1.下列各三肽混合物，用陽離子交換樹脂，pH梯度洗脫，哪一個最先被洗下來？（選D）

A.Met-Asp-Gln：B.Glu-Asp-Val；

C.Glu-Val-Asp：D.Met-Glu-Asp

8.當要把Cys、Ser、Gly和His四種氨基酸吸附于陽離子交換樹脂柱上時，應調到什么pH

值？（選A）

A.pH4.0B.pH6.0C.pH8.0D.pH10.0

9.在下列檢測蛋白質的方法中，哪一種取決于完整的肽鏈？B.雙縮胭反應

12.商的活性中心多為一凹穴，其作用是為酶促反應營造一個疏水環境，這種結構特征是蛋

白質分子在哪個結構層次上形成的？B.三級結構

13.在酶催化機理中，側鏈基團既足?個很強的親核基團，又是?個很有效的廣義酸堿基團

的氨基酸是B.His

14.DNA分子中拓撲連環數（L）、螺旋總數（T）、超螺旋數-W）三個參數之間的關系為

A.L=T+W

15.線粒體蛋白的跨膜運送是一種：D.通過對各個蛋白質專一的載體傳送

17.別構的與不同濃度底物發生作用常呈S型曲線，這說明：A.別構醐結合一個底物后，

與下一個底物的結合能力增強

19.卜冽關于凝膠層析的敘述哪一項是正確的？B.凝膠層析可用于蛋白質分子量的測定

6.氨基酸生物合成的調節，主要依率③氨基酸合成途徑中，酶的別構效應和阻遏效應

8,用雙脫氧末端終止法測定DNA序列，要除去DNA聚合酶中的活性。②5-3.外切

9.遺傳密碼中第幾個堿基常常很少或不帶遺傳信息？—③第三個

10.有一個環肽的組成是Ala、Asp、Gly、Phe、Leu、VaL下列方法中你首先選用什么方法

作為你測定這一個肽的序列的第一步？一②胰凝乳蛋白酶水解

I.蛋白質的堿水解導致一破壞。③Trp,Arg,His

2.測得核酸樣品甲溶液的粘度遠遠大于同濃度的核酸樣品乙溶液，甲最可能是一④DNA

3.線粒體內的細胞色素C是一種①內膜外周蛋白

4.酶反應速度對底物濃度作圖，當底物濃度達到一定程度時，得到是零級反應，對此最恰

當的解釋是__③酶的活性部位被底物所飽和

5.1997年，Prusiner因在研究的重大貢獻而獲得當年諾貝爾牛.理醫學獎。①骯病毒

的生物學傳染性原理

7.耍把膜蛋白質分子完整的從膜上溶解下來可以用③去垢劑

I.利用基因工程手段，包括基因的定點突變改造蛋白質分子，使之具有更完善、更能符合

人類需求的功能。這種技術和科學被稱之為o②蛋白質工程

2.用「32p]dATP標記一個DNA片段，需要用?③DNA聚合酹

胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的峻基側肽鍵（色Trp、酪Tyr、茶丙Phe）

胰蛋白酶法：水解賴氨酸Lys.精氨酸Arg的按基側肽鍵

澳化脯法：水解蛋氨酸Mei裁基側的肽鍵

4.磺胺藥物能抑制病菌的生長是因為它是一種。②競爭性抑制劑

5.在寡聚蛋白質中，亞基間的主體排布、相互作用以及接觸部位間的空間結構稱為o

③四級結構

9.2,3一二磷酸甘油酸(DPG)通過B亞基的正電荷相互作用，使脫氧血紅蛋白的四級結構

趨于穩定。鳥類紅細胞中含有一?種不同于DPG的調節分子，也能降低血紅蛋白對氧氣

的親和力。下列物質中哪種最有可能充當鳥類紅細胞的調節分子？④乳酸

I.蛋白質可與堿共熱而水解，雖然這個過程會破壞一些氨基酸，但它卻被常用來測定蛋白

質中哪一種氨基酸的含量？_③Trp

3.二異丙基磷酰氨(DFP)是下列哪一類蛋白水解幅的專一性不可逆抑制劑①絲氨酸

蛋白酹

5.雷體激素對機體的影響是激素與受體結合后通過什么方式而實現的？______④真核調節

基因轉錄

7.膜蛋白與雙脂層主要通過下列哪種力構成生物膜？④疏水作用

10.氧化磷酸化和光合磷酸化的區別為：a.在細胞中進行部位不同b.ATP酶在膜上定位的

方向不同c.磷酸化所需的能量來源不同d.電子供體和受體不同e.能量轉化過程

中H’流動方向不同。(全選)

2.如果測定?個小肽的氨基酸順序，下列試劑中最合適的是____?PITC

3.超過濾與凝膠過濾是①兩種性質不同，用處也不同的蛋白質制備方法

4.TPCK(N-對甲苯磺酰苯內氮酰甲基酮)是下列哪個新的親和標記試劑？②胰凝乳

蛋白酹

7.細胞內外鈉鉀的運送是屬于______①主動運輸

10.寡聚脫氧胸甘酸(oligodT)纖維素柱層析分離mRNA是屬于③親和層析

I2.DNA拓撲異構酣I型和【【型的主要區別在于

①I型使DNA的?條鏈發生斷裂和再連接，II型使DNA的二條鏈同時發生斷裂利再連接。

2.有?個蛋白質樣品，經SDS及不連續PAGE檢查均顯一條帶；N端分析及C端分

機說明它只有?個端基；等電聚焦電泳中呈現?深一淺的兩條帶。一般情況下，這蚩白

質樣品最可能是@樣品呈微不均?性

3.測定蛋白質在DNA上的結合部位常用④DNasel保護足跡分析法

4.對具有正協同效應的酎,其反應速度為最大反應速度0.9時的底物濃度與反應速度為最大

反應速度0.1時的底物濃度之比值應該是③<81

6.在染色體中DNA的構象主要是②B型

7.證明DNA是遺傳信息攜帶者的科學家是③Avery、Macleod和McCarty

8.端粒酶是一種②反轉錄的

12.蛋白質變性伴隨有結構上的變化是②?些側鏈基團的暴露

14.一個速度對底物濃度作圖有S型曲線的酎___③不一定是別構酣

15.酶促反應降低反應活化能的能量來源是④陶構象變化所粹放的能量

16.基因工程技術的創建成為可能是由于發現下列哪些能？③I【型限制性內切酣

19.以下哪?個是正確的？②線粒體內膜能通透H+離子由內向外

22.有一-個肽的組成是Ala、Asp、Gly、Leu、VakPro,它的N端是封閉的，下列方法中你

首選用什么方法作為你測定這一個肽的序列的第?步？__③竣肽施水解

24.腺甘酸環化能存在于③質膜

I.在酶的分離純化中最理想的實驗結果是下面哪一項？_____?純化倍數高，回收率高

7,下列關于Z型DNA結構的敘述哪一個不正確？?它是細胞內DNA存在的主要

形式(表述正確的有：①它是左手螺旋②每個螺旋有12個堿基對，每個堿基

對上升0.37nm③DNA的主鏈取Z字型)

8.下列關于DNA超螺旋的敘述哪一個不正確？②超螺旋密度為正值，表示DNA螺

旋不足(正緊負松,其余表述正確的有：①超螺旋密度為負值，表示DNA螺旋不足③大

部分細胞DNA呈負超螺旋④當DNA分子處于某種結構張力之下時才能形成超螺旋)

9.下列哪種技術常用于檢測凝膠電泳分離后的限制性能切片段？②Somhernblowing

10.下列關于離子交換樹脂的敘述哪一個不正確？_____?陽離子交換樹脂可交換的離子

是陰離子(其余表述正確的有：①是人工合成的不溶于水的高分子聚合物②陰離子

交換樹脂可交換的離子是陰離子③有陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂兩類)

12.在紅細胞中，谷胱甘肽的氧化為什么會降低血紅蛋白輸氧的能力？③氧化形式的

谷胱甘肽可使血紅蛋白中的鐵保持在正三價狀態

13.下面關于競爭性抑制劑的論述正確的是④如果抑制作用發生，需它與底物反應以

消除它對酶促反應的影響

16.不同的細胞對?不同的第二信使產生不同的反應是因為不同的細胞具有②不同的

酶組成

17.喝一杯濃茶或一杯濃咖啡會產生什么影響？②增強腎上腺素作用

19.預測下面哪種基因組在紫外線照射下最容易發生突變？②單鏈DNA病毒

21.測定酎促反應的初速度是為了③防止逆反應對結果分析所造成的影響

22.粉肽酶A促使底物的水解,下面哪個是其重要的機制？④通過結合Zn"的活化水

24.下面關于某一種酣的幾個同工酬的敘述正確的是「_②對同一底物具有小同專一性

25.下列哪種方法可得到蛋白質的“指紋圖譜"?用胰蛋白陶水解，再進行紙層析或

紙電泳

2.纖維素柱層析分離蛋白質是根據蛋白質的分子大小。(x)

4.離子載體是異類可溶于脂雙層的疏水性的小分子，它能增加脂雙層對離子的通透性。(V)

6.真核生物的基因不組成操縱子，不生成多順反子mRNA。(、)

10.正協同效應使酹促反應速度增加。(x)

11.酹活性的測定實際上就是酎的定量測定。N)

14.將含有Asp、Gly、Thr、Lys和Leu的溶液(pH為3.0)加到預先用同樣緩沖液平衡過的

Dower-50陽離子交換樹脂中，隨后用該緩沖液洗脫此柱，5和氨基酸將按以下順序洗脫下

來：Asp、Thr>Gly、Leu和Lys。(V)

15.從理論上說，可用Edman降解法測定任何非封閉性多肽的全部氨基酸順序。N)

16.真核細胞染色體DNA結構特點之一是具有重復序列，高度重復序列一般位于著絲點附

近，通常不轉錄。N)

19.逆轉錄病毒的基因組RNA實際上是一種多順反子mRNAoN)

20.與蛋白酶不同的是，ribozyme的活性不需要有特定的三維結構。(x)

5.操縱子學說適合于原核生物，又適合于真核生物，是說明基因調節的最好模型。(X)

7.生物膜象分子篩一樣時大分子不能通過，對小分子能以很高的速度通過。(X)

9.線粒體內膜的電位是基質側較負，胞液側較正。N)內負外正

12.因為密碼子是不重疊的，所以基因也不重疊。(X)

7.前反應中，底物類似物的抑制作用和過量底物的抑制作用基本上是相同的。(X)

10.鐮刀型細胞貧血病是一種先天性遺傳病，其病因是由于血紅蛋白代謝發生障礙。(X)

4.利用過渡態類似物做半抗原，免疫動物獲得抗體，從抗體中篩選具有催化活性的免疫球

蛋白。這是迄今為止獲得抗體的的重要方法。(<)

2.結晶了的酣是純酶。(x)

3.膜的獨特功能由特定的蛋白質執行，功能越復雜的生物膜，膜蛋白含量越高。(V)

6.蛋白質折登的主要驅動力是氫鍵。(x)

7.SOD專一性的清除超氧物負離子，是細胞防御系統的重要組成部分。(J)

8.在生物圈中，能量從光氧生物流向化氧生物，而物質在二者之間循環。(J)

9.核糖體不僅存在于細胞質中，也存在于線粒體和葉綠體中。(J)

I0.RNA病毒不含有DNA基因組，所以根據分子遺傳中心法貝J,它必須先進行逆轉錄，才

能復制和增殖。(x)

II.絲氨酸是蛋白質磷酸化位點，因此蛋白質中含有的絲氨酸殘基均能被磷酸化。(X)

12.蛋白質分子中的亞基也稱為結構域。(x)

I.含有四個二硫鍵的胰臟核糖核酸酶，若用筑基乙醇和尿素使其還原和變性，由于化學鍵

遭到破壞和高級結構松散.已經無法恢復其原有功能。(x)

7.所有別構酣都是寡聚蛋白。N)

8.?個基質連有Poly(u)配基內滎和層析柱，可方便的從細胞勻漿中分離出真核的RNA0(4)

10.反轉錄前僅具有RNA指導的DNA聚合酹的活力。(x)

I.某?生物樣品，與萍三酮反應呈陰性肺氨酸，羥脯氨酸，用峻肽陶A和B作用后脯■酸

測不出游離氨基酸，用胰凝乳蛋白酹作用后也不失活。因此可肯定它屬非肽類物質。(x)

3.糖蛋白合成時蛋白質糖基化位點主要在Ser、Asn殘基上。(<)

4.酹的最適溫度和最適pH都是醉的特征性常數。(x)

5.真核生物的基因不組成操縱子，不生成多順反子mRNA。(、)

6.NO是最小的信使分子之一。Z)

7.單克隆抗體和多克隆抗體的區別在于后者可以抗多種抗原。(x)

8.米氏常數是酶與底物形成復合物的結合常數。(x)

I2.RNA不攜帶遺傳信息。(x)

13.濱乙錠(EB)與雙鏈DNA利某些有雙鏈螺旋區RNA特界結合后，產生很強的熒光，是由

于EB能插入到核酸堿基對之間。(7)

14.核酸的生物功能都是通過與蛋白質的相互作用完成。（X）

15.在所有病毒中，迄今為止，沒有發現既含有RNA、又含有DNA的病毒。（4）

17.迄今為止，發現所有的第二信使都是通過蛋白激悔起作用的。（x）

21.在完整的紅細胞懸浮液中，即使加ATP、Na?和K*,也測不出Na"、K'-ATPase活力。（、’）

22.同一種神經介質作用于?不同靶細胞引起截然相反的作用，是因為靶細胞上受體不同。（Y）

23.激素與靶細胞中特異受體的結合親和力很高，但大多是?種可逆反應。（4）

25.萌蛋白最適pH值只取決于酶蛋白本身的結構。（x）

14.IP.;引起胞內Ca*的動員是其傳遞信號的方式。

15.DNA局部構象常是DNA一結合蛋白之間結合的標志。

17.蛋白質可逆磷酸化在介導信號物質生理效應中起到中心樞紐的作用。

19.產生限制性內切酶的細菌通過甲基化來保護自身的DNAK被降解。

20.密碼子不重疊，但基因有可能重疊。

3.因為絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸都是蛋白質磷酸化的位點，因此所有蛋白質激酶均能使蛋

白質中這三種氨基酸殘基磷酸化。

9.呼吸作用和光合作用均能導致線粒體或葉綠體基質值pH升高。

18.生物膜中膽固醇的作用是降低膜的流動性。

I.nuncodingRNA（非編碼RNA）是近年來發現，的關能夠轉錄但不能編碼蛋白質，具

有特定功能的RNA分子，在細胞中執行著許多功能，其中微RNA（miRNA）和小干擾RNA

（siRNA）越來越受到人們的關注與其他RNA作用模式不同的是，他們均對編碼RNA有干

擾作用。

2.核糖體循環

3.信號肽假說

4.mulecularchaperone（分子伴侶）一類可以介導蛋白質正確折卷與裝配，但其本身并

不構成被介導蛋白質的組成部分的蛋白因子。

5.酶聯免疫分析

6.蛋白質組學

是將醉作為標記物質，使其與抗原（或抗體）結合成施?抗原（或抗體）復合物，利用復

合物與待測抗體（或抗原〉專一且定量的結合關系，通過測定待測抗體（或抗原）結合的標

記酶活力，從而計算出抗原（或抗體）的量。相應于基因組學，其是在整體水平上研究細胞

內所有蛋白質的組成及其動態變化規律的新興學科。

7.親和標記法

8.Kcal型抑制劑

根據酎與底物特異結合的性質，設計或合成一種含有反應基團的底物類似物作為活性部位

基團的標記試劑，這種試劑象底物一樣進入活性部位，接近結合位點，并以其活波的化學基

團與活性部位的某一基團共價結合，而指示出酹活性部位的特征。

四、問答題（任選作三題，多選不計分，10X3=30）

I.闡述生物信息學的介入對核酸、蛋白質結構與功能研究的影響。

2.何謂guanylaiebindingprolein?請寫出其亞基組成、主要類型及各類型主要功能，

并用箭頭圖示guanylatcbindingprotein偶聯的受體信號傳遞途徑。

G蛋白:一般是指一類與膜受體偶聯的異三聚體結合蛋白，其具有和GTP結合并催化GTP

水解成GDP的能力，由a、0、丫三個亞基組成，可充當細胞膜上受體和靶酶之間的信號傳

遞體。

①Gs：能活化腺昔酸環化酶（ACasc）

②Gi、Go、Gt系列：Gi：抑制ACase、電位門控Ca2+通道和磷脂酰肌醇專一的PLC,活

化K+通道和Na+通道等；Go：抑制神經元Ca‘通道Gt：活化cGMP專一的

PDE

③GQ系列：活化磷脂酰肌醇專一的PLC

④GR系列：功能不詳，可能和活化JNK、Na*/K+交換系統和活化立早基因轉錄有關

3.闡述DNA指紋法（fingerprinting）為什么可用于不同個體基因組的比較？

DNA指紋法是指：由限制性內切能把很大的DNA分子降解成很多長短不同的較小片段，

其數目和長度反映了限制性內切酎的切點在DNA分子上的分布，它能作為某DNA或含有

這種DNA生物所特有的“指紋”。因為不同個體的等為基因之間堿基代換、重排、插入、

缺失等都會引起這種“指紋的多態性。

4.一種分子量為150,（XX）d的酶，其活性部位含有一個半胱氨酸殘基。已知使5ml含

有的酣溶液完全失活需要3.0*l（）-2mg的碘乙酰胺（ICH2coNH2,分子量185d）.

問該能是由兒個亞基組成的？

1.2X5X185/3.0*102=37000

150000/37000^4

5.從一種植物中葉中得到了粗酶提取液，每mL含蛋白質32mg。在提取條件下，10uL

提取液的催化反應速度為0.14pmol/min,取50ml提取液用硫酸胺鹽析分離。將飽和度

0.3-0.6的沉淀物溶于10mL水中，此溶液的蛋白濃度為50mg/mL,從中取出10uL,測

定其反應速度為0.65umol/min。計算：1）提取過程中酶的回收百分率；2）酶的提純倍

數。（10分）

1）粗提取液的總活力=0.14Rmol/min+（10uL*103）X50Ml=700IU

鹽析后的總活力=0.65pmol/min+(10uL*10:<)X10ML=650IU

提取過程中酶的回收H分率=650/700*100%=92.86%

2)粗提取液的比活力=0.14pmol/min+(10uL*10'3)/32ng/Ml=7/16

鹽析后的比活力==0.65Nmol/min+(10uL*10')/50mg/mL=l.3

酣的提純倍數=1.3+7/16=2.97

6.有一個七肽，經分析它的氨基酸組成是：Lys,Gly,Arg,Phe,Ala,Tyr,Ser。此肽未經胰

凝乳蛋白酶處理時，與FDNP反應不產生DNP-氨基酸。經胰凝乳蛋白酶(Phe,Tyr,Trp)

處理后，此肽斷裂成兩個肽段，共氨基酸組成分別為Ala,Tyr,Ser和Gly,Phe,Lys,

Argo這兩個肽段分別與FDNP反應，可分別產生DNP-Ser和DNP-Lys。此肽與胰蛋白

酶(Lys,Arg)反應，同樣能生成兩個肽段，它們的氨基酸組成分別是Arg,Gly和

PhcJyr.Lys,Ser,Ala0試問此七肽的一級結構是怎樣的？給出分析過程。，并闡述理由。

1)此肽未經胰凝乳蛋白酣處理時，與FDNP反應不產生DNP-氨基酸：此肽為環肽

2)胰凝乳蛋白酶處理后，此肽斷裂成兩個肽段，其氨基酸組成分別為Ala,Tyr,Ser

和Gly>Phe,Lys,Arg：

(Ala-Ser)-Tyr或(Scr-Ala)-Tyr

()-Phe

3)兩個肽段分別與FDNP反應，可分別產生DNP-Ser和DNP-Lys：

兩個肽鏈的N末端為Ser-和Lys-

4)可以得出這兩個肽鏈為：

Ser-Ala-Tyr；Lys-()-Phe

5)胰蛋白酣反應，能生成兩個肽段，它們的氨基酸組成分別是Arg,Gly和

Phe,Tyr.Lys,Ser,Ala：

Gly-Arg；()-Lys

6)根據以上可得：Lys-Gly-Arg-Phe：Scr-Ala-Tyr-Lys

所以推出：環肽Ser-Ala-Tyr-Lys—Gly-Arg-Phe

1、primaryactictansport直接利用細胞膜上的ATP將物質逆著濃度梯度轉運

2^noncodingRNA

3、AFLP

4、親和層析

5、具有酶活性受體

6、拉氏構象圖

7、骯病毒

8、結構域

9、Hsp70系統.Hsp70系統Hsp70,Hsp40,GrpE(核甘酸交換因子)，它們利用ATP

水解供能來改變底物蛋白質結構，交換因子將ADP重新牛.成ATP

10、Kcat型不可逆抑制劑

二、解答(8選5,5X6=30分)

1、簡述DNA酶法測序的基本思路。

2、DNA超螺旋形成的意義。

3、簡述糖蛋白的結構特點和主要功能。

4、為什么說端粒酶是一種逆轉錄酶？

5、胞內第二信使Ca2+信號與cAMP信號產生和滅活的區別是什么？

6、蛋白質凝膠過濾和超濾是一回事嗎？請解釋。

7、簡述細胞信號轉導的主要規律。

細胞信號傳遞途徑是一人復雜的網絡系統，一種胞間信號被靶細胞質膜或胞內的受體

接收，通過跨膜信號轉導系統傳入胞內，然后由一系列蛋白質傳遞于效應分子，產生預定的

生物學效應。這樣的信號傳遞途徑實際上是一個把原初信號逐級放大的級聯系統，使得一種

胞間信號的微弱刺激可以引發下游千仃種附和轉錄因子的活性改變，導致生物體內明顯的生

理變化。

8、設計實驗判斷可逆與不可逆抑制作用。

三、問答（5選3,3X10=30分）

1、為什么同工酹可以作為?種分子標記？試以SOD的電泳方法為例闡述同工的染色的原理

及其優越性。

2、繪出血紅蛋白和肌紅蛋白的氧合曲線圖，根據各自氧合曲線的特點，對血紅蛋白和肌紅

蛋白的結構和功能關系進行分析。

3、闡述氧化磷酸化偶聯的機制，比較線粒體氧化磷酸化與葉綠體光合磷酸化的異同。

4、酶高效催化的根本原因是什么？有哪些影響因素？結合實例討論影響酶催化效率的主要

因素。

5、試述細胞內蛋白質降解途徑及其生物學意義。

1.簡述信號肽的特點和轉運機制。

信號肽具有兩個特點：1）位于分泌蛋白前體的N-端2）引導分泌蛋白進入膜以后，信號

肽將被內質網腔內的信號肽酶切除

信號肽的轉運機制：信號肽運作的機制相當復雜，有關組分包括信號肽識別顆粒（SRP）及

其受體、信號序列受體（SSR）、核糖體受體和信號肽的復合物。信號肽發揮作用時，首先

是尚在延伸的、仍與核糖體結合的新生肽鏈中的信號肽與SRP結合，然后通過三重結合（即

信號肽與SSR的結合、SRP及其受體結合、核糖體及其受體的結合）。當信號肽將新生肽鏈

引導進入內質網腔內后，在信號肽酷復合物的作用下，己完成使命的信號肽被切除。

2.同工酶產生的原因是什么？研究同工酶有何意義？為什么可以用電泳的方法分離鑒定同

工酶？

初級同工前產生的原因是由于酎蛋白的編碼基因不同，次級同工觸產生的原因是雖然編碼基

因相同，但基因轉錄產物n】RNA或翻譯產物加工過程不同。

1在遺傳學和分類學上，同工苒提供了一種精良的判別遺傳標志的工具；

2在發育學上，同工酶有效的標志細胞類型及細胞在不同條件下的分化情況，以及個體發育

和系統發育的關系。

3在生物化學和生理學上，根據不同器官組織中同工萌的動力學、底物專一性、輔助因子專

一性、酶的變構性等性質的差異，從而解釋它們代謝功能的差兄。

4在醫學和臨床診斷上，體內同工酶的變化，可看作機體組織損傷、或遺傳缺陷，或腫瘤分

化的分子標記。因為同工酹的功能雖然相同，但是其分子量和其所帶電荷數有差異，故可以

用電泳的分析方法鑒定。

3.生物膜主要有哪些生物學功能？任舉一例說明膜結構與功能的密切關系。

生物膜的生物學功能可以概括如下：

1）區域化或房室化2）物質的跨膜運輸3）能量轉換（氧化磷酸化）4）細胞識別

4.研究蛋白質一級結構有哪些意義？

蛋白質的一級結構即多肽鏈中氨基酸殘基的排列順序（N端一C端）是由基因編碼的，是蛋

白質高級結構的基礎，因此一級結構的測定成為十分重要的基礎研究。一級結構的特定的氨

基酸序列決定了肽鏈的折疊模式，從而決定其高級結構，從而決定其功能。

一級結構的種屬差異與分子進化（細胞色素C）

一級結構的變異與分子病（鐮刀狀紅細胞）

5.何謂DNA的變性、復性和雜交？DNA的雜交在生物化學和分子生物學研究中的應用？

試舉例說明。

DNA變性是指在一系列物理化學因素作用下DNA一級結構不變而二級結構中的氫鍵遭到

破壞，DNA雙螺旋結構部分解體，或全部解離成兩條單鏈DNA分子的過程，兩股鏈成為

無規則線團，叫變性。

引起變性的外界條件消除后（如加熱變性后再緩慢降溫），已分開的雙螺旋又可重新締合成

雙螺旋，成為復性。

不同末源的DNA分子放在一起熱變性，然后慢慢冷卻，讓其復性，若這些異源DNA之間

有互補的序列或部分互補的序列，則復性使會形成雜交分子。DNA與互補的RNA之間也可

以發生雜交。

核酸的雜交在分子生物學和生物化學中應用廣泛，如將已知基因的DNA制成具有同位素標

記的DNA片段一DNA探針，用其去檢測未知DNA分子。

1.蛋白質特定構象形成的原因是什么？環境因素對蛋白質構象形成有無影響？為什么？

蛋白質特定構象形成的驅動力有R-側鏈基團間的相互作用：肽鏈與環境水分了的相互作用：

天然構象的形成過程是一個自發的過程。

環境因素對蛋白質構象形成有影響，因為維持蛋白質高級結構的主要是氫鍵、范得華力、疏

水作用利鹽鍵等次級鍵，環境因素會影響這些作用力的形成和大小，從而影響蛋白質構象的

形成。

2.試比較光合磷酸化和氧化磷酸化能量轉化機制的異同。

光合磷酸化的能量是來自光能的激發，是儲存能量，

氧化磷酸化能量是來自底物的分解?，釋放能量。

3.激素受體有哪兩大類？試比較其信號轉導機制。

蛋白質圣白康?PO,----生物學作昭

硝酸化

含氮激素作用機制的第二信使學說：激素是第一信使，它可與靶細胞膜上具有立體構型的專

?性受體結合，結合后激活膜上的腺甘酸環化的系統，在mg+存在的情況下腺甘酸環化酹

促使ATP轉化為cAMP,cAMP使無活性的蛋白激酶PKC激活，促使細胞內多種蛋白質發

生磷酸化反應，從而引起靶細胞各種生理生化反應。

類固醇激素作用機制的基因表達學說：類固醇激素分了一小、呈脂溶性，因此可透過細胞膜進

入細胞。在進入細胞之后，先丁?細胞內的胞漿受體結合，形成激素-胞漿受體結合物而進入

細胞核內，再與核內受體結合，形成激素-核內受體復合物從而激發DNA的轉錄過程，生成

新的mRNA,誘導蛋白質的合成，引起相應的生物效應。

6.分子篩層析和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳皆可用于測定蛋白質分子量，其原理有何差異？

各自特點和適用范闈。

分子篩層析，又稱凝膠層析、排阻凝膠層析、凝膠過濾，利用凝膠把物質按分子大小不同進

行分離的一種方法。由于被分離物質的分子大小(直徑)和形狀不同，洗脫時，大分子物質

由于直徑大于凝膠網孔而不能進入凝膠內部，只能沿著凝膠顆粒間的孔隙,隨溶劑向卜移動,

因此流程短，首先流出層析柱，而小分子物質，由于直徑小于凝膠網孔，能自由進入膠粒網

孔，使之洗脫時流程增長，移動速度變慢而后流出層析柱。

可用于測定氨基酸，脫鹽和濃縮，分離提純生物大分子，除去熱源物質

SDS,SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理是當SDS與蛋白質結合后，蛋白質分子即帶

有大量的負電荷，并遠遠超過r其原來的電荷，從而使天然蛋白質分子間的電荷差別就降低

乃至消除了，與此同時蛋白質在SDS作用下結構變得松散，形狀趨向一致，所以各種SDS-

蛋白質兔合物在電泳時產生的脈動率差異，就反映了分子量的大小。

可用于測PH值和蛋白質的亞基數

???7.將四種二肽(Gly-Gly,His-His,Asp-Asp,Lys-Lys)的混合物先在PH5.6緩沖系統

中進行電泳⑴，再轉90在PH7.2緩沖系統中進行電泳(H),最后用帝三酮顯色。請在下圖

中繪出該試驗電泳圖譜，并簡述理由。

3.什么是抗體？試以IgG的結構為例，分析抗體的重要功能，并簡要說明抗體的多樣性。

當外源性物質，如蛋白質、毒素、糖蛋白、脂蛋白等進入人或動物體內時?，機體的免疫系統

便產生相應的免疫球蛋白并與之結合，以消除異物的毒害，此反應為免疫反應，此異物便是

抗原，此球蛋白便是抗體。

抗體分子的多樣性和獨特的生物學功能都能從其分子結構上找出依據，以卜以IgG為例來簡

單說明：

1）輕、羽鏈。IgG呈Y型，由4條通過二硫鍵相連的肽鏈組成，其中包括兩條相同的輕

鏈和兩條相同的重鏈。一條重旌的N-末端和相鄰輕鏈協作形成一個抗原結合位點，所以IgG

共有2個抗原結合位點，是二價的。因而一個抗體分子可以和2個抗原分子結合并交叉連接

從而使抗原沉淀。

2）可變區和不變區。IgG每條鏈在N末端有一可變區，在C末端有一不變區，由于重輕

鏈N端形成了抗原結合位點，這些區域氨基酸序列的可變性使其在結構上具有某種程度的

柔韌性，從而形成了結合不同抗原的不同專一性結合位點。

3）抗體的結構域。輕鏈折疊形成2個緊密的三維結構域，一個代表可變區，另一個代表

不變區，每條重鏈可形成4個結構域，一個可變區和三個不可變區。

4）Fab和Fc片段。木瓜金白的消化IgG釋放出Y型分子的兩個臂，各含一個抗原結合

位點，叫做Fab片段，因為Fab只有一個抗原結合位點，所以不能與抗原交叉連接。釋放出

的Y型分子的柄部稱為Fc片段，它由兩條重鏈的C端組成，易于結晶。Fc有觸發破壞抗

原的作用。例如觸發補體系統和誘導白細胞吞噬病原。

4.什么是受體？有何特征和類別？簡述一種分離提純受體的方法、原理。

受體是細胞內或細胞表面的一種天然分子，可以識別并特異地與有生物活性的化學信號分子

（配體）結合，從而激活或啟動細胞內一系列生物化學反應最后導致該信號物質特定的生物

效應。絕大多數受體為蛋白質，極少數是非蛋白受體。

受體與配體結合具有特異性、親和性、飽和性

受體分為細胞內受體（笛醇類激素）和細胞外受體（離子型通道受體、G蛋白偶聯型受體、

具有酶活性的受體）。

分子克隆技術提取微量受體：從細胞中提取所有微量mRNA逆轉錄成cDNA,將其重組入

載體質粒子，繼而讓其轉染缺乏受體的培養細胞群，其中少數細胞可能還有能編碼受體所需

的cDNA,并表達成表面受體。

1.有一種七肽具有神經傳導抑制劑的作用，其氨基酸組成為Ala5、Phel、Lysl,七肽與FDNB

反應后經酸水解，釋放出DNP—Aku用胰蛋白酶處理產生組成為Ala3、Phel的四肽和組

成為Ala2、Lysl的三肽。與胰凝乳蛋白酶作用則生成游離的Ala和一個六肽。試推導出該

七肽的氨基酸序列。

1）七肽與FDNB反應后經酸水解，釋放出DNP—Ala：N末端是Ala-

2）與胰凝乳蛋白酶作用則生成游離的Ala和一個六肽：C末端是-Phe-Ala

3）用胰蛋白酶處理產生組成為Ala3、Phel的四肽和組成為Ala2、Lysl的三肽：

Ala-Ala-Phe-Ala和Ala-Ala-Lys

所以推除Ala-Ala-Lys-Ala-Ala-Phe-Ala

胰凝乳蛋白醐（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的殘基側肽健（色Trp、酪Tyr、苯丙

Phe）胰蛋白酶法：水解賴氨酸Lys、精氨酸Arg的按基側肽槌

浪化肺法：水解蛋氨酸Met粉基側的肽鍵

2.畫出肌紅蛋白（Mb）和血紅蛋白（Hb）的氧合曲線，并討論各自氧合曲線與其功能相關性。

4.什么是雙信使信號轉導系統，試述胞外信息通過該系統在胞內得以傳遞的機制。

生理生化反應

激素通過結合到細胞表面的膜受體上，激活G蛋白，G蛋白開啟磷酯朝C(PLC)的活性，

從而使磷酸酰肌醇(PIP2)分解為肌醇三磷酸(IP3)和二酰甘油(DG)。

1)DG進一步活化PKC,促使靶蛋白中的Thr和Scr殘基磷酸化，最終改變一系列萌的活

性，引起生理生化反應。

2)IP3則作用于內質網膜受體，打開Ca+離子通道，升高胞質內【Ca+I

a.Ca+的釋放改變CaM和其他鈣傳感器的構象，使之變得更容易與靶蛋白結合，改變靶蛋白

的生物活性，從而完成激素的聯級放大作用，在多種細胞內引起廣泛的生理效應。

b.Ca+的釋放也活化了PKC,從而改變?系列的的活性，引起生理生化反應。

5.試述三種直接或間接的方法，以證明某種外源基因已在轉基因生物中存在或表達。

1)載體特征的直接篩選：通常載體都帶有可選擇的遺傳標志，最常用的有抗藥性標記、營

養標記利顯色標記。對噬菌體而言，噬菌斑的形成則是其自我選擇的結果。

2)差別雜交或扣除雜交法分離克隆基因：扣除雜交就是用一般細胞的cDNA與特殊細胞的

cDNA雜交先扣除一般共有的cDNA,再將剩余的特異的cDNA進行克隆。

3)免疫學方法：用放射性固定酎或發光物質標記抗體，可以十分靈敏檢測到外源基因的存

在或表達。

4)細菌菌落或噬菌斑的原位雜交：細菌菌落一一復印至硝酸纖維素膜上一一aOH使菌體裂

解,DNA變性，然后中和——單鏈DNA結合到膜上——32P-CDNA朵交——放射自顯影一

一與放射性cDNA雜交的菌斑。

1.某天然九肽，其組成為:Gly2、Phe2^Tyrl、Metl、AspkArgl、Prol,經胰凝乳蛋白

酎水解后可分得一個五肽和?個四肽，四肽的組成為Phel、Tyrl、Glyl和ProL此九肽的

CNBr處理產物再經陽離子交換樹脂層析并洗脫得一個組成為Argl、PhcKGlyl的三肽，

此九肽經胰蛋白酶水解可得Pie,如用FDNB反應后再水解得DNP-Tyr.請寫出這九肽的全

順序，并闡述解析過程。

Tyr--oo-Phe-Asp-Met-Gly-Arg-Phe

2.什么是核酶和抗體的？它們和酶有什么不同？

核觸，把對RNA具有催化活性的RNA叫做核酹，化學本質為RNA,?般酹化學本質為蛋

白質。

抗體酶，又稱催化抗體，是指通過一系列生物化學技術方法制備出的具有催化活性的抗體，，

它除了具有相應的免疫學性質外還具有類似于酶能催化某種活化反應的性質，在?般陶基礎

之上還具有相應免疫學性質。

3.某?均?的DNA樣品，用EcoRI、HpeIkHindIII3種限制性內切酶及它們的組合進行

的切，測出得到的DNA片段的大小如下：

氏oRI1.3kb(x2)

HpeII2.6kb

HindIII2.6kb

EcoR1+HpeIIO5kbO.8kb1.3kb

Hpe11+HindIIIl.2kbl.4kb

EcoRI+Hpc11+HindIIIO.5kb0.6kbO.7kbO.8kb

指出這種分子是線性還是環形的，并繪出限制性圖譜。

4.試分析同源細胞色素C結構的種屬差異和保守性，闡明其結構和功能的統一性。

對比不同有機體中表現同一功能的蛋白質的氨基酸序列，結果發現它們不僅長度相同或相

近，而且其中許多位置的氨基酸對于不同種屬來說都相同，稱為不變殘基，其他部位的殘基

對于不同種屬則有相當大的變化，稱為可變殘基。同源蛋白質的氨基酸序列中的這種相似性

被稱為順序同源性。不變殘基對于同源蛋白質的功能是必須的，可變殘基的變化雖不影響蛋

白質的功能，卻反映了這些種屬在系統上的聯系，

細胞色素C三級結構的保守性。35個不變的AA殘基，是細胞色素C的生物功能所不可缺

少的。其中有的可能參加維持分子構象，有的可能參與電子傳遞，有的可能參與“識別”并

結合細胞色素C還原的和氧化酶。

5.細胞表面受體主要有哪些類型？各具有什么特點，作用機理有何區別？

離子通道性蛋白（配體閘門通道）：配體結合--通道打開

G-蛋白偶聯型受體：配體結合-一受體構象發生改變G蛋白激活——靶酶激活

具有酹活性的受體：配體結合陶激活

1.敘述血紅蛋白的結構特征。這種結構和它的功能有什么關系？血紅蛋白和氧的結合受哪

些因素的影響？

人體內的血紅蛋白由四個亞基組成，分別為兩個a亞基和兩個B亞基，自動組裝成a2優形

態,血紅蛋白的每個亞基由一條肽鏈和一個血紅素分子構成，肽鏈盤繞折登成球形，把血紅

素分子包在里面（這條肽鏈盤繞成的球形結構又叫球蛋白），血紅素分子是一個具有口卜咻結

構的小分子，在其中心有一個亞鐵離子。

血紅蛋白與氧結合：首先，一個氧分子與血紅蛋白中的一個亞基結合，與氧結合之后的珠蛋

白結構發生變化，造成整個血紅蛋白結構的變化，這種變化使得第二個氧分子相比于第一個

氧分子更容易尋找到血紅蛋白的另一個亞基結合，而它的結合會進一步促使第三個氧分了?的

結合，以此類推，直至構成血紅蛋白的四個亞基分別與四個氧分子結合。在組織內釋放氧的

過程也是這樣，一個氧分子的離去會刺激另一個的離去，直至完全釋放所有的氧分子。

3.什么是遺傳信息傳遞的中心法則？你認為用中心法則描述的遺傳信息傳遞規律還有哪些

問題有待補充？為什么說玩病毒的發現是對此法則的挑戰？

目前普騙認為遺傳信息不能從蛋白質流向核酸，但是DNA是否可以不經過RNA直接作為

指令蛋白質合成的模板，尚待實驗證明。

Prion骯病毒是一類高度保守的糖蛋白，其廣泛表達于脊椎動物，目與神經系統功能的維持、

淋巴細胞信號轉導、核酸代謝