ICS65.020CCSB0522吉林省地方標準DB22/T3604—2023甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存技術規程Technicalcodeofpracticeforinvestigation，evaluationandinvitroconservationoflocalsweetpotatogermplasmresources吉林省市場監督管理廳發布DB22/T3604—2023前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農業農村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省蔬菜花卉科學研究院。本文件主要起草人：徐飛、張勝利、韓忠才、孫靜、邱博妍、王中原、張倩、馬藝蕎、李天亮。IDB22/T3604—2023甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存技術規程1范圍本文件確立了甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存技術流程，規定了普查準備、普查實施、鑒定評價、離體保存的操作指示，描述數據庫建立、記錄與檔案的追溯方法。本文件適用于甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2260中華人民共和國行政區劃代碼GB/T19557.32植物品種特異性、一致性和穩定性測試指南甘薯NY/T402脫毒甘薯種薯(苗)病毒檢測技術規程NY/T1320農作物種質資源鑒定技術規程甘薯NY/T2176農作物優異種質資源評價規范甘薯甘薯種質資源描述規范34本文件沒有需要界定的術語和定義。甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存由普查準備、普查實施、鑒定評價、離體保存和數據庫建立及檔案管理5個階段構成，其中普查準備分為3個步驟，普查實施分為4個步驟，鑒定評價分為2個步驟，離體保存分為9個步驟，數據庫建立及檔案管理分為2個步驟。程序流程見圖1。1DB22/T3604—2023圖1甘薯地方種質資源普查、評價及離體保存流程圖5經過人類長期馴化，并經自然選擇、人工選擇形成的世代相傳種植的具有不同特點的群體；對本地區自然條件的適應性強、抵抗力和忍耐能力好的甘薯地方種質資源；優先普查特異的甘薯地方種質資源。普查區域內甘薯地方種質資源的種類、來源、數量（栽植面積）、分布、保存狀況等，記錄分行政區劃圖、地形圖、氣候、地理、土壤和社會經濟等資料；農業年鑒、農業管理部門記錄、地方志、縣志、技術報告、論文、專著等；地方及國家種質庫（圃）資料。2DB22/T3604—2023知情人訪談（走訪）包括不限于：a)通過會議、訪談或走訪等形式，召集基層農業技術人員和熟悉情況的村民代表進行座談，以此了解、詢問和調查區域內的甘薯地方種質資源；b)確定重點普查線路和重點普查區域。5.3.3征集甘薯地方種質資源征集未入地方及國家種質庫（圃）保存的甘薯地方種質資源。6普查實施實地普查6.16.1.16.1.26.1.3在資料查詢、訪談、征集的基礎上，確定普查地點、普查路線，進行實地普查。普查小組由專業技術人員、當地向導人員等2人～4人組成。根據普查表內容開展普查，記錄調查結果（見表A.1和表B.1）和普查報告。依據GB/T19557.32、NY/T1320、NY/T2176和NY/T2939調查甘薯地方種質資源的生物學性狀。6.2樣本收集收集地點6.2.1收集地點主要為田間、貯藏窖和農貿市場等。從不同植株上收集10個～15個薯塊（薯苗）。無名稱的種質資源可按縣（市、區）名加某一特征或加作物名命名，如長白黃瓤甘薯。同一地區同一作物相同名稱的不同種質材料，在名稱后加符號“—”和數字（1、2、3等）不同地區同一作物相同名稱的不同種質材料，在名稱前冠以縣（市、區）名進行區別，如長樣本應及時拍照或錄像，詳細記錄樣本的編號、拍攝時間、地點、畫面內容和拍攝人等。3DB22/T3604—20236.2.6.2每份種質圖像資料應包括薯塊或薯苗、完整植株、生境等的照片或錄像，應反映種質材料的典型特征特性。6.2.6.36.2.6.4圖片格式為“.jpg”，像素大小至少為1024×3648或600dpi。照片和錄像的文件名應按樣本編號加內容命名，同一份樣本的照片和錄像放在同一個文件夾內，文件夾用樣本編號命名。6.3樣本整理與處理整理6.3.16.3.1.16.3.1.26.3.1.3收集的樣本形成1份清單，逐份核對查看收集的樣本、編號、圖像、調查表是否完整。對缺失的樣本應及時重新收集，對缺項或不一致的信息及時補充修訂。為確保收集的種質資源可長期保存利用，將樣本分成2份，1份用于鑒定評價，1份由具有相應條件的薯類種質資源庫長期保存利用。6.3.2處理薯塊樣品存放于陰涼通風處，溫度在9℃以上；薯苗可在陰涼保濕處短時存放，應盡快假植或定植。6.4撰寫與整理工作日志6.4.1工作日志包括：普查時間、地點、經度、緯度、海拔、參加人員、行程路線、收集樣本種類和數量等情況；經驗、體會、存在問題等。78組織培養中的基礎培養基為MS培養基，其成分及配方見表C.1；固體基礎培養基為：MS+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂或6g/L卡拉膠。配置培養基時，培養基pH應為5.8～6.0。pH過高或過低時可用HCl或NaOH進行調節。4DB22/T3604—20238.1.2滅菌與存放分裝好的培養基進行高溫高壓滅菌，滅菌條件為121℃，15min～20min。滅菌后的培養基自然冷卻，常溫存放。8.2外植體預處理8.2.1薯塊選擇完好、無病害的薯塊在流水下用刷子清洗薯皮表面，去除泥土雜質。干凈的薯塊在28℃～30℃培養箱中催芽發苗。8.2.2薯苗將薯苗進行除雜、清洗，除去不需要的部分，剪取1cm～3cm頂芽，用1%洗衣粉溶液浸泡5min，流水沖洗30min。8.3消毒沖洗好的頂芽，在超凈工作臺中用75%乙醇浸泡30s，無菌水漂洗2次～3次。用添加1%吐溫—80的2%NaClO溶液浸泡10min～15min，無菌水漂洗2次～3次。8.4莖尖剝離無菌濾紙吸干頂芽表面水分，在40倍解剖鏡下，用解剖針、手術刀切取帶1個～2個葉原基的莖尖組織0.2mm～0.4mm。將剝離的莖尖組織接種到誘導培養基MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊培養條件：23℃±2℃、光強2000lx～3000lx、光照時間12h/d～16h/d。注明品種（編號）、莖尖號、接種日期等信息。誘導培養20d～30d后，將誘導出的莖尖苗轉接到MS基礎培養基上培養，獲得試管苗。其他條件同8.5。將單株莖尖苗剪切為帶有1葉～2葉的莖段，轉接到MS培養基上培養。其他條件同8.5。病毒檢測株系苗達到苗高10cm時，按照NY/T402方法進行病毒檢測。檢測后銷毀病毒陽性株系，保留經檢測確定不帶病毒的脫毒苗用MS基礎培養基繼代保存。每份株系保存3瓶、每瓶3株。其他5DB22/T3604—20239數據庫建立及檔案管理9.1數據庫建立將普查的數據、圖像、報告等錄入計算機，建立電子數據庫。檔案管理9.2原始記錄存檔，由專人管理，記錄檔案保存至少3年，做到可追溯。6DB22/T3604—2023附錄A（資料性）基本信息登記基本信息登記表見表A.1。表A.1基本信息登記表樣本編號普查單位日期年月日普查人提供人姓名：聯系電話:姓名：聯系電話:地經名點度稱市鄉（鎮）村緯度海拔種質來源播種期收獲期□高產□優質□抗病□抗蟲□耐鹽堿□抗旱□廣適□耐寒□耐熱耐澇主要特性□耐貧瘠□淀粉型□平原□其他品種類型□褐土栗鈣土□沼澤土土壤類型采集方式采集部位樣本數量7DB22/T3604—2023附錄B（資料性）甘薯性狀調查甘薯性狀調查表見表B.1。表B.1甘薯性狀調查表觀測時期序號性狀選項和方法123456*植株：生長習性20VG□直立半直立□匍甸20VG□無或疏□中□密20VG□凹□平□凸20VG□無或弱□中□強20VG□無或弱□中□強20VG□無或弱□中□強*莖：頂端茸毛莖：頂芽相對位置*莖：頂芽花青甙顯色強度莖：節間花青甙顯色強度莖：節花青甙顯色強度□極短□極短到短□短□短到中等□中等□中等到長□長□長到極長□極長78莖：長度30MS/VG30MS/VG30MS□極短□極短到短□短□短到中等□中等□中等到長□長□長到極長□極長□極小□極小到小□小□小到中等□中等□中等到大□大□大到極大□極大□無或極弱□極弱到弱□弱□弱到中等□中等□中等到強18*葉柄：花青甙顯色強度□極短□極短到短□短□短到中等□中等□中等到長□長□長到極長□極長□下膨紡錘形□紡錘形□球形□上膨紡錘形□柱形□不規則形8DB22/T3604—2023表B.1甘薯性狀調查表（續）觀測時期和方法序號性狀選項□白色□淺黃色□中等黃色□深黃色□橙紅色□深橙紅色□淺紅色□中等紅色□紫紅色□紫色□深紫色□棕色21*薯塊：表皮顏色40VG40VG□白色□淺黃色□中等黃色□深黃色□淺橙紅色□中等橙紅色□深橙紅色□淺紫色□中等紫色□深紫色□白色□黃色□橘紅色□紫色□薄□中□厚22*薯塊：薯肉主要顏色23242526272829303132薯塊：薯肉次要顏色薯塊：薯皮厚度薯塊：萌芽一致性薯塊：萌芽數量葉：葉耳40VG40VG10MG10VG20VG20VG40VG40VG40VG40MG□不一致□中等□一致□少□中□多□無□有葉：邊緣紫色□無□有薯蒂：長度□短□中□長植株：結薯習性薯塊：表面缺陷□松散□較集中□集中□無□星點狀□縱淺溝□縱深溝□橫淺溝□橫深溝□無或極少□少□中□多薯塊：裂皮注1：*為必填項注2：MS（個體測量）：每個小區植株取樣數量不少于20個，在觀測植株的器官或部位時，每個植株取樣數量為1注4：代碼：10出苗期，50%出苗；20蔓薯并長期，移栽后60d左右；30薯塊盛長期，移栽90d左右；40收9DB22/T3604—2023附錄C（資料性）MS培養基成分MS培養基成分見表C.1。表C.1MS培養基成分表使用濃度成分分子量mg/L硝酸鉀KNO3101.2180.0419001650170硝酸銨NH4NO3大量元素磷酸二氫鉀KH2PO4硫酸鎂MgSO