CCS65.020.20DB2327大興安嶺地區(qū)行政公署市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB2327/T109—2025為了規(guī)范大興安嶺地區(qū)篤斯越橘莖段離體快繁技術(shù)，特制定本文件。本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些部分可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由大興安嶺地區(qū)農(nóng)業(yè)林業(yè)科學(xué)研究院提出。本文件由大興安嶺地區(qū)林業(yè)和草原局歸口。本文件起草單位：大興安嶺地區(qū)農(nóng)業(yè)林業(yè)科學(xué)研究院本文件主要起草人：趙興宇、焦浩、侯鈺煊、王希剛、周紫薇、高新馨、石德山、黃宏、馬慶龍、許艷玲、孫豐、馬銘浩、孫璐。本文件為首次發(fā)布。DB2327/T109—20251篤斯越橘莖段離體快繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了篤斯越橘莖段離體快繁的術(shù)語(yǔ)和定義、培養(yǎng)基制備、莖段的選擇與處理、誘導(dǎo)分化與繼代增殖增壯、扦插、移植撫育和生產(chǎn)檔案。本文件適用于大興安嶺地區(qū)篤斯越橘莖段離體快繁。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義3.1篤斯越橘篤斯越橘（VacciniumuliginosumL.）是杜鵑花科、越橘屬植物，俗稱“藍(lán)莓”。3.2WPM培養(yǎng)基WPM培養(yǎng)基即木本植物用培養(yǎng)基（WoodPlantmedium），用于植物組織培養(yǎng)。4培養(yǎng)基制備4.1培養(yǎng)基4.1.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基WPM培養(yǎng)基。4.1.2誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)基WPM+ZT2.0mg/L+NAA0.2mg/mL+瓊脂7.0g/L+蔗糖20g/L，pH值調(diào)至5.3。4.2培養(yǎng)基制備按LY/T1882規(guī)定執(zhí)行。4.3培養(yǎng)基保存DB2327/T109—20252按LY/T1882規(guī)定執(zhí)行。5莖段選擇與處理5.1莖段的選擇在篤斯越橘新枝生長(zhǎng)旺盛時(shí)期，新芽長(zhǎng)至1cm～2cm時(shí)，選擇當(dāng)年生無(wú)病蟲(chóng)害、生長(zhǎng)健壯的嫩莖，剪去兩端莖節(jié)，取中間光滑部分剪取2cm～4cm嫩莖作為外植體。5.2莖段處理將新鮮的莖段用清水浸泡30min，水中加入1滴～2滴吐溫-80，再用自來(lái)水沖洗30min。將莖段移入超凈工作臺(tái)中，用75%乙醇消毒10s～15s，無(wú)菌水沖洗3次～5次，每次1min；無(wú)菌濾紙吸干表面水分，再用0.1%升汞消毒10min，無(wú)菌水沖洗5次，每次1min，無(wú)菌濾紙吸干表面水分。6誘導(dǎo)分化與繼代增殖增壯6.1培養(yǎng)條件培養(yǎng)室的溫度控制在25℃,空氣相對(duì)濕度控制在70%～80%，光照強(qiáng)度為2000lx，光照時(shí)6.2愈傷組織的誘導(dǎo)鑷子經(jīng)酒精燈消毒3次～5次后將消毒后的莖段用鑷子平放在培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶放2個(gè)～3個(gè)莖段，蓋上封口膜，標(biāo)注日期，進(jìn)行組織培養(yǎng)。6.3不定芽的增殖莖段經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)脫分化形成一定大小的愈傷組織后，將愈傷組織切成小塊重新接入新的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)瓶放2個(gè)～3個(gè)愈傷組織，培養(yǎng)30d后統(tǒng)計(jì)不定芽數(shù)量。6.4幼苗生根培養(yǎng)將3cm～4cm由不定芽長(zhǎng)成的篤斯越橘植株從基部剪下，采取高濃度生長(zhǎng)素浸蘸法，將幼苗基部放入200μg/ml的IBA溶液中，浸蘸10s～15s后將植株基部垂直插入WPM培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。6.5煉苗將高度為5cm～8cm已經(jīng)誘導(dǎo)生根的篤斯越橘幼苗培養(yǎng)瓶封瓶膜打開(kāi)，在組培室中放置7d，使幼苗初步適應(yīng)外界的環(huán)境。再將其移栽入盛有移栽基質(zhì)（V泥炭土∶V蛭石＝1：1）的花盆中進(jìn)行培養(yǎng)，