可從病人身上取少量正常、健康皮膚在體外進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增。目前，可對(duì)皮膚干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得適合臨床上使用的人造皮膚。1.概念：2.原理：4.地位：3.

目的:細(xì)胞增殖（有絲分裂）獲得細(xì)胞或者細(xì)胞產(chǎn)物，不能獲得完整動(dòng)物個(gè)體動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)問題:不能以淀粉、蔗糖為碳源1.營(yíng)養(yǎng)條件：合成培養(yǎng)基

+血清等天然成分

將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基

含人類未知、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所必需的物質(zhì)，滿足細(xì)胞對(duì)未知營(yíng)養(yǎng)成分的需求。血清等天然成分一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。無(wú)菌：①對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理②在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行操作③添加一定量的抗生素目的：①②①②③維持適宜的滲透壓的目的：維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能①②①②具體操作：(1)分散成單個(gè)細(xì)胞原因：②利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進(jìn)行物質(zhì)交換。①（2）怎樣將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞？蛋白質(zhì)不可以，因?yàn)槲傅鞍酌傅淖钸mPH為1.5左右胰蛋白酶處理時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)怎樣？

細(xì)胞膜也含蛋白質(zhì)，長(zhǎng)時(shí)間會(huì)分解細(xì)胞膜蛋白，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，把細(xì)胞消化掉。注意控制時(shí)間和酶用量。1.取動(dòng)物組織(1)取材對(duì)象:一般取材于動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官(2)取材原因:細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。2.分散成單個(gè)細(xì)胞3.細(xì)胞懸液懸浮生長(zhǎng)類：貼壁生長(zhǎng)類：細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間，分裂會(huì)受阻的原因：①③②三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程-取動(dòng)物組織剪碎，用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理分散成單個(gè)細(xì)胞解決懸浮生長(zhǎng)貼壁生長(zhǎng)(大多數(shù)）細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制傳代培養(yǎng)細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)加培養(yǎng)液在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞:直接用離心法收集貼壁細(xì)胞:用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，用離心法收集細(xì)胞分裂受阻②制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)①收集細(xì)胞1.下圖為幼鼠腎臟上皮細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A．甲→乙過程通常需要剪碎后，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理B．在丙中培養(yǎng)的細(xì)胞通常在10代以內(nèi)，一般未發(fā)生癌變C．丁過程表示傳代培養(yǎng)，大多細(xì)胞一般能增殖10～50代D．培養(yǎng)過程中應(yīng)提供5%CO2和95%O2的氣體環(huán)境，以維持培養(yǎng)液正常的pHD

課堂練習(xí)D

5%CO2和95%空氣的氣體環(huán)境一般取材于動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官。細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。(1)干細(xì)胞的概念：動(dòng)物和人體內(nèi)仍保留的少數(shù)具有分裂和分化能力的細(xì)胞。在一定條件下，干細(xì)胞可以分化成其他類型的細(xì)胞。(2)分布：(3)分類：胚胎干細(xì)胞成體干細(xì)胞按來(lái)源全能干細(xì)胞多能干細(xì)胞按分化潛能專能干細(xì)胞1.1分布1.3.應(yīng)用實(shí)例1.2.特點(diǎn)(1)形態(tài)上：體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯。(3)在體外培養(yǎng)的條件下，可以只增殖，而不分化。可以冷凍保存，也可以進(jìn)行遺傳改造。(2)功能上：具有發(fā)育的全能性。4.局限性必須從胚胎中獲取，涉及倫理問題；因而限制了在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。2.1分布2。2類型2.3特點(diǎn)2.4應(yīng)用實(shí)例①②1.4.局限性3.1概念3.2制備方法①②（成纖維細(xì)胞、已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞）3.3應(yīng)用①②3.4優(yōu)點(diǎn)①②3.5.面臨的問題：3.6應(yīng)用展望：

來(lái)源或存在功能、特點(diǎn)局限性胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)成體干細(xì)胞誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)早期胚胎能夠分化成為動(dòng)物體內(nèi)的任何細(xì)胞，并進(jìn)一步形成組織、器官甚至生物個(gè)體成體組織或器官，如造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞和精原干細(xì)胞等體外誘導(dǎo)體細(xì)胞產(chǎn)生能分化成為具有特定功能的細(xì)胞來(lái)治療疾病。無(wú)須破壞胚胎，且避免免疫排斥反應(yīng)。具有組織特異性，能分化成特定的細(xì)胞或組織不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力需從胚胎中獲取，涉及倫理問題，限制了它在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用技術(shù)不成熟。面臨的問題:存在著導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。三、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用2.為研究治療性克隆技術(shù)能否用于帕金森綜合征的治療，科研人員利用帕金森綜合征模型鼠進(jìn)行如下圖實(shí)驗(yàn)。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A．過程①得到的細(xì)胞，其DNA主要來(lái)自鼠皮膚細(xì)胞B．過程③的關(guān)鍵是利用特定條件誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)C．過程②獲取的胚胎干細(xì)胞具有細(xì)胞大、核小但核仁明顯的特征D．過程④對(duì)受體小鼠來(lái)說(shuō)植入的神經(jīng)元不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)C

課堂練習(xí)細(xì)胞體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯等特征C

×√××A

像建立骨髓庫(kù)一樣有研究團(tuán)隊(duì)正在嘗試建立HLA（HumanLeukocyteAntigen，人類白細(xì)胞抗原多態(tài)性豐富的iPS細(xì)胞庫(kù)可以為需要的人找到HLA匹配度較高的iPS細(xì)胞這樣不僅可以節(jié)省時(shí)間、成本,還能減輕異體干細(xì)胞移植后發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)。

該技術(shù)可能被用于治療不孕癥,獲得足夠量的生殖細(xì)胞來(lái)進(jìn)行瀕危物種的克隆研究；

獲得生殖細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作，再經(jīng)過受精、胚胎發(fā)育等過程來(lái)