2025年高考生物一輪復習之基因工程

一.選擇題（共15小題）

1.Y-氨基丁酸在醫藥等領域有重要的應用價值。利用L-谷經酸脫殘醐（GadB）催化L-谷氨酸脫粉是

高效生產Y-織基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L-谷經酸脫峻酶基因

（gadB）導入生產菌株E.coliA,構建了以L-谷氨酸鈉為底物高效生產丫-氨基丁酸的菌株E.coliB。

下列敘述正確的是（）

［和

QNcJoOKpnQl

質粒(^3

E.coliA

（含多克隆位點）

Ncol和Kpnl

PC憶券"切重組質粒，一】一、

gadB

釀酒酵母sE.coliB

A.上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB

B.E.cohB發酵生產Y-氨基丁酸時，L-谷氨酸鈉的作用是供能

C.E.coliA和E.coliB都能高效降解Y-氨基丁酸

D.可以用其他酶昔代NeoI和KpnI構建重組質粒

2.下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（）

A.實驗中如果將研磨液更換為蒸儲水，DNA提取的效率會降低

B.利用DNA和蛋白質在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA

C.DNA在不同濃度NaQ溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物

D.將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應，可檢測溶液中是否含有蛋白質雜質

3.關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法正確的是（）

A.整個提取過程中可以不使用離心機

B.研磨液在4c冰箱中放置幾分鐘后，應充分搖勻再倒入燒杯中

C.鑒定過程中DNA雙螺旋結構不發生改變

D.僅設置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾

4.制備熒光標記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴增

緩沖液、H2O和4種脫氧核昔酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標記的dATP）的反應管①?④中，

分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區遵循堿基互補配對原則，且在本實驗的溫

度條件下不能產生小于9個連續限基對的雙鏈DNAIXo能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有

)

反應管加入的單鏈DNA

①5'-GCCGATCTTTATA-3'

3'-GACCGGCTAGAAA-5f

②5'-AGAGCCAATTGGC-3'

③5'-ATTTCCCGATCCG-3'

3'-AGGGCTAGGCATA-5r

④5'-TTCACTGGCCAGT-3'

A.0^）B.②③C.?@D.??

5.某同學擬用限制酶（酶I、酶2、酶3和前4）、DNA連接醉為工具，將目的基因（兩端含相應限制前

的識別序列和切割位點）和質粒進行切割、連接，以構建重組表達我體。限制酶的切割位點如圖所示。

胸3番心筋1

5X-GLATTC-3/5，-GGATCC-3/5*-CCCGGG-3，5Z-AJGATCT-3，

石，抗生素\3'-CTTAAG-5'3'—CCTAGG—5'3'—GGGCCC—5'3'—TCTAGA-5'

陸性基9|fff

V—X酹1解2酹3的4

二列重組表達載體構建方案合理且效率最高的是（）

A.質粒和目的基因都用附3切割，用E.coliDNA連接醐連接

B.質粒用酶3切割、目的基因用到1切割，用T4DNA連接酶連接

C.質粒和目的基因都用隨1和睡2切割，用T4DNA連接醐連接

D.質粒和目的基因都用酶2和的4切割，用E.culiDNA連接醯連接

6.用氨羊青霉素抗性基因（AmpD、四環素抗性基因（TCF）作為標記基因構建的質粒如圖所示。用含有

目的基因的DNA片段和用不同限制酶酹切后的質粒，構建基因表達載體（重組質粒），并轉化到受體

菌中。下列敘述錯誤的是（）

A.若用Hindlll酹切，目的基因轉錄的產物可能不同

B.若用Pvul酹切，在含Tet（四環素）培養基中的菌落，不一定含有目的基因

C.若用SphI酶切，可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否

D.若用SphI前切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨茉青霉素）和Tet的培養基中能形成菌落

7.某小組通過PCR（假設引物長度為8個堿基短于實際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限

制酶進行酶切（如圖），再用所得片段成功構建了基因表達載體。下列敘述錯誤的是（）

限制慨Spel5Z-ACTAGT-3ZNheI5,-GCTAGC-3,Cfol5'-GCGC-3

浜別序列3,-TGATC|A-5,3/-CGATCG-5,V-CGCGS

擴增獲得5f-AGCTAGCAATGCTC..............ATGAACTGCGCA-3'

的DNA片段3*-TCGATCaTTACGAG...............TACTTCACCCCT—5，

①酶切

5Z-CTAGCAATGCTC..............ATGAACTGCG-3'

3'-GTTACGAG..............TACTTGAC-5'

A.其中一個引物序列為5'?TGCGCAGT-3'

B.步驟①所用的的是Spel和Cf。I

C.用步驟①的酶對載體進行酶切，至少獲得了2個片段

D.酶切片段和載體連接時，可使用E.coli連接酶或T4連接的

8.抗蟲作物對害蟲的生存產生壓力，會使害蟲種群抗性基因頻率迅速提高，導致作物的抗蟲效果逐漸減

弱。為使轉基因抗蟲棉保持抗蟲效果，農業生產上會采取一系列措施。以下措施不能實現上述目標必是

（）

A.在轉基因抗蟲棉種了?中混入少量常規種子

B.大面積種植轉基因抗蟲棉，并施用殺蟲劑

C.轉基因抗蟲棉與小面積的常規棉間隔種植

D.轉基因抗蟲棉大田周圍設置常規棉隔離帶

9.某研究小組利用轉基因技術，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如隆甲

所示。實驗得到能正常表達兩種蛋白膜的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3-GFP基因純合

子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設計了引物I和引物2用于PCR擴增，PCR產

物電泳結果如圖乙所示。

Gata3

，啟動子區編碼區非編碼區

插入前t3'

35，

Cata3GFP

一啟動子區編碼區1編碼區1非編碼區一，

3

插入后3,________....彳

^3<——‘

引物2

圖甲圖乙

、.列敘述正確的是（)

A.Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達

B.翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白

C.2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3-GFP基因純合子

D.若用引物1和引物3進行PCR,能更好地區分雜合子和純合子

10.抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12-5是我國自主研發的轉基因品種。為給監管轉基因生物安全提供依據,

果用PCR方法進行目的基因監測，反應程序如圖所示.下列敘述正確的是（）

預變性變性

94C叫

94X：,1min延伸后延伸

［復性/72C30s

72clmin

58C,30s

35次循環----->

A.預變性過程可促進模板DNA邊解旋邊復制

B.后延伸過程可使目的基因的力,增更加充分

C.延伸過程無需引物參與即可完成半保留復制

D.轉基因品種經檢測含有目的基因后即可上市

II.關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（）

A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解

B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀

C.在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現藍色

D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質

12.關于生物技術的安全與倫理問題在我國相關法規明令禁止的是（）

A.試管動物的培育

B.轉基因食品的生產

C.治療性克隆的研究

D.生物武器的發展和生產

13.以哺乳動物為研究對象的生物技術已獲得了長足的進步。對生物技術應用于人類，在安全與倫理方面

有不同的觀點，下列敘述正確的是（）

A.試管嬰兒技術應全面禁止

B.治療性克降不需要監控和審查

C.生殖性克隆不存在倫理道德方面的風險

D.我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗

14.下列相關實驗操作正確的是（）

A.配制PCR反應體系時，加入第量的4種核糖核甘酸溶液作為擴增原料

B.利用添加核酸染料的凝膠對PCR產物進行電泳后，在紫外燈下觀察結果

C.將配制的酵母培養基煮沸并冷卻后，在酒精燈火焰旁倒平板

D.將接種環燒紅.迅速靛取醉母菌液在培養基上劃線培養，獲得單菌落

15.關于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產物的實驗，下列敘述正確的是（）

A.瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小

B.凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置

C.在同一電場作用下，DNA片段越長，向負極遷移速率越快

D.瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來

二.解答題（共5小題）

16.研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養基，培養真菌A的野生型（含NV基因）、突變體（NV基因突

變）和轉基因菌株（轉入NV基因），檢測三種菌株NV酶的生成與培養液中的葡萄糖含量，結果如表

所示（表中“+”表示有，“一”表示無）。

檢測用菌株蔗糖NV醯葡萄糖（培養液中）

野生型+++

野生型——一

突變體+——

轉基因菌株+++

向答下列問題。

（I）據表可推測誘導了NV基因表達。NV前的作用是o檢測

NV的活性時，需測定的指標是（答出I點即可）。

（2）表中突變體由T-DNA隨機插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分另！提

取基因組DNA作為模板，用與（選填“T-DNA”或“NV基因”）配對的引物進行PCR

擴增。若突變體擴增片段長度（選填”或“V"）野生型擴增片段長度，則表明突變

體構建成功，從基因序列分析其原因是0

（3）為進一步驗證NV基因的功能，表中的轉基因菌株是將NV基因導入細胞獲得的。在

構建NV基因表達載體時，需要添加新的標記基因，原因是o

17.學習以下材料，回答（1）?（4）題。

篩選組織特異表達的基因

篩選組織特異表達的基因，對研究細胞分化和組織、器官的形成機制非常重要。”增強子捕獲”是篩

選組織特異表達基因的一種右.效方法。

真核生物的基本啟動子位于基因5,端附近，沒有組織特異性，本身不足以啟動基因表達。增強子位

于基因上游或下游.與基本啟動子懸同組成基因表達的調控序列.基因工程所用表達載體中的啟動子，實

際上包含增強子和基本啟動子。

很多增強子具有組織特異的活性，它們與特定蛋白結合后激活基本啟動子，驅動相應基因在特定組織

中表達（圖A）。基于上述調控機理，研究者構建了由基木啟動子和報告基因組成的“增強子捕獲載體”（圖

B）,并轉入受精卵。捕獲載體會隨機插入基因組中，如果插入位點附近存在有活性的增強不，則會激活報

告基因的表達（圖C）。

一、、▲I-----?mP'j：

A—次——s-l—i-n—?--轉錄

增強子基本內源基因終止子..…》激活

啟動子

B―I—n一

基本報告基因終止子

啟動工一......

C―—

報告基因內源基因

獲得了一系列分別在不同組織中特異表達報告基因的個體后，研究者提取每個個體的基因組DNA,

通過PCR擴增含有捕獲載體序列的DNA片段。對PCR產物進行測序后，與相應的基因組序列比對，即

可確定載體的插入位點，進而鑒定出相應的基因。

研究者利用各種遺傳學手段，對篩選得到的基因進行突變、干擾或過表達，檢測個體表型的改變，研

究其在細胞分化和個體發育中的作用，從而揭示組織和器官形成的機理。

（1）在個體發育中，來源相同的細胞在形態、結構和功能上發生的過程稱為細胞分化，

分化是基因的結果，

（2）對文中“增強子”的理解，錯誤的是（單選）。

A.增強子是含有恃定堿基序列的DNA片段

B.增強子、基本啟動子和它們調控的基因位于同一條染色體上

C.一個增強子只能作用于一個基本啟動子

D.很多增強子在不同組織中的活性不同

（3）研究者將增強子捕獲技術應用于斑馬魚，觀察到報告基因在某幼體的心臟中特異表達。鑒定出捕

獲載體的插入位點后，發現位點附近有兩個基因G和H,為了確定這兩個基因是否為心臟特異表達的

基因，應檢測.

（4）真核生物編碼蛋白的序列只占基因組的很少部分，因而在絕大多數表達報告基因的個體中，增強

子捕獲載體的插入位點位于基因外部，不會造成基因突變。研究者對圖B所示載體進行了改造，期望

改造后的載體隨機插入基因組后，在“捕獲”增強子的同時，也造成該增強子所調控的基因發生突變，

以研究基因功能.請畫圖表示改造后的載體.并標出各部分名稱（咯）.

18.新城疫病毒可引起家禽急性敗血性傳染病，我國科學家將該病毒相關基因改造為己HN,使其在水稻

胚乳特異表達，制備獲得r2HN疫苗，并對其免疫效果進行了檢測°

回答下列問題：

（1）實驗所用載體的部分結構及其限制酶識別位點如圖I所示。其中GtP為啟動子，若使r2HN僅在

水稻胚乳表達，GtP應為啟動子。Nos為終止子，其作用為or2HN

基因內部不含載體的限制酶識別位點。因此，可選擇限制酶和對r2HN基

因與載體進行酶切，用于表達載體的構建。

注：KpnI、HindJH、SacI

和EcoRI標注的位點為各限

KpnIHindinEcoRISac[制酶的識別位點

80-|■對照組

60-□實驗組

40-

201

抗體CD8+T細胞

圖2

（2）利用方法將r2HN基因導入水稻愈傷組織。為檢測r2HN表達情況，可通過PCR技

術檢測，通過技術檢測是否翻譯出r2HN蛋白。

（3）獲得轉基因植株后，通常選擇單一位點插入目的基因的植株進行研究。此類植株向交一代后，r2HN

純合體植株的占比為。選擇純合體進行后續研究的原因

是0

（4）制備r2HN疫苗后，為研究其免疫效果，對實驗組雞進行接種，對照組注射疫苗溶劑。檢測兩組

雞體內抗新城疫病毒抗體水平和特異應答的CD8T細胞（細胞毒性T細胞）水平，結果如圖2所示。

據此分析，獲得的r2HN疫苗能夠成功激活雞的免疫和免疫。

（5）利用水稻作為生物反應器生產r2HN疫苗的優點是。（答出兩點即可）

19.研究發現基因L能夠通過脫落酸信號途徑調控大豆的逆境響應。利用基因工程技術編輯基因L,可培

育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制的Bsal切點處插入大豆基因L的向導DNA序列，將載體導入大

豆細胞后，其轉錄產物可引導核酸葡特異性結合基因組上的目標序列并發揮作用。載體信息、目標基因

L部分序列及相關結果等如圖所示.

圖甲：載體信息BsaIBsaI

LB/RB：T—DNA的邊界序列:Ka"：卡那新素抗性基因；Am。：氨節青寄素抗性基因

圖乙：目標基因L部分序列...

目標序列~5-AGTCGACTCTGGATCCGAATTCTTCTCCGAGqdcCAGGCG-3,

突變序歹lj5-AGTCGACTCTGGATCCGAATTCTTCTCCGAGd&CAGGCG-3,

圖丙：限制的識別序列、切割位點及電泳結果

-GGATCC-3ZEcoRI5Z-GAATTC-3,

-CCTAGG-5,3'-CTTAAG—5'

t

BsaI5'-GGTCTCN'一3'

-GAGCTC-3Z

-CTCGAG-5/3Z-CCAGAGNNNNN-5,

注：N代表任一堿基

<I）用PCR技術從大豆基因組DNA中擴增目標基因L時，所用的引物越短，引物特異性越（填

“高”或"低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaI酶切大豆

基因組DNA,理論上可產生的黏性末端最多有種。載體信息如圖甲所示，經BsaI的切后，

載體上保留的黏性末端序列應為5'--3'和5'-?3'。

（2）重組載體通過農桿菌導入大豆細胞，使用抗生素篩選到具有該抗生素抗性的植株①?

④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴增目標基因L,部分序

列信息及可選用的酶切位點如圖乙所示，PCR產物完全醐切后的電泳結果如圖丙所示。據圖可判斷選

用的限制酶是，其中純合的突變植株是（填序號）。

（3）實驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測發現其體細胞中只有

I條染色體有T-DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代，其中突變位點純合且對抗生素敏感的

桎株所占比例為.篩選出的敏感植株可用于后續的品種選育。

20.將天然Ti質粒改造成含有Vir基因的輔助質粒（輔助T-DNA轉移）和不含有Vir基因、含有T-DNA

的穿梭質粒，共同轉入農桿菌，可提高轉化效率。細菌和棉花對密碼子偏好不同，為提高翻譯效率，增

強棉花抗病蟲害能力，進行如下操作。回答下列問題。

蘇云金桿菌

棉花植株

：組織培養

分離和擴增Bt基因棉花叫圓片

1與毒性有關11848與毒性無關3540

Bf基因忌z/z/ZZZZzd農桿菌、轉化

|酶切

I1849輔助質粒

國13162好3540除o?T

主rR2*R3

:導入

F31363-1848基因序列

‘人工合成\仔用p35s

1一136厘因序列拼接p35s

（氨基酸序列不變）1T-DNA-LB天然序列

穿梭質粒

HygBfi

重組

T-DNA-RB

Ori

注：F1-F3,R1-R3表示引物；T-DNA-LB表示左邊界；T-DNA-RB表示右邊界；Ori表示復制

原點：Kai?表示卡那霉素抗性基因：HygBR表示潮霉素B抗性基因。

（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，需加入蛋白酶，其作用是o提取過程中加

入體積分數為95%的預冷酒精，其目的是。

（2）本操作中獲取目的基因的方法是和。

（3）穿梭質粒中p35s為啟動子，其作用是.驅動目的基因轉錄；插入兩個p35s

啟動子，其目的可能是。

（4）根據圖中穿梭質粒上的心尸和HygBR兩個標記基因的位置，用基因對應的抗生素

初步篩選轉化的棉花愈傷組織。

（5）為檢測棉花植株是否導入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進行PCR,應選用的引

物是和o

（6）本研究采用的部分生物技術屬于蛋白質工程，理由是（單選）。

A.通過含有雙質粒的農桿菌轉化棉花細胞

B.將蘇云金桿菌Bt基因導入棉花細胞中表達

C.將1-1362基因序列改變為棉花細胞偏好密碼子的基因序列

D.用1-1362合成基因序列和1363-1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白

2025年高考生物一輪復習之基因工程

參考答案與試題解析

一.選擇題（共15小題）

1.Y-氨基丁酸在醫藥等領域有重要的應用價值。利用L-谷氨酸脫粉酶（GadB）催化L-谷氨酸脫瘦是

高效生產丫-織基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將限酒酵母S的L-谷額酸脫峻酶基因

（gadB）導入生產菌株E.coliA,構建了以L-谷氨酸鈉為底物高效生產y-緞基丁酸的菌株E.coliB。

下列敘述正確的是（）

和

QNcJolOKpnQl

質粒（^3

E.coliA

（含多克隆位點）

和

NcolKpnl重組質粒，一】一、

PCRjWt/J

gadB

釀酒醉母sE.coliB

A.上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB

B.E.coliB發酵生產Y-氨基丁酸時，L-谷氨酸鈉的作用是供能

C.E.coliA和E.coliB都能高效降解丫-氨基丁酸

D.可以用其他酶替代Neo［和KpnI構建重組質粒

【考點】基因工程在農牧、醫療、食品等方面的應用.

【專題】模式圖；基因工程.

【答案】A

【分析】基因工程技術的基本步驟：I、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴

增和人工合成。2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動

子、終止子和標記基因等。3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。

將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞

最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。4、目的基因的檢測

與鑒定：（I）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因一一PCR檢測等

技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA一—PCR檢測等技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質

一一抗原一抗體雜交技術。（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【解答】解：A、根據圖示可知，運用PCR技術可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB,A正【角：

B、L-谷氨酸脫竣酶（GadB）催化L-谷氨酸脫殘是高效生產丫-氨基J.酸，E.coliB中表達L-谷氨

酸脫竣酶（GadB）,從而發酵生產丫-氨基丁酸，該過程中L-谷氨酸鈉是反應原料，而非起供能作用，

B錯誤；

C、題干中E.coiiA和E.coliB均為產生丫-氨基丁酸的菌種，而不是高效降解丫-第基丁酸的菌種，C

錯誤：

D、根據圖示，利用NeoI和Kpnl對質粒和目的基因進行雙酶切，從而構建重組質粒，不一定可以用

其他酶替代NeoI和KpnI構建重組質粒（視質粒和目的基因所在DNA分子中酶切位點的情況而定），

D錯誤。

故選：A=

【點評】木題考查基因T.程的相關知識，要求考生理解識記有關技術的原理及操作步驟，掌握各操作步

驟中需要注意的細節，能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。

2.下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（）

A.實驗中如果將研磨液更換為蒸憎水，DNA提取的效率會降低

B.利用DNA和蛋白質在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA

C.DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物

D.將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應，可檢測溶液中是否含有蛋白質雜質

【考點】DNA的粗提取與鑒定.

【專題】正推法：基因工程.

【答案】D

【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：

（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同：DNA不溶于酒

精溶液，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精：DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。

（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。

【解答】解:A、研磨液加入了Na。溶液，有利于DNA的溶解，換為蒸緇水，DNA提取的效率會降

低，A正確;

B、DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精，因此，利用DNA和蛋白質在酒精中生溶

解度差異，可初步分離DNA,B正確：

C、DNA在NaCl溶液中的溶解度演著NaCl濃度的變化而改變，因此可用不同濃度的NaCl溶液對DNA

進行相提取，C正確；

D、在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色，二苯胺試劑用于鑒定DNA,D錯誤。

故選：D。

【點評】本題考查DNA的粗提取與鑒定的相關知識，意在考查考芻理解所學知識的要點，把握知識問

的內在聯系的能力。

3.關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法正確的是（）

A.整個提取過程中可以不使用離心機

B.研磨液在4c冰箱中放置幾分鐘后，應充分搖勻再倒入燒杯中

C.鑒定過程中DNA雙螺旋結構不發生改變

D.僅設置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾

【考點】DNA的粗提取與鑒定.

【專題】實驗基本操作：基因工程.

【答案】A

【分析】DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質等其他成分在不同濃

度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，

從而達到分離的目的：②DNA不溶于酒精溶液，細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精，利用這一原理

可以將蛋白質和DNA進一步分離：③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現藍色。

【解答】解：A、研磨后，可以用過濾的方法得到上清液，可以不使用離心機，A正確：

B、研磨液在4c冰箱中放置的目的是為了獲得上清液，不應再充分搖勻，B錯誤；

C、鑒定過程中的沸水浴加熱可能使DNA雙螺旋結構發生改變，C錯誤：

D、該實驗中，為排除二苯胺加熱后可能變藍對實驗結果的干擾，設置加二苯胺不加DNA一個對照組

即可,D錯誤。

故選：Ao

【點評】本題考查“DNA的粗提取和鑒定”的相關知識，意在考查考生的理解能力和實驗與探究能力，

進一步考查生命觀念、科學思維和科學探究等核心素養。

4.制備熒光標記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酹、擴增

緩沖液、H2O和4種脫氧核甘酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標記的dATP）的反應管①?④中，

分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區遵循堿基互補配對原則，且在本實驗收溫

度條件下不能產生小于9個連續堿基對的雙鏈DNA區。能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有

（）

反應管加入的單鏈DNA

①5'?GCCGATCTTTATA-3'

3'-GACCGGCTAGAAA-

②5'-AGAGCCAATTGGC-3'

③5'-ATTTCCCGATCCG-3'

3'-AGGGCTAGGCATA-5'

④5'?TTCACTGGCCAGT-3'

A.（D@B.②③C.?@D.??

【考點】DNA片段的擴增與電冰鑒定.

【專題】對比分析法：PCR技術.

【答案】D

【分析】多聚酶鏈式反應擴增DNA片段：

1、PCR原理：目的基因DNA受熱變性后解為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合：然后以單鏈DNA

為模板，在DNA聚合酶作用下進行延伸，即將4種脫氧核仃酸加到引物的3,端，如此重復循環多次。

由于延伸后得到的產物又可以作為下一個循環的模板，因而每一次循環后目的基因的量可以增加一倍，

即呈指數形式擴增（約為211,其中n為擴增循環的次數）。

2、PCR反應過程是：變性一復性一延伸。

3、結果：上述三步反應完成后，一個DNA分子就變成了兩個DNA分子，隨著重更次數的增多，DNA

分子就以2n的形式增加。PCR的反應過程都是在PCR擴增儀中完成的。

【解答】解：ABCD、分析反應管①?④中分別加入的適量單鏈DNA可知，①中兩條單鏈DNA分子

之間具有互補的序列，但雙鏈DNA區之外的3,端無模板，因此無法進行DNA合成，不能得到帶有熒

光標記的DNA探針：②中單鏈DNA分子內具有自身互補的序列，由于在本實驗的溫度條件下不能產

生小于9個連續堿基對的雙鏈DNA區，故一條單鏈DNA分子不發生自身環化，但兩條鏈可以形成雙

桂DNA區，由于DNA合成的鏈中不含堿基A,不能得到帶有熒光標記的DNA探針：③中兩條單鏈

DNA分子之間具有互補的序列，且雙鏈DNA區之外的3,端有模板和堿基T,因此進行DNA合成能得

到帶有熒光標記的DNA探針：④中單鏈DNA分子內具有自身互補的序列，一條單鏈DNA分子不發生

目身環化，兩條鏈可以形成雙鏈DNA區，且雙鏈DNA區之外的3'端有模板和堿基T,因此進行DNA

合成能得到帶有熒光標記的DNA探針。綜匕能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有：③④。

故選：Do

【點評】本題考查PCR的相關知識，意在考查考生的理解能力、獲取信息的能力和綜合運用能力，進

一步考查生命觀念和科學思維。

5.某同學擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和萌4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應限制酶

的識別序列和切割位點）和質粒進行切割、連接，以構建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示。

隨3平酣1

5'—&ATTC-3'5Z-GGATCC-3*5Z-CCCGGG-3,5'—左ATCT-3'

，抗生素13'-CTTAAG-5'3'-CCTAGG-5'3Z-GGGCCC-573'-TCTAGA-5'

醇4、t性基9fftt

V-X陶1的2陶3酎4

式列重組表達載體構建方案合理且效率最高的是（）

A.質粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接

B.質粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接

C.質粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接

D.質粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接

【考點】基因表達載體的構建.

（專題】正推法：基因工程.

【答案】C

【分析】限制酣選擇原則：

（1）根據目的基因兩端的限制酶期別和切割位點確定限制酶種類具體原則：應選擇切點位于目的基因

兩端的，不能位于目的基因內部，防止破壞目的基因，同時為避免目的基因和質粒自身環化或反向連接，

可使用不同的限制函切割目的基因和質粒。

（2）根據質粒特點確定限制酶種類具體原則：①保證切割的黏性末端與目的基因的相同，以便兩者能

夠連接。②保證切割后的質粒至少保留一個標記基因，以便進行篩選；保留復制原點，以便在受體細胞

中維持穩定和表達。

【解答】解：A、限制酶3切割后的末端是平末端，E.coliDNA連接酶連接的是黏性末端應用T4DNA

連接兩連接，A錯誤：

B、據圖可知，限制酶3切割后的末端是平末端，而限制幅1切割后的末端是黏性末端，若用兩種酶分

別切割質粒和目的基因，會導致DNA連接隨無法連接，B錯誤；

C、質粒和目的基因都用酶1和酶2切割，可避免目的基因和質粒的白身環化和反向連接，且兩者均形

成黏性末端，此后再用T4DNA連接酶連接，可構建重組表達載體，效率較高，C正確：

D、限制酶4會破壞質粒上的標記基因（抗生素抗性基因），故不能選擇該酶進行切割，D錯誤。

故選：Co

【點評】本題考查限制酶及基因表達載體構建的相關知識，意在考查學生的理解能力和判斷能力，運用

所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。

6.用氨羊青霉素抗性基因（AmpD、四環素抗性基因（TCF）作為標記基因構建的質粒如圖所示。用含有

目的基因的DNA片段和用不同限制酶萌切后的質粒，構建基因表達載體（重組質粒），并轉化到受體

菌中。下列敘述錯誤的是（）

A.若用HindUI酶切，目的基因轉錄的產物可能不同

B.若用Pvul酶切，在含Tei（四環素）培養基中的菌落，不一定含有目的基因

C.若用SphI酶切，可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否

D.若用SphI酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨茉青霉素）和Tet的培養基中能形成菌落

【考點】基因表達載體的構建.

【專題】模式圖；基因工程.

【答案】D

【分析】據圖分析可知，氨節青霉素抗性基因（AmpD內含有Seal和PvuI的酶切位點，四環素抗性

基因（TeiR）內含有HindHI、SphI和SalI的酶切位點。

【解答】解：A、若只用HindlH一種酶切質粒和目的基因，則產生相同的黏性末端，可能導致目的基因

正向連接或反向連接，故目的基因軌錄的產物可能不同，A正確；

B、若用Pvul的切，則會破壞氨茉青霉素抗性基因（AmpD,而重組質粒和空質粒中都有四環素抗性

基因（TeF）,因此在含Tei（四環素〉培養基中的菌落，不一定含有目的基因，B正確：

C、若用SphI酶切，則目的基因插入到四環素抗性基因（TeiR）中，重組質粒的大小與空質粒不同，

故可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否，C正確：

D、若用SphI麗切，則會破壞四環素抗性基因（TeF）,氨羊青霉素抗性基因（AmpD不受影響，則

重組質粒中含氨葦青霉素抗性基因（AmpD,因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芍青霉素）的

培養基中能形成菌落，在含Tet的培養基中不能形成菌落，D錯誤。

故選：De

【點評】本題考查基因表達載體的構建過程中限制酹的選擇原則等知識，意在考查考生對知識的理解和

應用能力。

7.某小組通過PCR（假設引物長度為8個堿基短于實際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限

制陶進行酶切（如圖），再用所得片段成功構建了基因表達載體。下列敘述錯誤的是（）

限制前Spel5,-ACTAGT-3,Nhel5,-GCTAGC-3/Cfol5'-GCGC-3

浜別序列3,-TGATC|A-5,3,-CGATCG-5,V-CGCGS

擴增獲得5Z-AGCTAGCAATGCTC...............ATGAACTGCGCA-3,

的DNA片段3r-TCGATCGTTACGAG................TACTTGACGCGT-5'

①］酶切

5'-