第1頁（共1頁）2025年高考備考生物復習之發酵工程一．選擇題（共6小題）1．（2023春?商丘期末）如表表示某培養基的配方（生長在此培養基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤），下列敘述不正確的是（）成分蛋白胨葡萄糖KH2PO4伊紅亞甲基藍蒸餾水瓊脂含量10g10g2g0.4g0.0655g1000mL15gA．從用途分析該培養基屬于選擇培養基 B．培養基中提供碳源的物質主要是葡萄糖，提供氮源的物質是蛋白胨 C．該培養基含有水、無機鹽、碳源和氮源等營養物質 D．該培養基pH值應調節至中性或弱堿性2．（2023春?鎮沅縣校級期末）如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1→2→3→4→5．下列操作方法正確的是（）A．操作前不用做任何處理 B．劃線操作必須在火焰上進行 C．在5區域中才可以得到所需菌落 D．在1、2、3、4、5區域中劃線前后都要對接種環滅菌3．（2023春?譙城區校級期末）利用卷心菜發酵制作泡菜過程中，乳酸菌和酵母菌的細胞數量和pH的變化如圖所示。下列敘述正確的是（）A．酵母菌和乳酸菌均有核膜包被的細胞核 B．發酵初期酵母菌菌建立了明顯的菌種優勢 C．前6dpH下降主要由酵母菌代謝引起 D．發酵中期酵母菌通過無氧呼吸進行增殖4．（2023春?城關區校級期中）在制作泡菜的過程中，下列描述錯誤的是（）A．所用食鹽水的質量百分比為5%～20% B．制作泡菜時，原料要接種乳酸菌 C．鹽水入壇前要煮沸冷卻，以防污染 D．在壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，以保證壇內的無氧環境5．（2024春?石景山區期末）關于白酒、啤酒和果酒的生產，下列敘述不正確的是（）A．在釀制白酒、啤酒和果酒的發酵初期需通入空氣 B．釀制過程中溫度控制在25℃左右更利于酒精發酵 C．葡萄糖轉化為乙醇所需的酶既存在于細胞質基質，也存在于線粒體 D．生產三種酒的原材料不同，但發酵過程中起主要作用的都是酵母菌6．（2024春?海淀區校級期中）下列關于制作果酒的敘述，錯誤的是（）A．酒精是酵母菌進行無氧呼吸產生的 B．果酒制作應選取含糖量較高的新鮮水果 C．制作過程中將瓶蓋擰松是為了讓空氣進入瓶內 D．果酒制作利用的酵母菌存在于許多新鮮水果表面二．多選題（共5小題）（多選）7．（2024春?東湖區校級期中）酵母菌的純培養包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟。下列相關敘述不正確的是（）A．純培養物是由單一酵母菌繁殖所獲得的酵母菌群體分泌的代謝物 B．在配制固體培養基時需要先進行滅菌，再對pH進行調節 C．倒平板時冷卻后的培養皿須倒置主要是為了方便觀察 D．利用平板劃線法接種時，接種環蘸取五次酵母菌液（多選）8．（2024?石家莊模擬）在涂布有敏感宿主細菌的固體培養基表面接種噬菌體，一個噬菌體先侵染和裂解一個細菌，然后以此為中心，再侵染和裂解周圍大量的細菌，最終在培養基上形成肉眼可見的透明圈，稱為噬菌斑，如圖所示。不同種噬菌體形成的噬菌斑形狀、大小、邊緣和透明度不同。研究者在涂布有敏感宿主細菌的固體培養基上接種0.1ml相應噬菌體的106倍稀釋液進行相關實驗。下列敘述正確的是（）A．接種細菌后的平板培養一段時間后變為不透明狀態，是由細菌大量繁殖造成的 B．噬菌體樣品應有足夠的稀釋度，以保證初期一個細菌最多被一個噬菌體侵染 C．若平均每個平板的噬菌斑量為150，則該樣品的噬菌體密度為1.5×108個/mL D．根據噬菌斑的形狀、大小等特征可判斷是否需要進一步純化噬菌體（多選）9．（2024?江蘇模擬）研究小組采用預加菌液法探究氮芐青霉素（Amp）和卡那霉素（Kan）對大腸桿菌的選擇作用，即將菌液直接加入培養基中，搖勻倒平板，冷卻后在相應區域放置圓形濾紙片，一段時間后測量抑菌圈直徑，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ代篩選實驗結果如圖所示。下列相關敘述正確的有（）A．為防止培養基凝固，加入菌液時培養基溫度不得低于65℃ B．抑菌圈內有兩個菌落，可能是具有抗藥性的大腸桿菌或其他雜菌形成的 C．Kan較Amp對大腸桿菌的抑菌效果強，且隨培養代數增多兩者抑菌效果減弱 D．一定濃度的抗生素會誘導細菌產生耐藥性的變異，故使用抗生素時需適量（多選）10．（2024?張家界模擬）高強度超聲可以通過破壞細胞結構、干擾基因表達等殺死細胞；低強度超聲可以通過提高酶活性、改變細胞膜通透性等調控細胞生長。果酒制作過程中，常利用超聲處理。下列有關敘述中，不正確的是（）A．果酒發酵的溫度一般控制在18～30℃ B．果酒發酵前期通入無菌空氣的目的是進行酒精發酵 C．果酒發酵結束后，可選擇高壓蒸汽滅菌處理發酵液 D．果酒發酵過程中，可選擇適宜強度的超聲處理（多選）11．（2024?湖南模擬）與傳統發酵技術相比，發酵工程的產品種類更加豐富，產量和質量明顯提高。下列有關說法正確的是（）A．發酵工程與傳統發酵技術最大的區別就是前者可以利用微生物來進行發酵 B．發酵工程的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身 C．在發酵工程的發酵環節中，發酵條件變化不僅會影響微生物的生長繁殖，也會影響微生物的代謝途徑 D．通過發酵工程可以從微生物細胞中提取單細胞蛋白三．填空題（共6小題）12．（2022春?雞冠區校級期中）實驗室常用的消毒方法：；滅菌方法：。13．如圖所示是劃線分離法的操作，其中正確的是。14．（2022秋?朝陽期末）傳統工藝釀造的醋不但含有豐富的營養成分，還具有獨特的緩解疲勞、改善脂質代謝、增強食欲、保護腸胃等功能。《尚書?說命下》中提到：“若作酒醴，爾惟曲囊；若作和羹，爾惟鹽梅。”說明古人用酒醋釀造谷物酒以及用梅子作酸味料。這些都與果醋的制作有關。回答下列問題：（1）根據醋酸菌的代謝特點，果醋釀制過程需控制適宜的環境條件，如（答兩點）。（2）較高初始乙醇濃度對醋酸菌的生長和代謝會產生抑制作用，選育高性能優良醋酸菌株能提高醋的含量和品質，某同學開展耐乙醇菌性的篩選研究，配制了兩種培養基：培養基種類成分富集培養基3%葡萄糖、2%酵母粉、0.01%Mg2SO4、自然pH篩選培養基0.5%葡萄糖、1%酵母膏、2%CaCO3、2%瓊脂、10%無水乙醇、自然pH①對兩種培養基常采用法進行滅菌；篩選培養基中，為醋酸菌提供氮源的是，該培養基中葡萄糖的含量低于富集培養基，原因是。②某同學從富集培養基中吸取少量菌液，經過后滴加到篩選培養基上進行涂布，適宜條件下培養后挑選產生透明圈的單菌落，得到耐乙醇的醋酸菌菌株。透明圈可用于鑒別醋酸菌的理由是。（3）乙醇脫氫酶（ADH）催化乙醇生成乙醛是醋酸發酵的第一階段，乙醛脫氫酶（ALDH）催化乙醛生成乙酸是醋酸發酵的第二階段，ADH和ALDH是醋酸發酵的兩種關鍵酶。某同學從FY﹣24，DY﹣5，AS﹣4三種耐乙醇菌株中分別提取ADH和ALDH，分別用高濃度的乙醇處理后測酶活性，由此可根據進一步篩選出耐乙醇醋酸高產菌株15．（2023?北京）自然界中不同微生物之間存在著復雜的相互作用。有些細菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細菌的結構使細胞內容物釋出。科學家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細菌。（1）用于分離細菌的固體培養基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要為細菌提供和維生素等。（2）A菌通常被用做溶菌對象，研究者將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層。培養一段時間后，薄層變渾濁（如圖），表明。（3）為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現。采用這種方法，研究者分離、培養并鑒定出P菌。（4）為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請提出一個假設，該假設能用以下材料和設備加以驗證。。主要實驗材料和設備：P菌、A菌、培養基、圓形濾紙小片、離心機和細菌培養箱。16．若想篩選出能分解石油的微生物，可以以為唯一的碳源，以LB全營養培養基為對照，觀察全營養培養基生長的菌落數比選擇培養基的菌落數（填“多”或“少”）。17．玉米芯殘渣含有大量的木質纖維素（由纖維素、半纖維素和木質素組成），通常被焚燒處理，不但造成嚴重的環境污染，還導致大量能量浪費。某科研團隊從樹林土壤中篩選，得到野生的季也蒙畢赤酵母，并進行多次篩選以期獲得優良菌株。優良菌株以玉米芯殘渣為原料可發酵生產潔凈燃料﹣乙醇。下圖為篩選過程，請分析回答：（1）圖中對土壤菌液進行系列梯度稀釋的目的是。稀釋后將菌液接種到以作為唯一碳源的培養基中進行培養。待長出菌落后，提取其基因組DNA進行擴增并測序，鑒定為季也蒙畢赤酵母。（2）發酵生產時需先將玉米芯殘渣進行預處理，該過程會產生許多抑制物。因此，研究人員在②的液體培養基中加入抑制物，并在③多次篩選時不斷提高抑制物的濃度，是為了。培養過程中從②的液體培養基中定期取樣并用的方法進行菌落計數，評估菌株增殖狀況。此外，選育優良菌株的方法還有和等。（3）剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不與水解后的葡萄糖等發生這種反應，從而在纖維素分解菌周圍出現透明的水解圈。將經過多次實驗所獲得的4種優良菌株后接種到含纖維素、剛果紅、高濃度抑制物的固體培養基中，結果如右圖。可選擇菌株作為目標菌株進行發酵生產，原因是。四．判斷題（共5小題）18．制作泡菜所用的菌種主要是醋酸菌。（判斷對錯）19．牛肉膏與蛋白胨不僅能為微生物提供碳源、氮源、無機鹽，還能為微生物提供生長因子．（判斷對錯）．20．一個由KH2PO4、Na2HPO4、H2O、NH4HCO3配制的培養基中含有4種營養物質．（判斷對錯）．21．培養微生物的培養基中都必須含有碳源、氮源、水和無機鹽，有些微生物的培養基中還需要加入生長因子．（判斷對錯）．22．發酵工程的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身。（判斷對錯）五．實驗題（共2小題）23．為了獲得β﹣胡蘿卜素產品，某小組開展了產?﹣胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實驗。請回答下列問題：（1）實驗用的培養皿常用的兩種滅菌方法是；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應該。（2）為了篩選出酵母菌，培養基中添加了青霉素，其目的是。（3）圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是。（填序號）①安全閥、放氣閥、壓力表②放氣閥、安全閥、壓力表③安全閥、放氣閥、溫度表④放氣閥、安全閥、溫度表（4）為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區均未見菌生長，最可能的原因是。（5）為增加胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是；研磨時（填“需要”或“不需要”）添加CaCO3，理由是。24．（2022春?雁峰區校級月考）某研究小組將一組相同圓紙片放入不同濃度的麥迪霉素（一種抗生素）溶液中浸泡后，放在接種有大腸桿菌的培養基上培養．實驗結果如圖1．請分析并回答下列問題．（1）將裝有培養基的滅菌包裝入高壓蒸汽滅菌鍋時，注意不要裝得太擠，以免因而影響滅菌的效果．加熱初期，必須將滅菌鍋內的冷空氣排盡，否則將因而影響滅菌的效果．倒平板時，待平板冷卻凝固后，應將平板倒過來放置，并將記號筆在上標明培養基的種類、培養日期、平板上樣品的稀釋度、培養微生物名稱及制作者姓名等信息．（2）實驗結果表明，對大腸桿菌抑制作用最明顯的是濃度為（填圖1中數字）的麥迪霉素；（3）該實驗中，宜使用方法接種大腸桿菌，在培養和接種大腸桿菌時要特別注意進行無菌操作，為了避免無關變量對實驗結果的影響，對圓紙片的要求是；（4）該研究小組運用上述實驗方法，還研究了相同濃度的三種不同抗生素A、B、C對大腸桿菌生長的影響，請在圖2中表示這一處理方案（可模仿圖1中圖示并加以必要注解的方法）．．六．解答題（共2小題）25．（2024春?焦作期末）十溴聯苯醚（DBDPO）是一種添加型高效阻燃劑，為白色或淡黃色粉末，不溶于水及一般有機溶劑，具有熱穩定性好、毒性低等優點。但在使用DBDPO時需注意其可能對環境造成的影響，并遵循相關的安全規定。科研人員為了從被DBDPO嚴重污染的土壤中分離出能高效降解DBDPO的好氧細菌，進行了相關實驗。請回答下列問題：（1）將10g土樣中的微生物稀釋10倍的操作是。（2）將土樣稀釋液置于恒溫培養箱中3天，然后取上層樣液接種到含一定DBDPO的培養液中，再置于恒溫培養箱中3天，循環上述操作的過程中，緩慢增加DBDPO的濃度。該循環操作過程中，每次取上層樣液的原因是。從平板上挑選高效降解DBDPO的好氧細菌，挑選的依據是。（3）土壤是微生物的“天然培養基”。該科研人員欲研究DBDPO污染對土壤中微生物種類數的影響，請利用DBDPO污染土樣、未污染土樣、普通培養基等為材料擬定一個實驗，需寫出實驗思路、預期結果及結論（注：實驗過程中不能使用顯微鏡）。實驗思路：。預期結果及結論：。26．（2024?深圳模擬）自然界中不同微生物之間存在著復雜的相互作用。有些細菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細菌的結構使細胞內容物釋出。科學家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細菌。（1）用于分離細菌的固體培養基包含多種營養成分，其中蛋白胨主要為細菌提供和維生素等。（2）A菌通常被用做溶菌對象。研究者將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層。培養一段時間后，薄層變渾濁（如圖1），表明。（3）為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現。采用這種方法，研究者分離、培養并鑒定出P菌。（4）為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請提出一個假設，該假設能用以下材料和設備加以驗證。主要實驗材料和設備：P菌、A菌、培養基、圓形濾紙小片、離心機和細菌培養箱。（5）為大量獲取P菌制成菌劑，請補充P菌應用于發酵工程的基本環節。

2025年高考備考生物復習之發酵工程參考答案與試題解析一．選擇題（共6小題）1．（2023春?商丘期末）如表表示某培養基的配方（生長在此培養基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤），下列敘述不正確的是（）成分蛋白胨葡萄糖KH2PO4伊紅亞甲基藍蒸餾水瓊脂含量10g10g2g0.4g0.0655g1000mL15gA．從用途分析該培養基屬于選擇培養基 B．培養基中提供碳源的物質主要是葡萄糖，提供氮源的物質是蛋白胨 C．該培養基含有水、無機鹽、碳源和氮源等營養物質 D．該培養基pH值應調節至中性或弱堿性【考點】培養基的配制；選擇培養基．【專題】微生物的分離、培養和應用．【答案】A【分析】1、微生物培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。2、鑒別、培養大腸桿菌可使用伊紅﹣亞甲基藍培養基，菌落呈黑色或紫黑色有金屬光澤。【解答】解：A、該培養基中添加伊紅﹣亞甲基藍，從用途分析，該培養基屬于鑒別培養基，可以鑒別大腸桿菌，A錯誤；B、該培養基中提供碳源的物質主要是葡萄糖，提供氮源的物質是蛋白胨，B正確；C、微生物的營養物質主要包括氮源、碳源、水和無機鹽等，有的還需要特殊營養物質如維生素，蛋白胨還可以提供維生素等，C正確；D、由于該培養基用于培養細菌，所以pH值應調節至中性或弱堿性，D正確。故選：A。【點評】本題考查結合表格數據，考查培養基的相關知識，要求考生識記培養基的營養構成、種類及功能，能結合題干和表格信息準確判斷各選項。2．（2023春?鎮沅縣校級期末）如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1→2→3→4→5．下列操作方法正確的是（）A．操作前不用做任何處理 B．劃線操作必須在火焰上進行 C．在5區域中才可以得到所需菌落 D．在1、2、3、4、5區域中劃線前后都要對接種環滅菌【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【答案】D【分析】閱讀題干和題圖可知，本題是與平板劃線操作有關的題目，先梳理平板劃線操作的相關知識，然后結合選項描述分析判斷。【解答】解：A、進行平板劃線操作之前，用將接種環在酒精燈火焰上進行灼燒滅菌，A錯誤；B、平板劃線操作應在火焰旁進行，不能在火焰上進行，B錯誤；C、由題圖可知，5區域是最后一個區域，有可能在5區域獲得所需要的菌落，在4區域也有可能得到所需要的菌落，C錯誤；D、在1、2、3、4區域中劃線前都要對接種環進行灼燒滅菌，保證每次劃線的菌種來自上一區域的末端，5區域劃線前都要對接種環進行灼燒滅菌目的是防止雜菌污染，1區域劃線后進行灼燒滅菌是防止污染環境及操作者，D正確。故選：D。【點評】本題的知識點是平板劃線操作劃線前后的滅菌及目的，平板劃線法接種的結果預期，主要考查學生對平板劃線法的掌握程度。3．（2023春?譙城區校級期末）利用卷心菜發酵制作泡菜過程中，乳酸菌和酵母菌的細胞數量和pH的變化如圖所示。下列敘述正確的是（）A．酵母菌和乳酸菌均有核膜包被的細胞核 B．發酵初期酵母菌菌建立了明顯的菌種優勢 C．前6dpH下降主要由酵母菌代謝引起 D．發酵中期酵母菌通過無氧呼吸進行增殖【考點】制作泡菜．【專題】坐標曲線圖；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】D【分析】泡菜在腌制過程中，乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽的變化：①發酵初期：以不抗酸的大腸桿菌和酵母菌的活動為主，同時還有一部分硝酸鹽還原菌活動。該時期利用了氧氣，產生了厭氧環境，乳酸菌才開始活動。此時乳酸菌和乳酸的量都比較少，而由于硝酸鹽還原菌的活動，亞硝酸鹽含量有所增加。②發酵中期：由于乳酸菌產生了大量乳酸，其他細菌活動受到抑制，只有乳酸菌活動增強。此時期乳酸菌數量達到最高峰，乳酸的量繼續積累。由于硝酸鹽還原菌受抑制，同時形成的亞硝酸鹽又被分解，因而亞硝酸鹽含量下降。所以在整個發酵過程中，亞硝酸鹽的含量表現為先增加后下降的趨勢。③發酵后期：由于乳酸的積累，酸度繼續增長，乳酸菌活動也受到抑制。乳酸菌數量下降，而硝酸鹽還原菌完全被抑制。【解答】解：A、酵母菌屬于真核細胞，具有成形的細胞核，而乳酸菌屬于原核細胞，不具有成形的細胞核，A錯誤；B、由曲線圖分析可知，發酵初期由于pH的迅速下降，其他雜菌的生長受到了嚴重影響，乳酸菌的數量快速增加，成為優勢種群，B錯誤；C、乳酸菌能夠將葡萄糖分解為乳酸，前6天pH下降主要由乳酸菌代謝引起，C錯誤；D、酵母菌屬于兼性厭氧微生物，也能夠進行無氧呼吸，發酵中期酵母菌通過無氧呼吸為細胞增殖提供能量，D正確。故選：D。【點評】本題考查制作泡菜，要求學生識記制作泡菜的原理、影響亞硝酸鹽含量的因素等知識，對于泡菜制作過程及原理的掌握及種群數量變化因素的理解是結題的關鍵。4．（2023春?城關區校級期中）在制作泡菜的過程中，下列描述錯誤的是（）A．所用食鹽水的質量百分比為5%～20% B．制作泡菜時，原料要接種乳酸菌 C．鹽水入壇前要煮沸冷卻，以防污染 D．在壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，以保證壇內的無氧環境【考點】制作泡菜．【專題】實驗原理；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】B【分析】泡菜的制作過程：按照清水與鹽的質量比為4：1的比例配制鹽水，將鹽、水煮沸冷卻。將經過預處理的新鮮蔬菜混合均勻，裝入泡萊壇內，裝至半壇時，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續裝至八成滿，再徐徐注入配制好的鹽水，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。向壇蓋邊沿的水槽中注滿水，以保證壇內乳酸菌發酵所需的無氧環境。在發酵過程中要注意經常向水槽中補充水。發酵時間長短受室內溫度的影響。【解答】解：A、所配制鹽水的質量百分比為5%～20%，A正確；B、家庭制作泡菜時，原料不需要接種乳酸菌，菌種來自于蔬菜表面，B錯誤；C、配制好的鹽水，需煮沸并冷卻，煮沸可以殺死鹽水中的微生物，鹽水入壇前煮沸后需要冷卻，是為了防止殺死乳酸菌，C正確；D、乳酸菌是厭氧菌，需要在無氧環境中將葡萄糖分解為乳酸，故在壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，可以保證壇內的無氧環境，D正確。故選：B。【點評】本題考查制作泡菜，要求考生識記制作泡菜的原理和制作過程，意在考查考生的識記能力和分析能力。5．（2024春?石景山區期末）關于白酒、啤酒和果酒的生產，下列敘述不正確的是（）A．在釀制白酒、啤酒和果酒的發酵初期需通入空氣 B．釀制過程中溫度控制在25℃左右更利于酒精發酵 C．葡萄糖轉化為乙醇所需的酶既存在于細胞質基質，也存在于線粒體 D．生產三種酒的原材料不同，但發酵過程中起主要作用的都是酵母菌【考點】果酒、果醋的制作．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】C【分析】酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。故酒的制作原理是酵母菌無氧呼吸產生酒精，酵母菌最適宜生長繁殖的溫度范圍是18～30℃；生產中是否有酒精的產生，可用酸性重鉻酸鉀來檢驗，該物質與酒精反應呈現灰綠色。【解答】解：A、在白酒、啤酒和果酒的發酵初期需要提供一定的氧氣，有利于酵母菌大量繁殖，A正確；B、酵母菌最適宜生長繁殖的溫度范圍是18～30℃，溫度控制在25℃左右更利于酒精發酵，B正確；CD、酒精發酵利用的菌種是酵母菌，其原理是酵母菌進行無氧呼吸產生酒精，葡萄糖轉化為乙醇所需的酶存在于細胞質基質，不存在線粒體中，C錯誤，D正確。故選：C。【點評】本題考查發酵技術及其應用的相關知識，要求考生理解識記有關技術的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。6．（2024春?海淀區校級期中）下列關于制作果酒的敘述，錯誤的是（）A．酒精是酵母菌進行無氧呼吸產生的 B．果酒制作應選取含糖量較高的新鮮水果 C．制作過程中將瓶蓋擰松是為了讓空氣進入瓶內 D．果酒制作利用的酵母菌存在于許多新鮮水果表面【考點】果酒、果醋的制作．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】C【分析】1、果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。故果酒的制作原理是酵母菌無氧呼吸產生酒精，酵母菌最適宜生長繁殖的溫度范圍是18～25℃；反應中是否有酒精的產生，可用酸性重鉻酸鉀來檢驗，該物質與酒精反應呈現灰綠色。2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一種好氧細菌，只有當氧氣充足時，才能進行旺盛的生理活動，其代謝類型屬于異養需氧型。當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解為醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變為乙醛，再將乙醛變為醋酸。醋酸菌的最適生長溫度為30～35℃。【解答】解：A、酵母菌在無氧條件下，酵母菌進行無氧呼吸，能進行酒精發酵，無氧呼吸產生的是酒精和二氧化碳，A正確；B、酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵，在該過程中需要消耗較多的糖類，故通常把含糖量較高的水果用來制作果酒，這樣既可以為果酒發酵提供原料，又可以為酵母菌的代謝提供能源，B正確；C、制作果酒利用的是酵母菌的無氧呼吸，而酵母菌的有氧呼吸和無氧呼吸都會產生二氧化碳，為了防止瓶子炸裂，在使用帶蓋瓶子制作果酒時，每隔一段時間擰松瓶蓋，以釋放出二氧化碳，C錯誤；D、傳統的果酒制作中，菌種的來源是附著在水果皮上的天然野生型酵母菌，這說明果酒制作利用的酵母菌存在于許多新鮮水果表面，D正確。故選：C。【點評】本題考查果酒和果醋的制作，要求考生識記參與果酒和果醋制作的微生物及其代謝類型，掌握果酒和果醋制作的原理及條件，能夠運用所學知識完成分析判斷。二．多選題（共5小題）（多選）7．（2024春?東湖區校級期中）酵母菌的純培養包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟。下列相關敘述不正確的是（）A．純培養物是由單一酵母菌繁殖所獲得的酵母菌群體分泌的代謝物 B．在配制固體培養基時需要先進行滅菌，再對pH進行調節 C．倒平板時冷卻后的培養皿須倒置主要是為了方便觀察 D．利用平板劃線法接種時，接種環蘸取五次酵母菌液【考點】微生物的純培養．【專題】對比分析法；微生物的分離、培養和應用．【答案】ABCD【分析】微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經溶化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。【解答】解：A、在微生物培養過程中，由一個細胞繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養物，A錯誤；B、在配制固體培養基時需要先對pH進行調節，再進行滅菌，B錯誤；C、倒平板冷卻后的培養皿要倒置在恒溫培養箱中，既能防止培養皿蓋上的水珠落在培養基表面造成污染，又能防止培養基中的水分過快蒸發，C錯誤；D、利用平板劃線法接種時，接種環只在菌液中蘸取一次，之后每次都從上一區的末端開始劃線，D錯誤。故選：ABCD。【點評】本題考查微生物培養的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。（多選）8．（2024?石家莊模擬）在涂布有敏感宿主細菌的固體培養基表面接種噬菌體，一個噬菌體先侵染和裂解一個細菌，然后以此為中心，再侵染和裂解周圍大量的細菌，最終在培養基上形成肉眼可見的透明圈，稱為噬菌斑，如圖所示。不同種噬菌體形成的噬菌斑形狀、大小、邊緣和透明度不同。研究者在涂布有敏感宿主細菌的固體培養基上接種0.1ml相應噬菌體的106倍稀釋液進行相關實驗。下列敘述正確的是（）A．接種細菌后的平板培養一段時間后變為不透明狀態，是由細菌大量繁殖造成的 B．噬菌體樣品應有足夠的稀釋度，以保證初期一個細菌最多被一個噬菌體侵染 C．若平均每個平板的噬菌斑量為150，則該樣品的噬菌體密度為1.5×108個/mL D．根據噬菌斑的形狀、大小等特征可判斷是否需要進一步純化噬菌體【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．【專題】模式圖；微生物的分離、培養和應用．【答案】ABD【分析】間接計數法（活菌計數法）：①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②計算公式：每克樣品中的菌株數＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數。【解答】A、根據題意可知，在噬菌體裂解細菌后，形成圓形透明斑，這說明在噬菌體裂解細菌前，透明的平板培養一段時間后變為不透明狀態，是由細菌大量繁殖造成的，A正確；B、噬菌體樣品應有足夠的稀釋度，以保證初期一個細菌最多被一個噬菌體吸附，如果稀釋度不夠，會出現兩個或多個噬菌體吸附同一個細菌，B正確；C、若平均每個平板的噬菌斑數量為150，則該樣品的噬菌體密度為：150÷0.1×106＝1.5×109個/mL，C錯誤；D、不同噬菌體噬斑的形態大小不同，根據培養基上噬菌斑的形狀等特征可判斷是否需要進一步純化噬菌體，D正確。故選：ABD。【點評】本題綜合考查了微生物的篩選與分離、接種與培養等知識，意在強化學生對微生物的實驗室培養的相關過程的理解與運用。（多選）9．（2024?江蘇模擬）研究小組采用預加菌液法探究氮芐青霉素（Amp）和卡那霉素（Kan）對大腸桿菌的選擇作用，即將菌液直接加入培養基中，搖勻倒平板，冷卻后在相應區域放置圓形濾紙片，一段時間后測量抑菌圈直徑，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ代篩選實驗結果如圖所示。下列相關敘述正確的有（）A．為防止培養基凝固，加入菌液時培養基溫度不得低于65℃ B．抑菌圈內有兩個菌落，可能是具有抗藥性的大腸桿菌或其他雜菌形成的 C．Kan較Amp對大腸桿菌的抑菌效果強，且隨培養代數增多兩者抑菌效果減弱 D．一定濃度的抗生素會誘導細菌產生耐藥性的變異，故使用抗生素時需適量【考點】選擇培養基；探究抗生素對細菌的選擇和作用．【專題】坐標曲線圖；微生物的分離、培養和應用．【答案】BC【分析】細菌抗藥性是由基因突變產生的，抗生素起到了選擇作用。抑菌圈的直徑越小，說明細菌對抗生素的抗性逐漸增強，抗生素的抑菌效果越差。【解答】解：A、溫度超過65℃會影響菌種的生存，甚至高溫能殺死菌種，因此加入菌液時培養基溫度不能太高，A錯誤；B、抑菌圈源于抗生素或其他抑菌物質對細菌生長的抑制作用，抑菌圈內有兩個菌落，可能是具有抗藥性的大腸桿菌或其他雜菌形成的，B正確；C、據柱狀圖可知，Kan較Amp組抑菌圈的直徑更大，說明其對大腸桿菌的抑菌效果強，且隨培養代數增多，兩者菌圈的直徑都減小，抑菌效果都減弱，C正確；D、細菌繁殖過程中會發生基因突變，產生抗藥性變異和不抗藥性變異，一定濃度的抗生素會殺死不抗藥性變異，抗藥性變異保留下來，不是抗生素會誘導細菌產生耐藥性的變異，D錯誤。故選：BC。【點評】本題主要考查培養基的配制以及抗生素對細胞的作用的相關知識，意在考查學生對基礎知識的理解掌握，難度適中。（多選）10．（2024?張家界模擬）高強度超聲可以通過破壞細胞結構、干擾基因表達等殺死細胞；低強度超聲可以通過提高酶活性、改變細胞膜通透性等調控細胞生長。果酒制作過程中，常利用超聲處理。下列有關敘述中，不正確的是（）A．果酒發酵的溫度一般控制在18～30℃ B．果酒發酵前期通入無菌空氣的目的是進行酒精發酵 C．果酒發酵結束后，可選擇高壓蒸汽滅菌處理發酵液 D．果酒發酵過程中，可選擇適宜強度的超聲處理【考點】果酒、果醋的制作．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】BC【分析】果酒制作的原理是利用酵母菌無氧呼吸分解有機物產生酒精和CO2，酒精發酵時需控制無氧環境。【解答】解：A、酵母菌的最適生長溫度約為28℃，故果酒發酵的溫度一般控制在18～30℃，A正確；B、果酒發酵前期通入無菌空氣的目的是讓酵母菌大量繁殖，B錯誤；C、高壓蒸汽滅菌可能會破壞果酒的品質，故不能用該方法對發酵液滅菌，C錯誤；D、低強度超聲可以通過提高酶活性、改變細胞膜通透性等調控細胞生長，從而增強發酵效果，提高果酒品質，故果酒發酵過程中，可選擇適宜強度的超聲處理，D正確。故選：BC。【點評】本題考查果酒果醋制作的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。（多選）11．（2024?湖南模擬）與傳統發酵技術相比，發酵工程的產品種類更加豐富，產量和質量明顯提高。下列有關說法正確的是（）A．發酵工程與傳統發酵技術最大的區別就是前者可以利用微生物來進行發酵 B．發酵工程的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身 C．在發酵工程的發酵環節中，發酵條件變化不僅會影響微生物的生長繁殖，也會影響微生物的代謝途徑 D．通過發酵工程可以從微生物細胞中提取單細胞蛋白【考點】發酵工程的基本環節；發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】BC【分析】1、發酵工程生產的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身。2、產品不同，分離提純的方法一般不同。（1）如果產品是菌體，可采用過濾，沉淀等方法將菌體從培養液中分離出來；（2）如果產品是代謝產物，可用萃取、蒸餾、離子交換等方法進行提取。3、發酵過程中要嚴格控制溫度、pH、溶氧、通氣量與轉速等發酵條件。4、發酵過程一般來說都是在常溫常壓下進行，條件溫和、反應安全，原料簡單、污染小，反應專一性強，因而可以得到較為專一的產物。【解答】解：A、發酵工程與傳統發酵技術都需要利用微生物來進行發酵，A錯誤；B、由分析可知，發酵工程的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身，B正確；C、在發酵工程的發酵環節中，發酵條件不僅影響微生物的生長繁殖，也會通過影響酶的活性影響微生物的代謝途徑，C正確；D、單細胞蛋白是指利用發酵工程獲得的大量的微生物菌體，D錯誤。故選：BC。【點評】本題考查發酵工程的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，難度不大。三．填空題（共6小題）12．（2022春?雞冠區校級期中）實驗室常用的消毒方法：；滅菌方法：。【考點】無菌技術常用的消毒和滅菌方法．【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．【答案】煮沸消毒法，巴氏消毒法，化學藥劑消毒法，紫外線消毒法；灼燒滅菌，干熱滅菌，高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）法【分析】1、無菌技術的主要內容：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；②將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等器具進行滅菌；③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。2、滅菌：使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物。灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌法適用于接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等。3、消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法。【解答】解：實驗室常用的消毒方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，化學藥劑消毒法，紫外線消毒法；實驗室常用的滅菌方法：灼燒滅菌，干熱滅菌，高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）法。故答案為：煮沸消毒法，巴氏消毒法，化學藥劑消毒法，紫外線消毒法；灼燒滅菌，干熱滅菌，高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）法【點評】本題主要考查無菌技術的內容，要求考生識記相關知識，并結合所學知識準確答題。13．如圖所示是劃線分離法的操作，其中正確的是。【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【專題】模式圖；微生物的分離、培養和應用．【答案】見試題解答內容【分析】劃線分離操作中的有關問題：（1）在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環，在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環。①第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結束灼燒目的避免接種環上可能存在的微生物污染培養基殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染或感染操作者②在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線，以免接種環溫度太高，殺死菌種。③在進行第二次以及其后的劃線操作時要從上一次劃線的末端開始劃線。每次劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。（2）平板劃線操作：①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。②劃A區：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁，左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁），右手拿接種環先在A區劃3﹣4條連續的平行線（線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區后應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方（不要放入皿蓋內），以防止雜菌的污染。③劃其他區：將燒去殘菌后的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，并使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條致密的平行線。再從B區作C區的劃線。最后經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。【解答】解：A、平板劃線法一般要畫幾個區域，而不是一個區域，A錯誤；BCD、在進行第二次以及其后的劃線操作時'要從上一次劃線的末端開始劃線，B正確，CD錯誤。故選：B。【點評】本題結合圖解，考查微生物分離和培養，重點考查接種微生物常用的兩種方法，尤其是平板劃線法，要求考生掌握平板劃線的具體操作過程及注意事項，能正確分析圖解。14．（2022秋?朝陽期末）傳統工藝釀造的醋不但含有豐富的營養成分，還具有獨特的緩解疲勞、改善脂質代謝、增強食欲、保護腸胃等功能。《尚書?說命下》中提到：“若作酒醴，爾惟曲囊；若作和羹，爾惟鹽梅。”說明古人用酒醋釀造谷物酒以及用梅子作酸味料。這些都與果醋的制作有關。回答下列問題：（1）根據醋酸菌的代謝特點，果醋釀制過程需控制適宜的環境條件，如（答兩點）。（2）較高初始乙醇濃度對醋酸菌的生長和代謝會產生抑制作用，選育高性能優良醋酸菌株能提高醋的含量和品質，某同學開展耐乙醇菌性的篩選研究，配制了兩種培養基：培養基種類成分富集培養基3%葡萄糖、2%酵母粉、0.01%Mg2SO4、自然pH篩選培養基0.5%葡萄糖、1%酵母膏、2%CaCO3、2%瓊脂、10%無水乙醇、自然pH①對兩種培養基常采用法進行滅菌；篩選培養基中，為醋酸菌提供氮源的是，該培養基中葡萄糖的含量低于富集培養基，原因是。②某同學從富集培養基中吸取少量菌液，經過后滴加到篩選培養基上進行涂布，適宜條件下培養后挑選產生透明圈的單菌落，得到耐乙醇的醋酸菌菌株。透明圈可用于鑒別醋酸菌的理由是。（3）乙醇脫氫酶（ADH）催化乙醇生成乙醛是醋酸發酵的第一階段，乙醛脫氫酶（ALDH）催化乙醛生成乙酸是醋酸發酵的第二階段，ADH和ALDH是醋酸發酵的兩種關鍵酶。某同學從FY﹣24，DY﹣5，AS﹣4三種耐乙醇菌株中分別提取ADH和ALDH，分別用高濃度的乙醇處理后測酶活性，由此可根據進一步篩選出耐乙醇醋酸高產菌株【考點】果酒、果醋的制作．【專題】實驗性簡答題；微生物的分離、培養和應用；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】（1）溫度、pH、氧氣（2）①高壓蒸汽滅菌酵母膏有利于篩選耐乙醇菌性高的目的菌株②梯度稀釋耐乙醇的醋酸菌可以將乙醇轉化為醋酸，醋酸可以分解碳酸鈣，從而產生透明圈（3）酶活性高低【分析】1、實驗室常用的滅菌方法：①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。2、微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。3、果醋制作原理：利用醋酸菌有氧呼吸將葡萄糖或者乙醇轉化為醋酸。醋酸菌的最適生長溫度為30～35℃。【解答】解：（1）醋酸菌是需氧生物，其代謝過程受到溫度、pH、氧氣等的影響。（2）①對培養基常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。篩選培養基中，為醋酸菌提供氮源的是酵母膏。選擇培養基中加入了10%的無水乙醇，其中葡萄糖的含量低于富集培養基，原因是有利于篩選耐乙醇菌性高的目的菌株。②培養分離菌株是，應將菌液經過梯度稀釋后滴加到篩選培養基上進行涂布，適宜條件下培養后挑選產生透明圈的單菌落，得到耐乙醇的醋酸菌菌株。耐乙醇的醋酸菌可以將乙醇轉化為醋酸，醋酸可以分解碳酸鈣，從而產生透明圈。（3）該同學提取了ADH和ALDH，并測定了酶活性，由此可根據酶活性高低進一步篩選出耐乙醇醋酸高產菌株。故答案為：（1）溫度、pH、氧氣（2）①高壓蒸汽滅菌酵母膏有利于篩選耐乙醇菌性高的目的菌株②梯度稀釋耐乙醇的醋酸菌可以將乙醇轉化為醋酸，醋酸可以分解碳酸鈣，從而產生透明圈（3）酶活性高低【點評】本題考查微生物培養與分離的相關知識，要求考生理解并識記有關的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。15．（2023?北京）自然界中不同微生物之間存在著復雜的相互作用。有些細菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細菌的結構使細胞內容物釋出。科學家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細菌。（1）用于分離細菌的固體培養基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要為細菌提供和維生素等。（2）A菌通常被用做溶菌對象，研究者將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層。培養一段時間后，薄層變渾濁（如圖），表明。（3）為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現。采用這種方法，研究者分離、培養并鑒定出P菌。（4）為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請提出一個假設，該假設能用以下材料和設備加以驗證。。主要實驗材料和設備：P菌、A菌、培養基、圓形濾紙小片、離心機和細菌培養箱。【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．【專題】模型思想；微生物的分離、培養和應用．【答案】（1）氮源、碳源（2）A菌能在培養平板中生長繁殖（3）稀釋溶菌圈（4）假設P菌通過分泌某種化學物質使A菌溶解破裂【分析】培養基從物理狀態可分為液體培養基和固體培養基。培養基的成分中一般含有碳源、氮源、水、無機鹽等成分。【解答】解：（1）用于分離細菌的固體培養基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要來源于動物原料，蛋白胨主要為細菌提供碳源。氮源和維生素等。（2）將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層。培養一段時間后，薄層若變渾濁說明菌體數量增加，表明A菌能在培養平板中生長繁殖。（3）因為湖泊水樣中含菌量較高，所以若從其中分離具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，應將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍不會出現菌體（菌體被破壞），則其周圍會出現透明圈（溶菌圈）。因此采用這種方法研究者分離和培養并鑒定出P菌。（4）為探究P菌溶解破壞A菌的方式，可假設P菌通過分泌某種化學物質使A菌溶解破裂。若培養過P菌的培養液可使A菌溶解破裂，即可得到證明。故答案為：（1）氮源、碳源（2）A菌能在培養平板中生長繁殖（3）稀釋溶菌圈（4）假設P菌通過分泌某種化學物質使A菌溶解破裂【點評】本題考查了微生物的培養和分離的相關知識，掌握微生物培養和分離的方法是解題的關鍵。16．若想篩選出能分解石油的微生物，可以以為唯一的碳源，以LB全營養培養基為對照，觀察全營養培養基生長的菌落數比選擇培養基的菌落數（填“多”或“少”）。【考點】選擇培養基．【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．【答案】見試題解答內容【分析】培養基按功能分：種類制備方法特征用途選擇培養基培養基中加入某種化學成分根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌，從而提高該菌的篩選率加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養基加入某種試劑或化學藥品依據微生物產生的某種代謝產物與培養基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計鑒別和區分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養基可以鑒別大腸桿菌【解答】解：選擇培養基是根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基，使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌，從而提高該菌的篩選率。因此，若想篩選出能分解石油的微生物，可以以石油為唯一的碳源，以LB全營養培養基為對照，觀察全營養培養基生長的菌落數比選擇培養基的菌落數多。故答案為：石油多【點評】本題考查微生物的分離和培養，重點考查培養基的相關知識，要求考生識記培養基的組成成分，掌握培養基的種類及功能，能結合所學的知識準確答題。17．玉米芯殘渣含有大量的木質纖維素（由纖維素、半纖維素和木質素組成），通常被焚燒處理，不但造成嚴重的環境污染，還導致大量能量浪費。某科研團隊從樹林土壤中篩選，得到野生的季也蒙畢赤酵母，并進行多次篩選以期獲得優良菌株。優良菌株以玉米芯殘渣為原料可發酵生產潔凈燃料﹣乙醇。下圖為篩選過程，請分析回答：（1）圖中對土壤菌液進行系列梯度稀釋的目的是。稀釋后將菌液接種到以作為唯一碳源的培養基中進行培養。待長出菌落后，提取其基因組DNA進行擴增并測序，鑒定為季也蒙畢赤酵母。（2）發酵生產時需先將玉米芯殘渣進行預處理，該過程會產生許多抑制物。因此，研究人員在②的液體培養基中加入抑制物，并在③多次篩選時不斷提高抑制物的濃度，是為了。培養過程中從②的液體培養基中定期取樣并用的方法進行菌落計數，評估菌株增殖狀況。此外，選育優良菌株的方法還有和等。（3）剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不與水解后的葡萄糖等發生這種反應，從而在纖維素分解菌周圍出現透明的水解圈。將經過多次實驗所獲得的4種優良菌株后接種到含纖維素、剛果紅、高濃度抑制物的固體培養基中，結果如右圖。可選擇菌株作為目標菌株進行發酵生產，原因是。【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．【答案】（1）保證每個菌落都是由一個單細胞發育而來木質纖維素PCR（2）篩選出對抑制物不敏感的菌株稀釋涂布平板法平板劃線法誘變育種法（3）B菌落最小，但抑菌圈最大【分析】1、從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株．篩選纖維素分解菌需要使用一纖維素為唯一碳源的選擇培養基．剛果紅和纖維素結合能形成紅色復合物，纖維素分解菌可以產生纖維素酶而分解纖維素使菌落周圍出現透明圈，所以可以用剛果紅鑒別纖維素分解菌．酵母菌無氧發酵產生的酒精可以用酸性的重鉻酸鉀檢驗，呈灰綠色．2、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．【解答】解：（1）稀釋的目的是保證每個菌落都是由一個單細胞發育而來，以保證計數的準確性。接種到以木質纖維素為唯一碳源的培養基上，長出菌落后，提取DNA進行PCR擴增，測序鑒定。（2）加抑制物是為了篩選出對抑制物不敏感的菌株。用稀釋涂布平板法進行計菌落數，每個菌落代表一個單細胞菌體，還有平板劃線法和誘變育種法。（3）選擇菌株B作為目標菌株生產，因為菌落最小，但抑菌圈最大。故答案為：（1）保證每個菌落都是由一個單細胞發育而來木質纖維素PCR（2）篩選出對抑制物不敏感的菌株稀釋涂布平板法平板劃線法誘變育種法（3）B菌落最小，但抑菌圈最大【點評】本題考查了土壤中纖維素分解菌分離和培養的有關知識，要求考生能夠識記微生物培養過程中滅菌的方法以及微生物分離與純化的接種方法，能夠區分兩種接種方法的接種工具的區別，能夠結合圖示獲取解題的關鍵信息．四．判斷題（共5小題）18．制作泡菜所用的菌種主要是醋酸菌。（判斷對錯）【考點】制作泡菜．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】×【分析】制作傳統泡菜是利用植物體表面天然的乳酸菌來進行發酵的。發酵期間，乳酸會不斷積累，當它的質量分數為0.4%～0.8%6時，泡菜的口味、品質最佳。【解答】解：制作傳統泡菜是利用植物體表面天然的乳酸菌來進行發酵的。本題說法錯誤。故答案為：×。【點評】本題考查泡菜的制作的相關知識，屬于基礎知識的考查，本題簡單。19．牛肉膏與蛋白胨不僅能為微生物提供碳源、氮源、無機鹽，還能為微生物提供生長因子．（判斷對錯）．【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【答案】見試題解答內容【分析】微生物的營養物質主要有碳源、氮源、水和無機鹽等．有些微生物培養過程中還需要添加生長因子等物質．【解答】解：牛肉膏與蛋白胨培養基是一種應用十分廣泛的天然培養基，其中的牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，還可以提供生長因子．故答案為：正確【點評】本題主要考查微生物的營養物質，意在強化學生對微生物營養物質的識記、理解與運用．20．一個由KH2PO4、Na2HPO4、H2O、NH4HCO3配制的培養基中含有4種營養物質．（判斷對錯）．【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【答案】見試題解答內容【分析】微生物的營養物質主要有碳源、氮源、水和無機鹽等．【解答】解：題干所述的培養基配方中有微生物營養物質中必須有的水，NH4HCO3可以提供碳源與氮源，KH2PO4、Na2HPO4可以提供無機鹽．故答案為：正確．【點評】本題主要考查微生物的營養物質的組成，意在強化學生對所學知識的識記、理解與運用．21．培養微生物的培養基中都必須含有碳源、氮源、水和無機鹽，有些微生物的培養基中還需要加入生長因子．（判斷對錯）．【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【答案】見試題解答內容【分析】微生物的營養物質主要有碳源、氮源、水和無機鹽等，有的微生物培養基中還需要添加生長因子等物質．【解答】解：微生物的營養物質主要有碳源、氮源、水和無機鹽等，有的微生物培養基中還需要添加生長因子等物質，但并不是說培養基配方中必須有這些物質，如自養型微生物的培養基中可以不必添加碳源，自生固氮菌的培養基中可以不添加氮源．故答案為：錯誤【點評】本題主要考查微生物的配方，因子強化學生對相關知識的識記、理解與運用．22．發酵工程的產品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身。（判斷對錯）【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．【答案】√【分析】發酵工程生產的產品主要包括微生物的代謝產物、酶及菌體本身。產品不同，分離提純的方法一般不同：（1）如果產品是菌體，可采用過濾，沉淀等方法將菌體從培養液中分離出來；（2）如果產品是代謝產物，可用萃取、蒸餾、離子交換等方法進行提取。【解答】解：由以上分析可知，發酵工程生產的產品主要包括微生物的代謝產物、酶及菌體本身。故答案為：√【點評】本題考查發酵工程的相關知識，比較基礎，只要考生識記相關知識點即可正確答題，屬于考綱識記層次的考查。五．實驗題（共2小題）23．為了獲得β﹣胡蘿卜素產品，某小組開展了產?﹣胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實驗。請回答下列問題：（1）實驗用的培養皿常用的兩種滅菌方法是；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應該。（2）為了篩選出酵母菌，培養基中添加了青霉素，其目的是。（3）圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是。（填序號）①安全閥、放氣閥、壓力表②放氣閥、安全閥、壓力表③安全閥、放氣閥、溫度表④放氣閥、安全閥、溫度表（4）為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區均未見菌生長，最可能的原因是。（5）為增加胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是；研磨時（填“需要”或“不需要”）添加CaCO3，理由是。【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【專題】實驗性簡答題；微生物的分離、培養和應用．【答案】見試題解答內容【分析】1、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。2、消毒和滅菌消毒滅菌概念使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包芽孢和孢子）使用強烈的理化因素殺死物體內外所用的微生物（包括芽孢和孢子）常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌適用對象操作空間、某些液體、雙手等接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等【解答】解：（1）滅菌常用方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌等，培養皿常用高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌。將培養皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報紙包扎避免滅菌后的再次污染。（2）青霉素能破壞細菌的細胞壁并在細菌的繁殖期起殺菌作用，因此添加青霉素可抑制細菌的生長。（3）乙連接軟管為排（放）氣閥，甲為安全閥，丙是壓力表。（4）三塊平板有兩塊平板長有菌落，說明含有菌株并可在培養基上生長；而其中一塊未見菌落，說明菌株死亡。因此，應在接種過程中接種環灼燒后未冷卻或未足夠冷卻，使菌株因溫度過高被殺死。（5）石英砂有助于研磨充分。CaCO3用于中和酸性物質，β﹣胡蘿卜素較耐酸，因此不需添加。故答案為：（1）干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）用牛皮紙包扎器皿（2）抑制細菌（放線菌）生長（3）①（4）接種環溫度過高，菌被殺死（5）有助于研磨充分不需要β﹣胡蘿卜素較耐酸【點評】本題考查微生物的分離和培養，要求考生識記無菌技術；試劑接種微生物常用的兩種方法，能結合所學的知識準確答題。24．（2022春?雁峰區校級月考）某研究小組將一組相同圓紙片放入不同濃度的麥迪霉素（一種抗生素）溶液中浸泡后，放在接種有大腸桿菌的培養基上培養．實驗結果如圖1．請分析并回答下列問題．（1）將裝有培養基的滅菌包裝入高壓蒸汽滅菌鍋時，注意不要裝得太擠，以免因而影響滅菌的效果．加熱初期，必須將滅菌鍋內的冷空氣排盡，否則將因而影響滅菌的效果．倒平板時，待平板冷卻凝固后，應將平板倒過來放置，并將記號筆在上標明培養基的種類、培養日期、平板上樣品的稀釋度、培養微生物名稱及制作者姓名等信息．（2）實驗結果表明，對大腸桿菌抑制作用最明顯的是濃度為（填圖1中數字）的麥迪霉素；（3）該實驗中，宜使用方法接種大腸桿菌，在培養和接種大腸桿菌時要特別注意進行無菌操作，為了避免無關變量對實驗結果的影響，對圓紙片的要求是；（4）該研究小組運用上述實驗方法，還研究了相同濃度的三種不同抗生素A、B、C對大腸桿菌生長的影響，請在圖2中表示這一處理方案（可模仿圖1中圖示并加以必要注解的方法）．．【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）；微生物的選擇培養和計數．【專題】圖文信息類簡答題；微生物的分離、培養和應用．【答案】見試題解答內容【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．【解答】解：（1）將裝有培養基的滅菌包裝入高壓蒸汽滅菌鍋時，注意不要裝得太擠，以免因影響蒸汽流通而影響滅菌的效果．加熱初期，必須將滅菌鍋內的冷空氣排盡，否則將因達不到規定溫度而影響滅菌的效果．倒平板時，待平板冷卻凝固后，應將平板倒過來放置，并將記號筆在皿底上標明培養基的種類、培養日期、平板上樣品的稀釋度、培養微生物名稱及制作者姓名等信息．（2）圖1中⑤的透明圈最大，說明對大腸桿菌抑制作用最明顯的是濃度為⑤的麥迪霉素．（3）根據圖1可知，該實驗中宜使用稀釋涂布平板法方法接種大腸桿菌，在培養和接種大腸桿菌時要特別注意進行無菌操作，為了避免無關變量對實驗結果的影響，對圓紙片的要求是大小、質地相同．（4）該方案的自變量為相同濃度的A、B、C三種不同抗生素，注意在圖中要標記清楚．具體圖解見答案．．故答案為：（1）影響蒸汽流通達不到規定溫度皿底（2）⑤（3）稀釋涂布平板法大小、質地相同（4）【點評】本題主要考查微生物的培養基相關的實驗操作，意在強化學生對無菌操作及微生物的培養的相關知識的識記、理解與運用．六．解答題（共2小題）25．（2024春?焦作期末）十溴聯苯醚（DBDPO）是一種添加型高效阻燃劑，為白色或淡黃色粉末，不溶于水及一般有機溶劑，具有熱穩定性好、毒性低等優點。但在使用DBDPO時需注意其可能對環境造成的影響，并遵循相關的安全規定。科研人員為了從被DBDPO嚴重污染的土壤中分離出能高效降解DBDPO的好氧細菌，進行了相關實驗。請回答下列問題：（1）將10g土樣中的微生物稀釋10倍的操作是。（2）將土樣稀釋液置于恒溫培養箱中3天，然后取上層樣液接種到含一定DBDPO的培養液中，再置于恒溫培養箱中3天，循環上述操作的過程中，緩慢增加DBDPO的濃度。該循環操作過程中，每次取上層樣液的原因是。從平板上挑選高效降解DBDPO的好氧細菌，挑選的依據是。（3）土壤是微生物的“天然培養基”。該科研人員欲研究DBDPO污染對土壤中微生物種類數的影響，請利用DBDPO污染土樣、未污染土樣、普通培養基等為材料擬定一個實驗，需寫出實驗思路、預期結果及結論（注：實驗過程中不能使用顯微鏡）。實驗思路：。預期結果及結論：。【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．【答案】（1）將10克土樣加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻（2）能高效降解DBDPO的好氧細菌分布在上層DBDPO被降解之后會形成透明圈（3）將DBDPO污染土樣和未污染土樣制成土壤浸出液，接種在普通培養基上，分別編號甲和乙，置于相同條件下培養一段時間后統計菌落的種類若甲的菌落種類數多于乙，說明DBDPO污染會增加土壤中微生物種類數；若甲的菌落種類數小于乙，說明DBDPO污染會減少土壤中微生物種類數【分析】選擇培養原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。【解答】解：（1）將10g土樣中的微生物稀釋10倍的操作是將10克土樣加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。（2）能高效降解DBDPO的好氧細菌分布在上層，所以需要取上層樣液。DBDPO為白色或淡黃色粉末，被降解后會產生透明圈，故篩選依據是DBDPO被降解之后會形成透明圈，透明圈越大，降解的效果越好。（3）欲研究DBDPO污染對土壤中微生物種類數的影響，可以將DBDPO污染土樣和未污染土樣制成土壤浸出液，接種在普通培養基上，分別編號甲和乙，置于相同條件下培養一段時間后統計菌落的種類。若甲的菌落種類數多于乙，說明DBDPO污染會增加土壤中微生物種類數；若甲的菌落種類數小于乙，說明DBDPO污染會減少土壤中微生物種類數。故答案為：（1）將10克土樣加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻（2）能高效降解DBDPO的好氧細菌分布在上層DBDPO被降解之后會形成透明圈（3）將DBDPO污染土樣和未污染土樣制成土壤浸出液，接種在普通培養基上，分別編號甲和乙，置于相同條件下培養一段時間后統計菌落的種類若甲的菌落種類數多于乙，說明DBDPO污染會增加土壤中微生物種類數；若甲的菌落種類數小于乙，說明DBDPO污染會減少土壤中微生物種類數【點評】本題考查微生物培養的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。26．（2024?深圳模擬）自然界中不同微生物之間存在著復雜的相互作用。有些細菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細菌的結構使細胞內容物釋出。科學家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細菌。（1）用于分離細菌的固體培養基包含多種營養成分，其中蛋白胨主要為細菌提供和維生素等。（2）A菌通常被用做溶菌對象。研究者將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層。培養一段時間后，薄層變渾濁（如圖1），表明。（3）為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現。采用這種方法，研究者分離、培養并鑒定出P菌。（4）為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請提出一個假設，該假設能用以下材料和設備加以驗證。主要實驗材料和設備：P菌、A菌、培養基、圓形濾紙小片、離心機和細菌培養箱。（5）為大量獲取P菌制成菌劑，請補充P菌應用于發酵工程的基本環節。【考點】微生物的純培養；發酵工程的基本環節．【專題】實驗性簡答題；微生物的分離、培養和應用．【答案】（1）氮源、碳源（2）A菌能在培養平板中生長繁殖（3）稀釋溶菌圈（4）假設P菌通過分泌某種化學物質使A菌溶解破裂（5）【分析】微生物的營養成分主要有碳源、氮源、水和無機鹽等。微生物的培養基按其特殊用途可分為選擇性培養基和鑒別培養基，培養基按其物理狀態可分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基三類。【解答】解：（1）微生物的營養成分主要有碳源、氮源、水和無機鹽等，蛋白胨主要為細菌提供氮源、碳源和維生素等。（2）將含有一定濃度A菌的少量培養基傾倒在固體培養平板上，凝固形成薄層，培養一段時間后，薄層變渾濁，表明A菌能在培養平板中生長繁殖。（3）將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現溶菌圈。（4）根據實驗實驗材料和設備，圓形濾紙小片可用于吸收某種物質，離心機可用于分離菌體和細菌分泌物，為探究P菌溶解破壞A菌的方式，可假設P菌通過分泌某種化學物質使A菌溶解破裂。（5）發酵工程一般包括菌種的選育，擴大培養，培養基的配制、滅菌，接種，發酵，產品分離、提純等方面，因此P菌應用于發酵工程的基本環節為：故答