DB1307張家口市市場監督管理局發布本標準起草單位：張家口市農業科學院、北京市農林科學院、河北巡天農業科技有限1“張雜谷”品種分子鑒定技術規程及溶液配制、引物信息、參照品種信息、操作程序、數據記錄與統計、判定規則等技術要求。由于不同谷子品種遺傳組成不同，基因組DNA中簡4儀器設備5試劑及溶液配制2送驗樣品可為種子、幼苗、葉片、果穗等組織或器官。對谷子材料隨機數取至少5個個體組成混合），在100mL4.5%PAGE膠中加入T部，在上部輕輕的插入梳子，使其聚合1h以上。灌膠時應勻速防止液600mL，拔出梳子。90W恒功率預電泳3用移液器吹吸加樣槽，清除氣泡和雜質，插入樣品梳子。每一個加樣孔點入5l樣品。80W恒功率電泳至上部的指示帶（二甲苯青FF）到達膠板的中部。電泳結束后注：預期擴增產物片段大小在150bp以下時電泳時間應適當縮短，擴增產物片段大小在300bp以上g）漂洗：雙蒸水漂洗1min。等體積混合不同熒光SSR標記（FAM，ROX）擴增產物，混勻后從混合液中吸取1L加入到DNA分析儀專用96孔板孔中。板中各孔分別加入0.1L分子量內標和8.9L去離子甲酰胺。將樣品在PCR儀9.1數據記錄不同型號DNA分析儀間可能存在的系統誤差，上兩個等位變異，小片段數據在前，大片段數據在后；缺失位點9.2數據統計4A.1主要儀器設備A.1.2高壓電泳儀A.1.3垂直電泳槽及配套的制膠附件A.1.4普通電泳儀A.1.5水平電泳槽及配套的制膠附件A.1.6高速冷凍離心機A.1.7水平搖床A.1.8膠片觀察燈A.1.10微量移液器規格分別為10L、20L、100L、200L、1000L，連續可調。A.1.11磁力攪拌器A.1.12紫外分光光度計A.1.13微波爐A.1.14高壓滅菌鍋A.1.15酸度計A.1.16水浴鍋或金屬浴A.1.17冰箱A.1.18制冰機A.1.19凝膠成像系統或紫外透射儀A.1.20DNA分析儀基于毛細管電泳，有片段分析功能和數據分析軟件，能夠分辨1個核苷酸大小的B.1.5乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-稱取186.1gNa2EDTA.2H2O溶于800mL水中，加固體氫氧化鈉調pH值至8.0，定容稱取60.55gTris堿溶于水中，加HC稱取146g固體氯化鈉溶于水中，定容至5超純水720μL定容至每種終濃度2.5mmol/L工作液。量取超純水分別配制上游引物和下游引物終量取49.75mL無水乙醇，250μL冰醋量取1mLBind緩沖液，加入5μLBind原液，混勻。稱取Tris堿108g，硼酸55g，量取0.5m量取10倍TBE緩沖液500mL，加水定容至5量取100mL冰醋酸，加水定容至10A52注2：多個品種在某一SSR位點上可能具有相同的等位變異，在確認這些品種該位點等位變異大小與參照品種相同注3：參照品種共40個，覆蓋了幾乎全部在0.05以上的所有等位變異；擴展參照品種共20個，主要補充基因頻率在0.05以下的稀有等位變異。熒光毛細管電泳只需從核心參照品種名單中選擇部分或全部使用，普通變性聚丙烯酰胺凝膠電泳需要將核心：