12規范性引用文件GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GB/T30891水產品抽樣規范3術語和定義5.1.3正己烷（C6H14色5.1.5乙酸乙酯（C4H8O2色譜純。）：5.1.8N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）：C8H18F3NOSi2。5.1.9三甲基氯硅烷（TMCSC3H25.2溶液配制5.4.2混和標準工作液：分別準7.1試樣的制備b）取均質后的空白樣品，作為空白試樣；c）取均質后的空白樣品，添加適宜濃度的標準溶液，作為空白添加7.2試樣的保存-18℃以下保存。8測定步驟3合1min，4000r/min離心5min，取水層，用正己烷5mL重復脫脂1次，取水層，備用。再依次用甲醇1mL、乙酸乙酯1mL洗滌離心管壁，氮氣吹至近干，備用。瓶中，加衍生化試劑100μL，蓋塞并渦旋混合10s，60℃烘箱中反應30min。冷卻至室溫，50℃~55℃氮氣吹干，準確加入甲苯1.0mL，渦旋混勻，供氣相色譜儀取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合標準工作液適量于2mL棕色反應瓶中，置50℃為1.0μg/L、1.5μg/L、5.0μg/L、15.0μg/L、50.0μg/L、150.0μg/L，甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺d）柱流速：1.0mL/min，尾吹為：25me）進樣口溫度230℃,檢測器溫度310℃;f）柱溫程序：起始80℃保持1min，以30℃/min升溫至280℃,保持5min；49結果計算w—試樣中待測藥物殘留量，單位為微克每千克(μg/kgrs—標準溶液中待測藥物濃度，單位為微克每升(μg/LAs—標準溶液中待測藥物的峰面積；V—最終定容體積，單位為毫升（mLm—試樣質量，單位為克（g注：計算結果不小于1μg/kg的保留3位有效數字，1μg/kg以下保留至小數點后2位。本方法氯霉素的檢出限為0.1μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢霉素的定量限為0.3μg/kg，甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的定量限均為3.0μg/kg。尼考胺在3.0μg/kg～300μg/kg添加水平上的回收率均為70%~120%。本方法的批內相對標準偏差≤20%，批間相對標準偏本文件規定了水產品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量檢測的制樣和液相色譜-GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗5）：）：）：15.2.1氨水-乙腈溶液（1:49,V/V取氨水10mL，用乙腈稀釋至515.3.1氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯15.3.2氯霉素-D5、甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3內標，含量均≥956配制成氯霉素-D5濃度為2μg/mL，甲砜標中間液。－18℃以下保存，有效期3個超聲10min，4000r/min離心5min，將上層清液全部轉入15mL離心管中，于50℃氮氣吹至約3mL，備飽和正己烷溶液重復去脂一次，對于脂肪含量高的樣品需要增加去脂一次精密量取混合標準中間液和混合內標工作液適量，用水稀釋，配制成氯霉素濃度分別為0.1μg/L、20μg/L、50μg/L，氯霉素-D5濃度均為2μg/L，甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、氟苯尼考胺-D3列標準溶液，臨用現配，供液相色譜-串聯質譜儀測定。以定量離子峰面積比7a）色譜柱：適合堿性化合物分離的C18色譜柱（150mm×3.0mm，1.8μm），或相當者；b）流動相：A：10mmol/L甲酸銨溶液，B：甲醇，梯度洗脫條件見表1；e）進樣量：10μL。8888表2氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟m/zm/zV248.1>130.1248.1>130.1248.1>230.186251.1>233.1251.1>233.1注：*根據不同品牌儀器上的線性結果，選擇合適的內標通的保留時間之比偏差在±1%以內，且檢測到的相對離子豐度，應與濃度相當的校正標準溶液相對離子豐度一致。其允許偏差為±40%。器線性范圍內，對應內標濃度與標準曲線制備中的內標濃度一致。在上述液相色譜-串聯質譜條件下，取空白試料，除不加藥物外，采用相同的測定步w—試樣中待測藥物殘留量，單位為微克每千克(μg/kgrs—標準溶液中待測藥物濃度，單位為微克每升(μg/Lris—試樣溶液中內標濃度，單位為微克每升(μg/L）；r′is—標準溶液中內標濃度，單位為微克每升(μg/L）；Ai—試樣溶液中待測藥物的峰面積；Ais—試樣溶液中內標的峰面積；As—標準溶液中待測藥物的峰面積；A’is—標準溶液中內標的峰面積；V—最終定容體積，單位為毫升（mLm—試樣質量，單位為克（g）。注：計算結果不小于1μg/kg的保留3位有效數字，1μg/kg以下保留至小數點后2位。20方法靈敏度、正確度和精密度本方法氯霉素的檢出限為0.075μg/kg，定量限為0.15μg/kg；甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的9檢出限為0.50μg/kg，定量限為1.00μg/kg。本方法氯霉素在0.15μg/kg～2μg/kg添加濃度水平，甲砜霉素在1μg/kg~50μg/kg添加濃度水平，氟苯尼考、氟苯尼考胺在1μg/kg~1000μg/kg添加濃度水平的回收率均為70%～120%。20.3精密度本方法的批內相對偏差≤15%，批間相對標準偏表A.1氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺標準品及內標物中英文名稱、化學分子C11H12Cl2N2O5ThiamphenicolC12H15Cl2NO5SFlorfenicolFlorfenicolamineChloramphenicol-D5C11H7Cl2D5N2O5202480-68-0Florfenicol-D32213400-85-0Florfenicolamine-D3標準物質氣相色譜圖氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺注：出峰順序從左到右依次為50.0μg/L氟苯尼考胺、5.0μg/L氯霉素、50.0μg/L氟苯尼考、50.0μg