ICS65.020.01GuidelineforlaboratoryculturemethodofSolenopsisinvictaBuren廣東省植物保護學會發布ⅠT/GDPPS010—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由廣東省植物保護學會提出并歸口。本文件起草單位：華南農業大學、廣東省農業有害生物預警防控中心、即撲有害生物防控技術有限公司。本文件主要起草人：王磊、陸永躍、葉欽杰、彭彬、葉欽文、許益鐫、劉晨浪。1T/GDPPS010—2024紅火蟻蟻群室內飼養技術規范本文件規定了紅火蟻野外蟻群采集和室內飼養方法。本文件適用于紅火蟻野外蟻群采集和室內飼養。2規范性引用文件本文件沒有規范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1水試管watertube在玻璃試管（直徑20mm或30mm×長200mm）中加水到離管口3cm處，用密實棉花球塞進管口然后向下推移棉塞直到棉球完全被水浸濕為止。3.2人工蟻巢artificialantnest人工蟻巢由填有1/3～2/3醫用石膏或建筑用石膏的培養皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿蓋組成。可用紅色塑料紙或錫箔紙覆蓋培養皿蓋遮避光線使人工蟻巢更接近自然蟻巢。3.3婚飛蟻后newly-matedqueen生殖雌蟻在婚飛交配后，落地褪翅，被稱為婚飛蟻后。3.4蟻群colony由紅火蟻工蟻、幼蟻、生殖蟻等多個品級構成的具有持續存在能力的群體。3.5水滴法waterdropmethod分離紅火蟻與巢穴土壤的方法，通過向裝有紅火蟻巢穴的容器中持續滴水使紅火蟻與土壤分離。3.6棄尸堆refusepiles由紅火蟻將剩余的食物碎片、紅火蟻本身的尸體搬到蟻巢外統一堆放形成。4工具及材料4.1采集工具及材料2T/GDPPS010—2024吸蟲器、鐵鍬（鏟面長30cm～35cm、鏟面寬15cm～25cm）、手套（醫用外科乳膠手套或橡膠手套）、滑石粉或爽身粉、16L～30L塑料桶或整理箱、雨靴、棉花、黃粉蟲或蝗蟲或火腿腸、塑料盤、石膏板、酒精。4.2飼養材料蟻群飼養盒宜選用透明的塑料保鮮冷藏盒。根據蟻群數量可選擇40cm×30cm×10cm或30cm×25cm×10cm規格的飼養盒。高度最好10cm～15cm。蟻群飼養盒最好帶有透明蓋便于觀察和操作。人工蟻巢由填有1/3～2/3醫用石膏或建筑用石膏的培養皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿蓋組成（附錄C圖C.1）。可用紅色塑料紙或錫箔紙覆蓋培養皿蓋遮避光線使人工蟻巢更接近自然蟻巢。石膏板（長寬≥25cm、厚度≥10cm）。水、10w/w%糖水、蝗蟲或黃粉蟲或其他昆蟲。5紅火蟻野外采集技術5.1采集前準備工作在裝蟻巢的容器（桶或整理箱，40L-60L）內壁距頂部邊緣30cm處及以上區域涂上滑石粉或爽身粉，同樣將涂抹滑石粉或爽身粉涂于鐵鍬手柄處。采集時需穿密閉性較好的雨靴或運動鞋配長筒襪，避免腳部皮膚裸露。在雨靴或運動鞋的鞋幫處涂抹滑石粉或爽身粉。作業人員雙手戴好橡膠手套。5.2采集天氣情況宜選擇晴天、多云或陰天開展采集活動，采集時降雨或采集前1天～2天采集區域內有強降水、地面有積水，不宜采集。氣溫在20℃~32°C之間。5.3采集過程選擇螞蟻活躍且蟻丘直徑在20cm以上的紅火蟻蟻巢進行采集。采集前，作業人員雙手應戴好橡膠手套并涂抹滑石粉，以防止紅火蟻直接爬至手臂。先將蟻巢周圍荒草、石塊等有礙挖掘的東西作適當清理，以方便后續操作，清理過程應避免驚擾蟻巢。使用鐵鍬將整個蟻巢的地上部分及地下部分分多鏟挖出來，迅速放到放到16L～30L桶或整理箱內。挖取的巢土頂部距離桶或整理箱的上緣距離不低于20cm，導致螞蟻逃逸。采集時盡可能采集到有翅蟻和蟻后。挖好后，將巢坑處進行簡單回土處理。5.4采集后運輸采集后，裝蟻巢的容器應在封口處留出些縫隙或不封口，以免容器內壁的滑石粉失效，造成紅火蟻逃逸。在將采集到的蟻巢運輸回室內過程中，應每隔1小時～2小時觀察容器內壁是否需要補充涂抹滑石粉，防止紅火蟻逃逸。同時降低運輸車輛內部溫度至24°C及以下。觀察注意是否會出現婚飛行為。5.5室內靜置3T/GDPPS010—2024將采集回來的蟻群放在室內靜置2天～3天，裝有紅火蟻蟻群的容器不要覆蓋容器蓋。期間每隔1天淋100mL～200mL清水，以保持蟻巢土壤部分濕潤，放入水試管為蟻群提供水分來源，并提供黃粉蟲或蝗蟲或火腿腸為蟻群提供蛋白質來源。5.6蟻群分離使用水滴法將蟻群從土中分離出來，操作流程如下：（1）準備1個飼養盒，并在其內壁均勻涂抹滑石粉，作為容納蟻群的容器。（2）在飼養盒內部兩端分別置入1個人工蟻巢和1塊石膏板。（3）取出盛有蟻巢的容器，并以約100mL/min的流速將水滴入容器中央，待水面沒過土壤表面后，蟻群會漂浮在水面。（4）使用漏勺將漂浮的蟻群撈出并轉移至步驟1準備的飼養盒中的石膏板表面。（5）待蟻群自主轉移至人工暗室后，取出石膏板及其它雜物，完成分離工作。6紅火蟻婚飛新蟻后的野外采集及飼養6.1蟻后的采集使用吸蟲器采集新蟻后。采集過程中盡量避免對蟻后造成傷害，降低其存活。采集時間：紅火蟻婚飛高峰期，即春夏季，大雨過后，天氣悶熱，氣溫26℃左右時的午后。采集地點：紅火蟻發生密度較高（一般三級以上區域）、向陽背風的位置，較容易獲得剛剛婚飛交配完落地脫翅準備建巢的新蟻后。6.2采后室內飼養將采集到的新蟻后帶回室內后，放置于新蟻后飼養裝置中進行飼養直至首批工蟻羽化。裝置由一個15mL玻璃管組成，在玻璃管內倒入1/2～2/3的純水，使用棉花塞塞緊，以棉花塞濕潤但沒有水滲出為宜（附錄圖C.2）。蟻后放入后，使用棉花塞將試管口封閉，使得空氣可以進入但是新蟻后無法出去。待第一批工蟻羽化后，在棉花塞中加一經裁剪的移液槍頭，這樣可以保證空氣流通，保證工蟻進出覓食，但是新蟻后無法出去。7紅火蟻蟻群的室內飼養7.1飼養室條件紅火蟻飼養室溫度需要保持在26±2oC，相對濕度60%-80%。可使用空調和加濕器或培養箱控制飼養環境的溫濕度。7.2飼養食物及水紅火蟻蟻群的存活需要水、糖類和蛋白質類。水源：將“水試管”用透明膠或鐵絲支架固定平放在飼養盒中，為紅火蟻持續供水，5天～7天更換新的水試管。4T/GDPPS010—2024蜂蜜水。每天供給蟻群5mL蜂蜜水。將蜂蜜水盛放在一個小容器（培養皿或瓶蓋）中，然后平放在飼養盒中；也可用浸蜂蜜水的脫脂棉飼喂螞蟻以免粘住螞蟻。（2）10w/w%蔗糖溶液。用1份蔗糖和9份水配制10w/w%蔗糖水，然后制作成蔗糖溶液試管放入紅火蟻飼養盒內。根據蟻群消耗情況及時更換水試管和10%w/w蔗糖溶液試管，至少保證1周更換1次。蛋白質：黃粉蟲幼蟲、蛹或成蟲、冷凍東亞飛蝗及豬肝粉等。及時添加蛋白質類食物，每天30g左7.3蟻群日常管理紅火蟻作為社會性生物，具有將工蟻尸體、食物殘渣等搬到蟻巢外形成棄尸堆的習性，故飼養過程中每隔5天～7天清理飼養盒內的棄尸堆，防止棄尸堆中的病原菌對蟻群產生不利影響。及時更換水源和糖類食物。及時提供黃粉蟲幼蟲、蛹或成蟲、冷凍東亞飛蝗及豬肝粉等蛋白質食物。使用水滴法分離獲得并在室內養殖7天后的蟻群，才能挑取其中的螞蟻開展試驗研究。8人員防護帶上厚橡膠手套并涂上滑石粉保持手臂垂直防止螞蟻攀爬。當觀察和試驗操作時注意衣服、頭發和裝飾不要掉入蟻群盤中。9飼養后蟻群處理對于還存活或者不再需要的蟻群，可將其連同飼養盒一起放置于-20oC環境下連續處理24小時進行滅殺。10生物安全管理紅火蟻是一種植物檢疫性有害生物，不能在非疫區飼養。因科研等需要在非疫區飼養的，需要向當地植物檢疫部門提出申請并得到批準后方能飼養。在紅火蟻疫區開展紅火蟻飼養時是主要對于還存活或者不再需要的蟻群，可將其連同飼養盒一起放置于-20oC環境下連續處理24小時進行滅殺。5T/GDPPS010—2024附錄A紅火蟻生物學信息A.1生物學特性婚飛蟻后一般獨立建巢，在建巢后1天～2天內產卵，26oC±2oC條件下，卵期6天-7天，幼蟲期10天左右，蛹期10天。從卵到工蟻羽化歷期在26天左右。A.2紅火蟻工蟻特征工蟻形態特征（圖A.1），各部位特征可參考以下信息進行識別：a）工蟻體長2.5mm～7.0mm。體色紅褐色，腹部呈黑褐色體表略光滑；b）復眼黑色。觸角10節，鞭節端部兩節膨大呈棒狀；a）額下方連接唇基明顯，兩側各有齒1個，唇基內緣中央具三角形小齒1個，齒基部上方著生1根剛毛；b）前胸背板前端隆起，前、中胸背板的節間縫不明顯，中、后胸背板的節間縫則明顯；胸腹連接處有2個腹柄結；腹部卵圓形，可見4個體節，腹部末端有螯刺伸出。圖A.1紅火蟻工蟻（RyanWhitehouse和JoeA.MacGown拍攝）A.3雄性生殖蟻6T/GDPPS010—2024雄性生殖蟻體長7mm～8mm，體黑色，著生翅2對，頭部細小，觸角呈絲狀，胸部發達，前胸背板顯著隆起。A.4雌性生殖蟻有翅型雌蟻體長8mm～10mm，頭及胸部棕褐色，腹部黑褐色，著生翅2對。頭部細小，觸角呈膝狀，胸部發達，前胸背板顯著隆起。圖A.2紅火蟻生殖蟻（從右至左分別為雌性生殖蟻、雄性生殖蟻）A.5蟻后蟻后（圖A.3）無翅，其他特征與生殖雌蟻相同。其體型，特別是腹部可隨壽命的增長不斷增大。圖A.3紅火蟻蟻后與紅火蟻幼蟻7T/GDPPS010—2024A.6紅火蟻蟻巢特征紅火蟻為完全地棲性蟻巢的螞蟻種類，成熟蟻巢（圖A.4）是以土壤堆成高10cm～30cm，直徑30cm～50cm的蟻丘；蟻丘表面土壤疏松，內部結構呈蜂窩狀。圖A.4成熟的紅火蟻蟻巢8T/GDPPS010—2024附錄B被采集蟻巢信息記錄文件被采集蟻巢信息記錄文件表見表B.1。表B.1被采集蟻巢信息記錄表9T/GDPPS010—2024紅火蟻室內飼養裝置圖C.1蟻群飼養人工蟻巢圖C.2紅火蟻新蟻后飼養裝置T/GDPPS01