抗體上游細胞培養技術體系演講人：日期:目錄CONTENTS01細胞系開發02培養工藝設計03培養基優化04過程監控體系05放大生產策略06質量控制體系01細胞系開發宿主細胞篩選標準細胞生長特性細胞遺傳穩定性細胞表達特性細胞安全性細胞增殖速度快，細胞周期短，有利于快速獲得大量細胞。宿主細胞需具備高效表達外源基因的能力，同時保持細胞原有的功能。宿主細胞需保持遺傳穩定性，避免在培養過程中發生不良變異。宿主細胞需經過嚴格的安全性評估，確保不含有害物質或致瘤基因。載體構建技術路徑載體選擇根據目標基因的特點和表達需求，選擇合適的載體類型。01載體構建利用基因工程技術將目標基因插入載體，并構建出高效表達的載體。02載體檢測通過PCR、測序等方法檢測載體的構建是否成功，以及插入基因是否正確。03載體純化對構建好的載體進行純化，去除其中的雜質和內毒素，以保證轉染效果。04穩定轉染方法優化轉染方法選擇轉染條件優化穩定轉染篩選細胞株鑒定根據宿主細胞類型和載體特性，選擇最佳的轉染方法，如脂質體轉染、電穿孔轉染等。對轉染過程中的細胞密度、轉染試劑比例、轉染時間等條件進行優化，提高轉染效率。通過藥物篩選、流式細胞術等方法篩選出穩定表達目標基因的細胞株。對篩選出的細胞株進行基因表達、功能等方面的鑒定，確保其符合實驗要求。02培養工藝設計批式/流加培養模式在細胞培養過程中，細胞一次性接種于培養基中，待細胞生長到所需密度后進行收獲。這種方式操作簡單，易于控制，但細胞密度和產物產量相對較低。批式培養在細胞培養過程中，不斷向反應器中補充新鮮培養基，同時移除部分舊培養基和細胞代謝產物。這種方式可以提高細胞密度和產物產量，但需要更復雜的設備和技術支持。流加培養營養補料策略制定碳源補料微量元素補料氮源補料在細胞培養過程中，葡萄糖是常用的碳源。當葡萄糖濃度下降到一定程度時，會影響細胞生長和產物合成。因此，需要制定合理的補糖策略，以維持細胞生長和產物合成的需要。氮源是細胞生長和產物合成的重要營養成分。在細胞培養過程中，需要不斷補充氮源，如氨基酸、蛋白質等，以滿足細胞生長和產物合成的需要。微量元素在細胞生長和產物合成中起著重要作用。在細胞培養過程中，需要不斷補充微量元素，如鐵、鋅、銅等，以保證細胞的正常生長和產物的合成。關鍵參數控制標準溫度控制細胞生長和產物合成需要在適宜的溫度下進行。溫度過高或過低都會影響細胞的生長和產物的合成。因此，需要嚴格控制培養溫度，確保其在適宜范圍內波動。pH值控制溶解氧控制細胞生長和產物合成需要在適宜的pH值范圍內進行。過高或過低的pH值都會影響細胞的生長和產物的合成。因此，需要不斷監測并調整培養液的pH值，確保其在適宜范圍內波動。細胞生長和產物合成需要充足的氧氣供應。過高或過低的溶解氧濃度都會影響細胞的生長和產物的合成。因此，需要不斷監測并調整培養液中的溶解氧濃度，確保其在適宜范圍內波動。12303培養基優化基礎培養基組分分析糖類細胞生長的主要能源物質，提供碳源和能量。01氨基酸構成蛋白質的基本單元，對細胞生長和抗體產生有重要影響。02維生素參與細胞代謝和抗體合成，是必需的營養成分。03無機鹽維持細胞滲透壓和酸堿平衡，參與細胞代謝。04生長因子添加方案提供豐富的生長因子和附著因子，促進細胞生長和抗體產生。血清包括胰島素、轉鐵蛋白等，促進細胞生長和分化。生長因子混合物如地塞米松等，對細胞生長和抗體產生有調節作用。激素類生長因子代謝副產物抑制策略氧化應激添加抗氧化劑如維生素C、E等，減少自由基對細胞的損傷。03通過控制葡萄糖濃度和通氣量，調節乳酸生成和排出，維持培養液酸堿平衡。02乳酸代謝氨代謝通過添加谷氨酰胺等氨的替代物，降低氨對細胞的毒性作用。0104過程監控體系細胞密度檢測技術利用血細胞計數板或細胞計數器進行細胞數量統計，反映細胞增殖狀態。細胞計數法細胞活力檢測細胞周期測定采用臺盼藍等染料進行細胞染色，區分活細胞與死細胞，評估細胞生長狀態。通過流式細胞術等方法，檢測細胞各個周期階段的比例，了解細胞增殖速度。代謝物動態監測關鍵營養物監測測定培養液中葡萄糖、谷氨酰胺等關鍵營養物質的消耗速率，確保細胞獲得充足的能量。01代謝產物分析檢測乳酸、氨等代謝產物積累情況，避免對細胞產生毒性作用。02酸堿度監控實時監測培養液的pH值，維持適宜的細胞生長環境。03產物表達量追蹤產物濃度測定利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等技術，測定培養液中目標產物的含量。基因表達水平檢測產物活性分析通過實時熒光定量PCR等方法，檢測目標基因的表達水平，反映產物合成潛力。針對某些具有生物活性的產物，需進行特定的生物活性測定，確保產物具有預期的生物學功能。12305放大生產策略生物反應器選型標準6px6px6px適用于大規模培養，提供良好的混合與氧傳遞性能。攪拌式生物反應器結構簡單，溶氧效率高，適用于細胞密度較低的培養。鼓泡式生物反應器利用氣體提升混合效率，降低剪切力，適用于高粘度培養基。氣升式生物反應器010302利用膜技術實現細胞與產物的有效分離，提高產物純度。膜生物反應器04氧傳遞效率控制通過調節進氣中的氧氣濃度，滿足細胞在不同生長階段的氧需求。氧氣濃度調節實時監測培養液中的溶氧濃度，確保細胞在最佳溶氧條件下生長。溶氧濃度監測通過優化攪拌速度和通氣量，提高氧傳遞效率，降低細胞代謝負擔。攪拌與通氣優化高剪切力可能導致細胞形態異常，影響細胞生長和產物表達。剪切力影響評估剪切力對細胞形態的影響適宜的剪切力可以促進細胞生長，但過高的剪切力會抑制細胞生長。剪切力對細胞生長的影響剪切力可能影響產物的結構、活性或表達量，需在工藝開發中進行優化。剪切力對產物表達的影響06質量控制體系細胞活性驗證方法細胞增殖能力檢測通過細胞計數、細胞周期分析等方法，驗證細胞增殖能力是否符合預期。01細胞代謝活性檢測采用熒光素酶報告基因等技術，檢測細胞代謝活性水平。02細胞表面標志物檢測通過流式細胞術等技術，檢測細胞表面特定標志物的表達情況，以驗證細胞身份和純度。03抗體完整性檢測抗原結合能力檢測采用ELISA等技術，檢測抗體與特定抗原的結合能力，以驗證抗體的特異性和親和力。03采用質譜等技術，測定抗體的分子量，與理論值進行比較，判斷抗體是否降解或聚集。02分子量測定蛋白電泳利用蛋白質在電場中的遷移率不同，檢測抗體分子是否完整。01殘留宿主蛋白標準殘留宿主蛋白種類制定殘留宿主蛋白的種類和限量標準，確保產