標準解讀

《DB32/T 3681-2019 小麥產毒鐮刀菌種群分子分型技術規范》是一項針對小麥中產毒鐮刀菌進行分子生物學鑒定與分類的技術標準。該標準主要適用于從事小麥病害研究、植物保護以及食品安全檢測等領域的專業人員。其核心內容涵蓋了從樣品采集到最終分析結果報告的全過程指導，具體包括以下幾個方面：

首先，在樣品處理上，標準詳細規定了如何正確采集和保存疑似含有產毒鐮刀菌的小麥樣本，確保后續實驗能夠基于準確無誤的基礎材料展開。

其次，對于DNA提取，明確了推薦使用的方法和技術參數，旨在獲得高質量的遺傳物質用于下一步操作。

再者，PCR擴增是整個流程中的關鍵步驟之一，本標準不僅列舉了幾種常用的引物序列，還對反應條件如退火溫度、循環次數等進行了具體說明，以保證目標片段可以被有效擴增出來。

此外，關于電泳檢測部分，描述了如何通過凝膠電泳或毛細管電泳來分離并觀察PCR產物，進而根據條帶位置判斷是否存在特定類型的鐮刀菌DNA。

最后，在數據分析階段，介紹了如何利用軟件工具對測序數據進行比對分析，從而確定所檢測到的鐮刀菌種類及其可能產生的毒素類型。

此標準為相關領域內的研究人員提供了一套系統化的操作指南，有助于提高小麥產毒鐮刀菌監測工作的效率與準確性。


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....

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  • 正在執行有效
  • 2019-12-03 頒布
  • 2019-12-25 實施
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

江蘇省地方標準

DB32/T3681—2019

小麥產毒鐮刀菌種群分子分型技術規范

Technicalspecificationformoleculartypingoftoxin-producing

fusariumspeciesinwheat

2019-12-03發布2019-12-25實施

江蘇省市場監督管理局發布

DB32/T3681—2019

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由江蘇省農業科學院提出并歸口

。

本標準起草單位江蘇省農業科學院

:。

本標準主要起草人邢宇俊仇劍波董飛徐劍宏史建榮吳季榮陸丹丹

:、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3681—2019

小麥產毒鐮刀菌種群分子分型技術規范

1范圍

本標準規定了小麥產毒鐮刀菌種群以及產毒素化學型區分中鐮刀菌的提取擴增電泳

DNA、PCR、

檢測及結果判定方法和操作規范

。

本標準適用于產毒鐮刀菌種群及產毒化學型的定性檢測

PCR。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數

GB4789.15

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682—2008

3原理

產毒鐮刀菌經過提取后利用特異性區分引物通過普通判斷該樣品是否為禾谷鐮刀

DNA,,PCR

菌或亞洲鐮刀菌根據關鍵特異基因來區分該樣品是否產生乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇

。Tri113

乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇或者雪腐鐮刀菌烯醇化學型

(3ADON)、15(15ADON)(NIV)。

4試劑和材料

41水應符合中一級水的規定

.:GB/T6682—2008。

42培養基符合的規定

.PDA:GB4789.15。

43緩沖液

.CTAB:55mmol/LCTAB、1400mmol/LNaCl、20mmol/LEDTA、100mmol/LTris-

高壓滅菌儲存于冷暗處備用

HCl(pH8),121℃20min,2℃~8℃。

44緩沖液

.TE。

45酶溶液

.RNA(5μg/μL)。

46蛋白酶

.K(20mg/mL)。

47飽和酚

.Tri。

48酚三氯甲烷異丙醇三者比例為三氯甲烷異戊醇兩者比例為

.、、25∶24∶1;、24∶1。

49異丙醇

.。

410區分亞洲鐮刀菌和禾谷鐮刀菌引物

.

Fg16F:5'-CTCCGGATATGTTGCGTCAA-3'

Fg16R:5'-GGTAGGTATCCGACATGGCAA-3'

預期亞洲鐮刀菌擴增片段大小為預期禾谷鐮刀菌擴增片段大小為

497bp,410bp。

411區分和化學型引物

.3ADON、5ADONNIV

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