ICS65.020.20CCSB05DB23黑龍江省地方標準DB23/T3033—2021東北百里香組培繁殖技術規程黑龍江省市場監督管理局發布DB23/T3033—2021前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由黑龍江省林業和草原局提出。本文件起草單位：東北林業大學、黑龍江省電力科學研究院、綏棱縣應急管理局、綏棱縣國有林場發展服務中心、海倫市森林資源保護中心、海倫市陳家店林場。本文件主要起草人：范麗娟、王玉喜、趙玉彬、苗雨蕾、錢大勇、史恭發、閆蕾、呂汝彤、葉王斌、趙蕊陽、劉桂伶、楊娟、付海靜、王玲、王金紅。ⅠDB23/T3033—2021東北百里香組培繁殖技術規程1范圍本文件規定了東北百里香（ThymusmandschuricusRonn.）組培繁殖的環境與設備消毒、培養基配制、外植體的制備、培養條件、不定芽誘導、不定芽增殖、生根培養、煉苗、溫室移栽及管理和生產檔案。本文件適用于東北百里香組培繁殖。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用性文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882—2010林木組織培養育苗技術規程NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術規程3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4.1接種室消毒接種室消毒按NY/T2306—2013中8.6的規定執行。4.2培養室消毒培養室消毒按NY/T2306—2013中8.7的規定執行。4.3超凈工作臺消毒接種器具按NY/T2306—2013中8.4的規定執行。培養基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的規定執行。1DB23/T3033—20215.2培養基配制5.2.1培養基配方培養基配制成分如下：a)初代培養基：MS＋0.5mg/L6-BA＋30?g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養基pH值調制為5.8～6.0；b)不定芽增殖培養基：MS＋0.5?mg/L6-BA＋0.1?mg/LNAA＋30?g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養基pH值調制為5.8～6.0；c)生根培養基：1/2MS＋0.5?mg/LIBA＋30?g/L蔗糖＋固化劑，滅菌前培養基pH值調制為5.8～6.0。5.2.2培養基配制方法培養基配制方法按NY/T2306—2013中7.4執行。5.3培養基滅菌及保存培養基滅菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2進行。6外植體的制備6.1外植體的選擇宜6月~8月，從健康植株上選取中上部半木質化的枝條，剪成5cm長的莖段。6.2消毒將外植體在洗衣粉水中浸泡15?min，自來水沖洗1?h~2?h后，置于超凈工作臺上，用75?%的酒精浸泡10?s～30?s，無菌水沖洗4遍~6遍，加入2?%的次氯酸鈉溶液攪拌殺菌15?min或0.1%的升汞殺菌8?min~10?min，無菌水沖洗4遍~6?遍，用無菌濾紙吸干材料表面水分，切割成1?cm~1.5?cm長的帶腋芽的莖段。培養條件為24℃～28℃，光周期為14h/d，光照強度3000Lux，空氣相對濕度60%～80%。將帶有腋芽的莖段接種到誘導不定芽的初代培養基上，培養15d～20d，獲取不定芽備用。切下不定芽，垂直插入不定芽增殖培養基中，插入深度0.5cm左右，培養30d。待分化的不定芽形成芽叢后，分割新長出的不定芽。可按需求重復繼代。選取培養瓶中長度2?cm?～3?cm生長健壯的不定芽轉接至生根培養基中，插入深度為0.5?cm，培養≥20d。2DB23/T3033—202111煉苗、溫室移栽及管理11.1煉苗在組培苗根長至2?cm～3?cm時，在培養室中半開封口膜放置1d，再去掉封口膜放置1d，用鑷子取出組培苗，用自來水沖洗附著在根上的培養基，放入底部裝有自來水的三角瓶中水培，水的深度以沒到組培苗根頸部為宜，2d后移栽。11.2溫室移栽及管理11.2.1移栽準備將蛭石在121℃高壓滅菌鍋中滅菌20min，放涼后裝入規格為10cm×11cm×8.5cm的花盆中，裝至花盆高度的2/3，壓實。11.2.2移栽取出組培苗，在散射光下移栽至花盆的蛭石中，使根盡量伸展開，壓實，浸透水，放入人工氣候箱內緩苗，培養條件為24℃～28℃，光周期為14h/d，光照強度3000Lux，空氣相對濕度60%～80%。15d后移至溫室。11.2.3移栽后管理移栽初期，保持空氣濕度≥60%，適時澆