WB實驗試題及答案

單項選擇題（每題2分，共10題）1.WB實驗中封閉的目的是？A.增強抗體結合B.防止非特異性結合C.清洗膜D.標記蛋白答案：B2.WB實驗常用的蛋白上樣緩沖液成分不包括？A.SDSB.甘油C.乙醇D.溴酚藍答案：C3.轉膜時常用的膜是？A.尼龍膜B.PVDF膜C.濾紙D.保鮮膜答案：B4.一抗稀釋液中通常添加？A.葡萄糖B.BSAC.肝素D.抗生素答案：B5.用于檢測蛋白分子量的是？A.預染markerB.內參抗體C.封閉液D.顯色液答案：A6.WB實驗中蛋白變性常用的方法是？A.加熱B.加酸C.加堿D.超聲答案：A7.二抗的作用是？A.識別抗原B.識別一抗C.標記抗原D.清洗膜答案：B8.常用的顯色方法不包括？A.化學發光法B.放射性自顯影C.銀染法D.比色法答案：C9.轉膜的關鍵參數不包括？A.電壓B.時間C.溫度D.濕度答案：D10.WB實驗中樣本制備時首先要進行？A.蛋白定量B.離心C.加樣D.電泳答案：A多項選擇題（每題2分，共10題）1.WB實驗中可能用到的儀器有？A.電泳儀B.轉膜儀C.脫色搖床D.離心機答案：ABCD2.封閉液的常見成分有？A.脫脂奶粉B.BSAC.吐溫20D.明膠答案：ABD3.影響WB實驗結果的因素包括？A.抗體質量B.樣本處理C.轉膜效率D.顯色時間答案：ABCD4.選擇一抗時需要考慮的因素有？A.特異性B.親和力C.來源D.濃度答案：ABC5.蛋白上樣前的處理步驟有？A.裂解細胞B.離心C.蛋白定量D.加入上樣緩沖液答案：ABCD6.轉膜過程中需要注意的是？A.膜與膠的對齊B.防止氣泡產生C.合適的轉膜條件D.膜的清洗答案：ABC7.二抗選擇需要考慮的因素有？A.種屬來源B.標記物C.濃度D.親和力答案：AB8.化學發光法顯色需要的試劑有？A.發光底物B.增強劑C.終止液D.顯色劑答案：AB9.WB實驗中對樣本的要求有？A.足夠的蛋白量B.無雜質C.蛋白保持活性D.新鮮樣本答案：AB10.實驗結束后膜的保存方法有？A.干燥保存B.含抗體保存C.含疊氮鈉保存D.丟棄答案：AC判斷題（每題2分，共10題）1.WB實驗中膜的孔徑大小不影響轉膜效果。（×）2.一抗可以反復使用。（×）3.轉膜時電壓越高效果越好。（×）4.封閉時間過長會影響抗體結合。（√）5.蛋白定量不準確不影響WB結果。（×）6.二抗可以不考慮種屬來源。（×）7.化學發光法比比色法靈敏度高。（√）8.樣本在裂解后不需要離心。（×）9.膜在使用前不需要預處理。（×）10.內參抗體用于校正上樣量差異。（√）簡答題（每題5分，共4題）1.簡述WB實驗的基本流程。答案：樣本制備（裂解細胞、蛋白定量等），蛋白變性，上樣電泳，轉膜，封閉，加一抗孵育，洗膜，加二抗孵育，洗膜，顯色檢測。2.為什么要進行封閉？答案：封閉是為了填充膜上未結合蛋白的空白位點，防止后續加入的一抗、二抗等與膜發生非特異性結合，從而降低背景信號，提高實驗的特異性和準確性。3.如何選擇合適的一抗？答案：需考慮抗體特異性，確保能準確識別目標蛋白；親和力要強以保證結合效果；還要關注抗體來源，如兔源、鼠源等，同時參考抗體的效價、應用類型等參數。4.轉膜效率受哪些因素影響？答案：受電壓、電流、轉膜時間影響，合適的條件才能保證有效轉膜；膜與膠的貼合程度、有無氣泡也很關鍵；此外，蛋白分子量大小、膠的濃度等也會影響轉膜效率。討論題（每題5分，共4題）1.當WB實驗結果出現高背景時，可能的原因及解決方法有哪些？答案：原因可能是封閉不充分、抗體濃度過高、洗膜不徹底等。解決方法包括延長封閉時間或更換封閉液，適當降低抗體濃度，增加洗膜次數和時間，確保洗膜充分。2.對比不同的顯色方法在WB實驗中的優缺點。答案：化學發光法靈敏度高，能檢測低表達蛋白，但試劑貴且發光時間有限；比色法操作簡單、成本低，但靈敏度相對低。放射性自顯影靈敏度高，但有放射性污染，操作受限。3.怎樣保證WB實驗結果的重復性？答案：要使用質量穩定的抗體和試劑，嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、電壓等。樣本處理要規范統一，包括細胞培養、蛋白提取等步驟。實驗操作要熟練且標準化，多人操作時要提前培訓統一方法。4.在WB實驗中，如何根據蛋白分子量選