上海市臨檢中心

實驗操作生物安全

上海市臨凍檢驗中，0

程東做皮物宦t4

生物恐怖攻擊事件：

2001年“971事件”后，一名美國政府科學家埃文斯

(BruceIvins)將裝有炭疽抱子的信件發送給新聞機構和美國參

議員辦公室，導致22人受感染患病，其中5人死亡。

2

X上海市臨檢中心

生物安全意外事件：

中新社休斯敦2014年6月20日電美國日前發生一起生物

安全事故，亞特蘭大美國聯邦政府實驗室20日證實，接觸到高

致死率炭疽菌的工作人員86人，美國疾病控制和預防中心(CDC)

設在亞特蘭大的一間高級別生物安全實驗室，在對活炭疽菌進

行滅活時，可能沒有遵循正確的程序。隨后，他們將可能帶有

活炭疽菌的樣本轉移到三個低級別實驗室，而后者并不具備處

理活炭疽的設施，由于相信樣本已經滅活，低安全級別實驗室

的工作人員沒有穿上適當的防護設備。6月6日至13日，兩個實

驗室可能讓抱子成煙霧狀散開。

上海市臨檢中心

東北農業大學實驗感染事件

2010年12月間，由于東北農業大學動物醫學學院有關教師,

未按國家及黑龍江省實驗動物管理規定，從哈爾濱市香坊區幸福

鎮紀家村青喜養殖場購入4只山羊,并在以上述4只山羊為實驗動

物的5次實驗（共涉及4名教師、2名實驗員、110名學生）前，未

按規定對實驗山羊進行現場檢疫，同時在指導學生實驗過程中未

能切實按照標準的實驗規范，嚴格要求學生遵守操作規程，進行

有效防護。由于上述違規行為，導致2011年3月至5月，學校27名

學生及1名教師陸續確診感染布病。

4

上海市臨檢中心

《上海市病原微生物實驗室生物安全管理行政處罰裁量基準》

上海市衛生和計劃生育委員會2017年12月26H

情形情節栽量幅度

未依照規定定期對工作人員進行培訓

工作人員考核不合格允許其上崗

首次發現情形警告

從事高致病性病原微生物相關實驗活動的實驗

室批準未采取防護措施的人員進入實驗室

未依照規定定期對工作人員進行培訓，逾期不

改正

工作人員考核不合格允許其上崗，逾期不改正

逾期不改正情形吊銷許可證件

從事高致病性病原微生物相關實臉活動的實驗

室批準未采取防護措施的人員進入實驗室，逾期不

改正

5

上海市臨檢中心

《上海市病原微生物實驗室生物安全管理行政處罰裁量基準》

情形情節榭t幅度

實驗室工作人員未遵守實驗室

首次發現情形警告

生物安全技術規范和操作規程

實驗室工作人員未遵守實驗室

途期不改正情形生物安全技術規范和操作規程，逾吊銷許可證件

期不改正

6

上海市臨檢中心

《上海市病原微生物實驗室生物安全管理行政處罰裁量基準》

情形情節裁?幅度

未依照規定制定實驗室感染應

首次發現情形警告

急處置預案

未依照規定備案實驗室感染應

逾期不改正情形吊銷許可證件

急處置預案

7

上海市臨檢中心

《上海市病原微生物實驗室生物安全管理行政處罰裁量基準》

情節裁量幅度

未經批準運輸高致病性病原微生物菌（毒）種，導致高致病性病原微生物

菌（毒）種被盜、被搶、丟失、泄漏

未經批準運輸高致病性病原微生物樣本，導致高致病性病原微生物樣本

被盜、被搶、丟失、泄漏

警告

承運單位經批準運輸高致病性病原微生物菌（毒）種未履行保護義務，導

致高致病性病原微生物菌（毒）種被盜、被搶、丟失、泄漏

承運單位經批準運輸高致病性病原微生物樣本未履行保護義務，導致高

致病性病原微生物樣本被盜、被搶、丟失、泄漏

8

上海市臨檢中心

《上海市病原微生物實驗室生物安全管理行政處罰裁量基準》

情節裁量幅度

造成傳染病傳播、流行

造成其他嚴重后果

吊銷許可證件

其他具有《上海市衛生和計劃生育行政處罰裁量適用辦法》規定的從重

情形

9

處罰內容

警告：實驗室有下列行為之一的，由縣級以上地方人民政

府衛生主管部門、獸醫主管部門依照各自職責，責令限期

改正，給予警告；

逾期不改正：逾期不改正的，由實驗室的設立單位對主要

負責人、直接負責的主管人員和其他直接責任人員，依法

給予撤職、開除的處分；有許可證件的，并由原發證部門

吊銷有關許可證件：

10

誓W上海市臨檢中心

-------------

內容

、

?實驗操作的主要生物危害

、

?實驗風險評估

_________________________________________________________________y

?實驗室生物安全操作和防護

解?實驗室意外事件的應急旃

11

V?實驗操作的主要生物危害

ocularinvasion

inhalation

ingestion

“skin

penetration

上海市臨檢中心

臨床實驗操作主要的職業暴露主要來源?血液

血源性病原體職業暴露是醫務人員工作中最常見的一種

職業危害。?I幔器類P和關聯掾作分布構成比《％》

XH人次構或比

ShSZ031?7$

?液41H22.22

f卡?匕1015.87

2*看*計46.3S

條云針46.35

零刺”34.76

￥本刀片23.18

此施69.52

為限操作不止?虻?線H導數的想傷3352.38

手術，作中的蛻器飭914.29

■，過，?口匕■動914.29

34.76

蚊》*?（累世陀屐中34.76

分突懵點日程中23.17

手術中傳透器械23.17

帔界使刖后初力分類中11.59

★已去住在短H套中外突得分則傷11.59

臺it63100.00

中隼氏豌*技學雜&2011年第21於第12W15

上海市臨檢中心

醫務人員血源性病原體職業暴露分析

類別發生率

護士發生職業暴露63.4%

工作年限短的醫務人員發生職業暴露64.1%

暴露種類以針刺傷為主84.7%

其他銳器傷11.5%

暴露源以乙肝為主46.8%

職業暴露的地點：手術室27.5%

職業暴露的地點：內科23.7%

暴露人員科室：外科35.1%

暴露人員科室：內科22.9%

職業暴露發生環節最多的為操作后處置利器25.2%

回帽操作13.7%

發生暴露后傷口正確處置率低39.7%

《醫學動物防制》2015年11期

16

X上海市臨檢中心

Pike對4000例實驗室相關感染統計分析表明，實驗

室室相關感染主要發生在研究實驗室、臨床診斷實驗室、

動物實驗室，其中弄清原因的（針刺、鼠咬、食入）實驗

室感染只占全部感染的18%,不明原因的實驗室感染卻高

達82%。

經后來調查，在這82%不明原因實驗室感染中，大

多數是因為在操作病原微生物時形成了氣溶膠并在實驗室

中擴散，工作人員和有關人員暴露后發生了空氣傳播。

17

上海市臨檢中心

實驗室職業暴露主要的媒介一氣溶膠

氣溶膠分為兩大類

一.液滴核(Dropletnuclei)氣溶膠

這種氣溶膠的產生是由于外力作用于含微生物的液體，如

液體標本、培養液形成顆粒進入空氣，較大的很快沉積在各種

物體的表面上形成了含有微生物的塵埃，較小的粒子水份很快

蒸發形成“液滴核”成為非常小的顆粒(2?4Hm),分散在空

氣之中，能夠漂浮教長的時間和擴散教遠的距離。

18

上海市臨檢中心

二.干粉氣溶膠

由于外力作用于干燥培養物或塵埃粒子，懸浮于空氣

之中，形成粉塵氣溶膠。其中包括微生物干燥過程中的污

染和再生氣溶膠，經過現代技術加工的微生物干粉可以做

到：低含水量粒子大小適合分散度強，極易被人體吸入感

染。

19

上海市臨檢中心

氣溶膠對人體的危害1

氣溶膠對人體的危害強度主要依賴于：

?成分、濃度和粒子徑。

?氣溶膠濃度和暴露時間決定了吸入劑量，濃度越高時間

越長危害越大。

?氣溶膠粒子直徑與其在呼吸道內沉著、滯留和清除有關。

一般而言，大于50Pm粒子不會被吸入，10?50pm的粒子絕大部分沉著在

鼻腔里，5-10口m可進入氣管和支氣管，只有＜5pm的粒產才能進入到深

部呼吸道乃至肺泡。顯而易見，只有＜10pm的粒子氣溶膠危險度比較高。

此外，有時環境因素如溫度和相對濕度對氣溶膠吸入危害也有一定影響。

20

上海市臨檢中心

氣溶膠對人體的危害2

氣溶膠危害有3類疾病值得重視：

1）傳染病，包括流感、肺結核和肺炎等；

2）過敏病，包括由自然過敏原引起的哮喘和肺泡炎；

3）肺癌等，由人為污染的氣溶膠顆粒引起的矽肺和肺癌等。

21

22

實驗室微生物氣溶膠的產生

實驗室中許多操作過程可以產生微生物氣溶膠，并隨空氣

擴散而污染實驗室的空氣，當工作人員吸入了污染的空氣，便

可以引起實驗室相關感染。

資料表明，對276種操作進行了測試，其中239種操作可以產

生微生物氣溶膠，占全部操作的86.6%。將各種操作歸納為21

大項，按其產生微生物氣溶膠顆粒的多少，分為重度、中度和

輕度三級。特別指出是,有些工作需要反復多次操作，即使一次操

作產生的氣溶膠并不多，但由于多次操作同樣可以在短時間內產

生大量的微生物氣溶膠，對工作人員造成嚴重危害。

23

上海市臨檢中心

一■■■■

產生微生物氣溶膠的操作(1)

?接種」

?吸液注射

?離心

-解剖

?微生物培養和劃線培養

?培養介質中“冷卻”帶菌接種環

?燃燒帶菌接種環

?用吸管吹打混合微生物懸液

?吸液管中菌懸液落在固體表面

?排除注射器中的空氣

?從塞子中拔出針頭

?接種動物

24

上海市臨檢中心_______________________

零一產生微生物氣溶膠的操作(2)

?針頭從注射器上脫落噴出毒液

?高速離心離心管破裂

?皮毛沒有消毒或消毒不徹底

?刀、鋸等操作

?血液噴發

?攪拌機、混合器、超聲波儀和混合用的儀器

-灌注和倒入液體

?打開培養容器

?感染性材料的溢出

?真空凍干和過濾

?接種雞胚和培養物的收取

25

操作一次可產生各種嚴重程度微生物氣溶膠的活動

■

輕度（＜10個顆粒尸中度（u~ioo個顆粒A重度（＞100個顆粒產

玻片凝篥試驗；?腹腔接種動物，局露不涂消毒死產離心時離心管破裂；?

頸倒春液；，實驗動物尸體解剖；，打群干燥菌種安前；，

火焰上灼熱接種壞尸用乳缽研磨動物組織；，打開干燥菌種安瓶：/

顱內接種；V離心沉淀前后注入、頸到、混懸毒液一攪拌后立即打開攪拌器蓋,?

接種隔呸或抽取培毒液滴落在不同表面上：，小白鼠疆內接種；,

養海3用注射器從安瓶中抽取毒液；~注射器針尖脫落噴出毒液/

接種環接種平皿、試管或二角燒瓶等;?刷衣服、拍打衣服；一

打開培養容器的螺旋瓶蓋；，

摔碎帶有培養物的平皿；*

上海市臨檢中心

實驗感染的控制原理

實驗室空氣傳播與感染主要有三個過程：

◎一是微生物氣溶膠的產生，

S二是微生物氣溶膠的擴散,

S三是微生物氣溶膠人體暴露和吸入。

因此，要控制或減少實驗室空氣傳播和感染，要

有相應針對的生物安全措施，以控制實驗室微生物氣

溶膠感染的三個過程。

29

上海市臨檢中心

內容

V?實驗風險評估

30

￥海市臨檢中心

一.危害程度評估的要素

（一）危害程度分類

（二）病原微生物背景資料

（三）擬從事實驗活動的危險分析

（四）評估結論

［風險評估］風+制

風險識別

31

窕\上海市臨檢中心

人間傳染的病原微生物名錄（中華人民共和國衛生部令第45號）

表L病毒分類名錄（部分）

病毒名物實驗活動所需生物安全實驗富縊耨運■包裝分類，

未經培|

1滅活材無■染

危害程養的■

病毒動物修性材料u、?

英文名中文名分類學地位度分類染材料料的提A/B

培弗?染實階的操作號

的操作作」e

t

Highpathogenic僅病

高致病性畬U、28l

1avianinfluenza正桐麗第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1A毒培養

4

virus物為A類

Human

僅病毒

immunodefkienc艾滋病毒（iUN281

2逆轉錄相噂科第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1A培養物

yvirus(HIV)■和110）4

為A類

t)pyland2virus

育疫苗.

Japanese乙型?炎篇UN28I僅病毒

3黃病毒科第二類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BSL-1A

encephalitisvirus?4培養物

為A類

立■友國炎小RNA病毒UN281

4Polio、lrush第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AJUi

索?科4

Rabiesvirus狂犬病毒（街UN28I

5彈狀病卻第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1A

(streetvirus)?）4

*------------

32

表2.病毒分類名錄（部分）

病毒名林實驗活動所需生物安全實驗型g史別運分類,

未經培無感

滅活

危害程養的感染性

序號病毒動物感染材料LN?善注

英文名中文名分類學地位度分類染材料材料A/B

培護實*的排號

的操作

作“

C作。

SARS-

a&sociatedSARSjg狀病UN281

6冠狀病毒科第二類BSL-3ABSL-3BSL-3BSL-2BSL-1A

coronavirus毒4

(SARS-CoV)

除了

SARS-

Co5以

UN337外，如

7Coronavirus您狀病毒冠狀病毒科第三類BSL-2ABSL-2BSL2BSUIBSL-1B

3NL-63,

00

43429E

等

小RNA病毒UN337

8Coxsakievirus利薩奇京毒第三類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BSL-1B

科3

HepatitisA小RNA病*UN337

9甲型肝炎病毒第三類BSL-2ABSL-2B§1「2BSL-1BSL-1B

virus科3

目■不

能培養.

但有產

HepatitisBIf肝DNA病UN281毒細胞

10乙型肝炎病毒第三類BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BSL-1A

、irus毒科4系.僅

細胞培

養物為

A類.

上海市臨檢中心

表3.細菌、放線菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體分類名錄（部分）

病原菌名稱危害程度實甄活動所需生物安全實驗室級別運輸迪分備注

分類類,

序號▼-------\

大量活動物感非感染

樣本檢UN

學名中文名菌操作染實驗性材料A/B

■b測,的實驗d編號

UN

Bacillusanthracis炭皰芽疳桿菌第二類BSL>3ABSL-3BSL-2BSL-1A

2814

其中羯

毒株或

疫苗株

UN

Brucellaspp布魯氏菌屬第二類BSL<3ABSL-3BSL-2BSL-1A可在

2814

BSL-2

實驗室

，作.

UN

Mycobacteriumbovis牛型分校桿菌類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1A

2814

MycobacteriumUN

結橫分校桿菌第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1A

tuberculosis2814

UN

Vibriocholerae霍亂弧葡第二類BSL>2ABSL-2BSL-2BSL-1A

2814

UN

Yersiniapestis國疫耶爾森菌第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1A

2814

34

上海市臨檢中心

二、針對不同類型實驗活動危害評估的原則

（一）含已知的病原微生物的物質

（二）含未知的病原微生物的物質

（三）可能含有或未含有未知的病原微生物的物質

（四）產生遺傳修飾生物體的實驗活動

35

瀚上海市臨檢中心

內容

J?實驗室生物安全操作和防護］

37

上海市臨檢中心

（一）實驗室的進入

⑥未經批準，任何人不得進入實驗室工作區域。兒童不得進入實

驗室工作區域。可能增加獲得性感染的危險性或感染后可能引

起嚴重后果的人員不允許進入實驗室或動物房。

SBSL2實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志，包括

通用的生物危險性標志，標明傳染因子、實驗室負責人或其他

人姓名、電話、以及進入實驗室的特殊要求。

?實驗室的門應保持關閉。

?工作人員進入動物房應當經過特別批準。

令與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。

38

上海市臨檢中心

-

樓

實

驗

區

域

門

禁E

39

.ibnr?forv

一

樓

微

生

物

實

驗

室

經同意

方可進入

三

樓

傳

染

病

實

驗

室

2

3

。

8

室

經同意

方可進入

41

⑥在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。

?在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的

操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。

8在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區域前，都必須洗

手。

8為了防止眼睛或面部受到噴激物的污染、碰撞或人工紫外線福射的傷害，必須

氟合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備。

今嚴禁穿著實驗室防護服離開實瞳室工作區域。

⑥不得在實驗室內穿集腳趾的鞋。

⑥禁止在實毆室工作區域進食、飲水、吸煙、化妝和處理BI形眼鐐。

⑥禁止在實驗室工作區域儲存食品和飲料。

?在實驗室內用過的防護朦不得和日常服裝放在同一柜子內。

44

上海市臨檢中心

口人員防護設備

■面部保護

■眼部保護

46

步上海市臨檢中心

病原微生物感染力和致病力再強，只要使其不與人體接觸（包括呼吸道）

它就不會發生作用，感染就不會發生,在操作中手接觸生物因子的機會最多，

所以用乳膠手套、防護服等作為屏障。對氣溶膠的防護用正壓服、正壓頭

盔、防護面具、口罩、防護眼鏡等作為主要屏障，避免生物因子被人體吸

入。這就是強調個人防護的原由。

1656年德國的醫生:

長袍、頭盔、防護眼鏡、填

滿調料的面具。防護鼠疫的

傳染!

48

上海市臨檢中心_________________

（三）有關操作的指導原則

?嚴禁用口吸移液管,嚴禁將實驗材料置于口內。嚴禁稚標簽。

-所有的實躺I作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來

進行。

?應限制使用注射針頭和注射器。除了進行腸道外注射或抽取實

驗動物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他用

途。

?實驗室應制訂并執行處理溢出物的標準操作程序。出現溢出、

事故以及明顯或可能暴■于感染性物質時，必須向實驗室負責

人報告。實驗室應如實記錄有關暴露和處理的情況，保存相關

記錄。

-污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化

學或物理學方法）。根據所處理的微生物因子的危險度評估結

果準備專門的污水處理系統。

?只有保證在實驗室內沒有受到污染的文件紙張才能帶出實毆室

上海市臨檢中心

針與鋒利器具的防范

上海市臨檢中心

（四）實驗室工作區的管理原則

⑥實驗室應保持清潔整齊，嚴禁擺放和

47Hill

⑥每天工作結束后應清除工作臺面的污M

音養物名

病國家

防止節

擦拭

52