細胞培養無菌技術演講人：日期:目錄CONTENTS01環境控制規范02人員操作規范03培養基與試劑管理04器具滅菌管理05污染監測體系06廢棄物處理規范01環境控制規范超凈工作臺操作標準6px6px6px實驗所需物品應經過表面消毒處理，并放置于超凈工作臺內。物品準備工作臺表面應定期用消毒劑擦拭，保持無菌狀態。工作臺清潔操作人員需穿戴潔凈的實驗服、手套和口罩，避免交叉污染。操作規范010302廢棄物應分類處理，廢棄物容器應定期更換和消毒。廢棄物處理04實驗室空氣凈化要求空氣潔凈度實驗室空氣潔凈度應達到規定標準，避免微生物污染。01通風換氣實驗室應設置合理的通風換氣系統，以保持空氣新鮮。02過濾設備使用高效過濾設備，如HEPA過濾器，去除空氣中的細菌、病毒等微粒。03氣流控制實驗室內的氣流應保持穩定，避免氣流紊亂導致污染。04溫濕度與壓力監控溫濕度控制壓力監測報警系統設備校準實驗室應保持適宜的溫濕度，避免對實驗結果造成影響。實驗室內應保持一定的正壓，防止外部污染物進入。應設置溫濕度和壓力報警系統，確保實驗環境始終處于受控狀態。溫濕度和壓力監測設備應定期校準，確保數據準確可靠。02人員操作規范要確保手套無破損，且要定期更換。戴手套穿戴無菌衣時需避免污染，確保無菌衣遮蓋全身。穿無菌衣01020304應遮住口鼻，且口罩要經常更換，以保持清潔。戴口罩帽子要遮蓋頭發，口罩要遮住口鼻。戴帽子和口罩無菌服穿戴流程手部消毒與行為禁忌手部消毒定期修剪指甲禁止觸摸禁止手部佩戴飾品進入無菌室前，需用消毒液徹底清洗雙手及手腕，并保持手部干燥。避免用手觸摸眼睛、鼻子、嘴巴等易感染部位，以及無菌物品。保持指甲短而干凈，以減少污染風險。手鏈、手表等飾品容易成為細菌滋生的場所，應避免佩戴。標準化操作輕柔操作進行細胞培養時，需按照標準操作規程進行，避免污染和細胞損傷。細胞非常脆弱，操作時需輕柔、緩慢，避免劇烈震蕩和碰撞。實驗動作標準化訓練保持清潔實驗過程中需保持臺面、儀器等物品的清潔，避免交叉污染。正確使用吸管和移液器避免吸管和移液器的污染，確保每次使用時都進行無菌處理。03培養基與試劑管理高壓滅菌參數設定壓力根據不同培養基和試劑的成分和特性，設定合適的壓力，通常為1.05-1.21kg/cm2。01溫度通常為121°C，持續時間根據物品的體積和類型而定，通常為15-30分鐘。02滅菌器選擇選擇高效、穩定的高壓滅菌器，確保滅菌效果和安全性。03過濾除菌技術要點根據待過濾物質的特性，選擇合適的過濾器，如0.22μm或0.45μm的濾膜。過濾器選擇將待過濾的溶液進行預處理，如離心、沉淀等，以去除大顆粒物質，延長濾膜壽命。過濾前處理過濾過程中需進行無菌操作，避免污染。同時，要注意過濾器的清洗和消毒。無菌操作無菌分裝與儲存條件對分裝容器、工具等進行清洗和消毒，確保無菌。分裝前準備分裝操作儲存條件在無菌環境下進行分裝，注意避免污染和交叉污染。同時，要控制好每份培養基或試劑的體積，以便于使用。儲存于避光、干燥、陰涼處，避免陽光直射和高溫。同時，要注意儲存期限，定期檢查和更新。對于易變質的試劑，需進行特殊儲存和處理。04器具滅菌管理濕熱滅菌效果通常優于干熱滅菌，因為濕熱滅菌能夠穿透細胞壁和細胞膜，殺死更多細菌。干熱/濕熱滅菌選擇滅菌效果干熱滅菌適用于對高溫和濕氣敏感的物品，如玻璃器皿等；濕熱滅菌則適用于大部分器皿、培養基和器械等。適用范圍干熱滅菌操作相對簡單，但所需時間較長；濕熱滅菌操作相對復雜，但所需時間較短。操作便捷性滅菌效果驗證方法生物指示劑法利用特定菌種在滅菌過程中的死亡情況來驗證滅菌效果，是最可靠的驗證方法。01化學指示劑法通過滅菌過程中化學物質的變色或形態變化來驗證滅菌效果，操作簡便，但準確性不如生物指示劑法。02物理參數監測法通過監測滅菌過程中的溫度、壓力等物理參數來驗證滅菌效果，但無法直接反映微生物的死亡情況。03無菌器具存放標準存放環境存放管理存放方式滅菌后的器具應存放在干燥、通風、無塵、無污染的環境中，避免再次受到污染。滅菌后的器具應采用專用無菌容器或無菌包裝進行存放，避免交叉污染。同時，應標明滅菌日期和使用期限，以便管理。存放無菌器具的區域應有明確的標識和管理制度，未經許可的人員不得隨意進入。同時，應定期對存放環境進行清潔和消毒，確保無菌環境的長期維持。05污染監測體系微生物檢測頻率空氣、水、表面、操作工具等。檢測環境常規操作前、后及每周至少一次全面檢測。檢測頻率培養法、PCR法、ATP檢測等。檢測方法記錄檢測結果，分析污染趨勢及原因。檢測結果記錄與分析污染源追蹤流程初步排查詳細調查污染源確認污染消除與驗證確認污染類型，追溯可能污染環節。收集疑似污染源信息，包括操作過程、原材料、設備等。通過實驗驗證，確定污染源及污染途徑。制定并執行消除污染措施，再次檢測驗證效果。隔離污染區域，防止污染擴散。污染隔離與控制采取適當措施消除污染，如消毒、滅菌等。污染消除與處理01020304發現污染立即報告，啟動緊急預案。污染發現與報告持續監測污染情況，評估處理效果。污染后續監測與評估緊急處理預案06廢棄物處理規范生物污染廢棄物分類損傷性廢棄物包括針頭、刀片等尖銳物品，需放入專用容器，防止扎傷和感染。03包括細胞培養過程中使用的有毒、有害、腐蝕性化學試劑，需按化學性質分類收集處理。02化學性廢棄物感染性廢棄物包括培養的細胞、微生物、動物組織、血液、體液等，需經過專門處理，防止交叉感染。01滅活處理技術參數采用121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘以上，確保徹底殺滅所有微生物。高壓蒸汽滅菌使用高效消毒劑，如75%酒精、新潔爾滅等，浸泡時間需達到規定要求?；瘜W消毒劑浸泡對無法高壓蒸汽滅菌的物品，需進行焚燒處理，確保徹底殺滅微生物。焚燒處理環境恢復操作流程清潔消毒對污染區域進行徹底