廣西地方標準《千年桐嫁接育苗技術規程》征求意見稿編制說明一、任務來源和起草單位本標準是廣西壯族自治區市場監督管理局2018年下達的項目，由廣西壯族自治區林業局提出，廣西壯族自治區林業科學研究院負責起草。項目編號：2018-0228，起止年限：2018.12-2020.12。二、制定標準的目的和意義1.油桐林面積大但老林低產林分多，急需更新油桐屬大戟科（Euphorbiaceae）油桐屬（VerniciaLour）。油桐與油茶、核桃、烏桕并稱我國四大木本油料樹種。它具有生長快、單位面積產量高、種子含油率高、適應范圍廣、栽培性強、經濟用途廣等特點。廣西是我國油桐主產地之一，主栽種主要有三年桐和千年桐，千年桐以其收獲期長受到青睞而面積居多，歷史上曾經是廣大山區農民重要的經濟樹種，為國家建設作出了貢獻。由于石油化工產業的崛起，油桐產業經受了一段相當長時間低迷，面積銳減，價格下滑。但是，近年來，由于桐油深加工開發取得突破，價格連年上揚，農民種植油桐的積極性高漲，種植效益不斷提高。據不完全統計，全區現有油桐面積241.8萬畝，占全國現有油桐林面積約為992.5萬畝的24.4%；常年產桐油約2萬噸，占全國產量的30左右%，居全國第一。我區的油桐主要集中分布在百色和河池2個市，其中，百色占全區面積的65.5%，河池占29.8%，但多數為老林低產林分，急需更新換種。2.發展油桐產業對于發展我國新材料工業、緩解我國能源危機具有重要的戰略意義桐油是油桐種子所榨取的油脂，其主要成分為脂肪酸甘油三酯混合物。桐油中含有80％左右的在地球上所有植物中絕無僅有的特異脂肪酸――桐酸，桐酸具3個共軛雙鍵，化學性質活撥，是優質、多用途工業原料。桐油是世界上植物油中最優的干性油，是制造最優質的油漆和油墨的基本原料，具有干燥快、附著力強、比重輕、富光澤、耐酸、耐堿、耐高溫、抗凍裂、防水、防腐、絕緣、抗輻射、抗滲透等優良特征，大量用作兵器、車船、電子、電器、建筑、裝飾、機械、漁具等的防水、防腐、防銹的環保型涂料。近年來，桐油應用的重點已從傳統領域轉向蓬勃發展的電子工業，大量用于制取作為電子產品心臟的印刷電路板浸漬材料。桐油還是制造生物柴油的優質原料，將油桐作為生物質能源樹種來栽培，則有可能成為緩解我國能源短缺的最有發展前途的生物質能源樹種之一。總之，發展油桐產業對于發展我國新材料工業、緩解我國能源危機具有重要的戰略意義，對于調整山區經濟結構、吸收山區勞動力、幫助農民脫貧致富具有重要的現實意義。3．千年桐實生苗分化大，無性系良種應用是油桐產業升級發展的必然方向千年桐因其實生苗中通常會有50%以上只開花不結果的雌株或結果甚少的雌雄同株導致單產不高。把千年桐苗接上雌株接穗，用嫁接苗配與一定比例的實生苗造林可使千年桐雌、雄株比例合理化，產量成倍增加。鑒于目前千年桐苗木培育無相關的行業標準，廣西也尚未制定千年桐育苗方面的地方標準，因而千年桐苗木培育技術方面缺乏規范。本建議提出并制定“千年桐嫁接育苗技術規程”將填補這一方面的空白，并為廣西千年桐苗木培育實現無性系化、良種化提供一份指導性文件，為廣西千年桐產業升級發展提供技術支撐。因此，通過集成應用已有科技成果，制定科學的規范化千年桐嫁接育苗技術標準，進一步規范化、集約化千年桐嫁接苗木的繁育，實現千年桐產業向優質、高效方向發展。對提高千年桐單位面積產量和經營效益、增加農民收入具有重要意義。三、國內外標準對比情況目前，廣西尚無針對千年桐嫁接育苗技術制定標準。與林業行業標準《油桐林培育技術規程》（LY/T1327-2017）相比，本標準在嫁接方法上新增操作簡便易學的切接法，豐富了嫁接方法；砧木培育的播種時間上，根據我區實際情況，春冬兩季均可播種，且冬播較春播苗木長得更快；在嫁接時間上，本標準在秋季亦可嫁接，且成活率不遜于春接，可嫁接時間更長；對于砧木地徑的要求方面，經過試驗表明，地徑0.8cm以上均可嫁接，可極大的縮短育苗周期。四、標準編寫的原則和依據1.編寫原則標準制定以推進千年桐嫁接苗木繁育標準化、規范化為目標，實現千年桐產業向優質、高效方向發展，遵循科學性、先進性、合理性和適用性的原則，力求做到科學規范、指標準確、可操作性強，既與國家相關標準接軌，又符合廣西區情。2.編寫依據按中華人民共和國國家標準GB/T1.12020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》等文件的要求進行編寫。五、標準工作簡況1.標準起草單位廣西壯族自治區林業科學研究院2.標準主要起草人藍金宣、黃曉露、趙志珩、梁文匯、曾祥艷、馬錦林、李開祥、廖健明、黃開順、楊卓穎、陳金艷、李寶財。3.技術路線六、征求意見稿編制過程2018年12月，廣西壯族自治區市場監督管理局下達廣西地方標準制定任務《千年桐嫁接育苗技術規程》任務。2018年8月～2020年11月，廣西林科院成立了標準編制小組，開展千年桐嫁接育苗技術的研究與驗證工作。提出工作方案，開展相關試驗，以實驗數據、調查材料為依據，匯總近年來企業、科研院所在千年桐嫁接苗培育的研究成果及技術參數，結合“十三五”國家重點研發計劃課題“油桐集約高效培育與高值化加工技術研究”（2017YFD0600703）的實施，參考《油桐林培育技術規程》LY/T1327-2017、《林業植物產地檢疫技術規程》LY/T1829-2020、《林木種苗生產經營檔案》LY/T2280-2018及《林木種苗標簽》LY/T2290-2018等林業行業標準，初步確定了標準內容的基本構架。2020年12月，在認真學習研究《林業標準化管理辦法》、GB/T1.12020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》等相關資料后，確定本標準制定的基本原則、內容及相關要求，正式開始牽頭起草。形成了工作組討論稿。對數據資料進行分析整理，完成標準草案稿，后經不斷修訂補充，形成征求意見稿。七、關鍵技術指標數據依據及來源1.嫁接時間1.1試驗方案（1）觀察千年桐在廣西的生長發育周期并進行總結。（2）2017年11月，在廣西林科院油桐山試驗基地采集千年桐優良無性系果實。果實采回后自然陰干，待果皮裂開后取出種子備用。篩選飽滿無蟲眼的油桐種子浸泡在0.3%的高錳酸鉀溶液中10min進行消毒，用清水沖洗后沙藏催芽，待長出兩片真葉后將植株移栽到苗圃地中。分別于2018年3、4、10、11月及2019年的3、5、8、9月進行嫁接，每次嫁接60株，重復3次。1.2試驗結果（1）從表1可以看出，廣西多地千年桐萌動期在3月上旬，10月中下旬之后，樹木處于休眠期，樹液停止流動，不易產生愈傷組織，接穗與砧木難愈合，接穗易餓死。表1不同區域千年桐年生長發育周期地點萌動期花期枝葉生長期果實發育期落葉期南寧3月5-10日4月1日-5月10日5月10日-6月5月上旬-10月上旬11月中旬-12月上旬永福3月上旬4月下旬-5月5月6月上旬-10月上旬10月上旬-12月中旬樂業3月5-10日4月5-30日5月-6月5月中旬-10月上旬10月下旬-11月30日（2）從表2可以看出，不同嫁接時間對千年桐嫁接成活率的影響達到顯著差異。嫁接成活率最高的是10月上旬，為96.67%，其次是3月上旬，為93.33%，兩個時間段之間的成活率差異不顯著。3月下旬及9月下旬的嫁接成活率均達到86.67%，且這兩個時間段的嫁接成活率與3月上旬的成活率差異不顯著，但顯著高于除10月上旬以外的其他嫁接時間。表2不同嫁接時間千年桐成活率嫁接時間嫁接株數成活株數成活株數成活株數平均成活率%3月上旬6057545793.33±2.89ab3月下旬6052505486.67±3.34bc4月上旬6045484576.67±2.89de4月下旬6044433970.00±4.41e5月上旬6035353256.66±2.89f8月中旬6019192233.34±2.89g9月中旬6046504880.00±3.33cd9月下旬6052495586.67±5.00bc10月上旬6059575896.67±1.67a11月上旬6040454170.00±4.41e1.3試驗結論結合試驗結果及在廣西多地千年桐生長發育規律，千年桐嫁接育苗最適宜時間為每年春季的3月，或者秋季的9-10月。2.解綁時間試驗2.1試驗方案2019年10月16日，以一年生千年桐地苗作為砧木，選取同一成年優樹上健壯的當年生枝條作為穗條。切長6~7cm，含1~2腋芽的莖段作接穗，用切接法進行嫁接，共嫁接1000株。嫁接后第5天開始，每隔2天采一次樣，共取8次；第20天至第55天，每隔3天取一次樣，共取12次；總共取樣20次。每次各取3株，采用完全隨機方法進行取樣。取樣時，截取千年桐嫁接苗嫁接結合部1.0~1.5cm的莖段，放入FAA固定液中固定,待完成取樣統一切片。采用硬組織切片法。取樣品進行組織脫水，梯度乙醇60％-70％-80％-90％-95％-100％-100％，二甲苯透明。組織滲透及塑料包埋，甲基丙烯酸甲酯，浸塑-浸塑川-浸塑I，入包埋液抽真空后包埋，聚合。組織切片、貼片、烤片，采用萊卡HistoCut全自動切片機切片，50％乙醇貼片，過夜烤片。切片脫塑、染色，將包埋劑脫去后再染色。切片脫塑至水，依次將切片乙二醇乙醚乙酸酯Ⅰ6h，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅱ過夜，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅲ室溫10~15min，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅳ室溫10~15min，100%Ⅰ乙醇10min，100%Ⅱ乙醇10min，95%乙醇10min，90%乙醇10min，80%乙醇10min，自來水洗。番紅染色，切片入番紅染液中染色3~5s，自來水稍洗，洗去多余染料即可。脫色，切片依次入50%、70%、80%梯度酒精中各3-8s。固綠染色，切片入固綠染液中染色4~6s，無水乙醇三缸脫水。透明封片，切片入干凈的二甲苯透明5min，中性樹膠封片。2.2試驗結果千年桐嫁接口嫁接后第5天至第55天的切片表明，嫁接口愈合過程經歷了5個階段，分別是隔離層形成期、愈傷組織分化形成期、愈傷組織連接期、形成層分化連接期和維管組織分化形成期。隔離層期。嫁接后第5d，由于嫁接時被嫁接刀切傷，切口發生愈傷反應，在傷口表面可觀察到一些褐色的壞死組織，即隔離層（圖1：A）。這個壞死組織，在嫁接早期可防止水分過度蒸發并保護傷口不受外物侵害感染。圖1.隔離層形成期的解剖觀察A:千年桐嫁接后5d的橫切圖；Sc：接穗；St：砧木；IL：隔離層愈傷組織形成期。從嫁接后第7d的切片（圖1：B）可以看出，砧木和接穗傷口附件的薄壁細胞、形成層脫分化，形成不規則多邊形狀的薄壁細胞，即愈傷組織。嫁接后第9d（圖1：C），這些不規則多邊形狀的薄壁細胞越來越多，砧木和接穗產生的愈傷組織共同填充接縫。圖1.愈傷組織分化形成期的解剖觀察B:千年桐嫁接后7d的橫切圖；C:千年桐嫁接后9d的橫切圖；Sc：接穗；St：砧木；Ci：愈傷組織愈傷組織連接期。從圖3可以看出，嫁接后第11d-15d，由于愈傷組織不斷分化積累，基本填滿了砧木和接穗之間的連接處，使兩者的愈傷組織連接成為一體，形成砧穗連接的愈傷組織橋。這個愈傷組織橋在維管束形成前的嫁接初期，是砧木向穗條提供水分和營養的主要通道，對嫁接成活與否至關重要。圖3.愈傷組織連接期的解剖觀察D:千年桐嫁接后11d的橫切圖；E:千年桐嫁接后13d的橫切圖；F:千年桐嫁接后15d的橫切圖；Sc：接穗；St：砧木；Ci：愈傷組織形成層分化形成期。嫁接后第17d開始，砧木形成層向內分化出4-5層木質部細胞，與此同時，砧木形成層附近的薄壁細胞不斷分化出新的形成層（圖4：G、H、I），這些形成層細胞穿過砧穗形成層間的愈傷組織，將兩者連接起來，使兩者連成完整的形成層帶。連接完整的形成層呈扭曲帶狀。圖4.形成層分化形成期的解剖觀察G:千年桐嫁接后17d的橫切圖；H:千年桐嫁接后19d的橫切圖；I:千年桐嫁接后22d的橫切圖；Sc：接穗；St：砧木；Ca：形成層。維管組織分化形成期。隨著嫁接口的發育，嫁接后第25d，連接完成的形成層帶繼續進行分化活動，向內分生出木質部，且連接處觀察到有新生導管的跡象（圖5：J）。嫁接后第31d，砧穗形成層以及兩者連接處形成層分化出較多的木質部，導管清晰可見（圖5：L）。嫁接后第34d，可明顯看到形成層向內分化出較多的木質部且內含導管，向外分化出韌皮部，形成篩管（圖5：M），砧穗完整地連為一體。至此，砧木和穗條便可通過新形成的維管組織恢復對穗條水分和營養的供應，這是嫁接成活至關重要的一個時期。圖5.維管組織分化形成期的解剖觀察J:千年桐嫁接后25d的橫切圖；L:千年桐嫁接后31d的橫切圖；M:千年桐嫁接后34d的橫切圖；N:千年桐嫁接后37d的橫切圖；S:千年桐嫁接后52d的橫切圖；T:千年桐嫁接后55d的橫切圖；Sc：接穗；St：砧木；Ca：形成層；V：導管；Xy：木質部。2.3試驗結論從嫁接口不同階段的解剖圖可以看出，千年桐嫁接口愈合過程大致分為5個階段：隔離層期（1-5d）、愈傷組織分化形成期（5d-9d）、愈傷組織連接期（9d-17d）、形成層分化連接期（17d-25d）和維管組織分化連接期（25d-34d）。千年桐嫁接后前9d是決定嫁接體能否形成的關鍵期，可對嫁接苗進行成活檢查并及時補接。前34d是維管組織分化連接期（25d-34d）是千年桐嫁接苗成活的重要時期，可對砧穗愈合情況進行檢查，如愈合良好，可將扎縛物松開。八、標準主要內容本標準共設置8章，各章的主要技術內容如下：第1章范圍：規定了標準的主要技術內容和適用范圍。第2章規范性引用文件：引用行業標準4個。第3章術語和定義，本文件沒有需要界定的術語和定義。第4章圃地準備選擇地勢平坦，背風向陽、排灌方便的緩坡地作為苗圃地進行育苗，并根據作業需要，劃分出苗床與步道。第5章砧木培育：從果實采收、果實處理、種子催芽、育苗基質、容器育苗（基質準備、