醫學免疫學第12講免疫檢測與防治第11講免疫學檢測技術的基本原理醫學免疫學第12講免疫檢測與防治免疫學檢測方法：依據免疫學理論設計的測定抗原、抗體、免疫細胞及細胞因子的實驗方法。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治一、基本原理抗原與相應抗體特異性結合，并呈現某種反應現象，如凝集或沉淀，以此檢測抗原或抗體。第一節體外抗原抗體結合反應的特點及其影響因素醫學免疫學第12講免疫檢測與防治㈠抗原抗體反應的特點

1.抗原抗體結合的特異性抗原抗體結合除空間構型互補外，還以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等非共價方式結合，一定條件下復合物可解離成游離狀態，且仍保持原有性質。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治2.抗原抗體結合的可逆性復合物解離度主要取決于特異性抗體超變區與相應抗原表位三維空間構型的互補程度，互補程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結合越牢固，不易解離；反之，則容易發生解離。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治3.抗原抗體結合的比例與濃度抗原與抗體結合比例合適，則可形成肉眼可見的大結合物；反之形成肉眼不可見的小結合物。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治4.抗原抗體反應的階段性第二階段：可見反應階段。數分鐘、數小時至數日，因素影響多。第一階段：特異結合階段。僅幾秒到幾分鐘、尚無可見反應；醫學免疫學第12講免疫檢測與防治㈡抗原抗體反應的主要影響因素1.抗原和抗體濃度、比例2.電解質3.溫度4.酸堿度醫學免疫學第12講免疫檢測與防治二、血清學反應的種類

1.凝集反應細菌、細胞等顆粒性抗原與相應的抗體，或表面包被抗原的顆粒狀物質與相應的抗體在電解質存在的條件下結合，出現肉眼可見的凝集團現象。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治2.沉淀反應毒素、組織浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應抗體反應后，出現肉眼可見的沉淀物。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治3.免疫標記技術用酶、熒光素、同位素等物質標記抗體或抗原進行抗原抗體反應，檢測抗原或抗體的技術。如免疫酶技術、免疫熒光技術、放射免疫測定。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治第一抗體抗原第一抗體—抗原第二抗體生物酶第一抗體—抗原-第二抗體顯色醫學免疫學第12講免疫檢測與防治第二節免疫細胞的測定淋巴細胞是機體內主要的免疫細胞，檢測其數量和功能是了解機體免疫狀態的重要手段。一、淋巴細胞的分離常用ficoll（淋巴細胞分離液）密度梯度離心除去紅細胞、粒細胞而獲得外周血單個核細胞（PBMC），再經吸附除去單核細胞而得到淋巴細胞。若要分離T細胞，可用尼龍毛柱、抗CD3單抗、E花結試驗等分離。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治醫學免疫學第12講免疫檢測與防治二、免疫細胞細胞的鑒定根據細胞的某些標志，采用免疫熒光法、磁珠分離法、流式細胞術等方法可確定細胞不同類型和比例。（一）T細胞功能測定

1.T細胞增殖試驗植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等絲裂原及抗CD3單抗等能非特異性激活培養的T細胞，使其轉化成淋巴母細胞的試驗。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治淋巴細胞功能測定在該增殖過程中，細胞DNA、RNA、蛋白質的合成增加，細胞形態改變。也可檢測特異性抗原致敏的T細胞。（1）氚標記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠，應用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射性污染。（2）MTT法：該法操作簡單，無放射性污染，但敏感性相對較差。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治淋巴細胞功能測定2.細胞毒試驗：

Tc、NK細胞對靶細胞有直接殺傷作用，可根據待檢效應細胞的性質，選用相應的靶細胞。（1）51Cr釋放法：用51Cr標記靶細胞，γ記數儀測定釋放的51C活性。（2）MTT法：其原理與增殖試驗相同，但甲生成量與靶細胞溶解破壞水平呈負相關。（3）乳酸脫氫酶釋放法：細胞受損致膜通透性改變，乳酸脫氫酶釋放到培養液中。

醫學免疫學第12講免疫檢測與防治3細胞因子檢測：

CK的檢測有助于了解其在免疫調節中的作用，鑒定分離的淋巴細胞，監測某些疾病狀態的細胞免疫功能。常用的檢測方法有以下三種：（1）ELISA法：（2）生物活性測定法：（3）聚合酶鏈反應（PCR）：醫學免疫學第12講免疫檢測與防治淋巴細胞功能測定

4皮膚實驗正常機體對某種抗原產生細胞免疫后，用相同抗原做皮膚試驗時出現以局部紅腫為特征的DTH。細胞免疫正常時出現陽性反應，細胞免疫低下則呈陰性反應。該方法簡便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如結核桿菌、麻風桿菌等）及免疫缺陷病等。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治淋巴細胞功能測定（二）B細胞功能測定

B細胞介導體液免疫，檢查B細胞的數量與功能是確定體液免疫是否正常的重要手段。1B細胞增殖試驗2抗體形成細胞的測定：吸附有特異性抗原的SRBC與抗體形成細胞分泌的Ig特異性結合后活化補體，溶解SRBC。又稱溶血空斑試驗。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治第12講免疫學防治“國防建設”學習要求：1.掌握人工主動免疫與人工被動免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。免疫學防治：應用免疫學理論預防和治療疾病，包括免疫預防和免疫治療。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治一、疫苗1.定義：為預防、控制傳染病的發生和流行，用于人體預防接種的生物制品。包括疫苗、菌苗和類毒素。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治2.基本要求：安全實用有效對絕大多數人群有保護性作用，使用后群體抗感染能力強，理想的疫苗：同時誘導細胞和體液免疫，維持時間長。接種程序簡單，無嚴重不良反應，便于運輸和儲存，價格低?；钜呙缫筮z傳性狀穩定，無返祖、致癌和致畸作用，無熱原性和過敏原。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治抗感染抗腫瘤計劃生育防止免疫病理損傷3.疫苗應用醫學免疫學第12講免疫檢測與防治二、免疫預防方式免疫預防自然免疫：顯性或隱性感染，胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動免疫人工被動免疫免疫預防自然免疫：顯性或隱性感染，胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動免疫人工被動免疫醫學免疫學第12講免疫檢測與防治（一）人工主動免疫1.定義：用疫苗接種機體，使之產生特異性免疫，從而預防感染的措施。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治2.疫苗⑴滅活疫苗（死疫苗）與減毒活疫苗活疫苗：人工的方法使病原體減毒或從自然界篩選病原體無毒株或微毒株所制成的活的微生物制劑。也稱減毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗：選用免疫原性強的病原微生物，經人工大量培養，經理化方法將其殺死后制成的疫苗。無毒力，但仍保持其免疫原性。傷寒、百日咳、鉤端螺旋體、斑疹傷寒、乙型腦炎等疫苗醫學免疫學第12講免疫檢測與防治死疫苗與活疫苗特點的比較醫學免疫學第12講免疫檢測與防治含義：細菌外毒素經0.3～0.4%甲醛處理。⑵類毒素特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。⑶新型疫苗亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用轉基因植物以預防接種已初步成功。含義：細菌外毒素經0.3～0.4%甲醛處理。⑵類毒素特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治（二）人工被動免疫1.定義：給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑，以治療或緊急預防感染的措施。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治2.制劑⑴抗毒素：細菌外毒素或類毒素免疫動物制備的血清。注意：對人而言既是抗體也是抗原，因而要防止超敏反應的發生，使用前需皮試。舉例：破傷風抗毒素，白喉抗毒素醫學免疫學第12講免疫檢測與防治⑵人免疫球蛋白制劑：混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。舉例：肝炎、麻疹、脊髓灰質炎。⑶細胞因子和單克隆抗體：IFN-γ

IFN-α、G-CSF、GM-CSF、IL-2，人源單抗。舉例：腫瘤、艾滋病有效預防手段。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治（三）人工主動與被動免疫的特點比較醫學免疫學第12講免疫檢測與防治3.計劃免疫醫學免疫學第12講免疫檢測與防治第三節免疫治療針對異常的免疫狀態，應用免疫制劑、免疫調節藥物或其他措施來調節或重建免疫功能，以達到治療疾病的目的。醫學免疫學第12講免疫檢測與防治免疫增強療法免疫抑制療法感染、腫瘤超敏反應、自身免疫病、移植排斥反應、嚴重炎癥免疫重建療法再障、免疫缺陷醫學免疫學第12講免疫檢測與防治主動免疫治療被動免疫治療刺激或增強機體免疫系統，使機體自身產生抵抗疾病的能力輸注免疫效應細胞或分子，發揮治療疾病的作用又稱過繼免疫療法醫學免疫學第12講免疫檢測與防治特異性免疫療法非特異性免疫療法主動被動主動被動瘤苗抗體、TIL佐劑（卡介苗）LAK