ICS65.150CCSB5222吉林省地方標準DB22/T3386—2022小球藻發酵培養技術規范Thetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgaris吉林省市場監督管理廳發布DB22/T3386—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件中的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農業農村廳提出并歸口。本文件起草主要單位：吉林農業大學，吉林省水產技術推廣總站、通化師范學院。本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、藺麗麗、王秋舉、郭志欣、劉洪建、趙云龍、高永生。IDB22/T3386—2022小球藻發酵培養技術規范1范圍本文件規定了小球藻（Chlorellavulgaris）發酵培養的儀器設備與耗材，培養基，培養，測定生物量和采收。本文件適用于淡水小球藻設施發酵培養。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業水質標準3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。培養基中接種少量的藻種，在適宜環境條件（溫度、鹽度、光照、pH值等）下，藻液達到一定的4小球藻發酵培養儀器設備應滿足下列要求：a)發酵罐,容量不低于50L；b)恒溫干燥箱，不低于2000W；1DB22/T3386—20225培養基擴大培養用BG-11培養基，主要成分見表1。表1BG-11培養基組成貯存液配制體積（mL）成分含量（g）工作液體積（mL）NaNO3(+N)/NaCl(-N)K2HPO4·3H2ONa2CO330/20.61a10000.800.4050檸檬酸0.302b100檸檬酸鐵銨EDTA-Na20.3020.05100100CaCl2·2H2OMgSO4·7H2OH3BO31.8022343.752.86MnCl2·4H2OCuSO4·5H2ONa2MoO4·2H2OCo(NO3)2·6H2OZnSO4·7H2OHEPES緩沖液1.810.0790.3910.049470.222119.1510001000c406貯存液1用2mol/L的NaOH調pH到7.4～8.0；貯存液2易生菌，高壓滅菌后保存于4℃；貯存液6為保種時用，平時培養可不加。發酵培養的培養基主要成分見表2。表22DB22/T3386—20226培養水質水質符合GB11607的要求。擴大培養6.2.1藻種小球藻純度≥99.99%。6.2.2接種無菌環境下，將已無菌的600mLBG-11培養基裝入1L已滅菌處理的玻璃三角燒瓶中，然后將200mL密度達到10ind/mL的小球藻接種于BG-11培養基中。66.2.3培養條件pH6.5，培養溫度28℃，充氣量1.5L/min,培養時間為96h。發酵培養6.3.1接種在50L發酵罐中進行發酵培養，接種量為10%，將3L擴大培養的小球藻藻種接入27L發酵裝料體積30L，溫度28℃，攪拌速度150r/min~300r/min，發酵時間96h。在發酵培養達36h時向發酵罐內補充30g/L葡萄糖；在發酵培養達60h時向發酵罐內補充10g/L尿素，培養至滿96h結束。7取8mL藻液裝入10mL離心管中以8000r/min離心10min，棄上清，再用蒸餾水混懸藻泥，離心棄上清，重復三遍。將藻泥用少量蒸餾水洗入預先稱重的培養皿中敞口置于