1體外受精-胚胎移植技術(shù)（IVF-ET）IVF-ET的操作步驟（1）控制性超排卵；（2）卵泡監(jiān)測(cè)；（3）取卵；（4）取精；（5）體外受精/顯微授精；（6）胚胎體外培養(yǎng)；（7）胚胎移植；（8）黃體支持；（9）胚胎移植后第14天驗(yàn)?zāi)虼_定是否妊娠；（10）妊娠后14天，B超檢查胎兒數(shù)及胚胎著床部位。IVF-ET的操作步驟過(guò)程簡(jiǎn)介：IVF-ET的操作步驟指以藥物的手段在可控制的范圍內(nèi)誘發(fā)多卵泡的發(fā)育和成熟。控制性超排卵由于自然周期中通常只有一個(gè)優(yōu)勢(shì)卵泡發(fā)育，受精后只能形成一個(gè)胚胎，而移植一個(gè)胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵來(lái)增強(qiáng)與改善卵巢功能，以達(dá)到不受自然周期的限制、獲得多個(gè)健康卵子的目的，提供多個(gè)胚胎移植。為評(píng)價(jià)卵巢刺激效果與決定取卵時(shí)間，須利用陰道B超來(lái)監(jiān)測(cè)卵泡大小，并配合抽血檢查E2值(雌激素)，調(diào)整用藥量。當(dāng)二至三個(gè)以上的卵泡直徑大于1.8cm，且1.4cm以上的卵泡數(shù)與E2值相當(dāng)，便可注射人絨毛促性腺激素（hCG），促使卵泡成熟。在注射hCG后34～36小時(shí)取卵。監(jiān)測(cè)卵泡IVF-ET的操作步驟IVF-ET的操作步驟最常用的取卵方式是在局部麻醉下，經(jīng)陰道B超引導(dǎo)，將取卵針穿過(guò)陰道穹窿，直達(dá)卵巢吸取卵子，并立即在顯微鏡下將卵子移到含胚胎培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，置37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取卵IVF-ET的操作步驟精子取出的時(shí)間與取卵的日子為同一天。取精前洗凈雙手，用自慰法留取精液。所給的小杯是無(wú)菌的，留取時(shí)不要觸摸杯緣及杯內(nèi)。取出的精液采用上游法或Percoll密度梯度離心法處理。取精I(xiàn)VF-ET的操作步驟取卵后4～5小時(shí)將處理后的精子與卵子放在同一個(gè)培養(yǎng)皿中，共同培養(yǎng)18小時(shí)后，可在顯微鏡下觀察受精情況。若精子質(zhì)量太差，無(wú)法自然受精，則必須以顯微注射法授精(參考卵細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微授精)。體外受精卵細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微授精

IntracytoplasmicSpermInjection(ICSI)定義：指用顯微操作術(shù)將單個(gè)精子注入卵胞漿的過(guò)程適應(yīng)癥：

①?lài)?yán)重精子質(zhì)量異常

②既往常規(guī)IVF失敗患者

③嚴(yán)重的抗精子抗體患者

④無(wú)精子癥患者

⑤未成熟卵以及冷凍保存的卵母細(xì)胞

⑥常規(guī)IVF失敗未受精卵母細(xì)胞ICSI技術(shù)發(fā)展史PZDSUZIICSI

透明帶部分分離術(shù)

透明帶下人工授精術(shù)

單精子胞漿內(nèi)顯微注射術(shù)1988年，Cohen等1990年，F(xiàn)ishel等1992年，Palermo等ICSI操作過(guò)程ICSI操作前準(zhǔn)備；卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備；固定針與注射針的安裝和調(diào)整；精子的準(zhǔn)備；精子制動(dòng)；顯微注射；體外培養(yǎng)。ICSI操作前的準(zhǔn)備顯微操作針：持卵針、注射針；試劑：G-MOPS-PlusorG-MOPS+5%HSA，PVP（聚乙烯吡咯烷酮），G-IVF-PlusorG-IVF+10%HSA，透明質(zhì)酸酶；操作皿、授精培養(yǎng)皿；ISCI示意圖卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備一般為取卵后的3-5小時(shí)內(nèi)，對(duì)MⅡ期卵母細(xì)胞行ICSI。卵母細(xì)胞的脫顆粒細(xì)胞：卵丘復(fù)合物移入透明質(zhì)酸酶中，顆粒細(xì)胞松散后移入配子洗滌液中，用內(nèi)徑適宜的拆卵針?lè)磸?fù)吹吸，使顆粒細(xì)胞脫落。卵母細(xì)胞評(píng)估：去除顆粒細(xì)胞后，觀察卵母細(xì)胞。卵周間隙見(jiàn)第一極體提示卵子核成熟，可用于ICSI。脫顆粒卵子形態(tài)ICSI精子的準(zhǔn)備射出精液處理同常規(guī)IVF，收集活動(dòng)精子備用，冷凍精子解凍后應(yīng)用；附睪手術(shù)所取精子可直接裝入注射皿或洗滌后使用；睪丸組織需要機(jī)械法拆碎曲精小管，制成精子懸液備用。ICSI精子制備方法ICSI﹥1×106/ml上游0.1～1×106/ml密度梯度離心＜0.1×106/ml直接離心精子制動(dòng)目的：使精子胞漿膜失去穩(wěn)定性，膜通透性增加，精子胞液內(nèi)的細(xì)胞因子釋放出來(lái)，激活卵母細(xì)胞。未經(jīng)制動(dòng)或制動(dòng)不充分的精子行ICSI受精率降低。方法：對(duì)精子尾部后1/3進(jìn)行壓迫、輕擊、摩擦擠壓或者激光灼燒等，精子尾部形成折角、卷曲、打圈或者黏住皿底，或尾部斷裂均說(shuō)明制動(dòng)成功。精子制動(dòng)后盡快注射。精子注射目的：以最小的損害程度，將單個(gè)有活力的精子注入到成熟的卵母細(xì)胞中；方法：用持卵針施以少許負(fù)壓固定卵母細(xì)胞，使第一極體處于11點(diǎn)至12點(diǎn)（或6點(diǎn)至7點(diǎn)）的位置，調(diào)節(jié)注射針至與卵母細(xì)胞赤道面同一水平，于3點(diǎn)處快速進(jìn)針至卵內(nèi)1/2位置，對(duì)注射針緩慢施以負(fù)壓吸引細(xì)胞膜，直到看見(jiàn)注射針內(nèi)的胞質(zhì)突然回流加速，確認(rèn)細(xì)胞膜破裂，然后緩慢進(jìn)針，同時(shí)將吸入的胞質(zhì)及精子一同注入到卵母細(xì)胞的3/4處，緩慢回針退出卵母細(xì)胞，完成對(duì)一個(gè)卵母細(xì)胞的ICSI。注射后的卵子移入培養(yǎng)皿內(nèi)，放入培養(yǎng)箱，同IVF胚胎培養(yǎng)。胞漿內(nèi)單精子注射a.將精子自尾部吸入穿刺針內(nèi)b.將精子注入卵胞漿單精子胞漿內(nèi)顯微注射注意事項(xiàng)核對(duì)程序；涉及卵母細(xì)胞的操作都必須在加熱板或加熱孔板中進(jìn)行；保護(hù)卵母細(xì)胞（脫顆粒，固定，破膜）；盡量選擇最優(yōu)精子；盡可能少的注入PVP和操作液；每個(gè)皿體外操作時(shí)間在20分鐘內(nèi)。IVF-ET的操作步驟受精卵在體外培養(yǎng)48～72小時(shí)可發(fā)育到8～16細(xì)胞期胚胎。此時(shí)依據(jù)患者的年齡、曾經(jīng)懷孕與否及胚胎的質(zhì)量，決定移植胚胎的數(shù)目，多余的胚胎可冷凍保存。胚胎移植一般不需麻醉。目前多在受精后2～3天移植胚胎。胚胎移植IVF-ET的操作步驟目前多采用注射法給予黃體酮支持黃體。如果確定妊娠，則改用hCG繼續(xù)補(bǔ)充到懷孕10周。胚胎移植后14天，可由驗(yàn)?zāi)蚧虺檠_定是否妊娠。胚胎移植后補(bǔ)充激素馬卵巢構(gòu)造示意圖IVF-ET的操作步驟