氣相色譜法（GC）在2010版

《中國藥典》中的應(yīng)用

孫仁爽單位：通化師范學(xué)院電話Q：804590217檢測器進(jìn)樣器色譜柱GAS氣源柱溫箱數(shù)據(jù)處理一、氣相色譜儀的配置

氣源的配置配FID檢測器需購買N2、H2和Air三種氣體。提供氣體兩種方式：鋼瓶（需提前準(zhǔn)備好）和氣體發(fā)生器（購買儀器的時(shí)候從廠家訂購）。鋼瓶純度高，但氫氣鋼瓶易泄露發(fā)生危險(xiǎn)，可購買氫氣報(bào)警器或放室外小房子。發(fā)生器氣體純度稍低，安全性高。通化購買不到高純氣體，一般到長春購買。標(biāo)配為氮?dú)庥娩撈浚瑲錃夂涂諝庥冒l(fā)生器。目前有氮?dú)淇找惑w機(jī)，F(xiàn)ID和TCD可滿足要求，ECD達(dá)不到要求。氣體凈化裝置：脫氧管、脫水管、脫烴管。進(jìn)樣系統(tǒng)：包括樣品引入裝置和氣化室（進(jìn)樣口）。樣品引入裝置：10uL微量注射器、自動(dòng)進(jìn)樣器和頂空進(jìn)樣器（做溶劑殘留、樹脂殘留需配置）。進(jìn)樣口：標(biāo)配為前進(jìn)樣口為填充柱進(jìn)樣口、后進(jìn)樣口為分流／不分流進(jìn)樣口。柱子的選擇（填充柱和毛細(xì)管柱）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求購買，購買的時(shí)候明確柱子型號(hào)最好，毛細(xì)管柱主要為聚硅氧烷類和聚乙二醇類。開發(fā)新方法時(shí)，首選非極性固定相，柱效高，對(duì)氧不敏感、最高使用溫度高、柱壽命長優(yōu)點(diǎn)。檢測器標(biāo)配為ＦIＤ（大多數(shù)有機(jī)化合物）/TCD（微量水分測定）和ＥCD（有機(jī)氯農(nóng)殘）。氮磷檢測器（有機(jī)磷農(nóng)藥殘留方法已被05藥典附錄收載，但具體品種的檢驗(yàn)尚未開展）工作站：廠家自帶工作站，可要求廠家安裝。N2000。通化師范學(xué)院有氣相、頂空、分流、農(nóng)殘檢測器，藥典標(biāo)準(zhǔn)要求的氣相條件已完全具備，可以委托做樣和開發(fā)方法。儀器標(biāo)準(zhǔn)配置氣源：氮?dú)怃撈俊錃獍l(fā)生器和空氣發(fā)生器。凈化裝置：無ECD可不配。進(jìn)樣口：填充柱進(jìn)樣口和分流/不分流進(jìn)樣口樣品引入裝置：手動(dòng)進(jìn)樣器（10uL）和頂空進(jìn)樣器柱子：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求。檢測器：FID和ECD（農(nóng)殘）工作站：廠家工作站或N2000需要購買儀器的情況無氣相色譜儀：一般為委托檢驗(yàn)。建議：根據(jù)樣品和藥典、局頒標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)按標(biāo)配配齊，節(jié)省成本。現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)無法滿足標(biāo)準(zhǔn)要求如有GC，未配置分流不分流進(jìn)樣口和頂空、ECD，建議：對(duì)儀器進(jìn)行升級(jí)。任務(wù)重，GC不夠用。建議：買同型號(hào)（可替換）或不同型號(hào)（方法學(xué)驗(yàn)證）均可。二、合格的GC操作者應(yīng)具備的知識(shí)1.保管好安裝光盤和說明書，熟悉配件。2.使用純度合乎要求的氣體，防止檢測器和柱子被污染。購買要告訴氣體生產(chǎn)廠家要五個(gè)9氣體或高純氣體。填充柱以FID為檢測器也可以用四個(gè)9氣體。氣體剩下0.2Mpa就不要再用，如果有管路泄露或氣體用盡，鋼瓶易被污染，灌裝前需凈化處理，需要幾百元費(fèi)用，而一瓶氣體一般價(jià)值幾百元，因此定期用肥皂水做泄露檢查。3.使用性能可靠的二級(jí)減壓閥（氧氣表）。氣體發(fā)生器不需要，一般需藥廠自己準(zhǔn)備好，避免工程師調(diào)試的時(shí)候無法安裝，要求高，一般在外地購買，氧氣表右邊的表顯示鋼瓶氣體壓力，左邊表顯示減壓輸出后氣體壓力。4.定期更換氣體凈化器填料（氣源與儀器之間，配ECD檢測器最好配置）變色硅膠變紅時(shí)需要活化，140℃加熱2h。分子篩等吸附有機(jī)物的凈化器就不好用肉眼判斷了，須定期更換。空氣壓縮機(jī)有機(jī)雜質(zhì)高一些，最好3個(gè)月更換一次，馬福爐400~600加熱4-6h。5.會(huì)測定氣體的流速和計(jì)算分流比氣體的流速單位一般用mL/min表示，一般用皂膜流量計(jì)測定。氫氣的流速30-40之間，空氣的流速一般在300-400之間，載氣的流速根據(jù)樣品和色譜柱的種類決定，測完氫氣、空氣、尾吹氣的流速減掉載氣流速。隔膜吹掃（用途）一般是1。尾吹氣（用途）是20-30之間。分流出口流量根據(jù)需要測定。分流比=（分流出口流量+柱流量）/柱流量。氮?dú)猓簹錃猓嚎諝?1:1:10FID靈敏度最高。6.進(jìn)樣口的維護(hù)能更換進(jìn)樣口隔墊、清洗進(jìn)樣口襯管（玻璃毛）、襯管上端的O形硅橡膠密封圈、清洗分流平板。每6-12個(gè)月或當(dāng)指示型捕集阱顏色改變時(shí)更換時(shí)間取決于捕集阱的容量與氣體純度每1-2年校準(zhǔn)一次每3個(gè)月當(dāng)發(fā)現(xiàn)注射器中有明顯的清洗不掉的污染物,或推桿難以抽動(dòng),或當(dāng)推桿粘連時(shí),或進(jìn)樣口隔墊穿刺出現(xiàn)異常,或當(dāng)針頭被堵塞時(shí)每60針樣品裂口,進(jìn)樣口襯管內(nèi)有碎屑,保留時(shí)間偏移,柱壓降低等等每月與襯管一起更換,或視磨損情況更換每周經(jīng)常檢查,當(dāng)襯管內(nèi)有可見的污染物或色譜性能下降時(shí)更換每月經(jīng)常檢查,當(dāng)有劃痕,腐蝕或非揮發(fā)性組分造成堵塞,污染時(shí)更換每次更換色譜柱,進(jìn)樣口/檢測器部件時(shí)更換GC消耗品更換時(shí)間表7.及時(shí)清洗注射器，取樣的時(shí)候會(huì)排氣泡，注射速度越快越好，且每次注射的過程重現(xiàn)性要好，取樣之前用溶劑洗3次（每次抽滿2/3），樣品溶液洗3次，然后取樣。8.會(huì)更換柱子（插入進(jìn)樣口和檢測器的深度，用換下的隔墊插到柱子上。換下的柱子堵上盲堵，第一次沒有方向，一般讓牌子從正面看到，用過一次就有方向）。

柱子安裝進(jìn)樣口端①使色譜柱穿過墊圈伸出4-6mm，把隔墊向上滑到柱螺帽②將柱插入進(jìn)樣口，把柱上的螺帽和墊圈向上滑到進(jìn)樣口底部，用手?jǐn)Q緊柱螺帽至柱固定，調(diào)節(jié)色譜柱的位置，使柱上隔墊正好在柱螺帽底部③扳手?jǐn)Q緊1/4-1/2圈。檢測器一端：將柱螺母和墊圈插入到檢測器接頭底部，接頭用手?jǐn)Q緊，再將柱子下拉1mm，扳手?jǐn)Q緊-1/4圈，檢漏。（液相柱區(qū)別）切割柱子、切割銅管，及時(shí)更換毛細(xì)管柱密封墊。安裝完色譜柱做泄露檢查，尤其是連檢測器的一端。準(zhǔn)備一份色譜柱測試標(biāo)樣，做柱效測定，看色譜柱是否合格以及確定問題是否在色譜柱。柱子牌子信息：長度、內(nèi)徑、固定液厚度、溫度范圍。柱子的老化（40℃-50℃/10℃/min→升至最高使用溫度2-3h，不連接檢測器，不用氫氣作為老化載氣。何時(shí)老化？新柱子和長時(shí)間未用的柱子或色譜峰異常）。老化目的除去填充物中殘留揮發(fā)性成分，并使固定液再一次均勻牢固地分布在載體表面上。9.檢測器的維護(hù)點(diǎn)火線圈的更換、噴嘴的清洗、注意不要燙傷。開機(jī)先開載氣，檢測到柱子流量后再升溫，否則將破壞柱子和檢測器。FID檢測器溫度達(dá)到150度才能點(diǎn)火，判斷是否已經(jīng)點(diǎn)著火。關(guān)機(jī)是先關(guān)氫氣和空氣，再降溫度，最后關(guān)載氣（保護(hù)檢測器和柱子）。熱導(dǎo)檢測器注意通電之前，確保載氣通過了檢測器，否則，錸鎢絲易被燒斷。關(guān)機(jī)先關(guān)檢測器電源，然后關(guān)載氣。注意錸鎢絲易被氧化。電子捕獲注意放射性危害，不允許自己拆卸，廠家工程師或?qū)I(yè)人員，ECD出口排到室外。10.會(huì)數(shù)據(jù)處理內(nèi)標(biāo)法（內(nèi)標(biāo)校正因子法和內(nèi)標(biāo)工作曲線法）可消除進(jìn)樣量不準(zhǔn)確誤差，GC進(jìn)樣量一般為1uL，液相是10uL、20uL，GC更易出現(xiàn)進(jìn)樣誤差，自動(dòng)進(jìn)樣器準(zhǔn)確度可滿足要求，手動(dòng)進(jìn)樣最好用內(nèi)標(biāo)法定量。需要內(nèi)標(biāo)物。廣藿香注意結(jié)果要求：mg/g、每片含、標(biāo)示百分含量對(duì)照品溶液得標(biāo)準(zhǔn)曲線AR/AS=aCR+b，將Ai/As代入曲線計(jì)算。得標(biāo)準(zhǔn)曲線：工作站、計(jì)算器、EXCEL外標(biāo)法（外標(biāo)一點(diǎn)法和工作曲線法）面積歸一化法粗略考察，需全部出峰且都被檢測到，溶劑峰去掉，不易用于微量雜質(zhì)的檢查，一般用于同系物的含量測定。硬脂酸鎂中硬脂酸含量、大豆油（供注射用）標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法（頂空進(jìn)樣）

頂空中供試品和對(duì)照品處于不相同基質(zhì)中，如有不同，加入法為準(zhǔn)配置適當(dāng)濃度對(duì)照品溶液（0.5mg/ml），取一定量（2mL）加入到供試品溶液（8mL）中，對(duì)照品加入前后各進(jìn)樣2uL。Ax=40，Ais=60。三、15版藥典的總體構(gòu)想將凡例、附錄（制劑通則、通用分析方法、指導(dǎo)原則）、藥用輔料整合成公共部分，稱為總則。藥品正文保留一部、二部、三部。一部分為上下兩卷，上卷收載藥材、飲片、植物油脂與提取物；下卷收載成方制劑。將應(yīng)用廣泛、成熟的相關(guān)測定方法，以附錄形式收入中藥一部。如黃芩苷、芍藥苷升格為附錄。二部為化學(xué)藥三部為生物制品解決系列品種多標(biāo)準(zhǔn)并列問題。合并同類項(xiàng)，建立系列品種的通用標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一鑒別、檢查、含量測定如六味地黃系列、藿香正氣系列。15版藥典原則上不再收載新方法，主要加強(qiáng)10版新收載方法的推廣。如一測多評(píng)、特征圖譜和指紋圖譜、DNA分子鑒定、薄層生物自顯影技術(shù)等。重視引導(dǎo)、推廣、支持國產(chǎn)檢驗(yàn)儀器的發(fā)展和應(yīng)用，開展了國產(chǎn)儀器驗(yàn)證工作（與國外對(duì)比試驗(yàn)，進(jìn)行重復(fù)性、檢測限等）。檢測限(與靈敏度區(qū)別)和定量限的計(jì)算。如進(jìn)一個(gè)濃度0.1ug/mL的對(duì)照品溶液，得到該組分的信噪比為60:1，檢測限為3倍信噪比，定量限為10倍信噪比。按照藥典勘誤改正藥典。四、執(zhí)行藥典之配套及參考圖書

《中國藥典》英文版《中國藥典注釋》90版有，10版即將出版。《臨床用藥須知》《中國藥典中藥材粉末顯微鑒別圖鑒》《中國藥典中藥薄層色譜圖集》《中國藥典中藥材及原植物彩色圖鑒》《中藥飲片炮制規(guī)范》，15年《全國中藥飲片炮制規(guī)范》五、GC法在2010版《中國藥典》中的應(yīng)用凡例：藥典凡例第十條關(guān)于溶劑殘留。正文一部中藥材與飲片：冰片中龍腦含量、農(nóng)藥殘留（甘草、黃芪）植物油脂和提取物：三七三醇皂苷的樹脂殘留、燈盞花素溶劑殘留、滿山紅油特征圖譜、薄荷素油指紋圖譜

中成藥：西瓜霜潤喉片冰片、小兒感冒口服液百秋李醇冰片（合成龍腦）本品含龍腦不得少于55.0%滿山紅油特征圖譜

從中藥指紋圖譜中選取若干專屬性強(qiáng)的色譜峰組成特征指紋圖譜，用于中藥的專屬性鑒別。薄荷素油指紋圖譜斜率靈敏度：平直的色譜基線其斜率為0，當(dāng)出現(xiàn)色譜峰時(shí)斜率會(huì)快速增大，當(dāng)斜率大于或等于設(shè)定值，積分儀就認(rèn)為是出峰了，便開始積分。當(dāng)斜率由正變負(fù)，即為色譜峰的最大值即峰高。峰出完后，斜率的絕對(duì)值變小，低于設(shè)定值時(shí)，積分儀認(rèn)為峰結(jié)束，停止積分。峰寬：設(shè)定采集數(shù)據(jù)速率的。峰寬設(shè)定越小，采集速率越快。對(duì)于很窄的峰，采集速率應(yīng)足夠快，否則會(huì)使峰形畸變，甚至丟失；對(duì)于很寬的峰，采集速率可慢一些。否則信號(hào)的微小波動(dòng)也作為峰處理，將峰分裂為幾個(gè)峰。最小峰高：符合斜率標(biāo)準(zhǔn)，信號(hào)大于最小峰高時(shí)開始積分。閥值越大，色譜峰開始積分點(diǎn)推后，結(jié)束點(diǎn)越提前。最小峰面積：當(dāng)積分結(jié)束后，某一色譜峰是否參與最后的計(jì)算，取決于最小峰面積的設(shè)定值。前三個(gè)決定積分的準(zhǔn)確性。三者要相互配合。如基線噪聲大而色譜峰也都較大時(shí)，斜率的設(shè)置難以有效除去噪聲，將峰寬或最小峰高設(shè)大一些。對(duì)很小的色譜峰積分時(shí)，將最小峰高設(shè)小一些，峰寬設(shè)大一些，色譜峰一般比基線噪聲的寬度大。程序升溫分析時(shí)，高溫下基線會(huì)出現(xiàn)不同程度的漂移，將斜率設(shè)大一些，避免誤將基線漂移作為峰來處理。最小峰面積積分后計(jì)算時(shí)才使用，對(duì)于歸一化法要注意最小峰面積的設(shè)定。中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)本軟件系統(tǒng)包括兩個(gè)應(yīng)用版本：研究版（2004A）和檢驗(yàn)版（2004B）。研究版主要用于科學(xué)研究工作，具有生成對(duì)照?qǐng)D譜功能。檢驗(yàn)版?zhèn)戎赜谏V指紋圖譜的檢驗(yàn)工作，功能簡化，不具有生成對(duì)照?qǐng)D譜的功能。本系統(tǒng)支持三種格式文件的導(dǎo)入：AIA(即*.cdf)文件，文本文件（*.txt）和Scp(*.Scp)格式文件的導(dǎo)入。建議采用通用的AIA（*.cdf）格式文件導(dǎo)入。注意AIA（*.cdf）文件中應(yīng)包含樣本圖譜的峰面積信息，在色譜工作站導(dǎo)出AIA（*.cdf）文件前應(yīng)現(xiàn)進(jìn)行積分。否則導(dǎo)出的AIA（*.cdf）文件可能因不包含峰面積信息而無法導(dǎo)入。

文件導(dǎo)入→設(shè)參照?qǐng)D譜→自動(dòng)匹配→對(duì)照?qǐng)D譜生成→相似度評(píng)價(jià)→打印報(bào)告如需要開發(fā)指紋圖譜的新方法和進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)可以免費(fèi)代做。二部乙醇中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查(藥典勘誤)、明膠空心膠囊中氯乙醇和環(huán)氧乙烷的檢查、吐溫類、聚乙二醇類的雜質(zhì)檢查、纖維素類甲氧基、乙氧基和羥丙氧基、丙二醇中有關(guān)物質(zhì)的檢查、溶劑殘留檢查。明膠空心膠囊（腸溶明膠空心膠囊）的限量檢查

氯乙醇為空心膠囊用環(huán)氧乙烷消毒過程衍生的有機(jī)物質(zhì)，為親肝性毒物，沸點(diǎn)128-130℃。C=2ug/mLV=1mLS=2.0g附錄制劑通則：流浸膏、藥酒、酊劑的乙醇、藥酒和口服酊劑的甲醇檢查。通用檢測方法：乙醇量檢查法甲醇量檢查法水分測定法第四法-氣相色譜法（一部）溶劑殘留檢查法農(nóng)藥殘留檢查法桉油精含量測定方法甲氧基、乙氧基和羥丙氧基測定法附錄IXM乙醇量測定法

（蒸餾法與GC法不一致，以后者為準(zhǔn)）以正丙醇為內(nèi)標(biāo)物(在不含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液中，內(nèi)標(biāo)物的位置不得出現(xiàn)雜質(zhì)峰)，F(xiàn)ID測定各種制劑（藥酒、酊劑、流浸膏劑）在20℃時(shí)乙醇的含量（%）（mL/mL）。如藿香正氣水[檢查]乙醇量應(yīng)為40-50%（附錄IXM）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備量取恒溫至20℃無水乙醇4、5、6mL，置100mL量瓶中，分別精密加入恒溫至20℃正丙醇5mL，加水定容。進(jìn)樣得校正因子。(CR=4%、5%、6%，CS=5%)供試品溶液的制備量取恒溫至20℃的供試品（約相當(dāng)于乙醇5mL，如藿香正氣水含40-50%，10mL）置100mL量瓶中，分別精密加入恒溫至20℃正丙醇5mL，加水定容，進(jìn)樣測含量。（C‘S=5%)注意：毛細(xì)管柱法稀釋100倍后進(jìn)樣。計(jì)算過程一樣。系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)毛細(xì)管法（INNOWAX，0.53mm，氣液色譜）上述3份標(biāo)準(zhǔn)溶液各進(jìn)樣3次，9個(gè)校正因子RSD≤2.0%，塔板數(shù)正丙醇≥8000，Rs≥2.0(出現(xiàn)峰形變差可提高柱溫老化柱子)填充柱法（GDX，2m，氣固色譜）塔板數(shù)正丙醇≥700（如不滿足，改變進(jìn)樣口、柱、檢測器溫度）規(guī)定:重復(fù)性（內(nèi)標(biāo)）-80%、100%、120%，至少做2次，校正因子RSD≤2.0%。(外標(biāo))-同一溶液進(jìn)5次。各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件，除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)的要求。補(bǔ)充為滿足系統(tǒng)適用性要求，有時(shí)需要調(diào)整流動(dòng)相組分的比例。以組分比例較低者(小于或等于50%)相對(duì)改變量不超過±30%且絕對(duì)改變量不超過±10%為限，如30%相對(duì)改變量的數(shù)值超過10%時(shí)，則改變量以10%為限。二元流動(dòng)相系統(tǒng)50：5050%的最大相對(duì)改變量為15%，已超過了絕對(duì)改變量允許的范圍，比例調(diào)節(jié)的范圍是±10%，即40：60至60：40。2：982%的最大相對(duì)改變量為0.6%，比例調(diào)節(jié)的范圍是1.4：98.6至2.6：97.4

三元流動(dòng)相系統(tǒng)（60：35：5）可每次調(diào)節(jié)比例較低的兩個(gè)組分。對(duì)于35%的組分，其最大相對(duì)改變量為10.5%，已超過了絕對(duì)改變量允許的范圍，故該組分比例調(diào)節(jié)的范圍是±10%，即25%-45%，則流動(dòng)相系統(tǒng)比例的調(diào)節(jié)范圍是50：45：5至70：25：5對(duì)于5%的組分,其最大相對(duì)改變量為1.5%,該組分比例調(diào)節(jié)的范圍是±1.5%，即3.5%-6.5%，則流動(dòng)相系統(tǒng)比例的調(diào)節(jié)是58.5：35：6.5至61.5：35：3.5結(jié)果判斷測2份供試品溶液，RDS≤2.0%，否則應(yīng)重新測定。根據(jù)測定結(jié)果的平均值判斷是否符合規(guī)定，不符合應(yīng)復(fù)測。附錄IN甲醇量測定法（酒劑、口服酊劑）

藿香正氣水[檢查]其它-應(yīng)符合酊劑下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（附錄IN）柱子同乙醇量測定法毛細(xì)管柱用頂空進(jìn)樣，外標(biāo)法計(jì)算含量。填充柱用手動(dòng)進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量，內(nèi)標(biāo)物相應(yīng)位置出現(xiàn)雜質(zhì)峰，改用外標(biāo)法。計(jì)算注意最后濃度的換算供試品溶液的制備：取內(nèi)標(biāo)1mL置10mL容量瓶中，加供試品溶液定容。結(jié)果判斷：兩次測定結(jié)果RSD≤10%,否則應(yīng)重新測定。根據(jù)測定結(jié)果的平均值判斷是否符合規(guī)定，除另有規(guī)定外，甲醇量≤0.05%。附錄IXH水分測定法第四法氣相色譜法以純化水為對(duì)照，無水乙醇為溶劑，熱導(dǎo)檢測器（TCD），測定貴重藥材及其制劑中的含水量。色譜柱：高分子多孔小球填充柱。（可改用毛細(xì)管柱，系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)須滿足要求）對(duì)照品溶液的制備取純化水約0.2g，置25mL量瓶中加無水乙醇定容。供試品溶液的制備取供試品適量（含水量約0.2g），置錐形瓶中加無水乙醇50mL，密塞（防空氣中水分進(jìn)入），超聲，傾取上清液。測定取無水乙醇、對(duì)照溶液和供試品溶液各1-5微升。先計(jì)算K值外標(biāo)法計(jì)算供試品水分，扣除無水乙醇的含水量。高分子多孔微球（GDX）屬于氣固色譜。用于分離水及含羥基（醇）化合物和永久性氣體如H2、O2、N2等。GDX由苯乙烯和二乙烯基苯共聚而成，屬于非極性固定相，分析醇、醛、水和其它短鏈極性化合物，可得到對(duì)稱的色譜峰。它對(duì)含OH化合物的親和力很弱，可使水在有機(jī)化合物出峰之前出峰，而所得水峰對(duì)稱，適合有機(jī)溶劑中痕量、微量水的測定。永久性氣體在氣液色譜中不能分離，在固定液中溶解度極小，分配系數(shù)幾乎相同而固體吸附劑對(duì)永久性氣體有好的吸附能力。附錄IXQ農(nóng)藥殘留量測定法（痕量）

用GC法測定藥材（甘草、黃芪）、飲片、制劑中有機(jī)氯、有機(jī)磷、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。

難點(diǎn)痕量分析，要求極高的檢測靈敏度。中藥樣品種類各異，基體成分復(fù)雜

高、中等含水量的樣品（提取加無水NaSO4）根和鱗莖類：甘草、貝母葉綠素含量低：豆蔻、陳皮葉綠素含量高：大青葉、薄荷含糖量高的樣品：枸杞、麥冬（提取加水）含脂肪高的樣品：酸棗仁對(duì)試驗(yàn)操作、儀器操作技術(shù)要求高硬件條件和檢測成本較高毒性強(qiáng)，檢測風(fēng)險(xiǎn)大農(nóng)藥的分類按照用途：殺蟲劑、殺螨劑、殺菌劑、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等。按照結(jié)構(gòu)特點(diǎn)礦物類農(nóng)藥-無機(jī)化合物：有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類化學(xué)合成農(nóng)藥-有機(jī)化合物：擬除蟲菊酯類生物類農(nóng)藥-天然有機(jī)物（有機(jī)氮類）、抗生素（雜環(huán)類）、生物類農(nóng)藥（有機(jī)金屬類）

世界上正使用的農(nóng)藥超過750種，對(duì)人類健康造成巨大威脅-農(nóng)殘分析日益受到重視。農(nóng)殘分析的一般程序樣品收集：采樣具科學(xué)性、代表性前處理：預(yù)處理（粉碎）-提取（超聲提取，不單獨(dú)采用非極性溶劑，常與極性溶劑合用或用極性溶劑如70%丙酮、乙酸乙酯、石油醚-丙酮）-凈化（磺化法、液液分配法、低溫冷凍法、柱層析法）-濃縮（真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、氮吹儀、自然揮發(fā)法）儀器分析：GC-ECD、NPD、FPD(70%以上)GC/MS-EI、CIHPLC-UV、DAD、FLD（氨基甲酸酯類）一、有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量測定法

六六六（4種）、DDT（4種）、五氯硝基苯有機(jī)氯農(nóng)藥是農(nóng)藥中使用量最大，使用歷史最長的一類農(nóng)藥，性質(zhì)穩(wěn)定，殘效期長（達(dá)30~50年），易在脂肪組織中蓄積，造成慢性中毒。2000版中國藥典開始收載有機(jī)氯農(nóng)藥。儀器：GC、手動(dòng)進(jìn)樣器、ECD、載氣為高純氮（安脫氧管）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（負(fù)壓液體沸點(diǎn)降低）、柱子：SE-54（弱極性）、DB-1701（中等極性）毛細(xì)管柱，均為不分流進(jìn)樣（0.75min）和程序升溫，二者進(jìn)樣口和柱溫不同。試劑：農(nóng)殘級(jí)試劑或分析純重蒸餾。注意：只有分流進(jìn)樣靈敏度達(dá)不到要求才采用不分流進(jìn)樣。分流不分流采用的是同一個(gè)進(jìn)樣口。時(shí)間設(shè)置90-120s，保證全部組分進(jìn)入色譜柱，選擇一個(gè)待測組分的峰面積為指標(biāo)，該面積代表100%進(jìn)入了色譜柱。然后逐步縮短不分流時(shí)間如70、50、30s分別進(jìn)樣分析，計(jì)算與第一次的峰面積比值只到小于0.95.95%-99%為最佳吹掃時(shí)間。對(duì)照品儲(chǔ)備液：分別制成4-5ug/mL。混合對(duì)照品儲(chǔ)備液：稀釋20倍。混合對(duì)照品溶液：石油醚（60-90℃）制成0、1、5、10、50、100、250ug/L。7個(gè)濃度均做，最后用與樣品面積最接近那個(gè)濃度按外標(biāo)法計(jì)算含量。總BHC、總DDT低于千萬分之二，PCNB低于千萬分之一70%丙酮超聲提取，二氯甲烷、丙酮/水液液萃取，濃硫酸進(jìn)行磺化處理，利用脂肪、蠟質(zhì)等雜質(zhì)與濃硫酸磺化生成極性大的物質(zhì)與農(nóng)藥分離。對(duì)易分解或發(fā)生反應(yīng)的有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥不可使用。注意加入硫酸后量取的上清液要用水洗，除盡硫酸，減少對(duì)儀器和柱子的破壞。加氯化鈉后應(yīng)充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙猓苟燃淄椤⒈?水溶液徹底分層，不加氯化鈉三者不分層。

無水硫酸鈉目的是除去水分，不可以用太多，一般為5-6g，否則會(huì)影響回收率。補(bǔ)足重量為部分取樣法，完全取樣法一般為回收溶劑定容。近干一般為剩下一滴，不要全干，避免農(nóng)藥損失。氮吹儀濃縮農(nóng)藥損失率低，但溶劑處理量小。實(shí)驗(yàn)用器皿應(yīng)嚴(yán)格清洗，不能殘存鹵素離子。操作應(yīng)避光，光線使許多農(nóng)藥降解。二、有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量測定法

有機(jī)磷農(nóng)藥具有毒性，其殘留嚴(yán)重危及人體健康。2010中國藥典一部收載12種有機(jī)磷農(nóng)藥測定方法。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)DB-17MS(或HP-5)，氮磷檢測器（NPD）。進(jìn)樣口溫度230℃；檢測器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始120℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘5℃升至240℃，保持2分鐘，每分鐘20℃升至270℃，保持0.5分鐘。理論板數(shù)按敵敵畏峰計(jì)算不低于6000，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。

對(duì)照品儲(chǔ)備液制備

稱取對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對(duì)照品適量，用乙酸乙酯分別制成約100ug/mL的溶液。混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，置20ml棕色量瓶中,加乙酸乙酯定容。混合對(duì)照品溶液的制備

精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用乙酸乙酯制成每1mL含0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、5μg的溶液，即得。

供試品溶液制備

取供試品約5g，加無水硫酸鈉5g，加入乙酸乙酯50~100ml，冰浴超聲處理3分鐘，放置，取上層液濾過。取濾液于40℃以下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取1ml，置活性炭小柱（乙酸乙酯5ml預(yù)洗），置真空樣品處理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1：1）混合液5ml洗脫，收集洗脫液，置氮吹儀上濃縮至近干，加入乙酸乙酯1ml使溶解。測定及結(jié)果計(jì)算進(jìn)1uL對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別進(jìn)樣3次，取平均值，外標(biāo)法計(jì)算12種有機(jī)磷含量。5.1×1000×100%玻璃儀器不能用含磷洗滌劑洗滌，應(yīng)用洗液浸泡洗滌，使用前用丙酮蕩洗并揮干溶劑。無水硫酸鈉脫水，劇烈振搖后如有固體硫酸鈉存在，說明所加無水硫酸鈉已夠。國際上多用乙腈作為有機(jī)磷農(nóng)藥的提取試劑及分配凈化試劑，但其毒性較大，用乙酸乙酯。一般提取3次。冷凍法使藥材中蠟質(zhì)等沉淀析出，而農(nóng)藥留在溶液中，超聲時(shí)候加冰塊，溫度高有機(jī)磷損失。活性炭對(duì)植物色素有很強(qiáng)的吸附作用。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定與DDT同屬軸突毒劑，中毒癥狀相似。菊酯類毒理作用迅速，危害人體健康。10版收載三種。三類農(nóng)藥都是神經(jīng)毒劑，阻斷神經(jīng)傳導(dǎo)，不直接殺死神經(jīng)細(xì)胞。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

彈性石英毛細(xì)管柱（30m*0.32mm*0.25um)SE-54(或DB-5），63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度270℃，檢測器溫度330℃。分流比20：1；5：1（或根據(jù)儀器設(shè)置選擇最佳的分流比）。程序升溫。對(duì)照品貯備液的制備

稱取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚（60~90℃）分別制成約20~25ug/ml的溶液。

混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，置10ml量瓶中，用石油醚稀釋至刻度。

混合對(duì)照品溶液的制備

精密量取上述混合對(duì)照品貯備液，用石油醚稀釋制成每1L分別含0ug、4ug、8ug、40ug、200ug的溶液，即得。供試品溶液的制備

取供試品于60℃干燥4小時(shí)，粉碎成細(xì)粉，取約1~2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加石油醚（60~90℃）-丙酮（4：1）混合溶液30ml，超聲處理15分鐘，濾過，藥渣再重復(fù)上述操作2次后，合并濾液。濾液加入適量無水硫酸鈉脫水后，于40~45℃減壓濃縮至近干，用少量石油醚反復(fù)操作至丙酮除凈，殘?jiān)舆m量石油醚溶解，置混合小柱［從下至上依次為無水硫酸鈉2g、弗羅里硅土4g（祛除色素）、微晶纖維素1g、氧化鋁1g（除糖苷類）、無水硫酸鈉2g］上，用石油醚-乙醚（4：1）混合溶液90ml洗脫，收集洗脫液，于40~45℃減壓濃縮至近干，再用石油醚3~4ml重復(fù)操作至乙醚除凈，用石油醚溶解轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并定容。1.8×1000×100%

測定法

分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1ul，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中3種擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量。殘留溶劑測定法藥典凡例第十條：對(duì)于生產(chǎn)過程中引入的有機(jī)溶劑，應(yīng)在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效去除。除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法進(jìn)行該項(xiàng)檢查外，其他未在“殘留溶劑”項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑與未在正文中列有此項(xiàng)檢查的各品種，如生產(chǎn)過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑，均應(yīng)按附錄“殘留溶劑測定法”檢查并應(yīng)符合相應(yīng)溶劑的限度規(guī)定。藥物中的殘留溶劑指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。2010版中國藥典參考了國際協(xié)調(diào)大會(huì)（ICH）頒布的殘留溶劑研究指導(dǎo)原則，所監(jiān)測的四類有機(jī)溶劑和限量值見限度標(biāo)準(zhǔn)一覽表。中國藥典的限量要求與日本藥典、美國藥典（USP46