ICS13.060.01Z16DB23黑龍江省地方標準DB23/T2750—2020水質生物毒性的測定發光細菌快速測定法黑龍江省市場監督管理局發布DB23/T2750—2020目??次前言......................................................................................................................................................................II引言.....................................................................................................................................................................III1范圍.................................................................................................................................................................12規范性引用文件.............................................................................................................................................1345678方法原理.........................................................................................................................................................1試劑和材料.....................................................................................................................................................1儀器設備.........................................................................................................................................................2測定.................................................................................................................................................................2結果計算與表示.............................................................................................................................................3方法的精密度.................................................................................................................................................3附錄A（資料性附錄）結果判定參考內容...................................................................................................4IDB23/T2750—2020前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由黑龍江省生態環境廳提出并歸口。本文件參與起草單位：黑龍江省生態環境監測中心。本文件主要起草人：王鵬杰、曹勝、邢延峰、孟慶慶、李博、胡麗娜、張蕊、楊宏坤、姜景陽、關吉鑫、李經緯、王國梁、李海智、蘆旭峰、蘇曉慧、于宗靈、柏廣宇、李慧。IIDB23/T2750—2020引??言為貫徹《中華人民共和國環境保護法》和《中華人民共和國水污染防治法》等法律法規，保護和改善生態環境，保障人體健康，制定本文件。IIIDB23/T2750—2020水質生物毒性的測定發光細菌快速測定法1范圍本文件規定了水質生物毒性的測定發光細菌快速測定法的方法原理、試劑和材料、儀器設備、測定、結果計算和表示及方法的精密度。本文件適用于工業廢水，納污水體及實驗室條件下可溶性化學物質的水質急性毒性監測。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15441-1995水質急性毒性的測定發光細菌法3方法原理水樣在一定的時間和條件下與發光細菌接觸后，發光細菌的發光強度變化與水樣中毒性組分總濃度呈負相關關系，通過生物發光光度計測定水樣與發光細菌接觸一定時間后的發光抑制率來表征水樣的急性毒性水平。4.1所有的試劑除另有說明外，均應為符合國家標準的分析純試劑，蒸餾水或同等純度的水。4.2超純水，常溫保存。4.5復蘇稀釋液（0.85%的氯化鈉溶液）。4.6滲透壓液（17%的氯化鈉溶液）。4.7青海弧菌Q67。注：菌株凍干粉封裝于透明小玻璃瓶中，于-18℃至-20℃下儲存。使用前，添加復蘇液使發光細菌恢復活性后用于1DB23/T2750—20205儀器設備生物發光光度計技術規格：可探測光譜范圍，320nm～1000nm；探測結果范圍，0～65535RLU；最快檢測時間，5min；相對發光強度，0-200%；可進行ATP測試；測試試管，規格為5ml的反應試管和10ml的測試試管。6測定6.1測定條件6.1.1室溫室溫20-25℃，同一批樣品在測試過程中要求溫度波動不超過±1℃。且所有測試器皿及試劑，溶液測前1h均置于控溫的測試室內。6.1.2pH若需測定包括pH影響在內的急性毒性，不應調節水樣pH。若需測定排除pH影響在內的急性毒性，需將水樣和復蘇液（氯化鈉0.85g/100ml）pH測前調至下值：主要含銅的水樣為4.5，主要含其他金屬水樣為5.4，主要含有機化合物水樣為7.0。6.2測定步驟6.2.1試管的排列6.2.2青海弧菌Q67凍干粉劑復蘇從冷凍環境（-18℃）中取出青海弧菌Q67凍干粉（含量約為0.0015-0.0018g）小瓶，在常溫環境（25℃左右）下放置15min后，啟開并輕敲小瓶，確保凍干細菌充分落在小瓶底部。移取0.5mL0.85%的復蘇液或3%的復蘇液至菌種中，搖勻，放置10min后可以使用。a）分別往三支反應試管中加入2ml的標準品（稀釋液），2ml（1:19-稀釋液：樣品）的陰性質控及2ml（1:19-稀釋液：樣品）的被測水樣；2DB23/T2750—20207結果計算與表示7.1計算結果計算結果以發光強度來表示。相對發光強度的表達式：樣品發光強度（s1）相對發光強度RLI(%)標準品發光強度（s1100%.............（1））7.2結果表示用氯化汞表達樣品毒性，見表1。表1氯化汞表達樣品毒性相對發光強度（RLI）抑制率（IR%）等當的HgCl2溶液濃度CHg（mg/L）毒性級別90%＜RLI≤110%80%≤RLI＜90%50%≤RLI＜80%30%≤RLI＜50%0%≤RLI＜30%RLI=0-10＜IR≤1010≤IR＜2020≤IR＜5050≤IR＜7070≤IR＜100IR=100CHg＜0.030.03≤CHg＜0.050.05≤CHg＜0.090.09≤CHg＜0.120.12≤