草莓中鞣花酸含量的測定超高效液相色譜-質譜法范圍本文件確定了草莓中游離鞣花酸含量的超高效液相色譜-質譜聯用測定方法。本文件適用于草莓鮮果中游離鞣花酸含量的測定。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和實驗方法術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理試樣經提取后進樣，采用超高效液相色譜-質譜聯用儀分離測定，根據保留時間定性，外標法定量。試劑或材料本方法所用的試劑，除另有規定外，均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。甲醇色譜純。甲酸色譜純。0.1%甲酸水溶液在100mL水加入0.1mL甲酸（5.2），混合均勻。提取液甲醇：0.1%甲酸水溶液（80:20，體積比）：將80mL甲醇（5.1）加入到20mL0.1%甲酸水（5.3）中，混合均勻。標準品鞣花酸（Ellagicacid，CAS號476-66-4，分子式C14H6O8，相對分子質量302.28），純度均≥99%。標準儲備液（1000μg/mL）準確稱取鞣花酸標準品10mg（準確至0.1mg），于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，現用現配。標準工作液分別吸取標準儲備液（5.6）0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10mL容量瓶中，用提取液（5.4）定容至刻度，配制成濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500.0μg/mL的標準系列工作液，現用現配。儀器設備超高效液相色譜-質譜儀，配電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量0.1mg和0.01g。高速離心機，轉速≥4000r/min。勻漿機。微孔濾膜：孔徑0.22μm。樣品處理稱取勻漿待測樣品2.00g，置于50mL離心管中。加入50.0mL提取液（5.4），全自動均質器提取1min，加入1.5g醋酸鈉和6g無水硫酸鎂，劇烈振蕩2min，混勻后以10000r/min離心3min。取2mL上清液置于裝有150mg無水硫酸鎂、25mgPSA和2.5mgGCB的離心管，渦旋1min，以10000r/min離心3min。取上清液過0.22μm濾膜至樣品瓶，上機測定。檢測方法色譜條件8.1.1色譜柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相當。8.1.2流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為甲醇，梯度洗脫條件見表1；8.1.3流速：0.2mL/min。8.1.4色譜柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相當。8.1.5柱溫：40℃。表1梯度洗脫條件時間/minA/%B/%09550.259557.8001008.5001008.5195510.00955質譜條件8.2.1電噴霧離子源負離子模式（ESI-）。8.2.2毛細管電壓：1kV。8.2.3離子源溫度：450℃。8.2.4氣簾氣流量：30L/hr。8.2.5霧化氣流量：900L/Hr。8.2.6掃描方式：MRM，離子對信息見表2。表2標準物質的MRM信息名稱保留時間/min母離子子離子錐孔電壓/V碰撞能/eV鞣花酸6.46301284*182522918251451830校準曲線的制作將校準系列工作液按濃度由低到高的順序分別注入超高效液相色譜質譜儀，測定相應的峰面積，以校準曲線工作液的質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制校準曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入超高效液相色譜質譜儀，以保留時間定性，得到峰面積，根據校準曲線得到待測液中鞣花酸的質量濃度。定性和定量8.5.1定性8.5.1.1保留時間被測試樣中鞣花酸色譜峰的保留時間與標準物質色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應在±2.5%之內。8.5.1.2在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出色譜峰的保留時間與標準物質相一致，并且目標化合物選擇的子離子均出現，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標化合物的離子豐度比與質量濃度相當的標準溶液相比，其允許偏差不超過表3規定的范圍，則可判斷樣品中存在目標化合物。表3定性時離子豐度比的最大允許偏差離子豐度比，%>5020~5010~20≤10允許相對偏差，%±20±25±30±50在上述條件下，鞣花酸質譜圖參見附錄A。8.5.2定量外標法定量。平行試驗按以上步驟對同一試樣進行平行試驗測定。空白試驗除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進行平行操作。分析結果的表述試樣中鞣花酸含量按式（1）進行計算： X=C×V×1000m×式中：X——樣本中鞣花酸含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——試樣溶液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣提取體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質量，單位為克（g