菌懸液的制備細菌繁殖體懸液的制備1取第3代～第8代的營養瓊脂培養基培養18h～24h的新鮮斜面培養物，用5.0mL吸管吸取3.0mL～5.0mL稀釋液（除酸性電解水用生理鹽水外，其他均用胰蛋白胨生理鹽水溶液）加入斜面試管內，反復吹吸，洗下菌苔。用5.0mL吸管將洗脫液移至另一無菌試管中，用電動混勻器混合20s，或在手掌上振打80次，使細菌懸浮均勻。2將制成的菌懸液，進行活菌培養計數，按其結果用稀釋液稀釋至所需濃度，懸液定量殺滅試驗時，菌懸液濃度為1×108CFU/mL～5×108CFU/mL。3細菌繁殖體懸液冷藏保存備用，當天使用。4懷疑有污染時，以菌落形態、革蘭染色與生化試驗等方法進行鑒定。枯草桿菌黑色變種芽胞懸液的制備1以無菌操作方式開啟菌種管，加入適量營養肉湯培養基，吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0mL～10.0mL營養肉湯培養基試管，滴入少許菌種懸液，置36℃±1℃培養18h～24h。用接種環取第1代培養的菌懸液，劃線接種于營養瓊脂培養基平板上，置36℃±1℃培養18h～24h。挑取上述第2代培養物中典型菌落，接種于營養肉湯培養基，置36℃±1℃培養18h～24h，即為第3代培養物。2用10.0mL吸管吸取5.0mL～10.0mL第3代～5代的18h～24h營養肉湯培養物，接種于羅氏瓶（或細胞培養瓶）營養瓊脂培養基表面，將其搖動使菌液布滿培養基表面，將多余肉湯培養物吸出，羅氏瓶（或細胞培養瓶）置36℃±1℃恒溫培養箱內培養5d～7d。3用接種環取少許菌苔涂于玻片上，以改良芽胞染色法染色。改良芽胞染色法：用接種環取菌苔涂于玻片上，自然干燥后，通過火焰加熱將菌固定于玻片上；將涂片放入平皿內，片上放兩層濾紙，滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液，將平皿蓋好，置55℃±1℃加熱30min。取出，去濾紙，用自來水沖去殘留液；加0.5%沙黃水溶液，1min后水洗，待干后鏡檢。芽胞呈綠色，菌體呈紅色。在顯微鏡（油鏡）下鏡檢，當芽胞形成率達90%以上時，即可進行以下處理。否則，繼續在室溫下放置一定時間，直至達到上述芽胞形成率后再進行以下處理。4加10.0mL無菌蒸餾水于羅氏瓶（或細胞培養瓶）中，以L棒輕輕刮下菌苔，吸出，再加入5.0mL無菌蒸餾水沖洗培養基表面，吸出。將兩次吸出的菌懸液集中于含玻璃珠的無菌錐形燒瓶中，振搖5min。5將燒瓶置45℃水浴24h，使菌自溶斷鏈，分散成單個芽胞。6用無菌棉花或紗布過濾芽胞懸液，清除瓊脂凝塊。7將芽胞懸液置無菌離心管內，以3000r/min速度離心30min。棄上清液，加蒸餾水吹吸使芽胞重新懸浮。再離心和重新懸浮清洗，本步驟重復進行3遍。8將洗凈的芽胞懸液放入含適量小玻璃珠的燒瓶內，80℃水浴10min（或60℃水浴30min），以殺滅殘余的細菌繁殖體。待冷至室溫后，搖勻分裝后冷藏保存備用，有效使用期6個月。9芽胞懸液在使用時，先進行活菌培養計數。10懷疑有污染時，以菌落形態、革蘭染色與生化試驗等方法進行鑒定。現場消毒評價原則原創生命力實戰老K談管理體系生命力2024年05月29日18:10廣東1現場消毒評價的內容包括現場消毒過程評價和現場消毒效果評價。進行現場消毒效果評價前，應先進行現場消毒過程評價。2現場消毒過程評價的內容包括消毒方案、消毒產品、消毒工作程序、個人防護。消毒方案制定應根據消毒范圍、消毒對象選擇合理的消毒方法和消毒產品。使用的消毒產品符合WS628等標準要求，在產品有效期內按照說明書規定的方法使用。消毒工作程序符合GB19193要求。根據病原微生物的危害程度和傳播途徑選擇個人防護裝備。3現場消毒效果評價包括現場評價和現場模擬評價。對重大活動衛生保障和目標微生物明確的傳染病疫源地、突發公共衛生事件進行現場消毒效果評價時，首選現場評價；對目標微生物無法檢測、不明原因的傳染病疫源地及突發公共衛生事件、風險等級較高的污染如炭疽桿菌、新冠肺炎病毒等進行消毒效果評價時選擇現場模擬評價。4現場評價是以檢測消毒對象上自然菌的存在數量或（和）目標微生物是否存在作為判定依據；現場模擬評價是以檢測指示微生物是否存在或存在的數量作為判定依據。5物體表面現場模擬評價根據病原微生物對消毒因子的抗力選擇相應的指示微生物。選擇大腸桿菌（Escherichiacoli）8099、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC6538作為親脂病毒、細菌繁殖體的指示微生物；選擇白色念珠菌(Candidaalbicans)ATCC10231作為致病性真菌的指示微生物；選擇龜分枝桿菌膿腫亞種(Mycobacteriumchelonaesubsp.Abscessus)CMCC93326或ATCC19977作為親水病毒、人結核分枝桿菌的指示微生物；選擇枯草桿菌黑色變種芽孢(Bacillussubtilisvar.niger)ATCC9372作為細菌芽孢的指示微生物；當發生未知病原微生物及不明原因傳染病時，選擇枯草桿菌黑色變種芽孢(BaciLLussubtiLisvar.niger)ATCC9372作為指示微生物。物體表面現場模擬評價已選擇抗力強的指示微生物進行評價時不再選擇抗力弱的指示微生物，除非有特殊要求。6生活飲用水現場模擬評價選擇大腸桿菌（Escherichiacoli）8099作為指示微生物。7根據現場消毒評價對象選擇合適的微生物種類進行評價。8現場消毒效果評價應記錄地點或對象、采樣時間、數量、采樣者、樣本編號、名稱、檢驗指標及依據、檢驗結果及判定等信息。附：現場消毒：disinfectiononsite發生傳染病流行、突發公共衛生事件或重大活動衛生保障時對現場環境和物品等進行的消毒。目標微生物：targetmicroorganism在現場消毒時應殺滅的某特定病原微生物。指示微生物：indicatormicroorganism具有確定的抗力并代表某類微生物、可供現場模擬評價使用的人工污染微生物。真菌懸液制備原創生命力實戰老K談管理體系生命力2024年05月28日11:56廣東白色念珠菌懸液的制備1取第3代～第6代的沙堡瓊脂培養基斜面新鮮培養物（18h～24h），用5.0mL吸管吸取3.0mL～5.0mL稀釋液加入斜面試管內，反復吹吸，洗下菌苔。用5.0mL吸管將洗脫液移至另一無菌試管中，用電動混勻器混合20s，或者在手掌上振打80次，使白色念珠菌懸浮均勻。2將制成的菌懸液，進行活菌培養計數，按其結果用稀釋液稀釋至所需濃度，懸液定量殺滅試驗時，菌懸液濃度為1×107CFU/mL～5×107CFU/mL。3菌懸液冷藏保存，當天使用。4懷疑有污染時，以菌落形態、革蘭染色與生化試驗等方法進行鑒定。黑曲霉菌孢子懸液的制備1挑取第2代培養物中典型菌落，接種于麥芽浸膏營養肉湯培養基中，置30℃±1℃恒溫培養箱中培養42h～48h，即為第3代培養物。2用10.0mL吸管吸取5.0mL～10.0mL第3代培養物，接種羅氏瓶，并搖動使菌液布滿麥芽浸膏瓊脂培養基表面，將多余肉湯培養物液體吸出，置30℃±1℃恒溫培養箱中培養42h～48h。3向羅氏瓶培養物中加入5.0mL～10.0mL0.05%（V/V）吐溫80生理鹽水溶液，刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中，將孢子懸液移入裝有玻璃珠的三角瓶中，輕輕振搖1min，過濾除去菌絲后，顯微鏡下（400倍）觀察是否仍有菌絲存在，若有可經5000r/min～6000r/min離心20min。再次在顯微鏡下（400倍）觀察，必要時重復上述步驟。4黑曲霉菌分生孢子懸液冷藏保存不超過2d，使用前，混合均勻，在顯微鏡下（400倍）觀察是否有孢子出芽，若有則不得使用。5將制成的菌懸液，進行活菌培養計數，按其結果用稀釋液稀釋至所需濃度，懸液定量殺滅試驗時，菌懸液濃度為1×107CFU/mL～5×107CFU/mL。分枝桿菌懸液制備1取第3代斜面培養物，在改良羅氏培養基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂培養基斜面上連續傳代，培養方法與第3代相同，取第5代～第6代的72h新鮮培養物，用5.0mL吸管吸取3.0mL～5.