DB3405/T××××-2008PAGE2PAGE1安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局?發(fā)布2025-××-××實(shí)施20安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局?發(fā)布2025-××-××實(shí)施2025-××-××發(fā)布肉牛繁育技術(shù)規(guī)程Codeofpracticeforbeefcattlebreeding（草案）DB34/T-xxxx34安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS?65.020.30CCSB43 DB/2025PAGEI前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)、安徽省畜禽遺傳資源保護(hù)中心、鳳陽(yáng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心、旌德縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心、績(jī)溪縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心、鳳陽(yáng)縣大明農(nóng)牧科技發(fā)展有限公司本文件主要起草人：宋寧、劉洪瑜、邱孝青、邵智驊、廖鳳先、涂小璐、丁路江、席海龍、陳宏達(dá)、杜煥睿、萬(wàn)穎、龍小雪、解晉、趙勇、吳永剛。PAGE3肉牛繁育技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了肉牛種公牛、繁殖母牛、發(fā)情鑒定、配種、胚胎移植、妊娠診斷等技術(shù)要求。本文件適用于肉牛保種與繁育場(chǎng)戶種公牛選育、母牛發(fā)情配種、胚胎移植及妊娠鑒定技術(shù)操作。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4143-2022牛冷凍精液GB/T25881-2010牛胚胎GB/T26938-2023牛體內(nèi)胚胎生產(chǎn)與移植技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1335-2022牛人工授精技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination用人工方法采取公牛的精液，并注入到發(fā)情母牛生殖道內(nèi)，達(dá)到母牛受胎的一種技術(shù)。3.2同期發(fā)情estrussynchronization用激素或類激素藥物處理，使一批母牛在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情。3.3超數(shù)排卵superovulation用外源性促性腺激素誘發(fā)動(dòng)物卵巢的多個(gè)卵泡發(fā)育，并排出具有受精能力卵子的方法。3.4胚胎移植embryotransfer將供體牛體內(nèi)或者體外獲得的早期胚胎移植到生理周期同步的一頭或數(shù)頭受體牛體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成正常個(gè)體的生物技術(shù)。種公牛4.1種公牛的外貌和生產(chǎn)性能，須符合品種標(biāo)準(zhǔn)，具有繁殖育種價(jià)值并作選留的公牛。4.2無(wú)傳染病，體質(zhì)健壯，發(fā)育良好，對(duì)環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，抗病力強(qiáng)。繁殖母牛5.1初配年齡宜在1.5歲以上，體重應(yīng)為成年體重的70％以上。5.2健康，繁殖機(jī)能正常。發(fā)情鑒定6.1外觀檢查6.1.1發(fā)情前期母牛興奮不安，眸叫，游走，食欲減退，追逐爬跨它牛，而它牛爬跨不予接受；陰門腫脹，松弛，充血，子宮頸口微張，有稀薄透明粘液流出，陰道壁潮紅；卵巢變軟，光滑略有增大。6.1.2發(fā)情中期母牛游走減少，它牛爬跨時(shí)站立不動(dòng)，后肢張開，頻頻舉尾，接受爬跨；子宮頸口紅潤(rùn)開張，陰道壁充血，粘液顯著增加，流出透明粘稠玻璃棒樣粘液；一側(cè)卵巢增大到0.5～1.0cm。6.1.3發(fā)情后期母牛轉(zhuǎn)入安靜，它牛爬跨時(shí)臀部避開，不接受爬跨；粘液量減少，混濁粘稠。子宮頸口緊閉，陰唇腫脹消退，重現(xiàn)皺褶，尾根緊貼陰門；卵泡增大到1.0～2.0cm，波動(dòng)明顯，泡壁變薄。6.2直腸檢查6.2.1檢查人員手臂消毒后，帶上牛用一次性長(zhǎng)臂塑料手套，涂抹潤(rùn)滑劑五指并攏呈楔形插入母牛直腸，掏出宿糞，順次觸摸子宮頸、子宮和卵巢，檢查卵泡發(fā)育程度，判斷發(fā)情程度及排卵時(shí)間。6.2.2卵泡發(fā)育一期（卵泡直徑0.5～1.0cm)，感覺是一個(gè)軟化點(diǎn)，波動(dòng)不清楚，此期持續(xù)10h。6.2.3卵泡發(fā)育二期（卵泡直徑1.0～2.0cm)，卵泡呈小球狀，波動(dòng)明顯，此期持續(xù)10～12h。6.2.4卵泡發(fā)育三期（卵泡體積不再變大，但卵泡壁變薄），卵泡有一觸即破之感，此期持續(xù)6～8h，是配種最適時(shí)間。6.2.5卵泡發(fā)育四期，卵泡破裂，排卵處形成凹陷，再經(jīng)過6～8h，黃體開始形成，大多數(shù)牛在性欲消退后10～15h排卵，初產(chǎn)牛比經(jīng)產(chǎn)牛排卵稍早。配種7.1與配公牛的選擇在避免近親交配的情況下，根據(jù)母牛的體型外貌缺點(diǎn)，采用同質(zhì)選配或異質(zhì)選配，選擇等級(jí)高于或等于母牛等級(jí)的適宜公牛。7.2自然交配種公牛與發(fā)情母牛直接配種。7.3人工授精按照NY/T1335-2022執(zhí)行。胚胎移植8.1供體牛的選擇8.1.1符合本品種特征，系譜清晰，且年齡達(dá)到1.5歲以上。8.1.2生殖器官正常，生殖周期正常、發(fā)情癥狀明顯，有兩次發(fā)情記錄且子宮恢復(fù)正常。8.1.3無(wú)卵巢囊腫、子宮內(nèi)膜炎、難產(chǎn)、產(chǎn)后癱瘓及產(chǎn)后胎衣不下等繁殖疾病，無(wú)傳染性疾病。8.1.4體況中上，體型外貌評(píng)級(jí)一級(jí)以上，健康無(wú)病。8.2受體牛的選擇8.2.1乳房發(fā)育良好，性情溫順，經(jīng)產(chǎn)牛3胎以下，應(yīng)有兩個(gè)以上連續(xù)的正常發(fā)情周期，泌乳性能、產(chǎn)犢性能良好，無(wú)連續(xù)兩次人工授精未孕記錄。牛體健康，子宮彈性、厚薄正常，卵巢發(fā)育正常。中等膘情。8.2.2當(dāng)母牛群體數(shù)量比較大時(shí)，可以選擇自然發(fā)情與供體發(fā)情時(shí)間相同或相近的母牛，一般兩者發(fā)情時(shí)間前后相差不宜超過24h。8.2.3為提高胚胎移植的成功率，需對(duì)受體牛的生理周期進(jìn)行正確評(píng)價(jià)，可采用外部表現(xiàn)、生殖道分泌物及直腸法進(jìn)行鑒定。8.3同期發(fā)情同期發(fā)情處理之前進(jìn)行直腸觸摸，檢查卵巢是否有周期性黃體。在同期發(fā)情和超數(shù)排卵激素處理時(shí)，初產(chǎn)牛使用低劑量，經(jīng)產(chǎn)牛使用高劑量。8.3.1肌肉注射前列腺素（PG）法第一次注射：在任意一天注射PG20～30mg。第二次注射：在第一次注射后第11d，第二次注射后24～96h時(shí)觀察發(fā)情。高溫季節(jié)需調(diào)整PG注射時(shí)間或增加維生素E補(bǔ)充，避免熱應(yīng)激反應(yīng)。8.3.2孕激素陰道栓塞（CIDR）法在任意一天放入CIDR，放置于子宮頸口周圍，放CIDR日定為0d，在第7～9d注射PG，第9～11d取出CIDR，觀察發(fā)情。8.4供體牛的超數(shù)排卵8.4.1促卵泡素（FSH）注射法在發(fā)情周期的第9～13d中的任何一天開始肌肉注射。FSH總量10～15mg，單次最大注射劑量2～3mg，連續(xù)注射4d，間隔12h遞減給藥。在第一次注射FSH后48h及60h，各肌肉注射一次PG。8.4.2FSH+CIDR聯(lián)合法埋植CIDR的供體，在第5d（放CIDR日定為0d）開始肌肉注射FSH。FSH總量10～15mg，單次最大注射劑量2～3mg，連續(xù)注射4d，間隔12h遞減給藥。8.4.3人工授精按照NY/T1335-2022執(zhí)行。8.5胚胎的收集8.5.1沖胚時(shí)間一般在第6～8d（發(fā)情時(shí)為0d）沖胚。此時(shí)的胚胎大多處于桑葚胚和早期囊胚階段，位于母牛的子宮角上端，此時(shí)胚胎處于游離狀態(tài)，可以通過非手術(shù)法將胚胎從子宮角沖出。8.5.2沖胚方法非手術(shù)法沖胚，主要借助于二路式?jīng)_胚器進(jìn)行。沖胚液杜氏磷酸緩沖液需確保無(wú)細(xì)菌、真菌等微生物污染。玻璃器皿與金屬器械需經(jīng)高壓蒸汽滅菌消毒。8.5.2.1牛入保定架，用2%利多卡因5～15mL在薦椎和第1尾椎之間實(shí)施硬膜外鞘麻醉。8.5.2.2清除母牛直腸糞便，并將外陰部沖洗干凈。8.5.2.3用擴(kuò)張棒擴(kuò)張子宮頸，然后插入宮頸黏液器將黏液抽出。8.5.2.4將帶內(nèi)芯的沖胚管插入子宮角，當(dāng)沖胚管到達(dá)子宮角彎處時(shí)，拔出內(nèi)芯5cm左右，再把沖胚管往子宮角前端推進(jìn)，當(dāng)內(nèi)芯再次到達(dá)子宮角彎處時(shí)，再向外適當(dāng)拔出內(nèi)芯，直到?jīng)_胚管到達(dá)子宮角前端為止。8.5.2.5先向沖胚管氣囊充空氣2～3mL，確定氣囊位置合適后，再充適量空氣固定沖胚管。8.5.2.6抽出沖胚管內(nèi)芯，連接沖胚管和三通導(dǎo)管。8.5.2.7沖胚時(shí)，先鉗住三通導(dǎo)管的輸出管，用注射器將沖胚液從輸入管注入子宮角，然后鉗住輸入管，輕緩地按摩子宮角，使沖胚液從輸出管流入集胚杯中，反復(fù)幾次，沖完一側(cè)子宮角再?zèng)_另一側(cè)，每個(gè)子宮角用500mL沖胚液。8.5.2.8兩子宮角均沖完后，將氣囊中的空氣放出，沖胚管抽出至子宮體，灌注抗生素和前列腺素。8.6檢胚從母牛生殖道沖出的沖胚液要保持在37℃，而后在20～30℃的無(wú)菌操作室內(nèi)進(jìn)行操作。記錄供體牛采胚記錄表，見附錄A.1。集卵濾皿放在40～100倍體視顯微鏡下，逐格檢查，檢出的胚胎用培養(yǎng)液清洗3次，放入含有礦物油的培養(yǎng)液中35～37℃暫存，檢胚完成后進(jìn)行等級(jí)鑒定。A、B級(jí)胚胎用于移植或冷凍。胚胎的等級(jí)分類按照GB/T25881-2010執(zhí)行。8.7胚胎的移植8.7.1胚胎的分裝向胚胎移植細(xì)管分裝胚胎時(shí)，先吸少量培養(yǎng)液于管一端，而后吸入一段空氣，然后將含有少量培養(yǎng)液的胚胎吸入，隨后再吸空氣，最后再吸入一點(diǎn)培養(yǎng)液。為了防止胚胎丟失，還需在細(xì)管的尖端保留一段空間。8.7.2胚胎的保存常溫保存采用商品或者自制的胚胎保存液，在常溫（15～25℃）下保存胚胎4～8h準(zhǔn)備移植。冷凍保存采用液氮罐保存胚胎。8.7.3移植采用非手術(shù)移植法進(jìn)行胚胎的移植。記錄受體牛胚胎移植記錄表，見附錄A.2。8.7.3.1將盛有胚胎的塑料細(xì)管裝入胚胎移植器。8.7.3.2受體牛的保定、消毒和麻醉與供體相同。8.7.3.3移植前對(duì)受體牛進(jìn)行直腸檢査，黃體達(dá)到A級(jí)的母牛用于移植。8.7.3.4移植時(shí)，首先分開受體陰唇，將移植器插入陰道，為防止陰道污染移植器，在移植器外面套上經(jīng)消毒的塑料薄膜，當(dāng)移植器前端到達(dá)子宮頸外口時(shí)，將塑料薄膜撤回，按直腸把握輸精的方法使移植器通過子宮頸，當(dāng)移植器通過子宮頸、子宮體到達(dá)子宮角時(shí)，將胚胎注入。8.7.3.5由于受體大都處于發(fā)情后6～8d，子宮頸口封閉較緊，尤其青年受體，因此通過子宮頸口比發(fā)情輸精時(shí)困難，移植者要謹(jǐn)防損傷子宮頸，初產(chǎn)母牛往往要首先使用子宮頸擴(kuò)張棒進(jìn)行擴(kuò)張。8.7.3.6胚胎移植使用的設(shè)備、器械與試劑按照GB/T26938-2023執(zhí)行。妊娠診斷9.1外部觀察法母牛配種后在下一個(gè)情期不再發(fā)情，且性情溫和，食欲大增，膘度增加，毛色越來(lái)越光亮，體重增加，腹圍增大，則為懷孕。9.2B超檢查法9.2.1準(zhǔn)備工作9.2.1.1使用B超前，應(yīng)先閱讀使用說明書，確定每個(gè)按鍵的作用。9.2.1.2將探頭與主機(jī)連接，開機(jī)調(diào)試，同時(shí)注意電量是否充足。9.2.1.3準(zhǔn)備好工作記錄本。9.2.1.4被測(cè)母牛處于自然站立姿勢(shì)，將牛頭固定牛頸枷內(nèi)，保證牛不亂動(dòng)。9.2.2檢測(cè)流程9.2.2.1操作者手臂消毒后戴一次性長(zhǎng)臂消毒手套蘸水或涂潤(rùn)滑劑，掏出直腸內(nèi)宿糞。將子宮角和卵巢在盆腔的位置觸摸清楚，初步判定子宮角或者卵巢的變化，確定B超探頭的放置位置，利于B超探頭探測(cè)。9.2.2.2將B超探頭接觸面蘸水、涂抹耦合劑或植物油，把中指平置于探頭的凹陷處，五指并攏呈錐型，用食指、無(wú)名指、大拇指及小指夾住探頭進(jìn)入直腸，放在子宮角一側(cè)（子宮角小彎或大彎處），進(jìn)行掃描，得出圖像，判定結(jié)果。9.2.3檢后處理9.2.3.1記錄好每頭牛的懷孕情況，如果發(fā)現(xiàn)沒有懷孕的牛可過2～3d再次進(jìn)行檢測(cè)。9.2.3.2B超儀使用后清洗消毒，放入儀器箱內(nèi)進(jìn)行保存。9.3直腸檢查法與6.2直腸檢查步驟相同，依據(jù)卵巢上黃體、子宮形態(tài)和質(zhì)地、子宮動(dòng)脈情況綜合判斷，參見表1。表1母牛懷孕各月份生殖器官變化情況表妊娠期卵巢子宮子宮動(dòng)脈1孕角卵巢體積增大，黃角間溝仍