實驗用合作小型豬病理學檢查規范2021-09-04實施2021-09-04實施 1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14縮略語 15檢查規則 26檢查程序 37臨床病理學檢查 48解剖病理學檢查 69檢查結論 6附錄A(資料性)實驗用合作小型豬組織病理學標本取材規范 7I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由甘肅省科學技術廳提出、歸口并監督實施。本文件起草單位：中國農業科學院蘭州獸醫研究所、甘肅省畜牧獸醫研究所。本文件主要起草人：景志忠、房永祥、陳國華、賈懷杰、張莉敏、何小兵、李政廳、楊帆(男)、婁忠子、李維克、景偉、張春祥。各單位或個人在執行本文件過程中如發現需要修改和補充之處，請隨時將意見和建議反饋至《實驗用合作小型豬病理學檢查規范》地方標準編制組(地址：甘肅省蘭州市城關區鹽場堡徐家坪1號，郵編：730046,聯系人：景志忠，E-mail:zhizhongj@163.com,聯系方式13099137618),以供今后修訂時參考。本文件規定了實驗用合作小型豬的檢查規則、檢查程序、臨床病理學檢查、解剖病理學檢查、結果判定和檢查結論等。本文件適用于實驗用合作小型豬的病理學檢查與疾病診斷。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。實驗用合作小型豬experimentalHezuominipig經人工飼育，對其攜帶的病原微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，12月齡體重不超過40kg,用于科學研究、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的合作豬。臨床病理學clinicalpathology用化學、微生物學、血液學和分子生物學的方法對動物血液、尿液和器官組織等進行實驗室檢測分析，而對動物是否健康做出判定的醫學學科。解剖病理學anatomicalpathology通過肉眼、顯微鏡以及化學、免疫學和分子生物學的方法對動物整體、器官和組織的形態進行檢查，而對動物是否健康做出判定的醫學學科。4縮略語下列縮略語適用于本文件。ALB(Albumin):白蛋白ALP(Alkalinephosphatase):堿性磷酸酶ALT(Alanineaminotransferase):丙氨酸氨基轉移酶AMY(Amylase):淀粉酶12HCT(Hematokrit):紅細胞比積HGB(Hemoglobin):血紅蛋白MCV(Meancorpuscularvolume):平均紅細胞體積MPV(MeanplateletvoluPCT(Plateletocrit):血小板比積RDW-CV(Redbloodcelldistributionwidthvariance):紅細胞分布寬度變異數WBC(Whitebloodcells):白細胞普通級實驗用合作小型豬每年檢查一次，無特定病原體級(SPF)實驗用合作小型豬每半年檢查一樣本要有明顯的標識，標明動物樣品名稱、品系、等級、數量及檢測項目等內通級、SPF級)要求安全運達檢測實驗室。選擇3月～12月齡的實驗用合作小型豬用于隨機抽樣(雌雄各半)和檢查檢測。樣品采集、保存與表1抽樣數量≥3頭≥5頭≥8頭≥10頭應按實驗用合作小型豬的等級分類要求，抽樣檢查檢測。臨床檢查采血病理學檢查報告普通級：無異常、輕微異常SPF級：無異常不合囍合格3學兔兔標準下載420℃~26℃室溫條件下，抗凝血不超過8h。%%DB62/T4360—2021P注：數據主要來自3月～12月齡實驗用合作小型豬，8、早動物合并統計。a)未見異常：動物外觀無異常，同時血液化驗指標b)輕微異常：動物外觀無明顯異常，但血液化驗指標3項以內存在異常升高或降低，最大變異不超過正常參考值范圍臨界值的20%;c)輕度異常：動物外觀無明顯異?；蛴休p微異常，超過3項血液化驗指標異常升高或降低，最大變異達到正常參考值范圍臨界值20%～50%;d)明顯異常：動物外觀呈現明顯異常；或動物外觀無明顯異?；蛴休p微異常，超過3項血液化驗指標異常升高或降低，最大變異超過正常參考值范圍臨界值50%。5學兔兔標準下載6麻醉或安樂死→放血→體表檢查→皮下檢查→剖開腹腔做一般視察→剖開胸腔做一般視察→摘出腹腔臟器并檢查→摘出胸腔臟器并檢查→摘出口腔和頸部器官并檢查→摘出骨盆腔臟器并檢查→剖開顱腔摘出頭部器官并檢查→剖開脊椎管，取出脊髓并檢查→肌肉、關節和淋巴結檢查→骨和骨髓檢查。d)胸腔：胸腔液、胸腺、肺和肺門淋巴腎上腺、胃、腸道(十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸)、腸系膜淋巴結；f)盆腔：膀胱、輸尿管、前列腺、精囊腺、卵巢、輸卵管、子宮及其附件、陰道。對大體解剖中發現的異常部位進行組織切片檢查b)輕微異常：發現輕微的病理形態學變化，動物仍然能夠表現正常的生理功能；d)明顯異常：有明顯的病理形態學變化，動物出現生無特定病原體級(SPF)小型豬病理學檢查未見異?；蜉p微異常時，均可判定為合格；出現輕度異臨床病理學與解剖病理學檢查結果不一致時，按抽檢的小型豬20%以上不合格時，判定該群實驗用合作小型豬不合格。(資料性)實驗用合作小型豬組織病理學標本取材規范A.1取材的總則及注意事項A.1.1組織塊要新鮮，切取的組織塊應立即投入固定液中，及時固定，以防組織發生死后變化。A.1.2取材要全面且具有代表性，能顯示病變的發展過程。要選擇有病變的器官或組織，特別是病變顯著部分或可疑病灶。在一塊組織中，要包括病灶及其周圍正常組織，且應包括器官的重要結構部分。如胃、腸應包括從漿膜到黏膜各層組織，腎臟應包括皮質、髓質和腎盂，心臟應包括心房、心室及其瓣膜各部分，外周神經組織作縱切及橫切面均屬必要，較大而重要的病變可從病灶中心到外周不同部位取材，以反映病變各階段的形態學變化。A.1.3切取組織塊所用的刀剪要鋒利。切時必須迅速而準確，由前向后一次切開，不要來回用力，勿使組織塊受擠壓或損傷，以保持組織完整，避免人為的損傷。因此，對柔軟菲薄或易變形的組織如胃、腸、膽囊、肺以及水腫的組織等的切取，更應注意。為了使胃腸黏膜保持原來的形態，在小動物可將整段腸管剪下，不需沖洗或擠壓，直接投入固定液內。黏膜面所附著的病理性產物，一經觸摸即被破壞，故采取標本時應格外注意。接觸水分可改變組織微細結構，組織在固定前不應沾水。A.1.4組織塊的大小要適當。通常組織塊的長、寬、厚以1.5cm×1cm×0.4cm為宜，必要時可增大到2cm×1.5cm×0.5cm,以便于固定液迅速浸透。尸體剖檢時采取病理組織塊可切得稍大些，待固定幾小時后再加以修整，切到適當的大小。A.1.5取材時要盡量保持組織的自然狀態與完整性，避免人為損傷。為了防止組織塊在固定時扭曲變形，對于胃、腸、膽囊等易變形的組織，切取后可將其漿膜面朝下平放于厚紙片上，然后徐徐投入固定液中。對于較大的組織片，可用兩片細銅絲網放在其內外兩面，系好，再行固定。A.1.6對于特殊病灶要做適當標記。在切取組織塊時，需將病變顯著的部分切平，另一面切成不平面，以供區別，使包埋時不致倒置。如果組織塊過小或易碎，采取后裝入特制的標本分載盒(銅網盒或特殊塑料制成的組織處理盒)內再行固定，以防丟失或破裂。A.1.7注意避免類似的組織塊混淆。當類似的組織塊較多，容易彼此混淆時，可分別固定于不同的小瓶中，或用分載盒分裝固定，或將組織切成不同的形狀(如長方形、四方形，三角形等),使易于辨認。此外，還可用鉛筆標明的小紙片和組織塊一同用紗布包裹，再行固定。A.1.8選用恰當的固定液。固定液的種類較多，不同的固定液各有其特點，應依據被檢物的性質選用恰當的固定液進行固定，以便正確的保存其固有成分和結構。例如福爾馬林液能固定一般組織，但能溶解肝糖原和某些色素；酒精能很好的固定肝糖原和蛋白性抗原物質，但能溶解脂肪。因此，固定標本須依據要求，選擇適當的固定液。最常用的固定液是10%的福爾馬林水溶液(市售甲醛用水稀釋10倍),為使切片效果更好可用中性福爾馬林液；其他固定液如酒精溶液或Zenker氏液等亦要準備齊全，以便需要時即可應用。固定液的量要相當于組織塊總體積的5～10倍，液量勿少于組織塊總體積的4倍。將組織塊投入固定液之后應及時搖動，使組織塊充分接觸固定液，固定液容器不宜過小，容器底部可墊以脫脂棉花，以防止組織與容器粘78連，避免組織固定不良或變形。肺臟組織比重較輕，易漂浮于固定液面，可蓋上薄片脫脂棉花，借棉花的虹吸現象，可不斷地浸濕標本。A.1.9固定時間要適當。固定時間依據固定物的大小和固定液的性質而定。通常由數小時至數天。時間過短組織固定不充分，影響染色效果，使組織原有結構不清楚；固定時間過長或固定液濃度過高，則使組織收縮過硬，也影響切片染色質量。如以甲醛液固定，需固定24h～48h,后用水沖洗12h即可。用Zenker氏液固定12h～24h后，經水沖洗24h。為阻止細胞內蛋白溶解酶的作用，最好將組織塊置于4℃冰箱冷藏固定，以使酶失去活性作用。A.1.10病理組織塊應合理寄送。將固定完全和修整后的組織塊，用浸漬固定液的脫脂棉花包裹，放置于廣口瓶或塑料袋內，并將其口封固。瓶外再裹以油紙或塑料紙，然后用大小適當的木盒包裝，即可運送。同時應將整理過的尸體剖檢記錄及有關材料一同寄出，并在送檢單上說明送檢的目的要求，組織塊的名稱、數量以及其他應說明的問題。除運送的病理組織塊外，本單位還應保留一套病理組織塊，以備必要時復查之用。A.1.11接收時應仔細檢查送檢標本。接收送檢標本時，須依據送檢單詳細檢查送檢物。注意標本名稱、大小及數目，是否與送檢單相符，負責人及地址有無填寫清楚。如發現送檢標本不符，或送檢單填寫有誤，應立即更正。標本固定不當，組織干涸或壞死不能制片時，也應退回。經檢查無誤后，即將標本編號登記，并在標本瓶上貼上標簽，以防錯亂。A.2標本采集與處理A.2.1皮膚和皮下組織A.2.1.1皮膚取肩背部皮膚組織和其他有病變皮膚。取材時發現有病變，需記錄其大小、顏色及其他特征。A.2.1.2淋巴結將淋巴結垂直于長軸切開，取組織1～2塊。記錄淋巴結的大小，與周圍組織的粘連情況，剖面病理狀況。A.2.1.3乳腺沿乳頭周圍連同皮膚剪取乳腺組織，皮膚面朝下放在取材板上，在乳頭中心處切開，取組織1～2塊。如果發現乳腺腫瘤，同時取乳腺淋巴結。記錄腫瘤大小、切面及表面狀況和乳腺淋巴結的情況。A.2.1.4睪丸和附睪用鋒利的刀將睪丸作矢狀切面剖開，取組織1塊。沿附睪長軸縱向剖開附睪，取組織1塊。記錄睪丸和附睪的表面和切面情況。A.2.2腹腔臟器A.2.2.1脾臟以0.5cm～1.0cm間距對脾作多個平行橫切面，檢查每塊脾臟薄片的局部形態。取組織1～2塊。記錄脾臟的形態、色澤和切面的情況。A.2.2.2腎上腺將腎上腺垂直于長軸切開，放入固定液中。記錄腎上腺的形態、色澤和切面的情況。自腎外側緣沿長軸經腎門縱向剖開腎臟，小心剖開腎盂、腎盞和輸尿管。在腎皮質和髓質最大剖面的不同部位切取2塊組織。若有病變，再于主要病變區域取組織2塊，無病變區域取組織2塊。記錄腎臟表面、皮質、髓質、腎盂和輸尿管的情況。A.2.2.4肝臟左外葉和右外葉各取組織1塊(包括包膜)。發現病灶的肝葉應沿標本長軸作垂直肝包膜的橫切面，切面經過病變中心，取病變組織2塊。記錄肝臟表面和切面情況，門脈做剖開檢查。A.2.2.5胰腺胰腺的頭、體、尾各取組織1塊。如有病變，應切出病變區域的最大截面，取組織2塊。沿胃大彎剪開，觀察胃內容物的性狀，用水輕輕洗凈胃內容。胃底、胃體、胃竇和十二指腸球部各取全層結構組織1塊。有病變時(腫瘤、潰瘍或胃炎),另取病變部位組織1～3塊。記錄黏膜的色澤及有無異常。A.2.2.7腸道十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸和直腸各取橫切全層腸組織1塊。若發現病灶，應包括鄰近的正常組織，縱向切取組織2塊。記錄腸系膜、腸道漿膜面、腸壁和腸道黏膜面的情況，注意記錄病變所處腸段的位置，以及腸腔內有無寄生蟲或異物。A.2.2.8腸系膜淋巴結將淋巴結垂直于長軸切開，取組織1～2塊。記錄腸系膜淋巴結情況，與周圍組織粘連情況，切面病理狀況。A.2.3胸腔臟器A.2.3.1胸腺頸部胸腺與胸部胸腺各取組織1塊。記錄胸腺的大小、質地和有無異常。A.2.3.2肺臟1.0cm切開肺葉，左右肺葉各取組織1塊，支氣管斷端1塊。若有病變，主要病變區域取組織1～3塊。記錄肺表面和切面的情況，若有病灶，應記錄病灶部位(肺葉、肺段)。肺組織固定時，應將組織塊沉入固定液液面之下，避免漂浮在液面之上。9A.2.3.3心臟沿左縱溝左側的切口，切至肺動脈起始處；沿左縱溝右側的切口，切至主動脈的起始處。然后將心臟翻轉過來，再沿右縱溝左右兩側作平行切口，切至心尖部與左側心切口相連接；切口再通過房室口切至左心房及右心房。將心臟全部剖開。左右心各取1組織塊，每塊組織應包括心房、瓣膜、心室壁各層結構及冠狀動脈。記錄心臟縱溝、冠狀溝的脂肪量，以及心外膜、心內膜和切面變化。A.2.4頸部器官甲狀腺位于喉下方的氣管表面，橫切檢查后放入固定液。記錄其大小和顏色。A.2.5盆腔器官A.2.5.1前列腺和精囊腺將前列