pcr核酸檢測考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應B.核酸序列測定C.基因克隆D.蛋白質印跡答案：A2.在PCR反應中，哪種酶起到關鍵作用（）A.逆轉錄酶B.DNA聚合酶C.RNA聚合酶D.連接酶答案：B3.PCR反應的三個基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉錄答案：D4.一般PCR反應中，變性溫度通常為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A5.以下哪種物質不是PCR反應的必需成分（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.核糖體答案：D6.PCR引物的長度一般為（）A.5-10個核苷酸B.15-30個核苷酸C.50-100個核苷酸D.100-200個核苷酸答案：B7.為了避免引物之間形成二聚體，引物設計時應注意（）A.引物長度B.引物的GC含量C.引物自身不能互補D.以上都是答案：D8.在PCR產物分析中，瓊脂糖凝膠電泳中，哪種物質可以使DNA顯色（）A.溴化乙錠B.考馬斯亮藍C.碘液D.雙縮脲試劑答案：A9.如果PCR反應沒有得到預期的產物，可能的原因不包括（）A.引物設計錯誤B.模板量過多C.反應體系中酶失活D.反應溫度過高導致DNA徹底降解答案：D10.對于微量模板的PCR擴增，以下哪種方法可以提高擴增效率（）A.增加循環次數B.增加引物濃度C.增加模板量D.降低退火溫度答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術可應用于以下哪些方面（）A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫學鑒定D.遺傳疾病檢測答案：ABCD2.以下哪些因素會影響PCR反應的特異性（）A.引物特異性B.退火溫度C.Mg2+濃度D.模板純度答案：ABCD3.在PCR反應體系中，dNTP的作用包括（）A.提供合成DNA的原料B.影響反應的特異性C.影響反應的效率D.作為緩沖物質答案：AC4.以下屬于PCR衍生技術的有（）A.反轉錄PCRB.實時熒光定量PCRC.巢式PCRD.多重PCR答案：ABCD5.PCR反應中，模板DNA可以來源于（）A.基因組DNAB.質粒DNAC.cDNAD.線粒體DNA答案：ABCD6.設計PCR引物時，需要考慮的因素有（）A.引物長度B.引物的GC含量C.引物的特異性D.引物與模板的互補性答案：ABCD7.關于PCR反應中的退火過程，下列說法正確的是（）A.引物與模板結合B.溫度通常低于引物的Tm值C.退火溫度過高會影響引物與模板的結合D.退火溫度過低可能導致非特異性結合答案：ABCD8.在PCR實驗操作中，防止污染的措施有（）A.嚴格分區操作B.使用一次性耗材C.定期對實驗室進行清潔和消毒D.實驗人員規范操作答案：ABCD9.以下關于PCR產物分析的說法正確的是（）A.瓊脂糖凝膠電泳可用于分析PCR產物的大小B.聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨率更高C.測序可以確定PCR產物的序列準確性D.酶切分析可用于檢測PCR產物中的特定序列答案：ABCD10.在實時熒光定量PCR中，常用的熒光標記方法有（）A.染料法B.探針法C.放射性標記法D.化學發光法答案：AB三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR可以在體外無限擴增任何DNA片段。（×）2.引物的3'端與模板DNA嚴格互補配對對于PCR成功至關重要。（√）3.PCR反應中，dNTP濃度越高越好。（×）4.只要有合適的引物，任何來源的DNA都可以作為PCR的模板。（×）5.實時熒光定量PCR只能用于檢測DNA。（×）6.在PCR反應中，變性時間越長越好。（×）7.巢式PCR可以提高PCR反應的特異性和靈敏度。（√）8.所有的DNA聚合酶都適合用于PCR反應。（×）9.PCR反應體系中不需要緩沖液。（×）10.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子越大，遷移速度越快。（×）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR是一種體外模擬體內DNA復制過程的技術。以DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，通過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板特異性結合）、延伸（在聚合酶作用下合成新的DNA鏈）三個基本步驟不斷循環，使特定DNA片段得到大量擴增。2.簡述引物設計的基本原則。答案：引物長度一般15-30個核苷酸；GC含量適中，一般40%-60%；引物自身不能互補形成二級結構；引物之間不能互補形成二聚體；引物3'端要與模板嚴格互補等。3.簡述在PCR反應中，如何減少非特異性擴增？答案：提高退火溫度，使引物更特異性結合模板；優化引物設計，保證引物特異性；降低引物濃度；提高模板純度；優化Mg2+濃度等。4.簡述實時熒光定量PCR的主要優點。答案：可實時監測反應過程；具有很高的靈敏度和特異性；能定量分析起始模板的濃度；不需要進行PCR后處理，減少污染機會。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術在新冠疫情防控中的應用。答案：用于新冠病毒核酸檢測，快速診斷患者；檢測病毒載量以評估病情嚴重程度；對環境樣本檢測判斷環境是否被污染；對密切接觸者檢測進行大規模篩查等。2.討論PCR反應中可能出現假陽性結果的原因及解決方法。答案：原因包括污染（如氣溶膠、試劑污染等）。解決方法：嚴格分區操作、使用一次性耗材、規范實驗流程、定期對實驗室清潔消毒等。3.討論如何提高PCR產物的