馬鈴薯黃萎病抗性室內鑒定技術規程2019-09-30實施2019-09-30實施甘肅省市場監督管理局發布I本標準按照GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由甘肅省農業農村廳提出并監督實施。本標準由甘肅省糧食作物栽培標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：定西市植保植檢站、定西市種子管理站、甘肅省農科院植物保護研究所、蘭州市農業科技研究推廣中心、定西誠宏馬鈴薯專業合作社。本標準主要起草人：魏周全、陳愛昌、梁平、安建華、李錦龍、李繼平、孫興明、王文慧、莊漢、莫娟、祿剛強、石娟娟、席旭東、鄧成貴、賀舒紅。1凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。變褐干枯，但不卷曲，直到全部葉片提早枯死，不脫落。成株期褐色至褐色，縱切病薯維管束變褐色等癥狀為主的馬鈴4.1PL培養液馬鈴薯去皮切片，稱取200g,加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min,用紗布過濾，補加蒸餾水至馬鈴薯去皮切片，稱取200g,加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min,用紗布過濾4.31%的次氯酸鈉(NaClO)溶液培養皿、錐形瓶、紗布、酒精燈、塑料花盆(直徑21cm、高13cm)等。2從馬鈴薯黃萎病發病植株莖基部用常規組織分離法分離黃萎病病原物(參見附錄A)。確認為大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)后采用單孢分離法進行分離物純化，經柯赫氏(koch)法則驗證后，保存備將保存的馬鈴薯黃萎病菌置于20℃~25℃PDA平板培養基上培養3d活化后，接種于盛有PL培養液的錐形瓶中，置下20℃~25℃搖床上，以120rpm振蕩培養3d～4d。培養液經兩層醫用紗布過濾即得孢將馬鈴薯黃萎病接種于PDA斜面培養基上，在25℃的恒溫箱中培養7d,置4℃~8℃冰箱內保存；或在斜面上加一層滅菌礦物油(超過斜面頂部1cm)后置冰箱冷藏空或室溫下保存。將馬鈴薯黃萎病菌接種于液體石蠟管，置2℃~8℃冰箱中保存。田土(2:1:1)。經高溫蒸汽滅菌(134℃,30min)。在日光溫室里育苗，室內溫度白天為20℃~25℃,3馬鈴薯生育期3葉期～5葉期。7.5.2接種濃度接種孢子懸浮液的濃度為1×10孢子/mL。7.5.3接種方法接種采用浸根接種法。將幼苗連根輕輕拔起后抖落干凈根部泥土，然后將根全都浸于接種懸浮液內10min～15min,將接種后的馬鈴薯苗定植于裝有育苗基質的育苗缽中，每缽1株。7.6接種后管理接種后將植株置于鑒定室內，每天光照14h,強度為700001x,保持植株正常生長的土壤濕度，接種期間鑒定室溫度控制在20℃~25℃范圍內。7.7病情調查7.7.1調查時間接種后8周調查病情，根據此期間感病的對照品種病級擴展到感病級的時間作適當調整。7.7.2病情級別劃分病情級別及其對應的癥狀描述見表1。表1馬鈴薯黃萎病抗性室內鑒定病情級別的劃分病情級別0級1級下部葉片變色及輕微的萎蔫2級3級4級7.7.3調查方法調查每份鑒定材料接種株發病情況，根據病害癥狀描述，逐份材料進行調查，記載單株病情級別，并計算每份鑒定材料的病情指數(DI)。病情指數(DI)按式(1)計算。 N——調查總植株數；S——最高病情級別的代表數值。4依據鑒定材料的病情指數(DI)平均值確定其抗性水平，劃分標準見表2。病情指數(DI)免疫(I)高抗(HR)抗病(R)中抗(MR)感病(S)高感(HS)當感病對照材料達到其相應感病程度(DI>50),抗病對照材料與實際抗性程度相符，該批次抗黃5(資料性附錄)鑒定結果原始記載表馬鈴薯黃萎病抗性室內鑒定結果記載表格式見圖A.1。編號品種/品系名稱重復區號病情級別平均病