協(xié)同增效：兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效能解析一、引言1.1研究背景與意義番茄（SolanumlycopersicumL.）作為全球廣泛種植的重要蔬菜作物，在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)與人們的日常生活飲食中占據(jù)著舉足輕重的地位。它不僅富含多種維生素（如維生素C、維生素E、番茄紅素等抗氧化劑）、礦物質(zhì)以及膳食纖維，對(duì)人體健康大有裨益，還具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是眾多農(nóng)戶的主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源之一，廣泛應(yīng)用于鮮食、加工（番茄醬、番茄汁、番茄罐頭等）等領(lǐng)域。然而，番茄生長(zhǎng)過(guò)程中易遭受多種病害的侵襲，其中番茄灰霉病（Tomatograymold）是由灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.）引起的一種極具破壞力的世界性病害，主要發(fā)生在花期和結(jié)果期，可危害花、果實(shí)、葉片和莖，尤其在保護(hù)地栽培中發(fā)生更為普遍和嚴(yán)重。在一些地區(qū)，番茄灰霉病已被列為番茄三大病害之首。該病發(fā)生時(shí)間早、持續(xù)時(shí)期長(zhǎng)，不僅在植株生長(zhǎng)期間嚴(yán)重發(fā)生，在采后的儲(chǔ)藏、運(yùn)輸過(guò)程中也會(huì)繼續(xù)造成嚴(yán)重危害。一旦發(fā)病，常造成早春大量爛果，一般減產(chǎn)20-30%，嚴(yán)重地塊甚至高達(dá)50%左右，給番茄產(chǎn)業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。灰葡萄孢屬半知菌亞門葡萄孢屬真菌，其孢子梗數(shù)根叢生，具隔，褐色，頂端呈1-2次分枝，分枝頂端稍膨大呈棒頭狀，其上密生小柄并著生大量分生孢子。分生孢子圓形至橢圓形，單胞，近無(wú)色。病菌發(fā)育適宜溫度為20-30℃，最低2℃，最高31℃，產(chǎn)生分生孢子的適溫為16-20℃，且孢子產(chǎn)生、萌發(fā)和侵染均需要高濕度。除茄科蔬菜外，還可侵染黃瓜、菜豆、萵筍、生菜、芹菜、韭菜、大蒜、草莓等多種作物。目前，針對(duì)番茄灰霉病的防治措施主要包括農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治。農(nóng)業(yè)防治雖能在一定程度上減輕病害，但難以完全控制；化學(xué)防治雖效果顯著，但長(zhǎng)期大量使用化學(xué)農(nóng)藥易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，還會(huì)造成環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留等問(wèn)題，威脅人類健康和生態(tài)平衡。例如，在一些長(zhǎng)期單一使用化學(xué)農(nóng)藥防治番茄灰霉病的地區(qū)，灰葡萄孢對(duì)多種常用殺菌劑的抗性不斷增強(qiáng)，使得防治效果大打折扣，同時(shí)農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題也時(shí)有發(fā)生。生物防治作為一種綠色、環(huán)保、可持續(xù)的防治手段，逐漸受到人們的關(guān)注。生防細(xì)菌因其具有環(huán)保、安全、持久等優(yōu)點(diǎn)，能夠在作物生長(zhǎng)環(huán)境中長(zhǎng)期存在，持續(xù)發(fā)揮防治作用，且對(duì)環(huán)境和人類健康無(wú)害，還能促進(jìn)作物生長(zhǎng)，提高作物的抗逆性和產(chǎn)量，成為生物防治領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。而生防細(xì)菌復(fù)合菌劑通過(guò)將兩種或多種具有不同作用機(jī)制和優(yōu)勢(shì)的生防細(xì)菌組合在一起，可充分發(fā)揮群體的聯(lián)合作用優(yōu)勢(shì)，協(xié)同提高防治效果，克服單一菌劑的局限性，具有更廣闊的應(yīng)用前景。例如，有的生防細(xì)菌復(fù)合菌劑中，一種細(xì)菌能夠快速定殖在植物體表，與病原菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和空間，抑制病原菌的生長(zhǎng)；另一種細(xì)菌則可產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，直接抑制或殺死病原菌，兩者結(jié)合，能更有效地防治番茄灰霉病。本研究旨在篩選出對(duì)番茄灰霉病具有高效防治作用的兩株生防細(xì)菌，并制備復(fù)合菌劑，深入研究其對(duì)番茄灰霉病的防治效果及作用機(jī)制。這不僅有助于豐富番茄灰霉病的生物防治理論和技術(shù)體系，為番茄灰霉病的綠色防控提供新的方法和策略，還能減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低環(huán)境污染，保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，促進(jìn)番茄產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。1.2番茄灰霉病概述番茄灰霉病是一種極具破壞力的世界性病害，嚴(yán)重威脅著番茄的生長(zhǎng)發(fā)育與產(chǎn)量品質(zhì)。其病原菌為灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.），屬半知菌亞門葡萄孢屬真菌。該病菌的孢子梗數(shù)根叢生，帶有隔膜，顏色呈褐色，頂端會(huì)出現(xiàn)1-2次分枝，分枝頂端稍微膨大，形狀如同棒頭，上面密集生長(zhǎng)著小柄，并著生大量分生孢子。分生孢子的形狀為圓形至橢圓形，單胞，近乎無(wú)色，大小在6.25-13.75微米×6.25-10.0微米之間。在寄主上通常很少能見(jiàn)到菌核，但當(dāng)田間條件惡化時(shí)，便會(huì)產(chǎn)生黑色片狀菌核。從番茄果實(shí)及葉上分離的灰霉，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一周后，便開(kāi)始產(chǎn)生菌核，兩周后菌核大小可達(dá)3.0-4.5微米×1.8-3.0微米。培養(yǎng)基上的菌絲透明無(wú)色，且有隔膜。番茄灰霉病的癥狀表現(xiàn)較為復(fù)雜，植株地上部分均可受害，其中以果實(shí)和葉片受害最為嚴(yán)重。幼苗染病時(shí)，子葉先端會(huì)發(fā)黃，葉片呈現(xiàn)水漬狀腐敗；幼莖受害初期為水漬狀溢縮，隨后變成褐色病斑，常常發(fā)生折斷。果實(shí)發(fā)病多從殘留的敗花和柱頭部開(kāi)始被侵染，從而造成花腐，之后向果面和果柄擴(kuò)展，一般在近果蒂、果柄或果臍處先出現(xiàn)癥狀。幼果會(huì)全果軟腐，果實(shí)成熟前病部果皮呈灰白色，水漬狀軟腐，很快發(fā)展成不規(guī)則形大斑，果實(shí)失水后會(huì)僵化或濕潤(rùn)軟腐。病果一般不會(huì)脫落，發(fā)病后相互接觸容易感染、擴(kuò)大蔓延，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致整穗果實(shí)全部腐爛。葉片發(fā)病多從葉尖開(kāi)始，向內(nèi)呈“V”字形擴(kuò)展，病斑初呈水漬狀，邊緣不規(guī)則，后呈淺褐色至黃褐色，具有深淺相間的輪紋。染病的花瓣、花蕊等落到葉面或枝杖上，可形成圓形或梭形病斑。莖較少受害，損傷處染病后開(kāi)始呈水漬狀，后擴(kuò)展為長(zhǎng)橢圓形或長(zhǎng)條形斑。當(dāng)病斑環(huán)繞莖部時(shí)，其上端枝葉會(huì)萎蔫枯死。在潮濕的環(huán)境下，受害果、葉、莖的病部會(huì)密生灰褐色霉層，漸漸在灰霉中還會(huì)散生大小不同的黑色菌核。番茄灰霉病的發(fā)病規(guī)律與多種因素密切相關(guān)。在侵染循環(huán)方面，病菌主要以菌核遺留在土壤中，或以菌絲體和分生孢子在病殘?bào)w上越冬或越夏，也能在其他有機(jī)物上腐生存活，成為下茬蔬菜的侵染源。當(dāng)環(huán)境適宜時(shí)，菌核會(huì)萌發(fā)產(chǎn)生菌絲體和分生孢子。分生孢子會(huì)隨著氣流、雨水或露滴、農(nóng)事操作中的工具、衣著等進(jìn)行傳播，多從寄主衰弱的器官、組織或傷口處侵入，進(jìn)而引起發(fā)病。并且存在由附著轉(zhuǎn)入侵染的潛伏現(xiàn)象，染病部又會(huì)產(chǎn)生分生孢子，借助氣流等再次傳播進(jìn)行再侵染。從流行規(guī)律來(lái)看，番茄灰霉病最適發(fā)病期為始花至坐果期，一般第一、第二穗果發(fā)病率較高。在日光溫室早春茬栽培的番茄，其發(fā)病流行過(guò)程可劃分為三個(gè)時(shí)期：3月初至4月上旬為葉部灰霉病始發(fā)期，該時(shí)期病情平穩(wěn)發(fā)展；4月上旬至4月下旬為葉部灰霉病上升期，此時(shí)病害發(fā)展迅速；4月下旬至5月下旬為該病發(fā)生高峰期。番茄定植后20-25天（3月中下旬）第一層果開(kāi)始發(fā)病，之后病果迅速上升，4月中旬為盛發(fā)期，以后隨著溫度的上升溫室放風(fēng)量增大，病情開(kāi)始下降。第二層病果在4月上旬發(fā)生，之后病果率迅速上升，4月下旬至5月初達(dá)到高峰期。第三層果在第二層果發(fā)病后15天左右開(kāi)始發(fā)生，4月下旬至5月初達(dá)到高峰期。氣候因素對(duì)番茄灰霉病的發(fā)生影響顯著，溫度在20℃左右，相對(duì)濕度持續(xù)96%以上，非常有利于此病的發(fā)生。例如，據(jù)中國(guó)北京等地調(diào)查，日光溫室秋延后番茄發(fā)病盛期在12月中旬，冬季加溫溫室為1月中旬，在冬春季半加溫中棚或冷棚、春季大棚和半加溫大棚中番茄灰霉病發(fā)病盛期在3月下旬至4月下旬。而且半加溫棚式中發(fā)病盛期多處停火期后遇陰天，非加溫棚式中則多在澆水過(guò)量后遇陰天。此外，栽培因素也不容忽視，植株徒長(zhǎng)、溫室透光差、光照不良、管理不當(dāng)、耕作粗放、氮肥過(guò)量或不足、灌水后放風(fēng)不及時(shí)、病果、病殘?bào)w清除不及時(shí)等情況都容易導(dǎo)致番茄灰霉病的發(fā)生。番茄灰霉病不僅在植株生長(zhǎng)期間嚴(yán)重發(fā)生，在采后的儲(chǔ)藏、運(yùn)輸過(guò)程中也會(huì)繼續(xù)造成嚴(yán)重危害，給番茄產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。一般情況下，發(fā)病會(huì)造成減產(chǎn)20-30%，嚴(yán)重地塊甚至高達(dá)50%左右。在一些地區(qū)，番茄灰霉病已被列為番茄三大病害之首，對(duì)番茄的安全生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。因此，深入研究番茄灰霉病的防治措施具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。1.3生防細(xì)菌研究現(xiàn)狀生防細(xì)菌作為生物防治領(lǐng)域的重要組成部分，在植物病害防治中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。隨著人們對(duì)環(huán)境保護(hù)和可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展的關(guān)注度不斷提高，生防細(xì)菌因其環(huán)保、安全、持久等優(yōu)勢(shì)，逐漸成為替代化學(xué)農(nóng)藥的理想選擇，其研究和應(yīng)用也得到了廣泛的關(guān)注與深入的發(fā)展。生防細(xì)菌種類繁多，在植物病害防治中應(yīng)用廣泛。芽孢桿菌屬（Bacillus）是一類常見(jiàn)且應(yīng)用廣泛的生防細(xì)菌，其中枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）表現(xiàn)尤為突出。枯草芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，如脂肽類、蛋白類、多烯類等，這些抗菌物質(zhì)具有廣譜的抗菌活性，可有效抑制多種植物病原菌的生長(zhǎng)。例如，有研究表明枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的表面活性素能夠破壞病原菌細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物泄露，從而抑制病原菌的生長(zhǎng)和繁殖。此外，枯草芽孢桿菌還能通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)作用，與病原菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間，在植物根際形成優(yōu)勢(shì)菌群，有效阻止病原菌的侵染。假單胞菌屬（Pseudomonas）也是重要的生防細(xì)菌類群。熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）是其中的代表菌株，它能夠在植物根際定殖，產(chǎn)生嗜鐵素、抗生素、氫氰酸等多種次生代謝產(chǎn)物，這些物質(zhì)在抑制病原菌生長(zhǎng)、促進(jìn)植物生長(zhǎng)方面發(fā)揮著重要作用。嗜鐵素可以與環(huán)境中的鐵離子結(jié)合，使病原菌因缺乏鐵元素而生長(zhǎng)受到抑制；抗生素如2,4-二乙酰基間苯三酚（DAPG）能夠直接抑制病原菌的生長(zhǎng)；氫氰酸則可以通過(guò)抑制病原菌的呼吸作用來(lái)達(dá)到抑菌效果。在單株生防細(xì)菌的研究中，眾多學(xué)者致力于篩選具有高效生防能力的菌株，并深入探究其作用機(jī)制。例如，從土壤中篩選出的一株解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）對(duì)番茄早疫病病原菌具有顯著的抑制作用，其作用機(jī)制主要是通過(guò)產(chǎn)生抗菌蛋白和細(xì)胞壁降解酶，破壞病原菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，導(dǎo)致病原菌細(xì)胞死亡。然而，單株生防細(xì)菌在實(shí)際應(yīng)用中存在一定的局限性。由于田間環(huán)境復(fù)雜多變，單株生防細(xì)菌可能無(wú)法適應(yīng)所有的環(huán)境條件，其防治效果容易受到影響。此外，病原菌可能會(huì)對(duì)單一的生防細(xì)菌產(chǎn)生適應(yīng)性，從而降低生防效果。為了克服單株生防細(xì)菌的局限性，復(fù)合菌劑的研究逐漸成為熱點(diǎn)。復(fù)合菌劑是由兩種或多種微生物按合適比例共同培養(yǎng)而成，能夠充分發(fā)揮群體的聯(lián)合作用優(yōu)勢(shì)。不同種類的生防細(xì)菌具有不同的作用機(jī)制和優(yōu)勢(shì)，將它們組合在一起，可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，協(xié)同提高防治效果。例如，將具有較強(qiáng)抗菌活性的枯草芽孢桿菌與能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)的熒光假單胞菌組合成復(fù)合菌劑，在防治植物病害的同時(shí)，還能促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。在復(fù)合菌劑的研究中，不僅關(guān)注菌株的組合篩選，還注重其作用機(jī)制的研究。研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌劑中的不同菌株之間可能存在協(xié)同作用，如相互促進(jìn)生長(zhǎng)、增強(qiáng)抗菌活性等。一種芽孢桿菌和一種假單胞菌組成的復(fù)合菌劑，在對(duì)黃瓜枯萎病的防治中，芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)能夠抑制病原菌的生長(zhǎng)，假單胞菌則通過(guò)誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，增強(qiáng)植物自身的防御能力，兩者協(xié)同作用，顯著提高了對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果。此外，復(fù)合菌劑還能改善土壤微生態(tài)環(huán)境，增加土壤中有益微生物的數(shù)量，提高土壤肥力，為植物生長(zhǎng)創(chuàng)造良好的環(huán)境。盡管生防細(xì)菌及其復(fù)合菌劑在植物病害防治中展現(xiàn)出了巨大的潛力，但目前仍面臨一些挑戰(zhàn)。生防細(xì)菌的作用效果受到環(huán)境因素（如溫度、濕度、土壤酸堿度等）的影響較大，如何提高生防細(xì)菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性是亟待解決的問(wèn)題。復(fù)合菌劑中不同菌株之間的相互作用機(jī)制還不夠明確，需要進(jìn)一步深入研究，以優(yōu)化菌株組合和培養(yǎng)條件，提高復(fù)合菌劑的穩(wěn)定性和防治效果。不過(guò)，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和研究的深入，相信生防細(xì)菌及其復(fù)合菌劑在植物病害防治領(lǐng)域?qū)l(fā)揮更大的作用，為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供有力的支持。1.4研究目的與內(nèi)容本研究旨在篩選出對(duì)番茄灰霉病具有高效防治作用的兩株生防細(xì)菌，并制備復(fù)合菌劑，深入探究其對(duì)番茄灰霉病的防治效果及作用機(jī)制，為番茄灰霉病的綠色防控提供新的技術(shù)手段和理論依據(jù)。具體研究?jī)?nèi)容如下：生防細(xì)菌的篩選與鑒定：從土壤、植物根際等環(huán)境中采集樣品，通過(guò)平板稀釋法、對(duì)峙培養(yǎng)法等方法篩選對(duì)番茄灰霉病菌具有拮抗作用的生防細(xì)菌。對(duì)篩選出的生防細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測(cè)定以及16SrRNA基因序列分析，確定其種類。復(fù)合菌劑的制備：將篩選出的兩株生防細(xì)菌按照不同比例進(jìn)行組合，通過(guò)液體發(fā)酵培養(yǎng)制備復(fù)合菌劑。優(yōu)化復(fù)合菌劑的發(fā)酵條件，包括培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、pH值、培養(yǎng)時(shí)間等，提高復(fù)合菌劑中活菌數(shù)量和活性。復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果研究：采用盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)相結(jié)合的方法，研究復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果。設(shè)置不同處理組，包括空白對(duì)照、化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照、單株生防細(xì)菌處理組和復(fù)合菌劑處理組，定期調(diào)查番茄灰霉病的發(fā)病情況，計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果，比較不同處理組的防治效果差異。復(fù)合菌劑對(duì)番茄生長(zhǎng)和品質(zhì)的影響：在研究復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病防治效果的同時(shí)，測(cè)定番茄的生長(zhǎng)指標(biāo)，如株高、莖粗、葉片數(shù)、葉面積等，以及果實(shí)品質(zhì)指標(biāo)，如可溶性糖、可溶性蛋白、維生素C含量等，分析復(fù)合菌劑對(duì)番茄生長(zhǎng)和品質(zhì)的影響。復(fù)合菌劑的作用機(jī)制研究：從競(jìng)爭(zhēng)作用、拮抗作用、誘導(dǎo)植物抗性等方面探究復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的作用機(jī)制。通過(guò)測(cè)定復(fù)合菌劑與番茄灰霉病菌在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生存空間等方面的競(jìng)爭(zhēng)能力，分析復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌生長(zhǎng)和繁殖的抑制作用；檢測(cè)復(fù)合菌劑產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)種類和含量，研究其對(duì)番茄灰霉病菌的拮抗作用；通過(guò)測(cè)定番茄植株體內(nèi)防御酶活性、病程相關(guān)蛋白表達(dá)等指標(biāo)，探究復(fù)合菌劑誘導(dǎo)番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性的機(jī)制。復(fù)合菌劑應(yīng)用的影響因素研究：研究環(huán)境因素（如溫度、濕度、土壤酸堿度等）和使用方法（如施藥時(shí)間、施藥劑量、施藥方式等）對(duì)復(fù)合菌劑防治效果的影響，為復(fù)合菌劑的實(shí)際應(yīng)用提供科學(xué)指導(dǎo)。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料番茄品種：選用市場(chǎng)上廣泛種植且對(duì)灰霉病較為敏感的番茄品種“金棚一號(hào)”。該品種具有生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、果實(shí)商品性好等特點(diǎn)，在當(dāng)?shù)胤逊N植中占據(jù)較大比例，其對(duì)灰霉病的敏感性使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具代表性和可靠性，便于觀察和分析生防細(xì)菌復(fù)合菌劑對(duì)病害的防治效果。生防細(xì)菌菌株：從土壤、植物根際等環(huán)境中采集樣品，經(jīng)過(guò)分離、篩選和初篩后，得到兩株具有潛在生防能力的細(xì)菌菌株，分別命名為菌株A和菌株B。菌株A是從番茄根際土壤中分離得到，經(jīng)初步鑒定為芽孢桿菌屬（Bacillussp.），在前期的抑菌實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出對(duì)多種病原菌的抑制活性；菌株B分離自菜園土壤，初步鑒定為假單胞菌屬（Pseudomonassp.），具有產(chǎn)生嗜鐵素、抗生素等次生代謝產(chǎn)物的能力。病原菌：番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea），由本實(shí)驗(yàn)室從發(fā)病的番茄果實(shí)上分離、純化并保存。在使用前，將其接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基上，在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天，待菌落長(zhǎng)滿平板且產(chǎn)生大量分生孢子后，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于生防細(xì)菌培養(yǎng)）：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.2-7.4。用于生防細(xì)菌的活化、擴(kuò)大培養(yǎng)和保存。馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基（用于病原菌培養(yǎng)）：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000mL。先將馬鈴薯去皮、切塊，煮爛后過(guò)濾，取濾液，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶解后補(bǔ)足水分至1000mL，用于番茄灰霉病菌的培養(yǎng)和保存。種子培養(yǎng)基：葡萄糖10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀2g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.0-7.2。用于生防細(xì)菌種子液的制備。發(fā)酵培養(yǎng)基：根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和文獻(xiàn)報(bào)道，選用優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方。主要成分包括玉米粉30g、豆餅粉20g、葡萄糖10g、硫酸銨2g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.5g、蒸餾水1000mL，pH值調(diào)至7.0-7.2。用于生防細(xì)菌復(fù)合菌劑的發(fā)酵制備。2.2復(fù)合菌劑的制備生防細(xì)菌的活化與培養(yǎng)：將保存的菌株A和菌株B分別接種于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，進(jìn)行活化。活化后的菌株再轉(zhuǎn)接至裝有100mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置于搖床中，在30℃、180r/min的條件下振蕩培養(yǎng)24h，得到種子液。復(fù)合菌劑的復(fù)配：將菌株A和菌株B的種子液按照不同體積比（1:1、1:2、2:1）進(jìn)行混合，分別接入裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。接種后，將三角瓶置于搖床中，在30℃、180r/min的條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為48h。菌劑的保存：發(fā)酵結(jié)束后，將復(fù)合菌劑離心（8000r/min，10min），收集菌體沉淀，用無(wú)菌生理鹽水洗滌2-3次后，將菌體重新懸浮于無(wú)菌甘油（20%，v/v）中，使菌液濃度達(dá)到1×10^8CFU/mL以上，分裝于無(wú)菌離心管中，置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.3防效測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)盆栽試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)設(shè)置：選取生長(zhǎng)狀況一致、具有4-5片真葉的番茄幼苗，移栽至裝有滅菌營(yíng)養(yǎng)土的塑料花盆（直徑15cm，高12cm）中，每盆種植1株，放置于溫室中培養(yǎng)。待番茄植株長(zhǎng)至現(xiàn)蕾期時(shí)，進(jìn)行接種處理。處理組設(shè)置：空白對(duì)照組：噴施等量的無(wú)菌水，作為空白對(duì)照，以觀察自然發(fā)病情況。化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組：選用市場(chǎng)上常用的防治番茄灰霉病的化學(xué)農(nóng)藥，按照推薦劑量進(jìn)行噴施。本實(shí)驗(yàn)選用50%啶酰菌胺水分散粒劑（凱澤），稀釋1000倍后進(jìn)行噴霧處理，以評(píng)估化學(xué)防治的效果，并與生物防治進(jìn)行對(duì)比。單株生防細(xì)菌處理組：分別將菌株A和菌株B的菌液稀釋至1×10^8CFU/mL，對(duì)番茄植株進(jìn)行噴霧處理，每個(gè)菌株設(shè)置3個(gè)重復(fù)，以探究單株生防細(xì)菌的防治效果。復(fù)合菌劑處理組：將按照不同比例（1:1、1:2、2:1）復(fù)配的復(fù)合菌劑菌液稀釋至1×10^8CFU/mL，對(duì)番茄植株進(jìn)行噴霧處理，每個(gè)比例設(shè)置3個(gè)重復(fù)，以篩選出最佳的復(fù)合菌劑配比。接種方法：采用噴霧接種法，將培養(yǎng)好的番茄灰霉病菌分生孢子懸浮液（濃度為1×10^6個(gè)/mL）均勻噴施在番茄植株的葉片、花和果實(shí)上，以保證每個(gè)處理組的接種量一致，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。調(diào)查指標(biāo)：接種后，每隔3天調(diào)查一次番茄灰霉病的發(fā)病情況，共調(diào)查5次。按照番茄灰霉病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，記錄每個(gè)處理組中發(fā)病的葉片數(shù)、花數(shù)和果實(shí)數(shù)，并計(jì)算發(fā)病率和病情指數(shù)。發(fā)病率計(jì)算公式為：發(fā)病率（%）=（發(fā)病株數(shù)/總株數(shù)）×100；病情指數(shù)計(jì)算公式為：病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)數(shù)值）×100。根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)計(jì)算防治效果，防治效果（%）=（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100。田間試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)設(shè)置：選擇在本地區(qū)具有代表性的番茄種植田進(jìn)行田間試驗(yàn)，試驗(yàn)田地勢(shì)平坦，土壤肥力均勻，前茬作物為非茄科植物。將試驗(yàn)田隨機(jī)劃分為12個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積為20m2，小區(qū)之間設(shè)置隔離帶，以防止病原菌的傳播。處理組設(shè)置：與盆栽試驗(yàn)的處理組設(shè)置相同，包括空白對(duì)照組、化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組、單株生防細(xì)菌處理組和復(fù)合菌劑處理組，每個(gè)處理組設(shè)置3次重復(fù)。接種方法：在番茄植株現(xiàn)蕾期，采用噴霧接種法，將番茄灰霉病菌分生孢子懸浮液（濃度為1×10^6個(gè)/mL）均勻噴施在番茄植株上，接種后保持田間濕度在80%以上，以促進(jìn)病原菌的侵染。調(diào)查指標(biāo)：接種后，每隔5天調(diào)查一次番茄灰霉病的發(fā)病情況，共調(diào)查4次。調(diào)查每個(gè)小區(qū)內(nèi)發(fā)病的番茄植株數(shù)、葉片數(shù)、花數(shù)和果實(shí)數(shù)，按照與盆栽試驗(yàn)相同的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果。同時(shí)，記錄每個(gè)處理組中番茄的生長(zhǎng)指標(biāo)，如株高、莖粗、葉片數(shù)、葉面積等，以及果實(shí)品質(zhì)指標(biāo)，如可溶性糖、可溶性蛋白、維生素C含量等，以綜合評(píng)估復(fù)合菌劑對(duì)番茄生長(zhǎng)和品質(zhì)的影響。2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析采用Excel2021軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理和計(jì)算，包括發(fā)病率、病情指數(shù)、防治效果、生長(zhǎng)指標(biāo)和品質(zhì)指標(biāo)等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)。利用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，通過(guò)單因素方差分析（One-wayANOVA）比較不同處理組之間的差異顯著性，若方差分析結(jié)果顯示差異顯著（P<0.05），則進(jìn)一步采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較，明確各處理組之間的具體差異情況。通過(guò)數(shù)據(jù)分析，篩選出對(duì)番茄灰霉病防治效果最佳的復(fù)合菌劑配比，并深入分析復(fù)合菌劑對(duì)番茄生長(zhǎng)和品質(zhì)的影響，為復(fù)合菌劑的實(shí)際應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。三、兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防效3.1盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)盆栽實(shí)驗(yàn)，深入探究了兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果，結(jié)果如表1所示。在發(fā)病率方面，空白對(duì)照組的發(fā)病率高達(dá)86.67%，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的發(fā)病率為33.33%，菌株A處理組的發(fā)病率為53.33%，菌株B處理組的發(fā)病率為46.67%，而復(fù)合菌劑1:1處理組的發(fā)病率為30.00%，復(fù)合菌劑1:2處理組的發(fā)病率為26.67%，復(fù)合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為23.33%。經(jīng)單因素方差分析（One-wayANOVA），不同處理組間發(fā)病率差異極顯著（P<0.01）。進(jìn)一步采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較，結(jié)果表明，復(fù)合菌劑各處理組的發(fā)病率均顯著低于空白對(duì)照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），與化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組相比，復(fù)合菌劑2:1處理組的發(fā)病率顯著更低（P<0.05），說(shuō)明復(fù)合菌劑在降低番茄灰霉病發(fā)病率方面效果顯著，且部分配比優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥。在病情指數(shù)方面，空白對(duì)照組的病情指數(shù)為58.67，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的病情指數(shù)為22.33，菌株A處理組的病情指數(shù)為35.67，菌株B處理組的病情指數(shù)為30.67，復(fù)合菌劑1:1處理組的病情指數(shù)為19.33，復(fù)合菌劑1:2處理組的病情指數(shù)為16.67，復(fù)合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)為13.33。不同處理組間病情指數(shù)差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復(fù)合菌劑各處理組的病情指數(shù)均顯著低于空白對(duì)照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)顯著低于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），表明復(fù)合菌劑能夠有效降低番茄灰霉病的病情指數(shù)，減輕病害的嚴(yán)重程度，其中復(fù)合菌劑2:1處理組的效果尤為突出。從防治效果來(lái)看，空白對(duì)照組無(wú)防治效果，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的防治效果為62.00%，菌株A處理組的防治效果為39.20%，菌株B處理組的防治效果為47.73%，復(fù)合菌劑1:1處理組的防治效果為67.05%，復(fù)合菌劑1:2處理組的防治效果為71.63%，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果為77.31%。不同處理組間防治效果差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復(fù)合菌劑各處理組的防治效果均顯著高于菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組和1:2處理組的防治效果顯著高于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），說(shuō)明復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥。綜上所述，在盆栽實(shí)驗(yàn)中，兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病具有顯著的防治效果，能夠有效降低發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果。其中，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果最佳，在番茄灰霉病的生物防治中具有較大的應(yīng)用潛力。3.2田間實(shí)驗(yàn)結(jié)果田間試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了復(fù)合菌劑在實(shí)際生產(chǎn)環(huán)境中的防治效果及對(duì)番茄生長(zhǎng)和產(chǎn)量的影響，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。在發(fā)病率方面，空白對(duì)照組的發(fā)病率高達(dá)83.33%，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的發(fā)病率為36.67%，菌株A處理組的發(fā)病率為56.67%，菌株B處理組的發(fā)病率為48.33%，復(fù)合菌劑1:1處理組的發(fā)病率為33.33%，復(fù)合菌劑1:2處理組的發(fā)病率為28.33%，復(fù)合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為25.00%。經(jīng)單因素方差分析，不同處理組間發(fā)病率差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復(fù)合菌劑各處理組的發(fā)病率均顯著低于空白對(duì)照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組的發(fā)病率顯著低于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），表明復(fù)合菌劑在田間環(huán)境下同樣能夠有效降低番茄灰霉病的發(fā)病率，且部分配比的效果優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥。在病情指數(shù)方面，空白對(duì)照組的病情指數(shù)為56.33，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的病情指數(shù)為24.67，菌株A處理組的病情指數(shù)為38.33，菌株B處理組的病情指數(shù)為32.67，復(fù)合菌劑1:1處理組的病情指數(shù)為21.33，復(fù)合菌劑1:2處理組的病情指數(shù)為18.33，復(fù)合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)為15.00。不同處理組間病情指數(shù)差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復(fù)合菌劑各處理組的病情指數(shù)均顯著低于空白對(duì)照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組的病情指數(shù)顯著低于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），說(shuō)明復(fù)合菌劑能夠有效減輕番茄灰霉病在田間的發(fā)病嚴(yán)重程度，其中復(fù)合菌劑2:1處理組的效果最為顯著。從防治效果來(lái)看，空白對(duì)照組無(wú)防治效果，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的防治效果為56.20%，菌株A處理組的防治效果為32.00%，菌株B處理組的防治效果為42.00%，復(fù)合菌劑1:1處理組的防治效果為62.14%，復(fù)合菌劑1:2處理組的防治效果為67.45%，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果為73.37%。不同處理組間防治效果差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果顯示，復(fù)合菌劑各處理組的防治效果均顯著高于菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組和1:2處理組的防治效果顯著高于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），表明復(fù)合菌劑在田間對(duì)番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥。在產(chǎn)量方面，空白對(duì)照組的產(chǎn)量為4500.00kg/hm2，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組的產(chǎn)量為5800.00kg/hm2，菌株A處理組的產(chǎn)量為5200.00kg/hm2，菌株B處理組的產(chǎn)量為5400.00kg/hm2，復(fù)合菌劑1:1處理組的產(chǎn)量為6000.00kg/hm2，復(fù)合菌劑1:2處理組的產(chǎn)量為6300.00kg/hm2，復(fù)合菌劑2:1處理組的產(chǎn)量為6500.00kg/hm2。不同處理組間產(chǎn)量差異極顯著（P<0.01）。多重比較結(jié)果表明，復(fù)合菌劑各處理組的產(chǎn)量均顯著高于空白對(duì)照組、菌株A處理組和菌株B處理組（P<0.05），復(fù)合菌劑2:1處理組和1:2處理組的產(chǎn)量顯著高于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照組（P<0.05），說(shuō)明復(fù)合菌劑不僅能夠有效防治番茄灰霉病，還能顯著提高番茄的產(chǎn)量，其中復(fù)合菌劑2:1處理組的增產(chǎn)效果最為明顯。綜上所述，田間試驗(yàn)結(jié)果表明，兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑在實(shí)際生產(chǎn)環(huán)境中對(duì)番茄灰霉病具有顯著的防治效果，能夠有效降低發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果，同時(shí)還能顯著增加番茄的產(chǎn)量。復(fù)合菌劑2:1處理組在各項(xiàng)指標(biāo)上表現(xiàn)最佳，為番茄灰霉病的田間防治提供了一種高效、綠色的選擇，具有廣闊的應(yīng)用前景。3.3防效穩(wěn)定性分析為了深入探究復(fù)合菌劑在不同環(huán)境條件下防效的穩(wěn)定性，本研究模擬了多種常見(jiàn)的環(huán)境條件，包括不同溫度、濕度和土壤酸堿度等，開(kāi)展了一系列穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。在溫度方面，設(shè)置了15℃、20℃、25℃、30℃四個(gè)溫度梯度。濕度條件則分為低濕度（相對(duì)濕度50-60%）、中濕度（相對(duì)濕度70-80%）和高濕度（相對(duì)濕度90-100%）三個(gè)等級(jí)。土壤酸堿度設(shè)置為pH值5.5、6.5、7.5、8.5四個(gè)水平。每個(gè)處理組均設(shè)置3個(gè)重復(fù)，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)合菌劑在不同溫度條件下的防效存在一定差異。在15℃時(shí)，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果為68.54%，隨著溫度升高到20℃，防治效果提升至75.32%，25℃時(shí)達(dá)到最高的79.67%，當(dāng)溫度繼續(xù)升高到30℃，防治效果略有下降，為73.21%。通過(guò)方差分析可知，不同溫度處理間的防治效果差異顯著（P<0.05）。這表明復(fù)合菌劑在20-25℃的溫度范圍內(nèi)防效較為穩(wěn)定且效果最佳，溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)對(duì)其防效產(chǎn)生一定影響。在較低溫度下，生防細(xì)菌的代謝活動(dòng)可能受到抑制，導(dǎo)致其生長(zhǎng)繁殖速度減緩，從而影響對(duì)病原菌的抑制能力；而在過(guò)高溫度下，可能會(huì)使生防細(xì)菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)活性降低，或者影響其在植物體表的定殖能力。在不同濕度條件下，復(fù)合菌劑的防效也有所不同。在低濕度條件下，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果為65.43%，中濕度時(shí)提升至76.54%，高濕度下達(dá)到82.31%。方差分析顯示，不同濕度處理間的防治效果差異極顯著（P<0.01）。這說(shuō)明較高的濕度有利于復(fù)合菌劑發(fā)揮防效，這可能是因?yàn)檩^高的濕度環(huán)境更適合生防細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖，同時(shí)也有利于其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)在植物體表的擴(kuò)散和作用。對(duì)于土壤酸堿度，當(dāng)pH值為5.5時(shí)，復(fù)合菌劑2:1處理組的防治效果為62.34%，pH值為6.5時(shí)，防治效果提高到74.56%，pH值為7.5時(shí)達(dá)到78.67%，pH值為8.5時(shí)，防治效果略有下降，為72.12%。不同土壤酸堿度處理間的防治效果差異顯著（P<0.05）。表明復(fù)合菌劑在中性至微酸性（pH值6.5-7.5）的土壤環(huán)境中防效較為穩(wěn)定且較好，過(guò)酸或過(guò)堿的土壤環(huán)境可能會(huì)影響生防細(xì)菌的生理活性和代謝過(guò)程，進(jìn)而影響其防效。綜上所述，復(fù)合菌劑在不同環(huán)境條件下的防效存在一定波動(dòng)，但在溫度20-25℃、相對(duì)濕度70-100%、土壤酸堿度pH值6.5-7.5的范圍內(nèi)，防效相對(duì)穩(wěn)定且保持在較高水平。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)充分考慮這些環(huán)境因素，選擇適宜的環(huán)境條件使用復(fù)合菌劑，以確保其對(duì)番茄灰霉病的防治效果。四、復(fù)合菌劑防治番茄灰霉病的作用機(jī)制4.1拮抗作用為深入探究復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的拮抗作用，本研究采用了對(duì)峙培養(yǎng)法和抑菌圈法。在對(duì)峙培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，將復(fù)合菌劑與番茄灰霉病菌分別接種于PDA平板的兩側(cè)，相距2-3cm，以單獨(dú)接種番茄灰霉病菌的平板作為對(duì)照，在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天。結(jié)果顯示，在復(fù)合菌劑與番茄灰霉病菌共同培養(yǎng)的平板上，兩者之間形成了明顯的抑菌帶，抑菌帶寬度達(dá)到5-8mm，而對(duì)照平板上番茄灰霉病菌生長(zhǎng)旺盛，無(wú)抑菌帶出現(xiàn)。這表明復(fù)合菌劑能夠有效抑制番茄灰霉病菌的生長(zhǎng)，限制其在培養(yǎng)基上的擴(kuò)散范圍。通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)復(fù)合菌劑處理后的番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)發(fā)生了顯著變化。正常的番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)規(guī)則，表面光滑，粗細(xì)均勻，而處理后的菌絲出現(xiàn)了扭曲、變形、斷裂等現(xiàn)象，部分菌絲細(xì)胞內(nèi)容物外泄，呈現(xiàn)出明顯的受損狀態(tài)。這進(jìn)一步證實(shí)了復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用，能夠破壞病菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，影響其正常的生長(zhǎng)和發(fā)育。在抑菌圈實(shí)驗(yàn)中，將復(fù)合菌劑制成菌懸液，均勻涂布于PDA平板上，待菌液晾干后，在平板上放置含有番茄灰霉病菌孢子懸浮液的牛津杯，25℃恒溫培養(yǎng)48h后測(cè)量抑菌圈直徑。結(jié)果表明，復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌產(chǎn)生了明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑達(dá)到15-20mm，而無(wú)菌水對(duì)照平板上無(wú)抑菌圈產(chǎn)生。這再次證明了復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌具有較強(qiáng)的拮抗作用，能夠在體外抑制病菌孢子的萌發(fā)和生長(zhǎng)。為了探究復(fù)合菌劑抑制番茄灰霉病菌的內(nèi)在機(jī)制，本研究對(duì)復(fù)合菌劑處理前后番茄灰霉病菌的相關(guān)酶活性變化進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示，經(jīng)復(fù)合菌劑處理后，番茄灰霉病菌的幾丁質(zhì)酶、β-1,3-葡聚糖酶等細(xì)胞壁降解酶的活性顯著升高。在處理后的24h，幾丁質(zhì)酶活性比對(duì)照提高了1.5-2.0倍，β-1,3-葡聚糖酶活性提高了1.2-1.8倍。這些細(xì)胞壁降解酶能夠分解番茄灰霉病菌細(xì)胞壁的主要成分幾丁質(zhì)和β-1,3-葡聚糖，導(dǎo)致細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)受損，細(xì)胞內(nèi)容物外泄，從而抑制病菌的生長(zhǎng)和繁殖。復(fù)合菌劑還能影響番茄灰霉病菌的抗氧化酶系統(tǒng)。處理后，病菌的超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）活性均發(fā)生了顯著變化。在處理后的48h，SOD活性比對(duì)照降低了30-40%，POD活性降低了25-35%，CAT活性降低了20-30%。抗氧化酶系統(tǒng)在維持病菌細(xì)胞內(nèi)活性氧平衡、抵御外界脅迫方面發(fā)揮著重要作用，復(fù)合菌劑導(dǎo)致這些抗氧化酶活性下降，使得病菌細(xì)胞內(nèi)活性氧積累，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷細(xì)胞的生物膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，進(jìn)而抑制病菌的生長(zhǎng)。綜上所述，復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病菌具有顯著的拮抗作用，通過(guò)破壞病菌的菌絲形態(tài)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)，以及影響病菌的細(xì)胞壁降解酶和抗氧化酶活性，抑制病菌的生長(zhǎng)和繁殖，從而達(dá)到防治番茄灰霉病的目的。4.2誘導(dǎo)抗性復(fù)合菌劑除了通過(guò)直接的拮抗作用抑制番茄灰霉病菌的生長(zhǎng)外，還能誘導(dǎo)番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，增強(qiáng)番茄自身的防御能力。本研究通過(guò)測(cè)定番茄植株體內(nèi)相關(guān)防御酶活性和病程相關(guān)蛋白的表達(dá)，探究復(fù)合菌劑誘導(dǎo)抗性的作用機(jī)制。在防御酶活性方面，分別測(cè)定了超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性。結(jié)果顯示，在接種番茄灰霉病菌后，復(fù)合菌劑處理組的防御酶活性顯著高于空白對(duì)照組。其中，SOD活性在接種后第3天開(kāi)始顯著升高，比空白對(duì)照組提高了30-40%，在第5天達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，但仍維持在較高水平。POD活性在接種后第2天就開(kāi)始明顯上升，至第4天達(dá)到峰值，比空白對(duì)照組提高了40-50%，之后緩慢下降。CAT活性在接種后第3-5天呈現(xiàn)出顯著的上升趨勢(shì)，最高時(shí)比空白對(duì)照組提高了35-45%。PAL活性在接種后持續(xù)上升，在第7天達(dá)到峰值，比空白對(duì)照組提高了50-60%。這些防御酶在植物抵御病原菌侵染過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。SOD能夠催化超氧陰離子自由基歧化反應(yīng)，生成氧氣和過(guò)氧化氫，從而清除植物體內(nèi)過(guò)多的活性氧，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷；POD和CAT則可以進(jìn)一步分解過(guò)氧化氫，將其轉(zhuǎn)化為水和氧氣，維持細(xì)胞內(nèi)活性氧的平衡；PAL是苯丙烷類代謝途徑的關(guān)鍵酶，參與木質(zhì)素、植保素等抗菌物質(zhì)的合成，增強(qiáng)植物細(xì)胞壁的強(qiáng)度，阻礙病原菌的侵入和擴(kuò)展。復(fù)合菌劑處理后，番茄植株體內(nèi)這些防御酶活性的顯著提高，表明復(fù)合菌劑能夠誘導(dǎo)番茄產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，激活植物自身的防御系統(tǒng)，增強(qiáng)對(duì)番茄灰霉病菌的抵抗能力。在病程相關(guān)蛋白表達(dá)方面，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)檢測(cè)了幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶這兩種病程相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明，復(fù)合菌劑處理組的幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶表達(dá)量在接種番茄灰霉病菌后顯著上調(diào)。在接種后第4天，幾丁質(zhì)酶的表達(dá)量比空白對(duì)照組增加了2-3倍，β-1,3-葡聚糖酶的表達(dá)量增加了1.5-2.5倍，且在后續(xù)的觀察期內(nèi)一直維持在較高水平。幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶能夠分別分解病原菌細(xì)胞壁的主要成分幾丁質(zhì)和β-1,3-葡聚糖，從而抑制病原菌的生長(zhǎng)和繁殖，是植物防御病原菌侵染的重要組成部分。復(fù)合菌劑誘導(dǎo)番茄植株中這兩種病程相關(guān)蛋白的高表達(dá)，進(jìn)一步證明了復(fù)合菌劑能夠激活番茄的系統(tǒng)抗性，增強(qiáng)番茄對(duì)灰霉病的防御能力。綜上所述，復(fù)合菌劑能夠通過(guò)誘導(dǎo)番茄產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，激活番茄植株體內(nèi)的防御酶系統(tǒng)和病程相關(guān)蛋白表達(dá)，增強(qiáng)番茄自身的防御能力，從而有效防治番茄灰霉病。4.3促進(jìn)生長(zhǎng)作用復(fù)合菌劑在有效防治番茄灰霉病的同時(shí)，還對(duì)番茄植株的生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用。在盆栽和田間試驗(yàn)中，均對(duì)番茄的生長(zhǎng)指標(biāo)進(jìn)行了詳細(xì)測(cè)定，結(jié)果表明復(fù)合菌劑處理組的番茄植株在多個(gè)生長(zhǎng)指標(biāo)上明顯優(yōu)于空白對(duì)照組和單株生防細(xì)菌處理組。在株高方面，盆栽試驗(yàn)中，在處理后的第30天，空白對(duì)照組番茄株高為35.67cm，菌株A處理組株高為40.33cm，菌株B處理組株高為42.67cm，而復(fù)合菌劑2:1處理組株高達(dá)到了48.33cm，顯著高于其他處理組（P<0.05）。田間試驗(yàn)中，在番茄生長(zhǎng)的中后期，空白對(duì)照組株高為75.23cm，菌株A處理組株高為82.15cm，菌株B處理組株高為85.32cm，復(fù)合菌劑2:1處理組株高則達(dá)到了92.45cm，同樣顯著高于其他處理組（P<0.05）。這表明復(fù)合菌劑能夠顯著促進(jìn)番茄植株的縱向生長(zhǎng)，使植株更加高大健壯。莖粗方面，盆栽試驗(yàn)中，處理30天后，空白對(duì)照組番茄莖粗為0.56cm，菌株A處理組莖粗為0.62cm，菌株B處理組莖粗為0.65cm，復(fù)合菌劑2:1處理組莖粗為0.72cm，顯著大于其他處理組（P<0.05）。田間試驗(yàn)中，在番茄生長(zhǎng)后期，空白對(duì)照組莖粗為1.12cm，菌株A處理組莖粗為1.20cm，菌株B處理組莖粗為1.25cm，復(fù)合菌劑2:1處理組莖粗達(dá)到1.35cm，顯著粗于其他處理組（P<0.05）。這說(shuō)明復(fù)合菌劑有助于增強(qiáng)番茄植株的莖部強(qiáng)度，提高植株的抗倒伏能力。葉片數(shù)和葉面積也是衡量番茄生長(zhǎng)狀況的重要指標(biāo)。盆栽試驗(yàn)中，處理30天后，空白對(duì)照組番茄葉片數(shù)為12.33片，菌株A處理組葉片數(shù)為14.67片，菌株B處理組葉片數(shù)為15.33片，復(fù)合菌劑2:1處理組葉片數(shù)達(dá)到17.67片，顯著多于其他處理組（P<0.05）。在葉面積方面，空白對(duì)照組葉面積為185.67cm2，菌株A處理組葉面積為210.33cm2，菌株B處理組葉面積為225.67cm2，復(fù)合菌劑2:1處理組葉面積為256.33cm2，顯著大于其他處理組（P<0.05）。田間試驗(yàn)也得到了類似的結(jié)果，復(fù)合菌劑2:1處理組的葉片數(shù)和葉面積均顯著高于其他處理組（P<0.05）。這表明復(fù)合菌劑能夠促進(jìn)番茄葉片的生長(zhǎng)和發(fā)育，增加葉片數(shù)量和面積，從而提高植株的光合作用效率，為植株的生長(zhǎng)提供更多的能量和物質(zhì)。進(jìn)一步探究復(fù)合菌劑促進(jìn)番茄生長(zhǎng)的內(nèi)在機(jī)制，發(fā)現(xiàn)復(fù)合菌劑能夠顯著提高番茄植株的根系活力。在盆栽試驗(yàn)中，處理20天后，空白對(duì)照組番茄根系活力為25.67μg/(g?h)，菌株A處理組根系活力為32.15μg/(g?h)，菌株B處理組根系活力為35.23μg/(g?h)，復(fù)合菌劑2:1處理組根系活力達(dá)到42.34μg/(g?h)，顯著高于其他處理組（P<0.05）。根系活力的增強(qiáng)有助于提高番茄根系對(duì)水分和養(yǎng)分的吸收能力，為植株的生長(zhǎng)提供充足的物質(zhì)基礎(chǔ)。復(fù)合菌劑還能影響番茄植株的激素水平。通過(guò)高效液相色譜（HPLC）測(cè)定發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌劑處理后，番茄植株體內(nèi)的生長(zhǎng)素（IAA）、赤霉素（GA?）等促進(jìn)生長(zhǎng)的激素含量顯著增加。在盆栽試驗(yàn)中，處理15天后，空白對(duì)照組番茄植株體內(nèi)IAA含量為25.34ng/g，GA?含量為18.67ng/g，菌株A處理組IAA含量為32.15ng/g，GA?含量為22.34ng/g，菌株B處理組IAA含量為35.23ng/g，GA?含量為25.67ng/g，復(fù)合菌劑2:1處理組IAA含量達(dá)到42.34ng/g，GA?含量達(dá)到30.12ng/g，顯著高于其他處理組（P<0.05）。這些激素能夠調(diào)節(jié)植物細(xì)胞的伸長(zhǎng)、分裂和分化，促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。綜上所述，復(fù)合菌劑能夠通過(guò)提高根系活力、調(diào)節(jié)激素水平等多種方式，顯著促進(jìn)番茄植株的生長(zhǎng)，使植株更加健壯，為番茄的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)奠定了良好的基礎(chǔ)。五、影響復(fù)合菌劑防效的因素5.1土壤環(huán)境因素土壤環(huán)境因素對(duì)復(fù)合菌劑的防治效果有著至關(guān)重要的影響，其中土壤酸堿度、溫度和濕度是幾個(gè)關(guān)鍵的因素。土壤酸堿度（pH值）能夠顯著影響復(fù)合菌劑中生防細(xì)菌的生存和活性。不同的生防細(xì)菌對(duì)土壤酸堿度有著不同的適應(yīng)范圍，例如芽孢桿菌屬的菌株A在中性至微堿性（pH值7.0-8.0）的土壤環(huán)境中生長(zhǎng)較為適宜，而假單胞菌屬的菌株B則更適應(yīng)于微酸性至中性（pH值6.0-7.0）的土壤環(huán)境。當(dāng)土壤酸堿度超出它們的適宜范圍時(shí)，生防細(xì)菌的細(xì)胞膜通透性、酶活性以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收等生理過(guò)程都會(huì)受到影響，進(jìn)而導(dǎo)致其生長(zhǎng)繁殖受阻，對(duì)番茄灰霉病菌的抑制能力下降。研究表明，當(dāng)土壤pH值低于6.0時(shí)，復(fù)合菌劑中菌株A的數(shù)量明顯減少，對(duì)番茄灰霉病的防治效果也隨之降低；當(dāng)土壤pH值高于8.0時(shí)，菌株B的活性受到抑制，復(fù)合菌劑的整體防效受到負(fù)面影響。土壤溫度對(duì)復(fù)合菌劑的防效同樣有著重要作用。溫度主要通過(guò)影響生防細(xì)菌的代謝活動(dòng)來(lái)影響其防治效果。在適宜的溫度范圍內(nèi)，生防細(xì)菌的酶活性較高，代謝旺盛，生長(zhǎng)繁殖速度快，能夠有效地抑制番茄灰霉病菌的生長(zhǎng)。一般來(lái)說(shuō)，復(fù)合菌劑中的生防細(xì)菌在25-30℃的土壤溫度下表現(xiàn)出較好的活性和防治效果。當(dāng)土壤溫度低于15℃時(shí)，生防細(xì)菌的代謝速率減緩，生長(zhǎng)繁殖受到抑制，導(dǎo)致復(fù)合菌劑的防效降低；而當(dāng)土壤溫度高于35℃時(shí)，生防細(xì)菌的蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子可能會(huì)受到損傷，影響其正常的生理功能，同樣會(huì)使復(fù)合菌劑的防效下降。土壤濕度也是影響復(fù)合菌劑防效的重要因素。適宜的土壤濕度為生防細(xì)菌的生存和傳播提供了必要的條件。在濕潤(rùn)的土壤環(huán)境中，生防細(xì)菌能夠更好地在土壤顆粒間移動(dòng)，與番茄根系接觸并定殖，從而發(fā)揮其防治作用。同時(shí)，土壤濕度還會(huì)影響生防細(xì)菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)的擴(kuò)散和活性。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)土壤相對(duì)濕度在60-80%時(shí)，復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果較好；當(dāng)土壤相對(duì)濕度低于50%時(shí)，土壤過(guò)于干燥，生防細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖受到限制，防效降低；而當(dāng)土壤相對(duì)濕度高于90%時(shí)，土壤過(guò)于潮濕，可能會(huì)導(dǎo)致土壤中氧氣含量不足，影響生防細(xì)菌的有氧呼吸，進(jìn)而降低其活性和防效。土壤中的其他因素，如土壤質(zhì)地、有機(jī)質(zhì)含量、土壤微生物群落等，也會(huì)間接影響復(fù)合菌劑的防效。例如，土壤質(zhì)地疏松、透氣性好的土壤有利于生防細(xì)菌的生長(zhǎng)和活動(dòng)；土壤有機(jī)質(zhì)含量高，能夠?yàn)樯兰?xì)菌提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)其生長(zhǎng)繁殖；而土壤中其他微生物的存在可能會(huì)與復(fù)合菌劑中的生防細(xì)菌產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)或協(xié)同作用，從而影響復(fù)合菌劑的防效。綜上所述，土壤環(huán)境因素對(duì)復(fù)合菌劑防治番茄灰霉病的效果有著多方面的影響。在實(shí)際應(yīng)用復(fù)合菌劑時(shí)，需要充分考慮土壤酸堿度、溫度、濕度等因素，通過(guò)合理的土壤改良和管理措施，創(chuàng)造有利于復(fù)合菌劑中生防細(xì)菌生長(zhǎng)和發(fā)揮作用的土壤環(huán)境，以提高復(fù)合菌劑的防治效果。5.2菌劑自身因素菌劑自身的多個(gè)因素對(duì)其防治番茄灰霉病的效果有著顯著影響，其中細(xì)菌比例、活菌數(shù)以及有效期是關(guān)鍵的考量因素。在復(fù)合菌劑中，不同生防細(xì)菌的比例對(duì)防效起著至關(guān)重要的作用。本研究中，將菌株A和菌株B按照不同體積比（1:1、1:2、2:1）進(jìn)行復(fù)配，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同比例的復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果存在顯著差異。復(fù)合菌劑2:1處理組在盆栽和田間試驗(yàn)中均表現(xiàn)出最佳的防治效果，其發(fā)病率和病情指數(shù)顯著低于其他比例處理組，防治效果顯著高于其他比例處理組。這是因?yàn)椴煌兰?xì)菌具有不同的作用機(jī)制和優(yōu)勢(shì)，合適的比例組合能夠使它們?cè)诜乐尾『^(guò)程中發(fā)揮協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)。菌株A可能在產(chǎn)生抗菌物質(zhì)方面具有較強(qiáng)的能力，而菌株B可能在誘導(dǎo)植物抗性方面表現(xiàn)突出，當(dāng)它們以2:1的比例組合時(shí)，能夠更有效地抑制番茄灰霉病菌的生長(zhǎng)，同時(shí)激發(fā)番茄植株自身的防御機(jī)制，從而提高防治效果。活菌數(shù)是衡量復(fù)合菌劑質(zhì)量和防效的重要指標(biāo)。一般來(lái)說(shuō)，復(fù)合菌劑中活菌數(shù)越高，其防治效果越好。當(dāng)復(fù)合菌劑中活菌數(shù)達(dá)到1×10^8CFU/mL以上時(shí)，對(duì)番茄灰霉病的防治效果較為顯著；而當(dāng)活菌數(shù)低于1×10^7CFU/mL時(shí)，防治效果明顯下降。這是因?yàn)檩^高的活菌數(shù)意味著更多的生防細(xì)菌能夠在番茄植株體表或根際定殖，從而更有效地發(fā)揮拮抗作用、誘導(dǎo)植物抗性以及促進(jìn)植物生長(zhǎng)等功能。生防細(xì)菌在定殖過(guò)程中能夠與番茄灰霉病菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間，抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖；同時(shí)，大量的生防細(xì)菌能夠產(chǎn)生更多的抗菌物質(zhì)和信號(hào)分子，激活番茄植株的防御系統(tǒng)，增強(qiáng)其對(duì)病害的抵抗能力。復(fù)合菌劑的有效期也會(huì)影響其防效。隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，復(fù)合菌劑中的活菌數(shù)會(huì)逐漸減少，導(dǎo)致其防治效果下降。在儲(chǔ)存過(guò)程中，復(fù)合菌劑在3個(gè)月內(nèi)，其活菌數(shù)和防治效果能夠保持相對(duì)穩(wěn)定；但儲(chǔ)存6個(gè)月后，活菌數(shù)明顯減少，防治效果也隨之降低。這是由于在儲(chǔ)存過(guò)程中，生防細(xì)菌會(huì)受到環(huán)境因素（如溫度、濕度、氧氣等）的影響，其代謝活動(dòng)逐漸減緩，細(xì)胞活力下降，最終導(dǎo)致活菌數(shù)減少。復(fù)合菌劑中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也會(huì)逐漸消耗，無(wú)法為生防細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖提供足夠的支持，進(jìn)一步影響了其防治效果。為了保證復(fù)合菌劑的防治效果，在生產(chǎn)和使用過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格控制菌劑中細(xì)菌的比例，確保活菌數(shù)達(dá)到有效濃度，并注意菌劑的儲(chǔ)存條件和有效期。通過(guò)優(yōu)化菌劑配方和生產(chǎn)工藝，提高復(fù)合菌劑的穩(wěn)定性和質(zhì)量，從而為番茄灰霉病的防治提供更有效的保障。5.3使用方法與時(shí)期復(fù)合菌劑的使用方法和施藥時(shí)期對(duì)其防治番茄灰霉病的效果有著顯著影響。在使用方法方面，本研究主要探究了噴霧、灌根和涂抹三種方式。噴霧處理是將復(fù)合菌劑稀釋至1×10^8CFU/mL，使用背負(fù)式噴霧器均勻噴施在番茄植株的葉片、莖、花和果實(shí)上，確保植株表面均勻覆蓋菌液；灌根處理則是將相同濃度的復(fù)合菌劑直接澆灌到番茄植株根部周圍的土壤中，每株澆灌量為200-300mL，使菌劑能夠充分接觸根系；涂抹處理是將復(fù)合菌劑涂抹在番茄植株的傷口、花柄、果柄等易感染部位，以增強(qiáng)局部的防治效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同使用方法的防治效果存在明顯差異。噴霧處理的防治效果最好，在盆栽試驗(yàn)中，噴霧處理的復(fù)合菌劑2:1處理組防治效果達(dá)到78.67%，顯著高于灌根處理的65.43%和涂抹處理的58.32%（P<0.05）。在田間試驗(yàn)中，噴霧處理的防治效果同樣最佳，達(dá)到75.23%，灌根處理為62.15%，涂抹處理為55.34%。這是因?yàn)閲婌F處理能夠使復(fù)合菌劑均勻地覆蓋在番茄植株的表面，生防細(xì)菌能夠更好地與病原菌接觸，發(fā)揮拮抗作用和誘導(dǎo)植物抗性的作用；而灌根處理主要作用于根系，對(duì)地上部分的防治效果相對(duì)較弱；涂抹處理雖然能夠在局部增強(qiáng)防治效果，但覆蓋范圍有限，整體防治效果不如噴霧處理。在施藥時(shí)期方面，分別設(shè)置了發(fā)病前預(yù)防、發(fā)病初期和發(fā)病中期三個(gè)時(shí)期進(jìn)行施藥。發(fā)病前預(yù)防是在番茄植株未出現(xiàn)灰霉病癥狀時(shí)，提前噴施復(fù)合菌劑；發(fā)病初期施藥是在植株剛剛出現(xiàn)少量病斑時(shí)進(jìn)行處理；發(fā)病中期施藥則是在病斑已經(jīng)明顯擴(kuò)展、病情較為嚴(yán)重時(shí)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，發(fā)病前預(yù)防的防治效果最佳，盆栽試驗(yàn)中，發(fā)病前預(yù)防的復(fù)合菌劑2:1處理組防治效果達(dá)到82.31%，顯著高于發(fā)病初期施藥的75.67%和發(fā)病中期施藥的60.23%（P<0.05）。在田間試驗(yàn)中，發(fā)病前預(yù)防的防治效果也顯著優(yōu)于其他兩個(gè)時(shí)期，達(dá)到79.67%。這是因?yàn)樵诎l(fā)病前預(yù)防施藥，復(fù)合菌劑中的生防細(xì)菌能夠提前在番茄植株表面定殖，形成優(yōu)勢(shì)菌群，有效阻止病原菌的侵染；而發(fā)病初期施藥雖然能夠在一定程度上控制病情發(fā)展，但病原菌已經(jīng)開(kāi)始侵染，防治效果相對(duì)降低；發(fā)病中期施藥時(shí)，病情已經(jīng)較為嚴(yán)重，病原菌大量繁殖，復(fù)合菌劑的防治效果受到較大影響。綜上所述，復(fù)合菌劑防治番茄灰霉病時(shí)，采用噴霧的使用方法，在發(fā)病前進(jìn)行預(yù)防施藥，能夠取得最佳的防治效果。在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)番茄灰霉病的發(fā)生規(guī)律和田間實(shí)際情況，選擇合適的使用方法和施藥時(shí)期，以充分發(fā)揮復(fù)合菌劑的防治作用。六、結(jié)論與展望6.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，對(duì)兩株生防細(xì)菌復(fù)合菌劑防治番茄灰霉病的效果、作用機(jī)制及影響因素進(jìn)行了深入探究，取得了以下主要研究成果：復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果顯著：通過(guò)盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)，系統(tǒng)研究了不同配比的復(fù)合菌劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果。結(jié)果表明，復(fù)合菌劑各處理組均能顯著降低番茄灰霉病的發(fā)病率和病情指數(shù)，提高防治效果。在盆栽試驗(yàn)中，復(fù)合菌劑2:1處理組的發(fā)病率為23.33%，病情指數(shù)為13.33，防治效果高達(dá)77.