌，如抑制Th1細胞分泌IFN-γ、TNF-β等細胞因子，從而調節Th1/Th2細胞平衡，使免疫反應向Th2型偏移。IL-10還能抑制單核-巨噬細胞的功能，減少其抗原呈遞能力和炎性細胞因子的分泌。單核-巨噬細胞在受到LPS等刺激后，會分泌大量的炎性細胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-6等，而IL-10可以抑制這些細胞因子的分泌，從而減輕炎癥反應。IL-10還能抑制NK細胞的活性，降低其對靶細胞的殺傷能力。IL-10對細胞增殖也有一定的影響。研究表明，IL-10可以抑制某些腫瘤細胞的增殖，如在前列腺癌細胞中，IL-10可能通過調節細胞周期相關蛋白的表達，抑制前列腺癌細胞的增殖。但在某些情況下，IL-10也可能促進細胞增殖，這取決于細胞類型和微環境等因素。IL-10還參與了免疫耐受的誘導。它可以促進調節性T細胞（Treg）的分化和功能，Treg細胞能夠抑制自身反應性T細胞的活化和增殖，從而維持機體的免疫耐受。IL-10還能抑制樹突狀細胞的成熟和功能，減少其對T細胞的激活作用，進一步促進免疫耐受的形成。TNF-α是一種具有廣泛生物學活性的細胞因子，主要由單核-巨噬細胞、T細胞、NK細胞等產生。它在細胞增殖、凋亡、炎癥反應以及腫瘤的發生發展等過程中都發揮著重要作用。在細胞增殖和凋亡方面，TNF-α具有雙重作用。在低濃度時，TNF-α可以通過激活細胞內的信號通路，促進細胞增殖。在某些腫瘤細胞中，TNF-α可以刺激腫瘤細胞的增殖，這可能與腫瘤的發生發展有關。然而，在高濃度時，TNF-α可以誘導細胞凋亡。它可以與細胞表面的TNF受體結合，激活caspase等凋亡相關蛋白，導致細胞凋亡。在腫瘤治療中，利用TNF-α誘導腫瘤細胞凋亡的特性，開發了一些基于TNF-α的腫瘤治療策略。TNF-α與炎癥反應密切相關，是一種重要的促炎細胞因子。當機體受到病原體感染或組織損傷時，TNF-α會迅速釋放，啟動炎癥反應。它可以招募和激活炎癥細胞，如中性粒細胞、單核細胞等，使其聚集到炎癥部位，增強炎癥反應。TNF-α還能誘導血管內皮細胞表達黏附分子，促進炎癥細胞的黏附和滲出，同時刺激炎癥細胞釋放炎癥介質，如前列腺素、白三烯等，進一步加重炎癥反應。在慢性炎癥性疾病中，如類風濕性關節炎、炎癥性腸病等，TNF-α的表達水平往往升高，參與了疾病的發生發展過程。在腫瘤的發生發展中，TNF-α也扮演著復雜的角色。一方面，TNF-α可以通過誘導腫瘤細胞凋亡、激活免疫細胞等機制，發揮抗腫瘤作用。它可以激活NK細胞和細胞毒性T細胞（CTL），增強它們對腫瘤細胞的殺傷能力。另一方面，在腫瘤微環境中，TNF-α也可能促進腫瘤的生長和轉移。它可以刺激腫瘤細胞分泌血管內皮生長因子（VEGF）等，促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供營養和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉移。TNF-α還能調節腫瘤細胞的侵襲和轉移相關蛋白的表達，增強腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。2.3研究現狀綜述過往研究在探索IL-10和TNF-α與前列腺增生及前列腺癌的關聯方面已取得了一定成果。在前列腺增生研究領域，眾多學者聚焦于細胞因子在前列腺組織中的表達變化。研究表明，IL-10在前列腺增生組織中的表達顯著高于正常前列腺組織。一項對50例前列腺增生患者和30例正常對照的研究發現，前列腺增生組織中IL-10的蛋白表達水平明顯升高，且其表達強度與前列腺增生的臨床癥狀嚴重程度相關。這提示IL-10可能在前列腺增生的發生發展過程中發揮重要作用，或許是通過調節免疫反應和細胞增殖來影響前列腺組織的生長。關于TNF-α，已有研究顯示其在前列腺增生組織中的表達也高于正常組織。TNF-α可能參與了前列腺增生的炎癥反應過程，通過激活炎癥細胞和調節炎癥介質的釋放，促進前列腺組織的增生和結構破壞。有研究指出，TNF-α可以刺激前列腺間質細胞分泌基質金屬蛋白酶，降解細胞外基質，從而導致前列腺組織的重塑和增生。在前列腺癌方面，研究發現IL-10在前列腺癌組織中的表達同樣異常。部分研究表明，IL-10在前列腺癌組織中的表達水平與腫瘤的分期和分級相關。在晚期前列腺癌患者中，IL-10的表達明顯升高，這可能與腫瘤的免疫逃逸機制有關，IL-10通過抑制機體的免疫反應，幫助腫瘤細胞逃避免疫系統的監視和殺傷。TNF-α在前列腺癌中的作用較為復雜。一方面，TNF-α可以誘導腫瘤細胞凋亡，發揮抗腫瘤作用。在體外實驗中，給予前列腺癌細胞TNF-α刺激后，發現癌細胞的凋亡率明顯增加。另一方面，TNF-α也可能促進腫瘤的生長和轉移。在腫瘤微環境中，TNF-α可以刺激腫瘤細胞分泌血管內皮生長因子，促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供營養和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉移。盡管已有上述研究成果，但當前研究仍存在一些不足和空白。在研究方法上，大多數研究主要采用免疫組織化學、Westernblot等傳統技術檢測IL-10和TNF-α的表達，這些方法在定量分析上存在一定的局限性。未來可結合更先進的技術，如蛋白質組學、單細胞測序等，更精確地檢測細胞因子的表達水平和變化規律，從分子層面深入探究其作用機制。在研究內容方面，對于IL-10和TNF-α在前列腺增生和前列腺癌發生發展過程中的具體信號通路和分子機制，目前的研究還不夠深入。雖然已知它們參與了免疫調節、細胞增殖和凋亡等過程，但具體的作用靶點和調控網絡尚未完全明確。進一步研究這些信號通路，將有助于揭示前列腺疾病的發病機制，為開發新的治療靶點提供理論依據。此外，關于IL-10和TNF-α與其他細胞因子或分子之間的相互作用，以及它們在前列腺疾病不同階段的動態變化，相關研究也相對較少。前列腺疾病的發生發展是一個復雜的過程，涉及多種細胞因子和分子的相互作用。深入研究這些相互作用，以及細胞因子在疾病不同階段的動態變化，對于全面了解前列腺疾病的發病機制和制定個性化的治療方案具有重要意義。三、材料與方法3.1研究材料3.1.1標本來源本研究共收集前列腺標本100例，其中前列腺增生標本40例，前列腺癌標本40例，均來源于[醫院名稱]泌尿外科20XX年1月至20XX年12月期間行手術治療的患者。所有患者術前均未接受過放療、化療或內分泌治療，且臨床資料完整，包括年齡、病史、癥狀、體征、實驗室檢查及影像學檢查結果等。同時，選取20例因外傷或其他非前列腺疾病死亡的男性尸體的正常前列腺組織作為對照標本，這些標本均在死后24小時內獲取，并經病理檢查證實為正常前列腺組織。所有標本在獲取后均立即放入10%中性福爾馬林溶液中固定，常規石蠟包埋，4μm連續切片，用于后續的免疫組織化學染色檢測。3.1.2實驗儀器與試劑本實驗所需的主要儀器包括：[儀器品牌及型號]臺式保溫箱，用于組織切片的烘烤；[儀器品牌及型號]石蠟切片機，用于制備組織切片；[儀器品牌及型號]顯微鏡，用于觀察切片；[儀器品牌及型號]圖像分析系統，用于對免疫組織化學染色結果進行量化分析；[儀器品牌及型號]離心機，用于分離血清和細胞。主要試劑包括：多聚賴氨酸，用于處理載玻片，增強組織切片與載玻片的黏附性；IL-10和TNF-α兔單克隆抗體，購自[試劑品牌]公司，用于免疫組織化學染色檢測IL-10和TNF-α的表達；即用型二抗試劑盒，購自[試劑品牌]公司，用于增強免疫組織化學染色的信號；DAB顯色試劑盒，購自[試劑品牌]公司，用于顯示免疫組織化學染色的結果；蘇木精染液，用于細胞核染色；伊紅染液，用于細胞質染色；二甲苯、無水乙醇、95%乙醇等試劑，用于組織切片的脫蠟、脫水和透明。3.2實驗方法3.2.1標本處理手術切取的前列腺組織標本迅速用生理鹽水沖洗，以去除表面的血液和雜質，確保后續檢測的準確性。隨后，將標本放入體積分數為10%的多聚甲醛溶液中進行固定，固定時間為24-48小時。多聚甲醛能使蛋白質等生物大分子發生交聯，從而穩定組織細胞的形態和結構，防止其在后續處理過程中發生變形或降解。固定后的標本依次經過不同濃度梯度的酒精進行脫水處理，即75%酒精浸泡1小時、85%酒精浸泡1小時、95%酒精浸泡1小時、無水乙醇浸泡2次，每次30分鐘。通過逐步升高酒精濃度，將組織內的水分置換出來，為后續的石蠟包埋做準備。脫水后的標本再用二甲苯進行透明處理，二甲苯能溶解酒精并與石蠟互溶，使石蠟能夠順利滲入組織。透明過程分兩步進行，二甲苯Ⅰ浸泡15分鐘、二甲苯Ⅱ浸泡15分鐘，使組織完全透明。最后，將透明后的標本放入熔化的石蠟中進行浸蠟，浸蠟在60℃恒溫箱中進行，時間為2-3小時，以使石蠟充分滲入組織內部，增強組織的硬度和韌性，便于后續切片。浸蠟完成后，將標本進行石蠟包埋，制成蠟塊，置于4℃冰箱中保存備用。3.2.2免疫組化染色將石蠟包埋的組織標本制成4μm厚的切片，貼于經多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤箱中烘烤2小時，以增強切片與載玻片的黏附性，防止在后續染色過程中切片脫落。切片經二甲苯脫蠟2次，每次10分鐘，然后依次經過無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇進行水化，每個梯度浸泡5分鐘，使組織恢復到含水狀態，以便后續染色試劑能夠順利進入組織細胞內。水化后的切片用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘，以去除殘留的乙醇。將切片浸入蘇木素染液中染色5-10分鐘，蘇木素是一種堿性染料，能與細胞核內的酸性物質結合，使細胞核染成藍紫色，從而清晰顯示細胞核的形態和結構。染色后，用自來水沖洗切片，以去除多余的蘇木素染液。然后將切片放入1%鹽酸酒精溶液中分化數秒，再用自來水沖洗返藍，使細胞核染色更加清晰、對比明顯。為消除內源性過氧化物酶的活性，將切片放入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘。過氧化氫能與內源性過氧化物酶發生反應，使其失去活性，避免在后續DAB顯色過程中產生非特異性染色。孵育后，用蒸餾水沖洗切片3次，每次3分鐘，再用PBS緩沖液浸泡5分鐘，以平衡切片的酸堿度。采用高壓鍋抗原修復法對切片進行抗原修復。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的高壓鍋中，加熱至沸騰后持續2-3分鐘，然后自然冷卻至室溫。抗原修復能夠暴露被掩蓋的抗原決定簇，增強抗原與抗體的結合能力，提高免疫組化染色的敏感性。修復后的切片用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。用5%牛血清白蛋白（BSA）封閉切片，室溫孵育30分鐘，以封閉組織切片上的非特異性結合位點，減少非特異性染色。傾去封閉液，勿洗，滴加適當比例稀釋的IL-10和TNF-α兔單克隆抗體，4℃孵育過夜。一抗能夠特異性地識別并結合組織細胞中的IL-10和TNF-α抗原，形成抗原-抗體復合物。孵育后，將切片用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結合的一抗。滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30分鐘。二抗能夠與一抗特異性結合，形成抗原-抗體-二抗復合物，從而放大免疫反應信號。孵育后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素（HRP-SA），37℃孵育30分鐘。HRP-SA能夠與二抗上的生物素結合，形成抗原-抗體-二抗-HRP-SA復合物。孵育后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。使用DAB顯色試劑盒進行顯色反應。將DAB顯色液滴加在切片上，室溫下避光顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應。DAB在HRP的催化下，被過氧化氫氧化生成棕色沉淀，從而使抗原所在部位呈現出明顯的顏色變化，便于觀察和分析。顯色結束后，將切片用自來水充分沖洗，以去除殘留的DAB顯色液。然后用伊紅染液復染3-5分鐘，伊紅是一種酸性染料，能使細胞質染成粉紅色，與蘇木素染成的藍紫色細胞核形成鮮明對比，便于觀察組織細胞的形態和結構。復染后，用自來水沖洗切片，依次經過75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇脫水，每個梯度浸泡3-5分鐘，再用二甲苯透明2次，每次5分鐘，最后用中性樹膠封片。3.2.3圖像分析與數據處理使用圖像分析系統對免疫組化染色后的切片進行分析。在顯微鏡下選取具有代表性的視野，每個標本至少選取5個視野，拍攝圖像。利用圖像分析軟件測量標本中陽性染色區域的光吸收密度值，以此來定量分析IL-10和TNF-α的表達水平。光吸收密度值與抗原的表達量呈正相關，通過測量光吸收密度值，可以準確地反映出IL-10和TNF-α在前列腺增生、前列腺癌及正常前列腺組織中的表達差異。采用SPSS22.0統計軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用Q檢驗。以P＜0.05為差異具有統計學意義。通過嚴謹的統計分析，能夠準確地揭示IL-10和TNF-α在不同組間的表達差異，為研究它們在前列腺增生和前列腺癌中的作用提供可靠的數據支持。四、實驗結果4.1IL-10的表達情況通過免疫組織化學染色及圖像分析技術，對IL-10在前列腺增生組織、前列腺癌組織和正常對照組織中的表達強度進行了精確檢測與量化分析。結果顯示，IL-10在三組標本組織細胞中均有表達，但其表達強度存在顯著差異。在前列腺增生組織中，IL-10呈現出最強的表達，光吸收密度值為0.3121±0.0936。這表明在前列腺增生的病理過程中，IL-10的表達被顯著上調，可能在前列腺細胞的增殖、免疫調節等方面發揮重要作用。前列腺癌組織中IL-10的表達次之，光吸收密度值為0.2958±0.0329。雖然其表達強度低于前列腺增生組織，但仍明顯高于正常對照組織，提示IL-10在前列腺癌的發生發展過程中也具有一定的作用，可能與腫瘤細胞的免疫逃逸、增殖等機制相關。正常對照組織中IL-10的表達最弱，光吸收密度值僅為0.0816±0.0732，說明在正常生理狀態下，IL-10在前列腺組織中的表達處于相對較低的水平。選用方差分析Q檢驗對三組數據進行統計學分析，結果表明IL-10在三組標本中的表達差異具有統計學意義（P＜0.05）。這一結果進一步證實了IL-10在前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達明顯高于正常對照組織，其表達變化與前列腺疾病的發生發展密切相關。4.2TNF-α的表達情況同樣采用免疫組織化學染色及圖像分析技術，對TNF-α在前列腺增生組織、前列腺癌組織和正常對照組織中的表達強度進行檢測與分析。結果顯示，TNF-α在三組標本組織細胞中均有表達，且表達強度存在明顯差異。前列腺增生組織中TNF-α的表達最強，光吸收密度值為0.4021±0.0652，這表明在前列腺增生過程中，TNF-α的表達被顯著上調，可能在前列腺組織的炎癥反應、細胞增殖和組織重塑等過程中發揮重要作用。前列腺癌組織中TNF-α的表達次之，光吸收密度值為0.3259±0.0487，雖然低于前列腺增生組織，但仍明顯高于正常對照組織，提示TNF-α在前列腺癌的發生發展中也具有一定作用，其可能通過調節腫瘤細胞的增殖、凋亡和侵襲等過程，影響前列腺癌的進展。正常對照組織中TNF-α的表達最弱，光吸收密度值僅為0.1016±0.0825，表明在正常生理狀態下，TNF-α在前列腺組織中的表達維持在較低水平。通過方差分析Q檢驗對三組數據進行統計學分析，結果表明TNF-α在三組標本中的表達差異具有統計學意義（P＜0.05）。這進一步證實了TNF-α在前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達顯著高于正常對照組織，其表達變化與前列腺疾病的發生發展密切相關。4.3表達差異的統計學分析為了進一步明確IL-10和TNF-α在前列腺增生組織、前列腺癌組織和正常對照組織中的表達差異是否具有統計學意義，我們采用了方差分析Q檢驗進行深入分析。方差分析是一種用于多組數據均值比較的統計方法，它能夠有效地檢驗不同組之間的差異是否是由于隨機誤差引起的，還是存在真實的組間差異。Q檢驗則是在方差分析的基礎上，用于進行組間兩兩比較的方法，能夠準確地確定哪些組之間的差異具有統計學意義。通過方差分析Q檢驗，結果顯示IL-10在三組標本中的表達差異具有統計學意義（P＜0.05）。具體而言，前列腺增生組織與正常對照組織相比，IL-10的表達水平顯著升高，這表明在前列腺增生的發生發展過程中，IL-10的表達上調可能是一個重要的因素，可能參與了前列腺細胞的增殖、免疫調節等過程。前列腺癌組織與正常對照組織相比，IL-10的表達也明顯升高，提示IL-10在前列腺癌的發生發展中也具有一定的作用，可能與腫瘤細胞的免疫逃逸、增殖等機制相關。雖然前列腺增生組織中IL-10的表達高于前列腺癌組織，但兩組之間的差異在統計學上不具有顯著性，這可能是由于樣本量有限或其他因素的影響，需要進一步擴大樣本量進行研究。同樣地，TNF-α在三組標本中的表達差異也具有統計學意義（P＜0.05）。前列腺增生組織中TNF-α的表達顯著高于正常對照組織，說明TNF-α在前列腺增生的炎癥反應、細胞增殖和組織重塑等過程中可能發揮著重要作用。前列腺癌組織中TNF-α的表達也明顯高于正常對照組織，表明TNF-α在前列腺癌的發生發展中也具有一定作用，其可能通過調節腫瘤細胞的增殖、凋亡和侵襲等過程，影響前列腺癌的進展。前列腺增生組織中TNF-α的表達高于前列腺癌組織，且兩組之間的差異具有統計學意義，這可能與兩種疾病的病理生理過程不同有關。在前列腺增生中，TNF-α可能主要參與了炎癥反應和組織增生過程；而在前列腺癌中，TNF-α的作用可能更為復雜，既參與了腫瘤細胞的增殖和侵襲，也可能在一定程度上誘導腫瘤細胞凋亡。五、結果討論5.1IL-10表達的意義探討IL-10在前列腺增生組織中呈現高表達狀態，這一現象與前列腺增生的發病機制密切相關。前列腺增生是一種非癌性的前列腺增大疾病，其發病過程中往往伴隨著慢性炎癥反應。IL-10作為一種具有免疫抑制作用的細胞因子，在前列腺增生組織中的高表達可能是機體對炎癥反應的一種自我調節機制。研究表明，炎癥細胞浸潤前列腺組織會釋放多種炎性細胞因子，這些細胞因子可刺激前列腺細胞的增殖和生長，導致前列腺體積增大。而IL-10的高表達可能通過抑制炎癥細胞的活性，減少炎性細胞因子的釋放，從而在一定程度上緩解炎癥反應，減輕前列腺組織的損傷。IL-10還可能調節前列腺細胞的增殖和凋亡，維持細胞的正常生長和代謝平衡。有研究發現，IL-10可以抑制前列腺上皮細胞的增殖，促進其凋亡，從而抑制前列腺組織的過度增生。IL-10在前列腺增生組織中的高表達可能是繼發于炎性反應，并與臨床癥狀密切相關。臨床癥狀越嚴重的前列腺增生患者，其前列腺組織中IL-10的表達水平可能越高，這提示IL-10的表達水平或許可作為評估前列腺增生患者病情嚴重程度的一個潛在指標。在前列腺癌組織中，IL-10同樣有表達，且其表達對癌組織的生長和炎性反應產生重要影響。一方面，IL-10可能參與了前列腺癌的免疫逃逸機制。腫瘤細胞可以通過分泌IL-10等免疫抑制因子，抑制機體的免疫反應，使免疫系統難以識別和清除腫瘤細胞，從而促進腫瘤的生長和轉移。研究表明，IL-10可以抑制T細胞、NK細胞等免疫細胞的活性，降低它們對腫瘤細胞的殺傷能力。IL-10還能調節樹突狀細胞的功能，使其抗原呈遞能力下降，進一步削弱機體的免疫監視作用。另一方面，IL-10在前列腺癌組織中的表達可能與癌組織快速增長引發的炎性反應有關。癌組織的快速生長會導致局部組織缺氧、缺血，引發炎癥反應，而IL-10的表達可能是機體對這種炎癥反應的一種調節方式。然而，IL-10在前列腺癌中的具體作用機制仍存在爭議，部分研究認為IL-10可能具有抗腫瘤作用，它可以通過抑制腫瘤細胞的增殖、誘導腫瘤細胞凋亡等方式發揮作用。因此，IL-10在前列腺癌中的作用還需要進一步深入研究，以明確其在腫瘤發生發展過程中的具體機制和潛在應用價值。5.2TNF-α表達的意義探討在前列腺增生組織中，TNF-α呈現高表達狀態，這一現象與前列腺增生的病理過程緊密相連。前列腺增生過程中，前列腺組織的結構發生改變，上皮細胞和間質細胞的比例失調，細胞外基質成分也發生變化。TNF-α的高表達可能參與了這一過程，它可以通過激活炎癥細胞，如巨噬細胞、T細胞等，使其釋放多種炎性介質，如白細胞介素、趨化因子等，進一步加重炎癥反應。TNF-α還可能直接作用于前列腺細胞，調節細胞的增殖和凋亡。研究表明，TNF-α可以促進前列腺間質細胞的增殖，同時抑制前列腺上皮細胞的凋亡，從而導致前列腺組織的增生。TNF-α還可能通過調節細胞外基質的合成和降解，影響前列腺組織的結構和功能。它可以刺激前列腺間質細胞分泌基質金屬蛋白酶，降解細胞外基質，導致前列腺組織的重塑和增生。TNF-α在前列腺增生組織中的高表達可能與前列腺組織增生、組織結構破壞引發的炎性反應密切相關，它在前列腺增生的發病機制中扮演著重要角色。在前列腺癌組織中，TNF-α同樣有表達，且其表達對癌組織的生長和轉移具有重要影響。一方面，TNF-α可以通過多種途徑發揮抗腫瘤作用。它可以誘導腫瘤細胞凋亡，通過與腫瘤細胞表面的TNF受體結合，激活細胞內的凋亡信號通路，導致腫瘤細胞死亡。TNF-α還能激活免疫細胞，如NK細胞、CTL等，增強它們對腫瘤細胞的殺傷能力，從而抑制腫瘤的生長。另一方面，在腫瘤微環境中，TNF-α也可能促進腫瘤的生長和轉移。它可以刺激腫瘤細胞分泌VEGF等血管生成因子，促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養和氧氣，支持腫瘤的生長和轉移。TNF-α還能調節腫瘤細胞的侵襲和轉移相關蛋白的表達，如基質金屬蛋白酶、整合素等，增強腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。研究發現，在前列腺癌的晚期，TNF-α的表達水平與腫瘤的轉移和預后密切相關。高表達的TNF-α可能預示著腫瘤的惡性程度更高，更容易發生轉移，患者的預后更差。因此，TNF-α在前列腺癌中的作用具有雙重性，其具體作用取決于腫瘤的微環境和細胞類型等多種因素。5.3IL-10和TNF-α聯合作用分析IL-10和TNF-α在前列腺疾病的發生發展過程中并非孤立地發揮作用，而是存在著復雜的相互作用關系，它們共同參與調節前列腺細胞的生長、凋亡、免疫調節等多個關鍵過程。在免疫調節方面，IL-10和TNF-α的作用相互制衡。IL-10作為一種免疫抑制因子，能夠抑制免疫細胞的活性，減少炎性細胞因子的釋放，從而減輕炎癥反應。而TNF-α則是一種促炎細胞因子，能夠激活免疫細胞，增強炎癥反應。在前列腺增生和前列腺癌組織中，這兩種細胞因子的平衡可能被打破。在前列腺增生組織中，雖然IL-10和TNF-α的表達均升高，但TNF-α引發的炎癥反應可能占據主導地位，導致前列腺組織的炎癥和增生。而在前列腺癌組織中，IL-10可能通過抑制免疫反應，幫助腫瘤細胞逃避免疫監視，同時TNF-α的表達也可能促進腫瘤細胞的生長和轉移。這種免疫調節失衡可能與前列腺疾病的進展密切相關。研究表明，在前列腺癌患者中，IL-10的高表達會抑制T細胞和NK細胞的活性，降低機體的抗腫瘤免疫反應，而TNF-α的存在則可能在一定程度上刺激腫瘤細胞的增殖和侵襲，兩者的聯合作用促進了腫瘤的發展。在細胞增殖和凋亡方面，IL-10和TNF-α也表現出復雜的相互作用。TNF-α在低濃度時可以促進前列腺細胞的增殖，而在高濃度時則可能誘導細胞凋亡。IL-10對細胞增殖的影響則較為復雜，它可以抑制某些細胞的增殖，也可以在特定條件下促進細胞增殖。在前列腺增生組織中，TNF-α的促增殖作用可能與前列腺細胞的增生有關，而IL-10的表達可能是機體對過度增殖的一種調節反應，試圖抑制細胞的過度生長。在前列腺癌組織中，IL-10可能通過抑制免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷作用，間接促進腫瘤細胞的增殖，而TNF-α則可能根據其濃度和腫瘤微環境的不同，對腫瘤細胞的增殖和凋亡產生不同的影響。當TNF-α濃度較低時，可能促進腫瘤細胞的增殖；當濃度較高時，則可能誘導腫瘤細胞凋亡。兩者的聯合作用可能決定了前列腺癌細胞的生長和存活狀態。IL-10和TNF-α在前列腺疾病的發生發展中還可能通過調節細胞因子網絡和信號通路來發揮聯合作用。它們可以調節其他細胞因子的表達和活性，如IL-6、IL-8等，這些細胞因子之間相互作用，形成復雜的細胞因子網絡，共同影響前列腺疾病的進程。IL-10可以抑制TNF-α誘導的IL-6和IL-8的表達，從而調節炎癥反應和細胞增殖。它們還可以激活或抑制不同的信號通路，如NF-κB信號通路、MAPK信號通路等，這些信號通路在細胞的增殖、凋亡、免疫調節等過程中發揮著關鍵作用。TNF-α可以激活NF-κB信號通路，促進炎癥相關基因的表達和細胞增殖，而IL-10則可以抑制NF-κB信號通路的激活，從而減輕炎癥反應和細胞增殖。兩者通過調節這些信號通路的活性，共同影響前列腺疾病的發生發展。5.4研究結果的臨床應用價值本研究結果顯示IL-10和TNF-α在前列腺增生及前列腺癌組織中表達存在顯著差異，這一發現具有重要的臨床應用價值，有望為前列腺疾病的診斷、治療和病情評估提供新的思路和方法。在早期診斷方面，IL-10和TNF-α可作為潛在的生物學標志物，用于前列腺增生和前列腺癌的輔助診斷。目前臨床上常用的前列腺特異抗原（PSA）檢測雖然在前列腺癌診斷中具有一定價值，但存在特異性不高的問題，容易出現假陽性和假陰性結果。而IL-10和TNF-α在前列腺疾病組織中的特征性表達變化，為前列腺疾病的早期診斷提供了新的方向。通過檢測患者血清或前列腺組織中IL-10和TNF-α的表達水平，結合傳統的診斷方法，如直腸指診、超聲檢查等，可以提高前列腺增生和前列腺癌的早期診斷準確性。研究表明，將IL-10和TNF-α與PSA聯合檢測，能夠顯著提高前列腺癌的診斷效能，減少誤診和漏診的發生。對于病情評估，IL-10和TNF-α的表達水平與前列腺增生和前列腺癌的病情嚴重程度密切相關。在前列腺增生患者中，IL-10和TNF-α表達越高，可能提示前列腺組織的增生程度越嚴重，臨床癥狀也可能越明顯。通過監測這兩種細胞因子的表達變化，可以更準確地評估前列腺增生患者的病情進展，為治療方案的選擇提供依據。在前列腺癌患者中，IL-10和TNF-α的表達與腫瘤的分期、分級以及轉移情況相關。高表達的IL-10和TNF-α可能預示著腫瘤的惡性程度更高，更容易發生轉移，患者的預后更差。因此，檢測IL-10和TNF-α的表達水平有助于醫生對前列腺癌患者的病情進行全面評估，制定個性化的治療方案。在治療方案制定方面，IL-10和TNF-α為細胞因子靶向治療提供了新的靶點。針對IL-10和TNF-α及其信號通路開發的靶向治療藥物，有望成為治療前列腺增生和前列腺癌的新方法。對于前列腺增生患者，可以通過抑制TNF-α的表達或活性，減輕炎癥反應，抑制前列腺細胞的增殖，從而緩解前列腺增生的癥狀。在前列腺癌治療中，可以利用IL-10的免疫調節作用，增強機體的抗腫瘤免疫反應，同時抑制TNF-α的促腫瘤作用，如抑制腫瘤血管生成和腫瘤細胞的侵襲轉移。目前，已有一些針對TNF-α的靶向治療藥物在其他疾病的治療中取得了良好的效果，如抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體在類風濕性關節炎等疾病的治療中廣泛應用。未來，可以進一步探索這些藥物在前列腺疾病治療中的應用潛力，同時研發針對IL-10的靶向治療藥物，為前列腺疾病的治療帶來新的突破。六、結論與展望6.1研究主要結論總結本研究通過對前列腺增生、前列腺癌及正常前列腺組織中IL-10和TNF-α表達水平的檢測與分析，明確了這兩種細胞因子在不同組織中的表達差異，并深入探討了其表達變化與前列腺疾病發生發展的關系。研究結果顯示，IL-10和TNF-α在前列腺增生組織和前列腺癌組織中的表達均顯著高于正常對照組織，且在前列腺增生組織中的表達高于前列腺癌組織。IL-10在前列腺增生組織中的高表達可能是機體對炎癥反應的一種自我調節機制，通過抑制炎癥細胞的活性，減少炎性細胞因子的釋放，調節前列腺細胞的增殖和凋亡，從而在一定程度上緩解炎癥反應，減輕前列腺組織的損傷。在前列腺癌組織中，IL-10的表達可能參與了腫瘤的免疫逃逸機制，通過抑制機體的免疫反應，幫助腫瘤細胞逃避免疫系統的監視和殺傷。TNF-α在前列腺增生組織中的高表達與前列腺組織的炎癥反應、細胞增殖和組織重塑密切相關，它可以激活炎癥細胞，調節細胞的增殖和凋亡，促進前列腺組織的增生。在前列腺癌組織中，TNF-α具有雙重作用，一方面可以誘導腫瘤細胞凋亡，激活免疫細胞，發揮抗腫瘤作用；另一方面，在腫瘤微環境中，它也可能促進腫瘤的生長和轉移，通過刺激腫瘤細胞分泌血管生成因子，調節腫瘤細胞的侵襲和轉移相關蛋白的表達，支持腫瘤的生長和轉移。IL-10和TNF-α在前列腺疾病的發生發展中存在復雜的相互作用關系，它們共同參與調節前列腺細胞的生長、凋亡、免疫調節等多個關鍵過程。在免疫調節方面，兩者的作用相互制衡，其平衡的打破可能與前列腺疾病的進展密切相關。在細胞增殖和凋亡方面，它們也表現出復雜的相互作用，共同影響前列腺癌細胞的生長和存活狀態。本研究結果表明，IL-10和TNF-α在前列腺增生及前列腺癌組織中的表達變化具有重要的生物學意義，它們可能作為潛在的生物學標志物，用于前列腺增生和前列腺癌的早期診斷和病情評估。它們還為前列腺疾病的細胞因子靶向治療提供了新的靶點，具有重要的臨床應用價值。6.2研究的局限性本研究雖取得了一定成果，但仍存在一些局限性。在樣本數量方面，僅收集了前列腺增生標本40例、前列腺癌標本40例及正常對照標本20例。較小的樣本量可能無法全面涵蓋前列腺增生和前列腺癌患者的個體差異，從而影響研究結果的普遍性和可靠性。不同患者的年齡、生活習慣、遺傳背景等因素均可能對IL-10和TNF-α的表達產生影響，樣本量不足可能導致這些因素無法得到充分體現，進而使研究結果存在偏差。研究方法上，本研